5、了解生物素 - 亲和素系统的特点

生物素亲和素系统的特点生物素亲和素系统是一种重要的蛋白质相互作用系统，其特点是高度特异性、高亲和力和可逆性。

它在生物学研究和生物工程中有着广泛的应用。

生物素亲和素系统是由生物素和生物素结合蛋白（biotin-binding protein）相互作用而形成的。

生物素是一种小分子有机物，是一种维生素B7，也称为维生素H。

生物素结合蛋白是一种特异性结合生物素的蛋白质，它存在于许多生物中，包括细菌、真菌、植物和动物。

生物素亲和素系统的特点主要有以下几个方面。

1. 高度特异性：生物素亲和素系统的结合是高度特异的，即只有生物素与生物素结合蛋白之间的相互作用才能发生。

这种特异性是由于生物素与生物素结合蛋白之间的非共价相互作用，如氢键、疏水相互作用和离子相互作用等。

这种特异性使得生物素亲和素系统在生物学研究和生物工程中能够准确地识别和分离目标蛋白。

2. 高亲和力：生物素与生物素结合蛋白之间的结合具有很高的亲和力。

生物素与生物素结合蛋白之间的结合常数（Kd）通常在纳摩尔或皮摩尔级别，表明它们之间的结合是非常紧密的。

这种高亲和力使得生物素亲和素系统能够在生物样品中高效地捕获目标蛋白，并且能够通过洗脱等步骤将非特异性结合的蛋白去除，从而实现对目标蛋白的高纯度分离。

3. 可逆性：生物素与生物素结合蛋白之间的结合是可逆的。

这意味着在适当的条件下，生物素与生物素结合蛋白之间的结合可以被打破，从而使得目标蛋白得以释放。

这种可逆性使得生物素亲和素系统能够在目标蛋白的纯化和分析过程中进行多次结合和释放，提高了操作的灵活性和效率。

生物素亲和素系统的应用非常广泛，主要包括以下几个方面。

1. 蛋白质纯化：生物素亲和素系统可以通过生物素与目标蛋白的特异结合来实现对目标蛋白的高效纯化。

在蛋白质纯化过程中，通常将生物素结合到目标蛋白上，然后使用生物素亲和素树脂等介质将目标蛋白捕获，最后通过洗脱步骤将纯的目标蛋白分离出来。

2. 蛋白质相互作用研究：生物素亲和素系统可以用于研究蛋白质之间的相互作用。

简述生物素亲和素系统的特点嘿，今天咱来聊聊这个生物素亲和素系统！你可别小看它，这玩意儿那可是相当有特点嘞！
要说这生物素亲和素系统，就像是一对超级合拍的好搭档。

首先呢，它们之间的亲和力强得很呐！硬要形容的话，就像是两块强力磁铁，“啪”一下子就吸到一块儿了，那叫一个紧密！这就意味着它们一旦牵手，那轻易可就不会松开哟，别提多牢固啦。

然后呢，这系统还特别敏感！就像是那种对周围动静特别在意的小机灵鬼儿。

只要稍微有点风吹草动，它就能迅速做出反应。

这种敏感度简直逆天了，别的系统可能还在那儿迷迷糊糊呢，它就能第一时间察觉到情况。

嘿，你知道吗？它还特别神通广大。

想象一下，它就如同一个万能连接器，可以把各种不同的东西都给串起来。

不管是蛋白质啦，还是别的啥玩意儿，它都能给完美地连接起来，厉害吧？这能力，简直就是生物界的“月老”，专门负责牵红线的！
而且哦，这个系统还超级稳定呢！就跟那泰山似的，任凭风吹雨打，它就是稳稳当当的。

不管周围环境怎么变，它都能坚定不移地发挥自己的作用。

咱再说说它的效率，那真是杠杠的！一旦运作起来，那速度就跟火箭似的，“嗖嗖”就把事情给搞定了。

别的系统可能还在慢悠悠地晃悠呢，它早就跑完一圈回来休息啦。

说起来，要是咱们生活中也有这种像生物素亲和素系统一样厉害的东西该多好啊！啥东西都能快速、牢固、敏感地结合在一起，那得省多少事儿啊！总之，这个生物素亲和素系统可真是不简单呐，小小的身体里蕴含着大大的能量和特点。

真是让咱不得不佩服大自然的神奇和智慧嘞！希望科学家们能好好利用它的这些特点，给咱的生活带来更多的惊喜和便利哟！是不是挺有趣的呀？嘿嘿。

第十一章生物素-亲和素放大技术第一节生物素的理化性质与标记生物素（biotin）、亲和素（avidin）是一对具有高度亲和力的物质，它们的结合迅速、专一、稳定并具有多级放大效应。

生物素-亲和素系统（BAS）是一种以生物素和亲和素具有的多级放大结合特性为基础的实验技术，它既能偶联抗原抗体等大分子生物活性物质，又可被荧光素、酶、放射性核素等材料标记。

生物素（biotin，B）广泛分布于动、植物组织中，常从含量较高的卵黄和肝组织中提取。

一、活化生物素利用生物素的羧基加以化学修饰可制成各种活性基团的衍生物，称为活化生物素。

生物素活化后，可容易地与各种抗原、抗体、酶及核酸分子中相应基团偶联形成生物素化标志物。

（一）标记蛋白质氨基的活化生物素此种活化生物素的制备方法是将生物素与N-羟基丁二酰胺在碳二亚胺的作用下进行缩和，生成生物素N-羟基丁二酰亚胺醣（BLAHS）。

BLAHS分子酯键中的—C-=0基团可与蛋白质分子中赖氨酸的氨基形成肽键。

从而使蛋白质标记上生物素。

（二）标记蛋白质醛基的活化生物素用于此类标记的活化生物素有两种：生物素酰肼（BHZ）和肼化生物胞素（BGHZ）。

BHZ是水合肼与生物素的合成物，主要用于偏酸性糖蛋白的生物素标记。

（三）标记蛋白质巯基的活化生物素3-（N-马来酰亚胺-丙酰）-生物胞素（MPB）是能特异地与蛋白质巯基结合的活化生物素试剂。

（四）标记核酸的活化生物素活化生物素可通过缺口移位法、化学偶联法、光化学法及末端标记法等技术使生物素的戊酸侧链通过酰胺键与核酸分子相连，构成生物素标记的核酸探针。

二、生物素标记蛋白质（一）生物素化蛋白质衍生物的特性生物素化蛋白质衍生物有两类：1.生物素化的大分子活性物质，如抗原、抗体。

2.标记材料（如酶）结合生物素后制成的标志物。

（二）标记方法1.标记抗体、抗原选用第二抗体进行生物素标记，制备的标志物具有通用性。

2.标记酶生物素标记辣根过氧化物酶第二节亲和素、链霉亲和素的理化性质与标记亲和素和链霉亲和素是生物亲和素的天然特异性结合物。

临床医学检验临床免疫：免疫组织化学技术考试题库真题1、单选免疫组织化学技术中，对固定剂的要求不包括（）A.能快速固定抗原B.能防止抗原物质扩散C.固定后的抗原能被抗体识别D.具有氧化活性E.固定后不影（江南博哥）响抗原抗体反应正确答案：D2、单项选择题生物素－亲和素系统的特点不包括（）A.灵敏度高B.特异性好C.适用广泛D.稳定性高E.无需活化正确答案：E3、单选免疫标记电镜技术获得成功的关键是（）A.对细胞超微结构完好保存B.保持被检细胞或其亚细胞结构的抗原在原位C.保持其抗原性不受损失D.选择的免疫试剂能顺利穿透组织细胞结构与抗原结合E.以上叙述都正确正确答案：E4、单选斑点ELISA与常规ELISA比较不同之处在于（）A.二者实验原理不同B.二者所用固相载体不同C.二者所用酶不同D.二者所用酶标抗体不同E.以上都不对正确答案：B5、单选免疫组化技术中非特异性染色的特点不包括（）A.细胞和细胞间质均匀染色B.染色无特定部位C.染色具有结构性D.某一片均匀着色E.无分布规律正确答案：C6、单选用直接免疫荧光法检测T细胞上CD4抗原，荧光素应标记在（）A.CD4抗原上B.CD4单克隆抗体上C.固相载体上D.抗人Ig抗体上E.某种动物红细胞上正确答案：B7、单选石蜡包埋材料用酶处理的目的（）A.防止出现假阳性B.增大抗原的保存量C.裸露抗原的决定簇D.分解蛋白质E.消化石蜡表面正确答案：C8、单选免疫组化技术中固定标本的目的不包括（）A.使细胞内蛋白质固定B.终止细胞内酶反应C.防止细胞自溶D.去除干扰抗原抗体反应的类脂E.促进组织细胞中抗原的释放正确答案：E9、单选下列关于酶免疫组织化学技术的叙述中错误的是（）A.敏感性比免疫荧光标记技术高B.可用普通光学显微镜观察结果C.不能用电子显微镜观察结果D.便于对组织细胞微结构作分析E.染色标本可长期保存正确答案：C10、单选石蜡切片的优点不包括（）A.切片薄有连续性B.可长期保存C.防止抗原损失D.用于回顾性研究E.观察组织细胞结构的理想方法正确答案：C11、单选下列关于组织取材说法错误的是（）A.取材部位必须是主要病变区B.活检钳的刃口必须锋利，以免组织受挤压C.可选病灶区与正常组织交界区以外的区域D.必要时取远距病灶区的正常组织做对照E.组织标本可取活组织检查标本正确答案：C12、单选用免疫荧光技术直接法检测组织中的抗原，应将荧光素标记（）A.抗原B.相应抗体C.抗免疫球蛋白杭体D.抗原－抗体复合物E.抗C抗体正确答案：B13、单选荧光抗体保存3～4年，应选择（）A.小量分装、4℃B.瓶分装、4℃C.瓶分装、－10℃D.小量分装、－20℃E.瓶分装、－20℃正确答案：D14、单选下列不符合荧光免疫技术直接法的描述是（）A.荧光抗体直接加于标本上B.常用于抗核抗体的检测C.每检查一种抗原需制备特异的荧光抗体D.灵敏度偏低E.特异性高，非特异荧光染色因素少正确答案：B参考解析：荧光免疫技术直接法检查抗原时，是用已知特异性抗体与荧光素结合，制成荧光特异性抗体，直接与细胞或组织中相应抗原结合，在荧光显微镜下即可见抗原存在部位呈现特异性荧光。

免疫组织化学技术题库3-1-8问题：[单选]生物素－亲和素系统的特点不包括（）A.灵敏度高B.特异性好C.适用广泛D.稳定性高E.无需活化问题：[单选]免疫标记电镜技术获得成功的关键是（）A.对细胞超微结构完好保存B.保持被检细胞或其亚细胞结构的抗原在原位C.保持其抗原性不受损失D.选择的免疫试剂能顺利穿透组织细胞结构与抗原结合E.以上叙述都正确问题：[单选]石蜡包埋材料用酶处理的目的（）A.防止出现假阳性B.增大抗原的保存量C.裸露抗原的决定簇D.分解蛋白质E.消化石蜡表面(安徽11选5 https://)问题：[单选]为了保证免疫荧光细胞化学染色的准确性，排除某些非特异性染色，必须在初次实验时进行对照试验。

下列选项中不必要的是（）A.自身对照B.吸收试验C.阴性对照D.阳性对照E.补体对照为保证免疫荧光组织化学染色的准确性，排除某些非特异性染色，在实验中通常针对第一抗体设立对照，包括阳性对照、阴性对照、替代对照、自身对照和吸收试验等。

【考点】：免疫组织化学设立的对照试验问题：[单选]关于免疫组织化学技术的应用，下列说法错误的是（）A.对于细胞抗原性物质能准确、敏感地进行检测和定位B.在细胞学中主要用于菌种鉴定和抗原结构的研究C.检测人体大多数寄生虫，且具有特异性高和敏感性好等优点D.确定肿瘤的组织学发生，进行肿瘤的转移性和特异性的鉴别E.应用免疫荧光抗体直接法可以检出自身免疫疾病患者血中的自身抗体免疫组织化学技术的应用为：①对于细胞抗原性物质能准确、敏感地进行检测和定位。

②在细胞学中主要用于菌种鉴定和抗原结构的研究。

③检测人体大多数寄生虫，且具有特异性高和敏感性好等优点。

④确定肿瘤的组织学发生，进行肿瘤的转移性和特异性的鉴别，辅助识别肿瘤的良、恶性，癌前病变和癌。

⑤应用免疫荧光抗体间接法可以检出自身免疫疾病患者血中的自身抗体。

问题：[单选]CT成像原理利用的是（）A.多方位成像特性B.横断面图像显示特性C.X线的吸收衰减特性D.数据采集系统（DAS）特性E.X线透过被照体之后的直进性问题：[单选]免疫组织化学染色，为最大限度保存抗原的免疫活性，不宜使用的固定剂是（）A.醛类固定剂B.非醛类双功能试剂C.丙酮D.醇类固定剂E.含重金属的固定剂蛋白类抗原，可用乙醇或甲醇固定；微生物抗原可用丙酮或三氯化碳固定；如需去除病毒的蛋白质外壳，可使用胰蛋白酶；多糖类抗原用10%福尔马林（甲醛溶液）固定或加热固定；如有黏液物质存在，应用透明酸酶等处理去除；类脂质丰富的组织进行蛋白、多糖抗原检测时，需用有机溶剂（乙醚、丙酮等）处理去除类脂。

生物素-亲和素系统ELISA法是一种基于生物素和亲和素之间高度特异性和高亲和力的免疫检测方法。

这种方法利用生物素和亲和素之间的结合反应，将抗原或抗体与生物素结合，再通过亲和素与生物素之间的结合反应，将抗原或抗体固定在固相载体上。

在ELISA中，生物素-亲和素系统可以用于提高检测的灵敏度和特异性。

首先，亲和素与生物素之间的结合反应非常稳定，可以减少非特异性结合，提高检测的特异性。

其次，每个亲和素可以结合4个生物素，使得反应信号放大，提高检测的灵敏度。

生物素-亲和素系统在ELISA中的应用有多种形式，包括用于固相化抗体或抗原的制备、用于ELISA终反应的放大等。

在固相化抗体或抗原的制备中，先将亲和素（或链霉亲和素）包被于固相载体，抗体或抗原也先与生物素结合，然后通过亲和素-生物素反应而使生物素化的抗体或抗原固相化。

在ELISA终反应的放大中，用生物素化的抗体替代常规ELISA中的酶标抗体，然后连接亲和素-酶结合物（BA-ELISA）、或亲和素及酶标生物京（BAB-ELISA）或ABC试剂（ABC-ELISA），从而使反应信号放大，提高检测灵敏度。

总之，生物素-亲和素系统ELISA法是一种灵敏度高、特异性好的免疫检测方法，可以用于各种抗原或抗体的检测。

2023年检验类之临床医学检验技术（师）高分题库附精品答案单选题（共50题）1、ELISA双抗原夹心法检测抗体时，固相载体包被物是A.酶标记的抗体B.酶标记的抗原C.未标记的已知抗原D.未标记的已知抗体E.未标记的抗抗体【答案】 C2、病人严重腹泻常可引起（）A.血中COB.血NaC.代谢性碱中毒D.低血钾E.血液pH↑【答案】 D3、不属于粪便病理成分的是A.RBCB.WBC.黏液D.阿米巴原虫E.虫卵【答案】 C4、脑出血时CSF的特点是A.出现血凝块B.二管均呈红色，一管无色C.离心后，上清液呈黄色D.离心后，上清液无色E.迅速形成薄膜【答案】 C5、骨髓纤维化A.外周血见泪滴细胞B.外周血中有较多的嗜酸、嗜碱性粒细胞C.外周血有大量的靶形红细胞D.外周血有大量的球形红细胞E.外周血有大量的原始细胞【答案】 A6、下列关于NK细胞的叙述正确的是A.NK细胞形态具有异质性，所有的LCL细胞均为NK细胞B.具有非特异杀伤作用，但无MHC限制性C.对所有肿瘤细胞均有作用D.NK细胞发源于骨髓干细胞，其发育、成熟依赖胸腺微环境E.NK细胞不具有细胞介导的细胞毒作用【答案】 B7、不属于宫颈鳞状上皮癌低分化鳞癌形态特征的是A.癌细胞多成群出现B.核畸形明显C.细胞体积大，胞质丰富，多数有角化D.胞核呈不规则形E.核质比明显增大【答案】 C8、急诊测定生化项目时应用的抗凝剂是（）。

A.草酸盐B.肝素C.枸橼酸钠D.氟化钠E.EDTA【答案】 B9、甘油三脂与冠心病关系的叙述，错误的是（）。

A.富含甘油三酯的脂蛋白在动脉粥样硬化中起重要作用B.高甘油三酯血症常伴HDL-C水平升高C.血浆甘油三酯升高是冠心病发生的一个独立危险因素D.甘油三酯以VLDL循环于血中，VLDL如转变为小而密LDL，则致动脉粥样硬化能力增加E.甘油三酯增高反映了CM和/或VLDL水平增高【答案】 B10、对放线菌叙述正确的是A.革兰阴性菌B.抗酸性为阴性C.触酶试验阳性D.可产生吲哚E.分解脲素【答案】 B11、质粒的本质是A.染色体DNAB.胞质颗粒C.染色体外DNAD.胞质中核糖体E.中介体【答案】 C12、在感染的病灶组织压片镜检时见到呈菊花状的菌丝是A.放线菌B.麻风菌C.真菌D.链霉菌E.链丝菌【答案】 A13、尿酮体中乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮分别约占A.2%、78%、20%B.20%、78%、2%C.78%、2%、20%D.2%、20%、78%E.78%、20%、2%【答案】 B14、系统性红斑狼疮（SLE）的标志性抗体是（）。

生物素-亲和素生物素－亲和素系统（Biotin-Avidin System，以下简称BAS）是半个世纪前发现的一种新型生物反应放大系统。

生物素与亲和素之间高亲合力的牢固结合，使BAS免疫标记和有关示踪分析更加灵敏，生物素－亲和素系统目前已广泛用于抗原、抗体的定性、定量检测及定位观察研究。

生物素（D-biotin）分子结构见图，分子量244.31Da．生物素分子有两个环状结构（如下左图），其中咪唑酮环是与亲和素结合的主要部位；噻吩环，C2上有一戊酸侧链，其末端羧基是结合抗体和其他生物大分子的惟一结构，经化学修饰后，生物素可成为带有多种活性基团的衍生物——活化生物素（如下右图）亲和素（avidin，AV）亦称抗生物素蛋白、卵白素，是从卵白蛋白中提取的一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白，分子量为68kD。

4个相同的亚基使每个亲和素能最多可结合4个分子的生物素。

生物素与亲和素之间具有极强的亲和力，比抗原与抗体间的亲和力高得多。

并且，二者的结合稳定性好、专一性强。

生物素－亲和素系统有哪些优点：灵敏度生物素易与蛋白质、核酸类及其他生物大分子结合，形成的生物素衍生物，不仅保持了大分子物质的原有生物活性，而且具有多价性。

此外，每个亲和素分子有四个生物素结合部位，可同时以多价形式结合生物素化的大分子衍生物和标记物。

因此，BAS具有多级放大作用，使其在应用时可极大地提高检测方法的灵敏度。

特异性亲和素与生物素间的结合呈高度特异性。

因此，BAS的多层次放大作用在提高灵敏度的同时，并不增加非特异性干扰。

而且，BAS结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响。

因此，在实际应用中可**限度地降低反应试剂的非特异作用。

稳定性亲和素结合生物素的亲和常数可为抗原-抗体反应的百万倍，二者结合形成复合物的解离常数很小，呈不可逆反应性；而且酸、碱、变性剂、蛋白水解酶以及有机溶剂均不影响其结合。

因此，BAS在实际应用中，产物的稳定性高，从而可降低操作误差，提高测定的精确度。