生物素亲和素系统
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简述生物素亲和素系统的特点嘿,今天咱来聊聊这个生物素亲和素系统!你可别小看它,这玩意儿那可是相当有特点嘞!
要说这生物素亲和素系统,就像是一对超级合拍的好搭档。
首先呢,它们之间的亲和力强得很呐!硬要形容的话,就像是两块强力磁铁,“啪”一下子就吸到一块儿了,那叫一个紧密!这就意味着它们一旦牵手,那轻易可就不会松开哟,别提多牢固啦。
然后呢,这系统还特别敏感!就像是那种对周围动静特别在意的小机灵鬼儿。
只要稍微有点风吹草动,它就能迅速做出反应。
这种敏感度简直逆天了,别的系统可能还在那儿迷迷糊糊呢,它就能第一时间察觉到情况。
嘿,你知道吗?它还特别神通广大。
想象一下,它就如同一个万能连接器,可以把各种不同的东西都给串起来。
不管是蛋白质啦,还是别的啥玩意儿,它都能给完美地连接起来,厉害吧?这能力,简直就是生物界的“月老”,专门负责牵红线的!
而且哦,这个系统还超级稳定呢!就跟那泰山似的,任凭风吹雨打,它就是稳稳当当的。
不管周围环境怎么变,它都能坚定不移地发挥自己的作用。
咱再说说它的效率,那真是杠杠的!一旦运作起来,那速度就跟火箭似的,“嗖嗖”就把事情给搞定了。
别的系统可能还在慢悠悠地晃悠呢,它早就跑完一圈回来休息啦。
说起来,要是咱们生活中也有这种像生物素亲和素系统一样厉害的东西该多好啊!啥东西都能快速、牢固、敏感地结合在一起,那得省多少事儿啊!总之,这个生物素亲和素系统可真是不简单呐,小小的身体里蕴含着大大的能量和特点。
真是让咱不得不佩服大自然的神奇和智慧嘞!希望科学家们能好好利用它的这些特点,给咱的生活带来更多的惊喜和便利哟!是不是挺有趣的呀?嘿嘿。
第十一章生物素-亲和素放大技术第一节生物素的理化性质与标记生物素(biotin)、亲和素(avidin)是一对具有高度亲和力的物质,它们的结合迅速、专一、稳定并具有多级放大效应。
生物素-亲和素系统(BAS)是一种以生物素和亲和素具有的多级放大结合特性为基础的实验技术,它既能偶联抗原抗体等大分子生物活性物质,又可被荧光素、酶、放射性核素等材料标记。
生物素(biotin,B)广泛分布于动、植物组织中,常从含量较高的卵黄和肝组织中提取。
一、活化生物素利用生物素的羧基加以化学修饰可制成各种活性基团的衍生物,称为活化生物素。
生物素活化后,可容易地与各种抗原、抗体、酶及核酸分子中相应基团偶联形成生物素化标志物。
(一)标记蛋白质氨基的活化生物素此种活化生物素的制备方法是将生物素与N-羟基丁二酰胺在碳二亚胺的作用下进行缩和,生成生物素N-羟基丁二酰亚胺醣(BLAHS)。
BLAHS分子酯键中的—C-=0基团可与蛋白质分子中赖氨酸的氨基形成肽键。
从而使蛋白质标记上生物素。
(二)标记蛋白质醛基的活化生物素用于此类标记的活化生物素有两种:生物素酰肼(BHZ)和肼化生物胞素(BGHZ)。
BHZ是水合肼与生物素的合成物,主要用于偏酸性糖蛋白的生物素标记。
(三)标记蛋白质巯基的活化生物素3-(N-马来酰亚胺-丙酰)-生物胞素(MPB)是能特异地与蛋白质巯基结合的活化生物素试剂。
(四)标记核酸的活化生物素活化生物素可通过缺口移位法、化学偶联法、光化学法及末端标记法等技术使生物素的戊酸侧链通过酰胺键与核酸分子相连,构成生物素标记的核酸探针。
二、生物素标记蛋白质(一)生物素化蛋白质衍生物的特性生物素化蛋白质衍生物有两类:1.生物素化的大分子活性物质,如抗原、抗体。
2.标记材料(如酶)结合生物素后制成的标志物。
(二)标记方法1.标记抗体、抗原选用第二抗体进行生物素标记,制备的标志物具有通用性。
2.标记酶生物素标记辣根过氧化物酶第二节亲和素、链霉亲和素的理化性质与标记亲和素和链霉亲和素是生物亲和素的天然特异性结合物。
ABC法亲和素与生物素系统的操作流程
亲和素—生物素—过氧化物酶复合物法是许世明于1981年在BAB法和LAB法的基础上改良的,其特点是利用亲和素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶。
ABC法与LAB法、BAB法不同的是第一抗体不为生物素所标记,生物素标记的第二抗体与ABC复合物相连接,最后进行显色反应定位。
复合物是将过氧化物酶结合在生物素上,再将生物素—过氧化物酶连接物与过量的亲和素反应而制备的。
ABC法与LAB法、BAB法相比较具有敏感性高、特异性强、背景染色淡等优点。
ABC法染色流程如下。
(1)4um石蜡切片常规脱蜡至水,PBS洗3X3min。
(2)IHC的前处理视特异性一抗不同,可采用蛋白酶消化或热诱导的微波抗原修复(AR),PBS洗3X3min。
(3)3%过氧化氢孵育10min(可省略),以阻断内源性过氧化物酶活性。
(4)PBS洗3X3min。
(5)10%非免疫性动物血清孵育10min(可省略),以减少非特异性背景,无需冲洗只需吸去多余血清。
(6)滴加适当稀释的第一抗体,37℃孵育60min或4℃过夜。
(7)PBS洗3X3min。
(8)滴加生物素标记的二抗,37℃孵育30~60min。
(9)PBS洗3X3min。
(10)滴加ABC复合物(提前30min,A液与B液等量混合),37℃孵育30~60min。
(11)PBS洗3X3min。
(12)0.04%DAB(含0.03%H:02)显色5~10min。
(13)复染,脱水,常规树胶封固和结果观察。
主管检验师资格考试临床免疫学和免疫检验复习习题第十一章生物素-亲和素放大技术(附答案解析)一、A1型题1、每个亲和素能结合生物素分子的数目是()A、4B、2C、1D、3E、82、以下关于生物素-亲和素系统(BAS)的说法错误的是()A、1个亲和素分子可结合4个生物素分子B、1个生物素分子可以结合多个亲和素分子C、生物素易与抗体、酶、多聚核苷酸结合D、亲和素易与酶、铁蛋白、荧光素、核素结合E、亲和素和生物素.有极强的亲和力3、免疫组化技术的优点不包括()A、高特异性B、高敏感性C、形态学的直观性D、精确定量分析E、能对抗原表达情况进行分析4、BAS在ELISA技术中应用最广泛的反应模式是()A、ABAB、ABCC、BRABD、BAE、LAB5、免疫组化染色前,对标本进行固定的目的是()A、保存组织细胞的抗原性B、防止细胞脱落C、防止细胞自溶D、终止胞内酶的活性E、使细胞内蛋白质凝固6、ABC-ELISA将酶标记在()A、亲和素B、生物素C、抗体D、补体E、抗原7、关于亲和素-生物素系统的错误描述是()A、用于间接包被B、用于终反应放大C、用于酶免疫测定D、用于胶体金测定E、不用于荧光免疫测定8、ABC-ELISA将酶标记在()A、亲和素B、生物素C、抗体D、补体E、抗原9、关于生物素标记蛋白质的注意事项,下列说法错误的是()A、根据抗原或抗体分子结构中所带可标记基团的种类以及分子的理化性质,选择相应的活化生物素和反应条件B、活化生物素与待标记抗原或抗体可以为任意比例C、在生物素与被标记物之间加入交联臂样结构可减少空间位阻影响D、生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后,不影响后者的免疫活性E、生物素标记酶时会影响其免疫活性10、亲和素和生物素结合的特点是()A、免疫反应B、不属于免疫反应C、特异性弱D、亲和力小E、不够稳定二、B型题1、 A.ABCBC.BABD.直接法BASE.间接法BAS<1> 、标记亲和素-生物素的方法为();<2> 、亲和素-生物素化酶复合物技术为();<3> 、生物素化第二抗体为();<4> 、生物素化第一抗体为()。
亲和素与生物素连接
亲和素与生物素,生命中的紧密连接。
亲和素和生物素是生命中不可或缺的两种物质,它们之间有着
紧密的连接。
亲和素是一种蛋白质,它在生物体内起着极其重要的
作用。
亲和素通过与生物素结合,形成了生物素-亲和素复合物,这
种复合物在细胞内参与了许多重要的生物化学反应。
生物素是一种维生素,它在细胞代谢中扮演着关键的角色。
生
物素与亲和素结合后,形成了一种生物素-亲和素复合物,这种复合
物在许多酶催化的生物化学反应中起着媒介作用。
这些反应包括葡
萄糖新陈代谢、脂肪酸合成和氨基酸代谢等,这些都是维持生命所
必需的过程。
亲和素和生物素的连接不仅仅局限于细胞内的生物化学反应,
它们也在医学和生物技术领域发挥着重要作用。
生物素标记技术利
用了生物素和亲和素之间的结合,用于检测和分离蛋白质和核酸等
生物分子,这为科学研究和医学诊断提供了重要的工具。
总之,亲和素和生物素之间的连接是生命中不可或缺的一部分。
它们共同参与着细胞代谢和生物化学反应,为维持生命的正常运转提供了重要的支持。
同时,它们的结合也为科学研究和医学诊断提供了重要的技术手段。
因此,亲和素与生物素之间的连接是生命中不可或缺的一环。