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网织红计数的方法与原理

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《临床检验基础》课件——第九讲：网织红细胞计数实验

《临床检验基础》课件——第九讲：网织红细胞计数实验
过5%
不允许以血红 蛋白浓度来折 算红细胞数
充池要均匀， 不能有气泡混 入、溢出或不
满
请认真书写实 验报告
谢谢 大家
数板等
试剂
红细胞稀释液
改良牛鲍氏计数板
操作步骤
01
02
03
04
取中号试管1支 ，加红细胞稀 释液20ml。用清洁干燥微量吸管 取末梢血10μl ，擦去 管外余血后加至红细 胞稀释液底部，再轻 吸上层清洗吸管2-3次
立即混匀。
混匀后，用干净 微量吸管将红细 胞悬液充人计数 池，不得有空泡 或外溢，充池后 静置2-3 min后计
参考区间
男：
（4.09～5.74）×1012/L
女：
（3.68～5.13）×1012/L
新生儿：（5.2～6.4）×1012/L
注意事项
1
2
3
4
5
采血时不能 挤压过甚， 因此针刺深 度必须适
当。。
稀释液要过滤， 试管、计数板 均须清洁，以 免杂质、微粒 等被误认为红
细胞
参考范围数 值内，两次 红细胞计数 相差不得超
临床检验基础
第九讲 网织红细胞计数
目录
CONTENTS
实验原理 实验器材 实验试剂 操作步骤
计算 参考值 注意事项 思考题
实验原理
用等渗稀释液将血液按一定倍 数稀释，充人计数池后显微镜下 计数一定体积内红细胞数，换算 求出每升血液中红细胞的数量
试验器材、试剂
试验器材
显微镜、改良 Neubauer血细胞计
数。
高倍镜下依次计 数中央大方格内 四角和正中共5 个中方格内的红 细胞。对压线细 胞按"数上不数下 、数左不数右"的

《临床检验基础》课件——第九讲：网织红细胞计数理论

《临床检验基础》课件——第九讲：网织红细胞计数理论

3．放疗和化疗的监测
•指导临床适时调整治疗方案，避免造成严重的 骨髓抑制。
•机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制，早期 HFR和MFR降低，而后网织红细胞数值降低； 停止放、化疗，骨髓功能恢复后，这些指标依次 上升。
临床检验基础
第九讲 网织红细胞计数
网织红细胞(reticulocyte，Ret)是晚幼红细胞脱核后到 完全成熟红细胞间的过渡细胞
胞质中残存嗜碱性物质核糖核酸(RNA)，经煌焦油蓝等活 体染色后，嗜碱性物质凝聚成蓝黑色颗粒，连缀成线， 线连接成网。
属于尚未完全成熟的红细胞(当嗜碱性物质消耗殆尽后才 被视为成熟红细胞)，一般为8～9.5μm。
2．评价疗效
(1)观察贫血疗效：贫血随访
缺铁贫或巨幼贫有效治疗后，2～3d后Ret开始上升， 7～10d达到最高峰(约10％)，2周后渐降至正常。
(2)骨髓移植后监测骨髓造血恢复：
骨髓移植后第21天，如Ret大于15X109／L，常表示 无移植并发症；
若骨髓开始恢复造血功能，首先HFR和MFR上升， 其次为网织红细胞计数值上升。
外周血中网织红细胞主要为Ⅳ型，凡含有2个以上 网织颗粒的红细胞均应计为网织红细胞。
3．网织红细胞计数方法
(1)Miller窥盘： (2)显微成像系统：计算机和细胞形态分析软件，
①HFR：粗颗粒堆积成网状。 ②MFR：粗颗粒在10个以上，或细小颗粒超过15个。 ③LFR：细胞内含15个以下细小颗粒
参考范围
参考值
成人和儿童:0.005～0.025
网织红细胞百分数 新生儿: 0.02～0.06 网织红细胞绝对数 成人和儿童: (24～84)X109／L
4
临床意义
1．评价骨髓增生能力，判断贫血类型。

网织红细胞计数实训报告

网织红细胞计数实训报告

一、实训背景网织红细胞是红细胞前体，其计数对于评估骨髓造血功能和红细胞生成情况具有重要意义。

本实训旨在通过学习网织红细胞计数的操作方法，掌握其计数原理和注意事项，提高对血液学检验的认识和技能。

二、实训目的1. 了解网织红细胞计数的基本原理和操作方法。

2. 掌握显微镜下观察和计数网织红细胞的技术。

3. 学会分析网织红细胞计数结果，并应用于临床实践。

三、实训内容1. 网织红细胞计数原理网织红细胞计数是通过染色技术将网织红细胞与成熟红细胞区分开来，然后进行计数。

常用的染色剂有煌焦油蓝、新亚甲蓝等。

染色后，网织红细胞呈现蓝绿色网状或点粒状物质，而成熟红细胞则呈红色。

2. 网织红细胞计数操作方法（1）制备血涂片：取新鲜血液2滴，加入10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液2滴，立即混匀，置37℃下15～20分钟。

（2）制片：取1小滴制成薄血涂片，自然干燥。

（3）染色：将染好的血涂片放入染色缸中，用染液染色5～10分钟。

（4）观察：在低倍镜下选择红细胞分布均匀的部位进行观察。

（5）计数：在油镜下计数至少1000个红细胞中的网织红细胞数。

（6）计算：网织红细胞分数 = 计数的网织红细胞数 / 1000网织红细胞绝对值 = 红细胞数× 10^12 / L × 网织红细胞分数3. 注意事项（1）染色时间要适中，过长或过短都会影响计数结果。

（2）观察时要选择红细胞分布均匀的部位，避免计数误差。

（3）计数时要仔细区分网织红细胞与HbH包涵体。

（4）计算时要确保数值准确。

四、实训结果与分析本次实训，我们按照操作步骤进行了网织红细胞计数，并计算出网织红细胞分数和绝对值。

通过对计数结果的分析，我们了解到患者的骨髓造血功能和红细胞生成情况。

五、实训总结通过本次实训，我们掌握了网织红细胞计数的操作方法，了解了其计数原理和注意事项。

同时，我们也认识到，在实际操作中，要严格按照操作步骤进行，确保计数结果的准确性。

此外，我们还学习了如何分析计数结果，并将其应用于临床实践。

实验五 网织红细胞计数

实验五 网织红细胞计数

3．因网织红细胞在体外仍继续成熟，其数量随 着保存时间的延长而递减，所以标本采集后应及 时处理；标本染色后也应及时测定，因染料吸附 可人为增高网织红细胞计数值。 4．选择红细胞分布均匀、网织红细胞着色好的部 位计数。由于网织红细胞体积较大，故应兼顾血 片边缘和尾部。
二、玻片法
【目的】 掌握网织红细胞玻片法的原理及 操作方法。 【原理】 网织红细胞胞质内残存少量核蛋 白体和核糖核酸(RNA)等嗜碱性物质，经煌 焦油蓝或新亚甲蓝等染液活体染色后呈蓝 色网织状或点粒状，可与完全成熟的红细 胞区别。
【注意事项】 1．染液质量直接影响网织红细胞计数的准确性。 煌焦油蓝染液长期普遍应用，但溶解度低，易形 成沉渣吸附于红细胞表面；新亚甲蓝对Ret染色力 强且稳定，是WHO推荐使用的染液。试剂应定期配 制，以免变质沉淀。瑞氏染液复染可使网织红细 胞数值偏低。 2．染色时间不能过短，室温低时，可放置37℃ 温箱或适当延长染色时间。染液与血液的比例以 1∶1为宜。
【操作】 1．加染液 2．加血液 3．制备涂片 4．观察 5．计数 6．计算 7．报告方式
【注意事项】 同试管法。
实验五 网织红细胞计数
一、试管法
【目的】 掌握网织红细胞试管法的原理及 操作方法。 【原理】 网织红细胞胞质内残存少量核蛋 白体和核糖核酸(RNA)等嗜碱性物质，经煌 焦油蓝或新亚甲蓝等染液活体染色后呈蓝 色网织状或点粒状，可与完全成熟的红细 胞区别。
【操作】 1．加染液 2．加血染色 3．制备涂片 4．源自察 5．计数 6．计算 7．报告方式

网织红细胞计数

网织红细胞计数
①动态观察病情变化。炎症性疾病及组织损伤 或坏死如风湿热、结核病、心肌梗塞等疾病， 病变活动时血沉增快，病情好转或静止时，血 沉率可较前降低或恢复至正常； ②良、恶性肿瘤的鉴别。良性肿瘤血沉多正常， 而恶性肿瘤则有不同程度增快，晚期或有转移 时常明显增快； ③反映血浆中球蛋白增高，可考虑到一些导致 高球蛋白血症的疾病的诊断与鉴别诊断。
8
3．作为病情观察的指标
溶血性贫血及失血性贫血，治疗过程中 连续观察网织红细胞计数，可作为判断 病情变化的参考指标。 如治疗后网织红细胞逐渐降低，表示溶 血或出血已得到控制。 如网织红细胞持续不减低，甚至更增高， 表示病情未得以控制，甚至加重。
9
四、红细胞沉降率测定
红细胞沉降率（ESR），简称血沉率 指红细胞在一定条件下沉降的速率。 正常情况下，红细胞在血浆中具有相对 的悬浮稳定性，沉降极其缓慢。 在病理情况下，血沉率可明显增快。
28
临床意义
2．血细胞比容减低 见于各种贫血。 不同类型的贫血，红细胞体积大小不同， 故血细胞比容的减少与红细胞数量减少 并不—定成正比。 因此必须将红细胞数、血红蛋白量和血 细胞比容三者结合起来，计算红细胞各 项平均值才有参考意义。
29
(二)红细胞平均值的计算
1．平均红细胞容积(MCV) 指每个红细胞的平均体积，以飞升（ fl ）为单 位。
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参考值
魏氏(Westergoen)法： 成年男性0~15mm/1小时末
成年女性0~20mm/1小时末
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临床意义
(一)生理性变化 12岁以下的儿童血沉略快。 妇女月经期血沉略增快，可能与子宫内膜破损 及出血有关。 妊娠3个月以后至分娩后3周血沉快，与生理性 贫血及纤维蛋白原含量增加等有关。 老年人血浆纤维蛋白原含量增加血沉加快。 高原地区居民红细胞增多，血沉低于平原地区。

网织红细胞计数操作规程

网织红细胞计数操作规程

网织红细胞计数操作规程目的：本实验旨在规范网织红细胞计数的标准操作，以确保实验数据的准确性。

原理：网织红细胞是未完全成熟的红细胞，其包体较一般红细胞稍大，胞浆中尚有嗜碱性残留物质，可被煌焦油蓝等染成蓝色颗粒状、线状及网状结构物。

网织红细胞的数量可用百分率或每立方毫米血液中的绝对值数来表示。

材料：煌焦油蓝（灿烂甲酚蓝）、枸橼酸钠、生理盐水、香柏油、载物片（玻璃片）、推片（磨去边的玻璃片）、试管（2ml）、毛细吸管或枪头（200微升）、光学显微镜。

操作规程：染色液配制：将煌焦油蓝0.4g和3.5%枸橼酸钠20ml研磨溶解后加入生理盐水至100ml，过滤备用。

室温下可保存6个月。

血膜片制备：1.染色：取试管一支，用毛细管或枪头于其中加入染液2～5滴，然后再加入新鲜血液1滴轻摇混合，染色10～15min。

2.制片：取载物片一片，用毛细管或枪头吸取血液染色液1小滴于载物片上，并用推片约45度角推制成舌型血膜片，自然干燥备用。

3.观察：用显微镜观察，取血膜片滴入香柏油1滴，将血膜片置于显微镜载物台，用油镜观察网织红细胞。

4.计数：取计数器在油镜下检查计数红细胞，即计数红细胞中网织红细胞的数量，检查计数1000个红细胞中网织红细胞的数量，并得出千分率再除以10即为百分率。

计算公式：百分率=1000个红细胞中网织红细胞的数量/1000注意事项：1.载物片使用前必须经过酸或碱液浸泡脱脂处理后方可使用。

2.血膜片制备需要反复练推片，熟练推制血膜片的技巧。

3.血膜片的厚薄要适中，过厚或过薄均无法进行观察。

4.室温过低时，血液染色时间要适当延长，以确保细胞着色更充分。

5.血膜片需在3天内检查计数，否则其网状结构会褪色，不易观察清晰。

网织红细胞计数SOP(手工法)

网织红细胞计数SOP(手工法)
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XXXX医院
临床检验实验室
网织红细胞计数（
［检测原理］
网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质,
经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后呈浅蓝或深蓝色的网状结构。
溶于双蒸馏水100ml中，过滤后备用；
2,10g/L煌焦油蓝ACD溶液：取ACD保养液（血库用）20ml,用1mol/L NaO调至PH 7.5左右，加入研细的煌焦油蓝200mg溶解后过滤备用。
（二）方法：
1，于小试管中滴加1滴煌焦油蓝生理盐水溶液或煌焦油蓝ACD溶液。
2，加入末梢血2滴于上述试管中，混匀。
［标本的收集与处理］
1,用EDTA-K20.2ul抗凝静脉血1ml,轻轻摇动抗凝。凝集，溶血，血量小 于0.5 ML或抽血时间超过四小时为不合格标本，拒收。
2，直接采集未稍血液。
［操作步骤］一，百分计数；
（一）试剂：
1,10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液：煌焦油蓝1g,枸橼酸钠0.4g，氯化钠0.85g
4，试剂定期重配，以免变质沉淀。
5，用瑞氏--姬姆萨染液复染后可使网织红细胞计数结果减少。
6，因操作误差大，不宜用波片直接染色法。
7,网织红细胞也可用荧光染色或流式细胞仪计数。
8,抗凝血标本应尽可能快地制片。
（四）参考范围：
成人：0.005--0.015 （ 0.5%--1.5% ）;
新生儿：0.03--0.06 （ 3%--6% ）
XXXX医院
临床检验实验室
文件编号：
XXXX
网织红细胞计数(Ret)，网织红细胞绝对值计数
网织红细胞% X红细胞/ul

(三)网织红细胞计数

(三)网织红细胞计数

（2）评价疗效
网织红细胞反应： 网织红细胞反应：IDA或巨幼细胞贫血分别 或巨幼细胞贫血分别 给予铁剂、维生素B 或叶酸治疗2~3d后，网织 给予铁剂、维生素 12或叶酸治疗 后 红细胞计数值开始上升， 达到最高(10% 红细胞计数值开始上升，7~10d达到最高 达到最高 左右)；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、 左右 ；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、 血红蛋白开始升高。 血红蛋白开始升高。 骨髓移植、 治疗后： 骨髓移植、EPO治疗后：若骨髓开始恢复造 治疗后 血功能， 升高， 血功能，RMI升高，网织红细胞计数值上升。 升高 网织红细胞计数值上升。
六、参考值
成人： 成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%） （ ） 新生儿： 新生儿：0.02-0.06（2%-6%） （ ） 儿童： 儿童：0.005-0.075（0.5%-7.5%） （ ） 成人绝对值（ 成人绝对值（24-84） ×109/L ）
七、临床意义
（1）评价骨髓增生能力，判断贫血类型 ）评价骨髓增生能力， 再障时 明显降低。绝对值低于 × 再障时，明显降低。绝对值低于5×109/L可 可 做为急性再障的辅助诊断指标。 做为急性再障的辅助诊断指标。 失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明 失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明 溶血性贫血 显高于正常。 显高于正常。 营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持 营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持 正常、轻度升高或降低。 正常、轻度升高或降低。
（3）放、化疗监测 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制， 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制， 早期HFR和MFR降低，然后才检测到网织 降低， 早期 和 降低 红细胞的降低。而停止放、化疗， 红细胞的降低。而停止放、化疗，骨髓功 能恢复后，又见上述指标依次上升。 能恢复后，又见上述指标依次上升。可指 导临床医师适时调整治疗方案， 导临床医师适时调整治疗方案，避免造成 严重的骨髓抑制。 严重的骨髓抑制。

网织红细胞计数

网织红细胞计数

号的部位，按一定顺序计数。由于网织红细胞体
积较大，应兼顾血涂片的边缘和尾部。凡含有2个
问答题
1.网织红细胞的分类和特点。 2.网织红细胞计数可用哪些染液？ 3.影响网织红细胞计数的因素有哪些? 4.网织红细胞计数增高的临床意义。 5.Ret测定注意事项。 6.如何根据血液标本的血红蛋白浓度推 一张好的血玻片?
网织红细胞比值=
1000
网织红细胞绝对值（个/L）=网织红细胞比值×红细胞数/L
[注意事项]
• 血液与染液的比例以1：1为宜，贫血时适当增加
血量。
• 染色时间不能过短，室温低时，可适当延长染色
时间或放置37℃恒温水浴箱染色，否则会因为染
色浅造成结果偏低。
• 选择红细胞分布均匀、不重叠、网织红细胞着色
的一角轻轻将血液与染料混匀。用另张载玻片盖于其上，使
两玻片黏合，以防染色过程中水分蒸发而使血液和染料干燥。 （3）染色和制片室温放置5-10min后，移开上层载玻片,取1 小滴制成薄血涂片(或两载玻片贴合轻轻对拉，制备成两张 涂片)。 （4）观察、计数和计算。
网织红细胞
四、结果计算
计数1000个全部红细胞中的网织红细胞数
（2）加血标本 于上述试管内加人新鲜全血2滴，立 即混匀。
（3）染色和制片 水浴15-20min,取混匀染色血1小 滴制成薄血涂片，自然干燥。 （4）观察网织红细胞 低倍视野下观察红细胞的分 布和染色情况，并选择红细胞分布均匀、平铺、着 色好的部位。
2.玻片法
（1）滴加染液取载玻片1张,在其 一端滴染液1滴,待自然干 燥后备用。 （2）加血液标本加人新鲜全血1滴于千燥的染料上，用推片
实验四
网织红细胞计数
一、实验目的及原理

(三)网织红细胞计数

(三)网织红细胞计数

精选版课件ppt
1
网织红细胞（Ret）
是晚幼红细胞脱核后到成熟红细胞间 的过渡细胞，是尚未完全成熟的红细胞， 其胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质。嗜碱 性物质与染料凝聚成蓝色颗粒，颗粒与颗 粒连缀成线，线连接成网，故而得名。
分型：丝球型、网型、破网型、点粒型。 （Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型）
精选版课件ppt
2
骨髓移植、EPO治疗后：若骨髓开始恢复造 血功能，RMI升高，网织红细胞计数值上升。
精选版课件ppt
13
（3）放、化疗监测
机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制， 早期HFR和MFR降低，然后才检测到网织 红细胞的降低。而停止放、化疗，骨髓功能 恢复后，又见上述指标依次上升。可指导临 床医师适时调整治疗方案，避免造成严重的 骨髓抑制。
精选版课件ppt
16
3. 低倍镜浏览，选取红细胞分布均匀网织红细胞染色 较好的部分（体尾交界处），滴香柏油转换至油镜， 在Miller窥盘下计数小方格中的RBC数和大方格中 的网织红细胞数（或数出整个视野中的RBC总数和 其中的网织红细胞数，换一视野同法计数至几个视 野RBC总数>1000为止）。
精选版课件ppt
6
Miller窥盘
网织红细胞
精选版课件ppt
3
计数方法
1、普通光学显微镜法：活 体染色后推片镜检
2、网织细胞计数仪法：荧 光染色后用流式细胞术计数
精选版课件ppt
4
Hale Waihona Puke 二、试剂器材1、试剂 10g/L煌焦油蓝酒精（水）溶液
2、器材 毛细血管采血用具、小试管、 载玻片、推片、显微镜、香柏油、二甲 苯及擦镜纸、Miller窥盘或直径约20 mm （较目镜内径稍小）的圆形硬纸片（正 中央开一边长为3mm的菱形或正方形小 孔，置目镜光阑处，用于缩视野法计数）

网织红细胞

网织红细胞
小格）计数网织红细胞数。
Miller窥盘结构 示意图
ü计算
2．玻片法
ü 加染液：于载玻片的一端滴加10g/L煌焦油蓝乙醇溶液1 滴，自然干燥后备用。
ü 加血液：取血l滴在干燥的染料上，用推片角将血滴与 染料混匀，用另一载玻片盖在此载玻片上，使两玻片粘 合。
ü 制备涂片：5～10min后，移开上层玻片，取l小滴推制 成血涂片。
成人、儿童：0. 5℅～1.5℅。 新生儿：2.0℅～6.0℅。 成人绝对值：（24～84）×109/L。
（六）临床意义
网织红细胞计数是反映骨髓造血功能的重要 指标。 1．评价骨髓增生能力，判断贫血类型 2．评价疗效 3．放疗和化疗的监测
常见网织红细胞参数及评价
小
网织红细胞活体染料的评价
2. 正确辨认网织红细胞 外周血液网织红细胞 主要为Ⅳ型，凡含有2个或2个以上颗粒、且颗粒必须 远离细胞边缘的红细胞均应计为网织红细胞。
红细胞各种颗粒或包涵体的鉴别
3．网织红细胞计数方法
（1）Miller窥盘法：ICSH及我国卫生部临床检
验中心推荐使用Miller窥盘法（见下图）进行网
五、网织红细胞计数
网织红细胞（Ret，RET）是 介于晚幼红细胞和成熟红细胞之 间的过渡细胞，略大于成熟红细 胞，其胞质中残存的嗜碱性物质 RNA经碱性染料活体染色后，形 成蓝色或紫色的点粒状或丝网状 沉淀物。
ICSH将网织红细胞分为4型。
网织红细胞
网织红细胞分形及特征
（一）检测原理
1．普通显微镜法 活体染料的碱性着色基团可与 网织红细胞RNA的磷酸基结合，使RNA胶体间的 负电荷减少而发生凝缩，形成蓝色的点状、线状或 网状结构。
2．血液分析仪法 特殊染料与网织红细胞中RNA 结合后进行RNA定量，可精确计数网织红细胞占 成熟红细胞的百分数（Ret%），并可根据RNA含 量将网织红细胞分类及计算网织红细胞其他参数。

网织红细胞计数

网织红细胞计数
网织红细胞计数
一、教学目的：熟练掌握网织红细胞计数的原理、方法、参考值及临床
意义
二、实验内容
1、网织红细胞计数
（1）原理：网织红细胞胞是介于晚幼红细胞与成熟红细胞之间的的过渡阶段细胞质 内残存的少量嗜碱性核糖体和核糖核酸在活体染色时可被煌焦油草蓝染成蓝色网状 或颗粒状，可与完全成熟红细胞区别。 （2）器材与试剂：采血用具、显微镜、10g/L煌焦油蓝生理盐水液、试管、玻片等 （3）操作方法： ①于小试管中加入10g/L煌焦油蓝生理盐水液2滴，再加入新鲜全血2滴，混匀，于 室温下染色15-20分钟 ②取1小滴混合液制成血涂片，待干。 ③低倍镜下选择红细胞分布均匀的部位，转至油镜下进行观察网织红细胞并计数 1000个红细胞中的网织红细胞数
网织红细胞分型及特征
分型
Ⅰ型 （丝球型）
Ⅱ型（网型）
形态特征
红细胞几乎被肉织红充满 位于外周血少见
Ⅲ型（破网型）
Ⅳ（点粒型）
网状结构少，呈不规刚点状
分散的细颗粒、短丝状
少量存在于外周血
主要存在于外周血中

④计算：网织红细胞数=计数网织红细胞数/1000 （4）结果报告： Ret:0.0** （5）注意事项 （6）参考值 成人：0.005-0.025 新生儿 0.02-0.06 绝对值（24－84）×109/L（红细胞数/L ×网织红细胞数) （7）临床意义 A：评价骨髓增生能力（判断贫血类型） 增高：表示骨髓造血功能旺盛。各种增贫可增多，尤于溶 贫显著。 减低：表示骨髓造血功能减退，常见于再障 B：观察疗效：网织红细胞反应（治疗后2－3天网织红开始上升，
7－10达最高峰（约0.10），2周后渐隆至正常水平）

实验三网织红细胞计数血沉测定优秀课件

实验三网织红细胞计数血沉测定优秀课件
▪ 3. 充池 混匀后用微量吸管将细胞悬液冲入计数 池，室温下平放3～5分钟，待细胞下沉后于显 微镜下计数。
▪ 4. 计数 用低倍镜依次计数四角4个大方格内的 白细胞数。
▪ 5. 计算 白细胞 /L=N/4×10×20×106=N/20×109/L
▪ 6. 报告方式 X.X×109/L。
▪ 试剂 新亚甲蓝 ▪ 标本 新鲜全血
操作步骤
▪ 1.加染液 将Ret染液2滴加至小试管中，做好标记。 ▪ 2.加血 在已加入染液的小试管内注入新鲜全血2滴，立
即混匀。
▪ 3.染色 室温下染色10-15min。 ▪ 4.涂片制备 取染色血1小滴推制成薄血涂片，自然干燥 ▪ 5.观察 低倍镜下选择红细胞分布均匀、着色好、背景
操作步骤
1.采血 采静脉血1.6ml加入含0.4ml 109mmol/L枸 橼酸钠溶液抗凝剂的采血管中（即采血量到采血管 2ml刻度线处） ，混匀。 2.吸血 混匀血吸入血沉管内至刻度“0”处，拭去 管外残余血。 3.立血沉管 将血沉管直立于血沉架上。 4.读数 1h末准确读取红细胞下沉后露出的血浆高 度。 5.报告方式 XX板、血盖片、试管、微量 吸管、加样枪、乳胶吸头、纱布
四、试剂
白细胞稀释液
五、标本
EDTA盐抗凝血
六、操作
▪ 1. 加稀释液 用加样枪吸取白细胞稀释液0.38ml 于小试管中。
▪ 2. 加血 用清洁干燥微量吸管吸取抗凝血20μl， 擦去管外余血，轻轻加至白细胞稀释液底部， 再轻吸上清液清洗吸管2～3次，混匀。
2h内完成。
▪ 5.红细胞沉降率在1h沉降过程中，并不是均衡等速 度的沉降，绝不可以只观察30min沉降率，将结果乘 以2作为1h血沉结果。
二、血液沉降率测定（自动血沉仪法）

实验三、网织红细胞计数血沉测定.

实验三、网织红细胞计数血沉测定.

操作步骤
1.采血 采静脉血1.6ml加入含0.4ml 109mmol/L枸
橼酸钠溶液抗凝剂的采血管中（即采血量到采血管
2ml刻度线处） ，混匀。
2.吸血 混匀血吸入血沉管内至刻度“0”处，拭去
管外残余血。 3.立血沉管 将血沉管直立于血沉架上。
4.读数 1h末准确读取红细胞下沉后露出的血浆高
度。
5.报告方式 XX mm/h
二、血液沉降率测定（自动血沉仪法）
白细胞计数
一、目的
掌握显微镜白细胞计数的方法。
二、原理
用白细胞稀释液将血液稀释一定倍数， 同时破坏溶解红细胞。将稀释的血液冲入计 数池后，在显微镜下计数一定体积内的白细 胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数。
三、器材
显微镜、改良计数板、血盖片、试管、微量 吸管、加样枪、乳胶吸头、纱布
7.计算 Ret百分数=（1000个RBC中的Ret数/1000）×100% 8.结果报告 网织红细胞百分数：X.X%
血涂片制备
推片
血液 载玻片 将推片匀速向前，勿停顿。涂 片的厚薄取决于速度和角度。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
一张满意的血涂片应厚薄均匀
头
体
尾
涂片干燥后用铅笔在血涂片 的头部写上姓名和编号
B 123
李 四
实验三 网织红细胞计数、血 沉测定及白细胞计数
一、网织红细胞计数 目的 掌握网织红细胞（Ret)试管法计数的原理
及操作方法。
原理 网织红细胞胞质内残存少量核蛋白体及核
糖核酸等嗜碱性物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝等 染液活体染色后，呈蓝色网状或点状结构，可与 成熟红细胞相区别。
器材 显微镜、试管、吸管、玻片、推片、 香柏油、擦镜纸、擦镜液 试剂 新亚甲蓝 标本 新鲜全血
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嗜碱性物质少，呈 主要存在与外周血 分散的细颗粒，短 中 丝状
2 检测原理及方法
2.1检测原理
网织红细胞的核糖核酸以弥散胶体状态存在。常 规细胞染色法在涂片及染色过程中对细胞进行了 固定，使网织红细胞的核酸物质即使着色也难于 在普通显微镜下识别。Ret须经活体染色或荧光染 色后才可用显微镜识别或经仪器计算分离。 因此就有两大类计数方法：显微镜计数法和仪器 计数法。
网织红细胞计数
马强虎
网织红细胞计数
1 概念、分型及形态特征 2 检测原理及方法 3 方法学评价 4 质量控制 5 参考值 6 临床意义
1 概念、分型及形态特征
1.1概念：
网织红细胞是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间 的过渡阶段细胞，略大于成熟红细胞，直径 8.0~9.5um，其胞质中残存的嗜碱性物质核糖核酸 （RNA）源自有核红细胞，嗜碱性物质RNA经碱 性染料（煌焦油蓝或新亚甲蓝等）活体染色，形 成蓝色或紫色的点粒状或丝网状结构沉淀物，故 称作网织红细胞。
3.方法学评价
检测方法
评价
普通显微镜法 玻片法 试管法
简便、成本低，可直观细胞形 态；影响因素多，重复性差
水份易蒸发，染色时间短，结Hale Waihona Puke 果偏低易掌握，重复性好，易复查
Miller窥盘计数法 仪器法
规范计算区域，减少了实验误 差，ICSH推荐方法
检测细胞多，精密度高，与手 工法相关性好，易标准化，仪 器贵；出现Howell-jolly小体， 有核红细胞，巨大血小板可是 结果假性增高。
细胞数÷1000 ×100%
网织红细胞
2.3 Miller窥盘计数法（ICSH推荐使用的Ret显微镜 计数法）
1．标本采集：真空采血管或普通空针采静脉血， 用EDTA-K2抗凝（1.5~2.2mg/ml）
2．标本处理：同试管法 3将Miller窥盘置于目镜内
直径19mm，厚1mm的圆形玻璃
ICSH根据网织红细胞的形态特征和成熟程度将 Ret分为4型：
分型
形态特征
正常存在部位
Ⅰ型（丝球型） Ⅱ型（网型） Ⅲ型（破网型） Ⅳ型（点粒型）
RBC几乎被网织物 仅在正常骨髓 充满
位于RBC中央、线 大量存在与骨髓， 团样，结构松散 外周血中很难见到
网状结构稀少，呈 少量存在与外周血 不规则点状排列 中
4质量控制
4.1显微镜计数法：影响因素有操作人员对网织红 细胞的识别能力，血涂片质量好坏，计数红细胞 数量，计数方法等；Miller窥盘计数网织红细胞 误差可减小。 4.2仪器法：出现Howell-jolly小体，有核红细胞， 巨大血小板可是结果假性增高。
5参考值
网织红细胞百分数： 成人和儿童：0.005~0.025； 新生儿：0.02~0.06
2.2显微镜计数法（玻片法、试管法和Miller窥盘计数 法） 。
.试管法
1.取小试管滴加2滴10g/L的煌焦油蓝生理盐水，混 匀；
2.加等量（2滴）血液（末梢血或EDTA-K2抗凝静脉 血），混匀；
3.置37℃静置15-20Min后，取一滴制成玻片； 4.油镜下至少计数1000个红细胞中网织红细胞数； 5.计算：网织红细胞=计数1000个红细胞中的网织红
4．在低倍镜下选择红细胞分布均匀，网织 红细胞着色较好的部位，按一定顺序移动 视野，用油镜计数大方格内的网织红细胞 数，同时计数小方格内的红细胞数。压线 细胞计数：数上不数下，数左不数右
5.当小方格内计数的红细胞达到>=111时， 即相当于至少观察了1000个红细胞，记录 在此过程中计数到的所有网织红细胞数
网织红细胞自骨髓释放到外周血后仍具有合成血红蛋白
的能力约1~2d后，其核算物质消失殆尽，过渡为成熟红 细胞。
晚幼红细胞
网织红细胞
成熟红细胞
1.2分型及形态特征： 在红细胞发育过程中，RNA含量有明显的规律 性变化，即有原始阶段较为丰富，然后逐渐减
低，至细胞完全成熟后消失或接近消失，即红 细胞中网线状结构越多，表示细胞越幼稚。
网织红细胞绝对数： 成人和儿童：（24~84）×109 /L
6.临床意义
6.1．评价骨髓增生能力，判断贫血类型 6.2. 评价疗效 6.3. 放疗和化疗的监测
6．计算：网织红细胞百分数=大方格内的 网织红细胞数÷（小方格内的红细胞数 ×9 ）×100%
7.报告方式：百分数（%）或绝对值（个/L）
网织红细胞绝对值=红细胞浓度数（ 1012 /L） ×网织红细胞百分数
2.4仪器法 包括流式细胞仪法、网织红细胞计 数仪法和血液分析仪法
网织红细胞计数仪法：根据荧光强度对RNA进 行定量分析，精确计数网织红细胞占成熟红细 胞的百分数（Ret%），可将Ret分为 HFR,MFR,LFR三类,见下图：