网织红细胞计数
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10-网织红细胞计数B D I S R e t i c-C O U N T(T h i a z o l e O r a n g e)Catalog No. 349204简介早期红细胞细胞核丢失后,胞浆内仍残留有细胞器(如核糖体、线粒体),这样的早期红细胞就是网织红细胞,它有别于不含细胞器的成熟红细胞。
这些细胞器富含核酸物质(RNA和DNA),而在成熟红细胞中不含有此种物质。
正常人(非贫血者)中,网织红细胞在骨髓中三天成熟,第四天出现在外周循环血中。
网织红细胞计数可以评估红细胞造血系统活性,但是如果网织红细胞的骨髓成熟时间缩短而循环血成熟时间延长,这种评估方法就会有误差。
这时,外周血相中一至三天的网织红细胞(“漂移”网织红细胞)也会被当做第四天网织红细胞而计算在内。
如遇此种情况,应当对“漂移”网织红细胞做修正(修正公式见流式细胞仪分析一节)。
BD公司生产的Retic-COUNT试剂主要成分为噻唑橙(TO),与丫啶橙(AO)的作用类似。
TO 与DNA碱基对以1:2的比例结合,分解常数、正电荷数和膜通透性与AO相近。
Retic-COUNT试剂既可与DNA结合,也可与RAN结合,形成的荧光-核酸复合物,吸收光谱为475nm,荧光发射光谱为530nm,因此,适合在安装了488nm激光的流式细胞仪上使用,如FACSCalibur,FACSort,FACScan等。
网织红细胞计数的传统方法是使用新亚甲基蓝染料,染色涂片后,光镜下计数。
但此方法费时,且由于只计数1000个细胞,因而存在固有的取样误差。
使用Retic-COUNT流式细胞术方法进行网织红细胞计数,与传统的新亚甲基蓝方法相比,存在很多优势。
使用流式细胞术,可以检测上万个细胞,具有很好的取样精确性。
由于使用的是细胞悬液,可以消除涂片时的分布误差。
同时,它还具有省时、操作简便等优点。
另外,由于可以使用配套的Retic-COUNT自动软件,不需要做阴性对照,还可以减少操作的变异性。
网织红细胞计数网织红细胞是未完全成熟的红细胞。
红细胞由骨髓进入外周血,需24-48h合成最后20%的血红蛋白,残余的嗜碱性物质才能完全消失,成为成熟的红细胞。
将其分为五型:花冠型、丝球型、网型、破网型、点粒型。
●仪器型号:Sysmex XE-2100型多项目自动血球分析装置●检测原理:一份血液样品经过吸液和定量、稀释至指定的稀释比,并进行染色。
然后将该样品送入流动的池中。
一个半导体激光束通过流动池照射到细胞上。
前向散射光由光二极管接收,侧面的散射光和侧面的荧光则由光点信增管(PMT)接收。
光信号被转化为电脉冲,从而可以得到有关血液细胞的信息。
⑴前向散射光和侧向散射光:当光通路中存在诸如粒子之类的障碍物时,该光束就在每个障碍物的不同方向上产生出散射光。
通过检测散射光,可以得到有关细胞体积大小和材质的信息。
与此同时,当一束激光照射到血细胞颗粒上时,就产生光散射。
散射光的强度,取决于颗粒直径和观察角度这样的因素。
对前向散射光进行检测,提供有关血液细胞体积大小的信息;同时对侧向散射光进行检测,提供有关细胞内部的信息。
⑵侧向荧光:当光照射到经过荧光染色的血液细胞上时,就产生比入射光波长更长的光。
随着染色集团浓度的增加,荧光强度也增加。
通过测●试剂:⑴CELLPACK(EPK)⑵RET SEARCHⅡ(RED)●标本吸入量:⑴手工模式130lμ⑵自动进样器模式200lμ●静脉血采血方法:抽取病人静脉血2ml,于EDTA二钾抗凝的真空采血管中(1.5mgEDTA-K2/ML)24小时室温保存。
●操作步骤:⑴当机器经过电源接通和一系列自检无误后,在机器左上放状态栏显示“READY”及确认“READY LED”(准备状态灯)呈绿色时,机器进入准备测量状态。
⑵要在允许空白值内:WBC RBC HGB PLT0.3⨯109/L 0.02⨯1012/L 1g/L 10⨯109/L⑶检测质控数值合格。
⑷标本的测量:手工模式:在准备测量状态下,按下屏幕最上一行数字键输入标本的编号,按吸液管放进待测标本试管中并按下开始键。
10-网织红细胞计数B D I S R et i c-C O U N T(Thi azol e O r ange)Catalog No. 349204简介早期红细胞细胞核丢失后,胞浆内仍残留有细胞器(如核糖体、线粒体),这样的早期红细胞就是网织红细胞,它有别于不含细胞器的成熟红细胞。
这些细胞器富含核酸物质(RNA和DNA),而在成熟红细胞中不含有此种物质。
正常人(非贫血者)中,网织红细胞在骨髓中三天成熟,第四天出现在外周循环血中。
网织红细胞计数可以评估红细胞造血系统活性,但是如果网织红细胞的骨髓成熟时间缩短而循环血成熟时间延长,这种评估方法就会有误差。
这时,外周血相中一至三天的网织红细胞(“漂移”网织红细胞)也会被当做第四天网织红细胞而计算在内。
如遇此种情况,应当对“漂移”网织红细胞做修正(修正公式见流式细胞仪分析一节)。
BD公司生产的Retic-COUNT试剂主要成分为噻唑橙(TO),与丫啶橙(AO)的作用类似。
TO 与DNA碱基对以1:2的比例结合,分解常数、正电荷数和膜通透性与AO相近。
Retic-COUNT试剂既可与DNA结合,也可与RAN结合,形成的荧光-核酸复合物,吸收光谱为475nm,荧光发射光谱为530nm,因此,适合在安装了488nm激光的流式细胞仪上使用,如FACSCalibur,FACSort,FACScan等。
网织红细胞计数的传统方法是使用新亚甲基蓝染料,染色涂片后,光镜下计数。
但此方法费时,且由于只计数1000个细胞,因而存在固有的取样误差。
使用Retic-COUNT流式细胞术方法进行网织红细胞计数,与传统的新亚甲基蓝方法相比,存在很多优势。
使用流式细胞术,可以检测上万个细胞,具有很好的取样精确性。
由于使用的是细胞悬液,可以消除涂片时的分布误差。
同时,它还具有省时、操作简便等优点。
另外,由于可以使用配套的Retic-COUNT自动软件,不需要做阴性对照,还可以减少操作的变异性。
网织红细胞计数
1.项目名称
网织红细胞计数
2.检验目的
2.1观察贫血疗效
2.2骨髓移植后监测骨髓造血恢复
2.3其他疾病协诊等临床实验室
3.检验原理:网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞,其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质,甲蓝活体染色后,其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质,经煌焦油蓝或新亚呈浅蓝或深蓝色的网状结构。
4.性能参数
4.1重复性
4.2分析和计算参数:百分比(%)
4.3样本量:染液量=1:1
4.4精密度
5.原始样品系统:
全血
6.容器和添加剂类型
容器采用真空负压专用抗凝管,添加剂类型为0.109M乙二胺四乙酸钾
7.试及显微镜
7.1 10G/L新亚甲蓝(或煌焦油蓝)生理盐水溶液:
新亚甲蓝 1.0G
枸橼酸钠0.4G
氯化钠0.85G
溶于双蒸馏水100ML中,混匀,过滤后备用。
7.2 显微镜
7.2.1 商标
8.校准程序:显微镜的验证,光路系统校正
灯泡大约半年更换一次
9.程序步骤:
9.1标本采集与要求
9.1.1标本采集:
抽取静脉血1.8ml,加入到含有乙二胺四乙酸钾溶液的抗凝真空试管中,并轻轻颠倒10次使之充分混匀,不得有凝块、不得形成泡沫,总量不得超过2.0±0.2ml,并在试管上做好标识。
采血应避免溶血,采血后2小时内送到检验科,需要运输时应在低温条件下运输。
采集标本时宜“一针见血”,以防止组织损伤。
9.1.2不合格标本的处理
对凝固、有凝块、采血量不符合要求、无条码或无标识等不合格的标本,距采集时间超过2小时并且没有按要求储存的标本,按程序文件《样品核收、登记和保存程序》处理
9.1.3标本保存
检测应在标本采集后2小时内完成,2~8℃保存不超过4小时,分析后的标本保存三天。
9.2检验前准备
9.2.1把接收到的标本按顺序编写序号。
9.2.2准备清洁、干燥、无尘、无油脂的载玻片、盖玻片、毛细管,玻璃笔。
9.3病人标本的检验
9.3.1取小试管1支加10G/L新亚甲蓝盐水溶液2滴。
9.3.2加入末梢血(或EDTA钾抗凝静脉血)2滴于上述试管中,混匀。
9.3.3室温下放置10~15MIN后,取1滴制成薄片。
9.3.4油镜下至少计数1000个红细胞中网织红细胞数。
9.3.5计算网织红细胞百分数=计数1000个红细胞中的网织红细胞数/1000 网织红细胞绝对数(个/L)=网织红细胞百分比数*红细胞数/L 【注意】
1.活体染色时间不能过短。
室温低时,放37摄氏度恒温箱。
2.最好制两张片,每张计数1000个红细胞,避免分布不均引起的误差。
涂片要薄而均匀,不使红细胞重叠。
3.为计数方便,可于目镜中放一中间有孔硬纸,缩小视野便于计数。
4.试剂应定期重配,以免变质沉淀。
5.染液与血液比例约为1:1,严重贫血时可适量增加血液的比例。
10.质量控制
10.1显微镜法网织红细胞目视激计数误差较大,影响因素主要有:操作人对网织红细胞认识不同;血涂片的好坏;计数红细胞数量的多少和计数方法等。
10.2仪器法岁可计数红细胞10000~50000个,但如存在Howell-Jolly小体、有核红细胞、巨血小板,则可见假阳性。
11.干扰
12.参考区间
网织红细胞百分数
成人:0.005~0.015
新生儿:0.03~0.06
儿童:0.005~0.015
网织红细胞绝对数:
成人:(24~84)*10*9/L
13.实验室解释:
13.1判断骨髓红细胞造血情况
13.1.1网织红细胞增多:表示骨髓红细胞生成旺盛。
常见于:1.溶血性贫血,溶血时由于大量网织红细胞进入血液循环,RET可增至6%~8%或以上,急性溶血时,可达到20%左右,严重者可在50%以上,绝对值常超过100*10*9/L。
急性失血后5~10D网织红细胞达到高峰,2周后恢复正常。
2.放射治疗和化学治疗后,造血恢复时,可见RET短暂和迅速增高,是表明检测幼稚RET的变化骨髓恢复较敏感的指标。
3.红系无效造血时,骨髓检查表明红系增生活跃,而外周网织红细胞计数正常或仅轻度高。
13.1.2网织红细胞减少:见于再生障碍性贫血、溶血性贫血再障危象时。
典型的再生障碍性贫血网织红细胞计数低于0.005,网织红细胞绝对值低于15*10*9/L,为诊断其标准之一。
13.2观察贫血疗效缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血治疗过程中,如RET增高,表明治疗有效,说明骨髓增生功能良好;如RET不增高,则表明治疗无效,
并提示有骨髓造血功能障碍,需进一步检验。
RET是贫血患者随访检查的项目之一。
13.3骨髓移植后监测骨髓造血恢复骨髓移植后第21天,如RET大于15*10*9/L,常表明无移植并发症;RET小于15*10*9/L,伴中性粒细胞和血小板增高,可能为骨髓移植失败。
14.安全性防护措施
14.1在操作显微镜时应按照仪器作业指导书进行操作,防止受伤、触电等14.2请带上橡胶手套进行染色、冲片,在工作完成后,用消毒液清洗双手,以免发生感染
14.3在涂片时应小心谨慎,应始终戴上橡胶手套,以避免发生细菌感染,若样本溅入眼睛或者伤口,须用大量清水冲洗,并立即就诊
14.4在配制染液时:如果试剂不慎落入眼睛,立即用大量清水冲洗,并接受治疗;如果不慎吞入试剂,立即向医生求助,喝入大量清水,并尽量呕出吞入试剂;如果试剂沾上皮肤或者手,用大量清水冲洗;在丢弃废液和消耗品时,请按照处理医疗、传染性、工业性废水的步骤进行处理,如果其中含有血样,可能导致细菌感染. 15.变异的潜在来源
15.1标本放置时间过长
15.2制片时用力不均匀使。
细胞分布不均、细胞破碎。
15.3染色时间过长或过短。
16.参考文献
16.1 叶应妩.王毓三等《全国临床检验操作规程》第三版,东南大学出版社16.2熊立凡主编《临床检验基础》第三版,人民卫生出版社
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