网织红细胞计数SOP(手工法)

网织红细胞计数（Ret）【定义】网织红细胞是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞间的过渡细胞，属于尚未完全成熟的红细胞，其胞质中残存嗜碱性物质核糖核酸（RNA），经活体染色后，嗜碱性物质凝聚成蓝黑色颗粒，颗粒与颗粒连缀成线，线连接成网，故而得名。

【分型】根据网织红细胞发育阶段分为4型，分别是：Ⅰ型（丝球型）：红细胞充满网状物，见于骨髓。

Ⅱ型（网型）：红细胞网状物结构松散，见于骨髓。

Ⅲ型（破网型）：红细胞网状物结构稀少，呈不规则枝点状排列，见于外周血。

Ⅳ型（点粒型）：红细胞内为分散的细颗粒、短丝状网状物，见于外周血。

【检测原理】1.普通光学显微镜法2.网织细胞计数仪法和血液分析仪法【操作方法】1.显微镜试管法操作（1）加染液：于试管中加入10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液2滴，再加新鲜血2滴，立即混匀，置37℃下15～20min。

（2）制片：取1小滴制成薄血涂片，自然干燥。

（3）观察：在低倍镜下选择红细胞分布均匀的部位进行观察。

（4）计数：在油镜下计数至少1000个红细胞中网织红细胞数。

（5）计算：网织红细胞分数=（计数的网织红细胞数）/1O00，网织红细胞绝对值（×109/L）=红细胞数×1012/L×网织红细胞分数。

2.显微镜法注意事项（1）网织红细胞必须活体染色，WH0推荐使用新亚甲蓝染液，其染色力强且稳定。

煌焦油蓝染液操作简单、费用低廉，但易产生沉淀、工作效率不高、精度差。

染液与血液比例以1:1为宜，严重贫血时，可适量增加血量。

（2）为提高网织红细胞计数精度和速度，ICSH推荐使用Miller窥盘，方法是将Miller 窥盘置于目镜内，选择红细胞散在且分布均匀的部位（3）用小方格（A）计数红细胞，大方格（B）计数网织红细胞，按下式计算：（4）注意鉴别网织红细胞与HbH包涵体。

Ret为蓝绿色网状或点粒状物质，分布不均，HbH包涵体为蓝绿色圆形小体，均匀散布于整个红细胞内。

XXXX医院
实验室网织红细胞显微镜计数法操作规程
一、目的
用于辅助某些贫血的诊断及疗效观察。

二、试验原理
网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝活体染色后呈浅蓝或深蓝色的网状结构。

三、试验试剂
10g/L煌焦油蓝溶液：煌焦油蓝1g，枸橼酸钠0.4g，氯化钠0.85g，溶于双蒸馏水加至100ml,完全溶解后过滤备用。

四、检测方法
1、于小试管中滴加1滴煌焦油蓝染液。

2、加入末梢血2滴于上述试管中，混匀。

3、静置15-20min后，取用1滴制成薄片。

4、油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数，以百分比或绝对值报告。

五、参考值
成人：0.005-0.015
新生儿：0.03-0.06
六、临床意义
增加：表示骨髓造血功能旺盛，各型贫血均可增多，溶血性贫血增。

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网织红细胞计数操作规程目的：本实验旨在规范网织红细胞计数的标准操作，以确保实验数据的准确性。

原理：网织红细胞是未完全成熟的红细胞，其包体较一般红细胞稍大，胞浆中尚有嗜碱性残留物质，可被煌焦油蓝等染成蓝色颗粒状、线状及网状结构物。

网织红细胞的数量可用百分率或每立方毫米血液中的绝对值数来表示。

材料：煌焦油蓝（灿烂甲酚蓝）、枸橼酸钠、生理盐水、香柏油、载物片（玻璃片）、推片（磨去边的玻璃片）、试管（2ml）、毛细吸管或枪头（200微升）、光学显微镜。

操作规程：染色液配制：将煌焦油蓝0.4g和3.5%枸橼酸钠20ml研磨溶解后加入生理盐水至100ml，过滤备用。

室温下可保存6个月。

血膜片制备：1.染色：取试管一支，用毛细管或枪头于其中加入染液2～5滴，然后再加入新鲜血液1滴轻摇混合，染色10～15min。

2.制片：取载物片一片，用毛细管或枪头吸取血液染色液1小滴于载物片上，并用推片约45度角推制成舌型血膜片，自然干燥备用。

3.观察：用显微镜观察，取血膜片滴入香柏油1滴，将血膜片置于显微镜载物台，用油镜观察网织红细胞。

4.计数：取计数器在油镜下检查计数红细胞，即计数红细胞中网织红细胞的数量，检查计数1000个红细胞中网织红细胞的数量，并得出千分率再除以10即为百分率。

计算公式：百分率=1000个红细胞中网织红细胞的数量/1000注意事项：1.载物片使用前必须经过酸或碱液浸泡脱脂处理后方可使用。

2.血膜片制备需要反复练推片，熟练推制血膜片的技巧。

3.血膜片的厚薄要适中，过厚或过薄均无法进行观察。

4.室温过低时，血液染色时间要适当延长，以确保细胞着色更充分。

5.血膜片需在3天内检查计数，否则其网状结构会褪色，不易观察清晰。

红细胞计数SOP（手工法）文件编号: xxxx医院 XXXX临床检验实验室版序:xxxx页码:第1 页，共2 页红细胞计数(RBC)[检测原理]用等渗稀释液将血液稀释并充入计数池后，于显微镜下计数。

[试剂与器械]1，试剂: 赫姆(Hayem)液:氯化钠 1.0g结晶硫酸钠(Na2SO4.10H2O) 5.0g(或无水硫酸钠 2.5g)氯化高汞 0.5g蒸馏水加至 200ml溶解后加20g/L伊红水溶液1滴，过滤后用。

2，器械:(1) 微量计数板(2) 显微镜(3) 微量吸管(MC)[标本的收集与处理]1，用EDTA-K2 0 .2ul抗凝静脉血1ml，轻轻摇动抗凝。

凝集，溶血，血量小于0.5 ML或抽血时间超过四小时为不合格标本，拒收。

2，直接采集未稍血液。

[操作步骤]1.取小试管1支，加红细胞稀释液2.0 ml 。

2.用清洁干燥微量吸管取末梢血10ul 。

3.擦去管尖内外部余血，轻轻吹入红细胞稀释液底部，再轻吸上层清液嗽洗吸管2--3次，然后立即混匀。

4.充池后待2--3 min，用高倍镜依此计数中央大方格内四角和正中5个中方格内的红细胞。

按数上不数下，数左不数右的原则进行目视计数。

[结果计算]红细胞/L=5个中方格内红细胞数 , 5 , 10 , 201 , 10E6(或红细胞数/L=5个中方格内红细胞 /100 , 10E12 )文件编号: xxxx医院 XXXX临床检验实验室版序:xxxx页码:第2 页，共2 页红细胞计数(RBC)[质量控制]1，如无上述稀释液是，也可用新鲜配制的等渗盐水代用。

2，正常数值范围内，两次红细胞计数相差不得超过 5% 。

3，其他注意点见白细胞计数。

4，光电比浊法在我国曾盛行一时，该法缺点太多，诸如红细胞体积太小，血红蛋白含量多少，红细胞冷凝，自凝，光电比色计性能，电压高低等都会影响结果，今后不能使用。

5，不允许以血红蛋白浓度来折算红细胞数。

6，所用微量吸管和计数板必须为校正品。

网织红细胞计数检测标准操作规程1.【目的】为了规范化操作，保证检测结果准确可靠。

2.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。

2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

3.【样本类型及实验前准备】3.1样本类型：静脉血2ml（标本应新鲜，注意避免污染，避免溶血，注意有无血凝块）。

3.2患者准备：要求患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。

3.3容器添加剂类型：EDTA-2K3.4实验试剂：煌焦油蓝或新亚甲蓝染液4.【测定原理】网织红细胞是晚幼红细胞到完全成熟红细胞之间的过渡型细胞，由于其细胞浆中尚存在嗜碱性的RNA物质，用煌焦油蓝或新亚甲蓝进行活体染色后，RNA中的负电荷基团与带正电荷的有色基团结合，胞浆中镜检可见有浅蓝色或深蓝色的点状.丝状或网状结构。

5.【操作步骤】5.1样本要求新鲜全血或EDTA抗凝全血。

5.2将网织红细胞染色液与病人全血1：1比例混匀，静置室温20分钟或更久。

制成血涂片，于显微镜下观察，判读。

5.3先在低倍镜下浏览，了解染色好坏和细胞分布情况。

选择涂片体尾交界处染色良好的区域，在油镜下观察1000个红细胞，算出网织红细胞的百分率。

6.【生物参考区间】儿童成人：0.05—0.15%新生儿：0.3—0.6%7.【临床意义】网织红细胞增加见于各种增生性贫血，溶贫尤为显著，巨幼贫和缺铁贫在治疗后显著曾生，表示有治疗效果;减少常见于再生障碍性贫血。

7.1增高提示骨髓造血功能旺盛，见于各种增生性贫血（溶血性、缺铁性、巨幼细胞性、急性失血性贫血）及经相应药物治疗有效时；急性溶血时可高达0.6～0.8；急性失血后5～10d网织红细胞达高峰，2周后恢复正常；恶性贫血或缺铁性贫血使用维生素B12或供铁质后显著增多，表示有疗效。

7.2减低提示骨髓造血功能低下，见于再生障碍性贫血、溶血性贫血再生危象时。