常规考马斯亮蓝染色试剂盒
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考马斯亮蓝染色套装使用说明货号:P1305保存:室温保存,至少一年有效。
规格:100ml+500ml产品简介:本考马斯亮蓝染色套装(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法,以考马斯亮蓝G-250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色,或Western 转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。
产品内容:考马斯亮蓝染色液100ml考马斯亮蓝脱色液500ml说明书1份使用方法:1、电泳结束后,取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中(至少5倍胶体积),确保染色液可以充分覆盖凝胶。
2、将凝胶置于摇床上缓慢摇动,室温染色至少2小时,低丰度蛋白染色需4小时以上。
3、染色结束后移除染色液,染色液通常可重复利用2-3次,但染色效果会略有影响。
4、将凝胶浸泡于和染色液等量体积的脱色液中,摇床上脱色4-8小时,期间更换3-5次脱色液。
注意事项:1.染色时间4小时以上效果最佳。
2.脱色可根据目的蛋白丰度和脱色效果随时终止,或延长脱色时间。
3.脱色越彻底,检测的蛋白量越低,脱色24小时一般可以检测出0.1ug蛋白量。
4.脱色后,将凝胶保存在水中,拍照或扫描保存图像。
或制成干胶保存。
相关试剂:P1300-500考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液PC0020BCA蛋白浓度测定试剂盒PR1400低分子量蛋白MARKERPR1700预染次高分子量蛋白MARKERI1020IPTG溶液(50mg/ml)A101030%丙烯酰胺(29:1)T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液P1300SDS-PAGE凝胶制备试剂盒。
蛋白质含量测定具体操作——考马斯亮蓝法(南京建成,货号:A045-2)一、实验目的:样品蛋白质的含量测定(本实验为小鼠肝组织10%的组织匀浆上清液样本)二、测定的原理:蛋白质中有-NH3+基团,当棕红色的考马斯亮蓝显色剂加入蛋白质样品中,会发生络合反应,使溶液变成蓝色,通过吸光度的测定来计算蛋白质的含量。
三、实验材料a)仪器:紫外分光光度计、涡旋混匀器、比色皿、2mlEP管、5mlEP管、标记笔、b)试剂:考马斯亮蓝试剂盒、待测样品、双蒸水四、实验步骤a)将考马斯亮蓝试剂一贮备液:双蒸水=1:4进行配置,本实验需要75ml,即取出贮备液15ml和60ml的双蒸水进行试剂一应用液的配制,备用;b)蛋白质标准品从20℃冰箱中取出,融冻,暂时放在4℃冰箱保存;c)标记好25个2ml的EP管、5mlEP管,按顺序放好;准备好200ul和1000ul的移液器枪头d)将各10%的肝组织匀浆上清液从冰箱中取出,融冻,备用;e)将10%的肝组织匀浆上清配制成1%的肝组织匀浆上清,即使用移液器移取0.1ml放于对应的2mlEP管中,分别加入0.9ml的生理盐水,使用涡旋混匀器适当混匀各个组织匀浆;f)将处理后的样品按照下面的操作表,将200ul量程的移液器调至50ul,1000ul量程的调至1000ulg)待样品和标准品加完以后,使用涡旋混匀器混匀,静置10minh)准备好比色皿,和纸i)将紫外分光光度计的波长调至595nm,双蒸水调零,测定各管的吸光度。
j)根据公式:待测样品蛋白=测定管OD值−空白管OD值标准管OD值−空白管OD值∗标准品蛋白浓度五、注意事项a)此法灵敏度高,反应后的显色液可以在2个小时之内是稳定的;b)样本的蛋白浓度必须使用生理盐水稀释至1.3g/l以下,在该范围内呈线性关系;c)考马斯亮蓝法测定组织蛋白的组织匀浆的浓度一般在0.5%-2%;d)不可用石英比色皿,可用玻璃或塑料比色皿,测完成后立即用 95%乙醇冲洗使用完比色皿,使用95乙醇立马清洗比色皿,洗去显色剂;。
考马斯亮蓝染色一产品简介:本考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法,以考马斯亮蓝R250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色,或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。
使用本试剂盒,采用常规染色脱色方法累计时间达到2-3小时后可以观察到蛋白条带;采用快速染色脱色方法20分钟左右即可观察到蛋白条带。
观察到最清晰的蛋白条带则需染色脱色更长时间。
本试剂盒中的染色液和脱色液经过改良,不含有毒的甲醇,但含有刺激性气味的乙酸。
二保存条件:室温保存,至少一年有效。
注意事项:可以使用枪头盒或适当大小的培养皿作为染色和脱色的容器。
本染色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
三使用说明:1. 常规染色脱色方法:a. 电泳结束后,取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中,确保染色液可以充分覆盖凝胶。
b. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温染色1小时或更长时间。
注:具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。
凝胶较厚,温度较低,则染色时间宜适当延长。
凝胶较薄,温度较高,则染色时间可以适当缩短。
通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近,在染色液中几乎看不清凝胶时,可以认为已染色充分。
染色2-4个小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。
c. 倒出染色液。
染色液可以回收重复使用至少2-3次。
d. 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
e. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温脱色4-24小时。
期间更换脱色液2-4次,直至蓝色背景基本上全部被脱去,并且蛋白条带染色效果达到预期。
通常蛋白条带在脱色1-2小时后即可出现。
注:脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸,可以使部分染料吸附在吸水纸上,加快脱色。
脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。
仅供科研版本号:170313考马斯亮蓝G250染料试剂【产品组成】【保存条件】室温,避光,3个月【产品概述】Bradford法是常用的蛋白浓度检测的方法,与传统方法相比,更简单、更稳定、兼容性更好。
Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。
样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M,DTT的浓度可高达5mM。
但受高浓度的去垢剂的影响明显,故在用BradfordProteinAssayKit进行蛋白定量时,需确保SDS低于0.01%,TritonX-100低于0.05%,Tween20,60,80低于0.015%,含高浓度去污剂的蛋白定量,建议采用BCAProteinAssayKit。
考马斯亮蓝G250染料试剂由考马斯亮蓝G250、乙醇、磷酸组成,用于考马斯染料结合(Bradford)分析的总蛋白测量,其特点在于对蛋白样品中可能存在的大多数盐、溶剂、缓冲液、硫醇、金属螯合剂、还原性物质等均不排斥。
检测浓度下限达到25μg/ml,最小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1~20μl,在50~1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
【使用方法】1、稀释蛋白标准(一般为BSA5mg/ml)使其终浓度为0.5mg/ml。
注意:蛋白样品在什么溶液中,蛋白标准也应用什么溶液稀释,也可以用0.9%NaCl或PBS稀释蛋白标准。
2、将标准品按0,1,2,4,8,12,16,20μl加到96孔板的蛋白标准孔中,加蛋白标准稀释液补足至20μl。
3、加适当体积样品到96孔板的样品孔中,补加标准品稀释液至20μl。
4、各孔加入200μl考马斯亮蓝G250染料试剂,室温放置3~5min。
5、酶标仪测定595nm波长处的吸光值,560~610nm之间的波长也可。
6、根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
【注意事项】1、待测蛋白溶解于什么样的稀释液中,蛋白标准也应溶解于什么样的稀释液中,否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致,有可能导致测定不准确。
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线:400-168-3301或800-8283301订货e-mail:******************技术咨询:*****************碧云天网站微信公众号网址:考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法)产品编号产品名称包装P0017A 考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法) 1盒产品简介:本考马斯亮蓝染色试剂盒(Coomassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法,以考马斯亮蓝R250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色,或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。
使用本试剂盒,采用常规染色脱色方法累计时间达到2-3小时后可以观察到蛋白条带;采用快速染色脱色方法20分钟左右即可观察到蛋白条带。
观察到最清晰的蛋白条带则需染色脱色更长时间。
本试剂盒中的染色液和脱色液经过改良,不含有毒的甲醇,但含有刺激性气味的乙酸。
包装清单:产品编号产品名称包装P0017A-1 考马斯亮蓝染色液100mlP0017A-2 考马斯亮蓝染色脱色液500ml—说明书1份保存条件:室温保存,至少一年有效。
注意事项:可以使用枪头盒或适当大小的培养皿作为染色和脱色的容器。
本染色液和脱色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:1.常规染色脱色方法:a.电泳结束后,取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中,确保染色液可以充分覆盖凝胶。
b.置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温染色1小时或更长时间。
注:具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。
凝胶较厚,温度较低,则染色时间宜适当延长。
凝胶较薄,温度较高,则染色时间可以适当缩短。
通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近,在染色液中几乎看不清凝胶时,可以认为已染色充分。
5×考马斯亮蓝G-250(蛋白定量用)货号:PC0015规格:100mL/500mL保存:开封使用后请密封保存,本试剂盒自订购之日起九个月内有效。
产品简介:考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(Imax),由465nm 变为595nm,在一定的浓度范围内,测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。
Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,样品中巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM,但受略高浓度的去垢剂影响,需确保SDS的浓度低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween20,60,80低于0.06%。
自备试剂:PBS、BSA标准品(5mg/ml)操作说明:一.微孔酶标仪法1.完全溶解蛋白标准品,取10ul,稀释至250ul,使终浓度为0.2mg/ml。
待测蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。
但是为了简便起见,也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。
2.5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀,取1ml5×G250染色液,加入4ml双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。
3.将标准品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中,加PBS稀释液补足到20微升。
4.将样品作适当稀释(最好多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20微升到96孔板的样品孔中。
由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
5.各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液,室温放置3-5分钟。
6.用酶标仪测定A595,或560-610nm之间的其它波长的吸光度。
7.根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
二.分光光度计法如无酶标仪,染色反应可在离心管中进行,反应液混匀后加入比色皿中,使用分光光度计测定吸光值。
Bradford法蛋⽩定量试剂盒使⽤说明书使⽤说明书◆Bradford法蛋⽩定量试剂盒◆⽬录号1902◆使⽤⼿册◆实验室使⽤,仅⽤于体外Bradford法蛋⽩定量试剂盒⽬录号:1902⽬录编号包装单位190201 250次190202 1000次190203 2500次试剂盒组成、储存、稳定性:试剂盒组成保存250次1000次2500次蛋⽩标准(5mg/mlBSA)-20℃0.5ml 1ml 3mlBradford染⾊液4℃50ml 200ml 500ml本产品收到后按照上⾯指⽰温度存放各成份,⾄少九个⽉内有效。
蛋⽩标准长期保存-20℃放置,常温运输。
产品介绍:Bradford法蛋⽩定量试剂盒是在世界上常⽤的蛋⽩浓度检测⽅法之⼀Bradford法基础上(考马斯亮蓝结合显⾊法)改进⽽成。
当Bradford染⾊液(考马斯亮蓝)和蛋⽩在酸性条件下结合时,最⼤吸光值波长⽴刻由465 nm转移⾄595nm,同时颜⾊由褐⾊转为蓝⾊,通过测定吸光值⼤⼩并对照标准蛋⽩的吸光值,推算出蛋⽩浓度。
产品特点:1.灵敏度⾼,检测浓度下限达到25µg/ml,最⼩检测蛋⽩量达到0.5µg,待测样品体积为1-20µl。
2.检测速度极快,10-20个样品只需不⾜10分钟即可完成。
3.在50-1000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
注意事项:1.Bradford染⾊液含有刺激性或者腐蚀性化合物,操作时要戴乳胶⼿套,避免沾染⽪肤,眼睛和⾐服。
若沾染⽪肤、眼睛时,要⽤⼤量清⽔或者⽣理盐⽔冲洗。
2.Bradford染⾊液中考马斯亮蓝易聚集成团,每次使⽤前请颠倒6-8次并且竖直抓住瓶⼝做⽔平划圈动作,旋转瓶中液体,帮助充分混匀,但不可以上下振荡混匀。
3.低温会降低Bradford染⾊液的敏感度,因此每次使⽤前应该使Bradford染⾊液回复到室温。
仅仅将需要的Bradford染⾊液复温,可以减少复温时间。
爱必信WB彩色凝胶试剂盒上新啦!
让您的WB实验多姿多彩
蛋白免疫印迹实验(Western Blot)实验大家肯定都不陌生,要想做出好看的条带,从制胶开始就不容半点马虎。
WB制胶可谓实验室新手的必修课了,想想小编我在当初实验室的时候,就没少帮师兄师姐配置WB凝胶,泛黄的配方表小编还记忆犹新。
WB凝胶配
方表
说起WB凝胶配置,小编可有一肚子苦水要倒,第一个让人头疼的一点就是多种溶液都需要计算量取,每次调移液器就要调半天。
还有各种试剂的保存条件也不一样,配胶之前还需要从冰箱,室温柜子里分别拿出不同的溶液。
这还不算,最容易出问题的促凝剂APS,需要新鲜配置,4度保存不能超过一周,关键是粉末还特容易吸水,打开后需要密封保存。
小编之前就踩过一次坑,APS粉末吸水结块,称量配置后的APS含量不够,凝胶凝结不好,整个WB实验条带跑的七扭八歪。
蛋白质印迹(Western Blot)实验中产品推荐:。
考马斯亮蓝染色液(常规法)产品简介:本考马斯亮蓝染色液(Commassie Blue Staining Solution)是以考马斯亮蓝R250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE 等蛋白电泳胶的常规染色,或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。
本染色液可以和碧云天的考马斯亮蓝染色脱色液(P0017C)配套使用。
使用本染色液进行染色,采用常规染色方法需至少1小时可以完成染色;采用快速染色方法数分钟即可完成染色。
本染色液经过改良,不含有毒的甲醇,但含有刺激性气味的乙酸。
保存条件:室温保存,至少一年有效。
注意事项:需自备脱色液。
脱色液可以选购碧云天的考马斯亮蓝染色脱色液(P0017C)。
可以使用枪头盒或适当大小的培养皿作为染色和脱色的容器。
本染色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:1. 常规染色脱色方法:a. 电泳结束后,取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中,确保染色液可以充分覆盖凝胶。
b. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温染色1小时或更长时间。
注:具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。
凝胶较厚,温度较低,则染色时间宜适当延长。
凝胶较薄,温度较高,则染色时间可以适当缩短。
通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近,在染色液中几乎看不清凝胶时,可以认为已染色充分。
染色2-4个小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。
c.倒出染色液。
染色液可以回收重复使用至少2-3次。
d.加入适量脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
注:脱色液可以选购碧云天的考马斯亮蓝染色脱色液(P0017C);如果希望自行配制,推荐的脱色液配方为:40%乙醇,10%乙酸,50%蒸馏水。
也可以使用其它适当的脱色液。
e.置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温脱色4-24小时。
期间更换脱色液2-4次,直至蓝色背景基本上全部被脱去,并且蛋白条带染色效果达到预期。
考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒说明书分光光度法50管/48样注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。
此外,可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
测定原理:在酸性溶液中,考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合形成蓝色复合物;该复合物在620nm处有最大吸收峰,其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。
该方法灵敏度高,适合微量蛋白质分析。
自备仪器和用品:离心机、分光光度计、石英比色皿、移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制:试剂一:液体30 mL×1瓶,4℃保存。
样品中可溶性蛋白质提取:1. 液体样品:澄清液体样品可以直接测定。
2. 组织样品:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:20的比例(建议称取约0.05 g组织,加入1mL提取液(自备,根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水))冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即待测液。
(动物样品常常需要稀释)3. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
测定操作:1. 分光光度计预热30 min,蒸馏水调零。
2. 在石英比色皿中加入:试剂(μL)测定管空白管样本500蒸馏水500试剂一500 500混匀后,测定波长620 nm吸光值,△A=A测定-A空白。
注意:空白管只需要测定一次。
计算公式:标准曲线:y = 14.253x - 0.0007 R2 = 0.9997 x: 蛋白标准品浓度(mg/mL)y: 吸光值差值1.按液体样本体积计算:Cpr(mg/mL)=(△A+0.0007)÷14.253=0.07×(△A+0.0007)2.按组织样本质量计算:Cpr(mg/g)=(△A+0.0007)÷14.253×V总÷W=0.07×(△A+0.0007)÷WV总:提取液体积,1 mL; W:样本质量,g。
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS30003 v.A GENMED蛋白质考马斯亮蓝染色试剂盒产品说明书(中文版)主要用途GENMED蛋白质考马斯亮蓝染色试剂是一种旨在使用考马斯亮蓝染色剂G-250直接在聚丙烯酰胺凝胶上进行染色,在清晰背景上产生灵敏度10纳克以上蛋白质的蓝色条带的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适用于蛋白电泳的检测。
产品即到即用,性能稳定,操作便捷,敏感度高,显色清晰,重复性好,建立标准化体系。
技术背景考马斯亮蓝染色剂G-250(Coomassie Brilliant Blue G250)是一种与蛋白质结合,并显示蓝色的无毒染色剂。
通常用于蛋白凝胶电泳的检测。
可与质谱分析兼容。
产品内容GENMED染色液(Reagent A)XX毫升GENMED脱色液(Reagent B)XX毫升产品说明书保存方式保存在室温下, GENMED染色液(Reagent A),避免光照,有效保证12月用户自备塑料盘:用于染色的容器无离子水:用于稀释试剂的溶液平式摇荡仪:用于染色操作时的孵育实验步骤实验开始前,完成SDS-PAGE蛋白电泳的运行,取出6cm X 8cm 的胶体,作好定向标记,然后进行下列操作:一、 染色1.准备一个8cm X 10cm 大小的染色塑料盘2.放入聚丙烯酰胺凝胶3.加入XX毫升GENMED染色液(Reagent A)在凝胶上,覆盖整个胶体4.在室温下平式摇荡仪上孵育1小时,速度为XX RPM,避免光照5.小心倒掉染色盘里的染色液6.(选择步骤)加入XX毫升用户自备的无离子水,用手摇动10秒7.(选择步骤)小心倒掉无离子水8.即刻放在成像仪下观察和照相:条带显示蓝色二、 脱色9.如果染色过度或重新染色,加入XX毫升GENMED脱色液(Reagent B)在凝胶上,覆盖整个胶体10.在室温下平式摇荡仪上孵育2至3小时,速度为XX RPM,避免光照11.直至蓝色条带变淡或消失12.小心倒掉染色盘里的脱色液13.(选择步骤)加入XX毫升用户自备的无离子水,用手摇动10秒14.(选择步骤)小心倒掉无离子水15.即刻放在成像仪下观察和照相:条带显示蓝色16.或重新染色注意事项1.本产品为10次操作2.每25毫升试剂盒溶液用于处理6cm X 8cm大小胶体;每50毫升试剂盒溶液用于处理12cm X 12cm大小胶体;胶体越大,用量增加3.操作时须戴手套4.孵育温度为室温5.孵育后,即刻进行观察;放置时间过久,影响效果6.本公司提供系列蛋白染色试剂产品质量标准1.本产品经鉴定性能稳定2.本产品经鉴定染色效果出色使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。
考马斯亮蓝(Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书考马斯亮蓝(Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒Coomassie (Bradford) Protein Assay Kit产品简介:Bradford法(考马斯亮蓝法),是目前灵敏度最高的蛋白质测定法之一。
当Bradford 染色液(考马斯亮蓝G250)和蛋白在酸性条件下结合时,溶液颜色由棕黑色转为蓝色,最大吸光值波长由456nm 转至595nm,吸光值与蛋白质的含量在一定浓度范围内有较好的线性关系,通过测定吸光值大小并对照标准蛋白的吸光值,推算出蛋白浓度,实现了蛋白浓度测定的快速,稳定和高灵敏度。
Bradford 染色液为2 倍浓缩母液,便于储存。
产品特点:●快速,10-20 个样品只需要10 分钟即可完成测定。
●稳定,加样混匀后2 分钟既可测定,1 小时内吸光度变化不超过10%。
●最小测量体积为1-20 uL,最低测量蛋白量为0.5 ug。
●有常规和微量两种检测模式。
●不受绝大部分样品中的化学物质的影响。
巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5 mM。
●但受略高浓度的表面活性剂影响,各种蛋白质与染料的结合效率可能有差异。
●经济实用:在微孔板中进行测定,可大大节约样品和试剂用量。
产品组成:上海美季生物技术有限公司上海市中山南二路777号2号搂2303考马斯亮蓝(Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书保存温度:Bradford染色液2-8℃保存,BSA蛋白标准-20℃保存。
有效期一年。
操作步骤:一、常规测定A.96 孔酶标板测定:1.根据需要从冰箱取出适量Bradford 2x 染色液,平衡至室温并混匀;预热酶标仪20分钟。
2.根据需要取适量标准品,加入去离子水稀释至1mg/ml(原液5mg/ml),并混匀。
注意:原则上蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。
但是为了简便起见,也可以用去离子水、0.9%NaCl或PBS稀释标准品。
常规考马斯亮蓝染色液使用说明考马斯亮蓝染色液是一种用于织物染色的常规染色剂。
它可以为织物提供均匀的染色效果,并能提高织物的色牢度。
本文将详细介绍考马斯亮蓝染色液的使用方法和注意事项。
一、准备工作1.准备染色液:按照需要染色的织物数量,准备足够的考马斯亮蓝染色液。
2.准备清洁剂:在染色前,务必将织物彻底清洗干净,去除污渍和油渍。
3.准备染色器具:选择适合染色的容器,如不锈钢盆子或塑料桶。
确保容器干净无杂质。
4.配置染色溶液:按照染色液的配方,将考马斯亮蓝染色液与适量的水混合,搅拌均匀。
二、染色过程1.将清洗过的织物放入染色容器中。
2.将配好的染色溶液倒入染色容器,确保织物完全浸泡在溶液中。
3.搅拌染色溶液,使其均匀分布在织物上。
4.将染色容器放置在适当的染色环境中。
根据织物的需要,可以选择冷染、温染或热染。
在染色过程中,保持温度恒定。
5.根据染色效果要求,定时检查染色结果。
如果需要更深的颜色,请延长染色时间;如果需要较浅的颜色,请减少染色时间。
6.染色时间到达后,取出织物,用清水冲洗干净,直到水中不再有着色剂残留。
7.将染过的织物晾干。
三、注意事项1.染色前建议进行测试。
在染色的一小块织物上进行测试,以确定染色效果和颜色的深浅程度。
2.染色过程中,不要叠放织物,以免染色不均匀。
3.手套和保护眼睛。
由于染色液可能对人体皮肤和眼睛有刺激性,染色时请注意保护措施。
4.染色结束后记得及时清洗染色工具,以免留下染色剂残留。
四、存储注意事项1.考马斯亮蓝染色液应存放在避光、干燥、凉爽的地方,远离火源和热源。
2.染色液应储存在密封的容器中,以防止挥发和泄露。
3.存放时请注意染色液的有效期。
过期的染色液不宜使用,以免影响染色效果。
总之,使用考马斯亮蓝染色液进行织物染色需要仔细遵循使用说明和注意事项,以确保染色效果和使用安全。
希望以上信息能对您有所帮助。
爱必信WB彩色凝胶试剂盒上新啦!
让您的WB实验多姿多彩
蛋白免疫印迹实验(Western Blot)实验大家肯定都不陌生,要想做出好看的条带,从制胶开始就不容半点马虎。
WB制胶可谓实验室新手的必修课了,想想小编我在当初实验室的时候,就没少帮师兄师姐配置WB凝胶,泛黄的配方表小编还记忆犹新。
WB凝胶配
方表
说起WB凝胶配置,小编可有一肚子苦水要倒,第一个让人头疼的一点就是多种溶液都需要计算量取,每次调移液器就要调半天。
还有各种试剂的保存条件也不一样,配胶之前还需要从冰箱,室温柜子里分别拿出不同的溶液。
这还不算,最容易出问题的促凝剂APS,需要新鲜配置,4度保存不能超过一周,关键是粉末还特容易吸水,打开后需要密封保存。
小编之前就踩过一次坑,APS粉末吸水结块,称量配置后的APS含量不够,凝胶凝结不好,整个WB实验条带跑的七扭八歪。
蛋白质印迹(Western Blot)实验中产品推荐:。
考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒使用说明酶标法100管/96样产品简介:样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。
此外,可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
在酸性溶液中,考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合形成蓝色复合物;该复合物在595nm 处有最大吸收峰,其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。
该方法灵敏度高,适合微量蛋白质分析。
试验中所需的仪器和试剂:酶标仪、酶标板、移液器和蒸馏水。
产品内容:试剂一:液体×1瓶,4℃保存。
标准品:液体×1瓶,4℃保存。
操作步骤:一、样品中可溶性蛋白质提取:液体样品:澄清无色液体样品可以直接测定。
组织样品:准确称取约0.1g样品,加1mL提取液(自备,根据需要可以是酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水),冰浴匀浆,10000rpm,4℃离心10min,取上清,即待测液。
(动物样品常常需要稀释)二、吸光值测定:1.酶标仪预热30min以上,调节波长到595nm,蒸馏水调零。
2.空白孔:取酶标板,在空白孔中加入20µL蒸馏水,180µL试剂一,混匀后室温静置10min,于595nm测定吸光度,20min内完成测定,记为A空白。
3.标准孔:取酶标板,在空白孔中加入20µL标准液,180µL试剂一,混匀后室温静置10min,于595nm测定吸光度,20min内完成测定,记为A标准。
4.测定孔:取酶标板,在空白孔中加入20µL待测液,180µL试剂一,混匀后室温静置10min,于595nm测定吸光度,20min内完成测定,记为A测定。
蛋白质含量计算:C待测(µg/m L)=C标准×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)=50×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)C标准:标准品蛋白质浓度,50µg/mL。
注意事项:1.加考马斯亮蓝后,在10~20min内吸光值相对较稳定,因此须在10~20min完成比色。
SDS-PAGE及考马斯亮蓝染色及脱色原理:十二烷基磺酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)是一种蛋白表达分析技术。
SDS是一种阴离子表面活性剂,与蛋白质充分混合后破坏蛋白质的二级和三级结构,使蛋白质完全变性并带上负电荷。
PAGE包含浓缩胶和分离胶,样品首先通过浓缩胶,使样品中所有SDS多肽复合物在分离胶表面聚成一条很薄的区带,使全部样品处于同一起跑线上;分离胶具有分子筛效应,将样品中不同分子量的大小的蛋白质彼此分开。
SDS-PAGE常用于检测蛋白的表达量、表达分布,或分析蛋白的纯度等。
溶液准备:②将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGESeparatingGelBuffer和纯水在小烧杯或试管中混合。
③加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
④在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1cm的水层,速度不能太快,使凝胶表面保持平整。
⑤静置30-60分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,表面凝胶已聚合。
2)灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表2)①去除覆盖在分离胶上的水层。
②将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGEStackingGelBuffer和纯水在一个小烧杯或试管中混合。
③加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
④将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
⑤将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
⑥静置10~20分钟,等待浓缩胶聚合。
⑦待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,以免气泡破坏加样孔,若上样孔有变形,可用适当粗细的针头拨正。
2.样品处理:在蛋白样品中加入蛋白上样缓冲液,稀释至1×(如蛋白样品有50μl,则加入6x缓冲液10μl),混匀,沸水或95-100℃加热5min,然后适当离心收集样品至管底。
Mini VE 凝胶快速考马斯亮蓝染色1.剥离凝胶置于小盒中(例如1ml枪头盒),使凝胶平展,在盒中加入100ml 试剂A,在微波炉中用最大功率加热至溶液刚好沸腾(>90℃,约需30-60s,小心防止烫伤)2.室温轻轻摇动冷却5min3.弃去试剂A(可选用注射器吸取),加入100ml试剂B,用微波炉最大功率加热至溶液刚好沸腾(>90℃,约需30-60s,小心防止烫伤)4.弃去试剂B,用蒸馏水冲洗凝胶一次5.加入100ml 试剂C,用微波炉最大功率加热至刚好沸腾(>90℃,约需1min)6.弃去试剂C,用水冲洗凝胶一次。
7.加入100ml试剂D,用微波炉最大功率加热至刚好沸腾(>90℃,约需1min)8.室温轻轻摇动冷却5min,弃去试剂D9.加入100ml试剂D,室温轻轻摇动脱色至背景无色。
试剂A试剂名称用量用量用量异丙醇25 ml 125 ml 250 ml醋酸10 ml 50 ml 100 ml水65 ml 325 ml 650 ml考马斯亮蓝R-250 0.05 g 0.25 g 0.5 g总体积100 ml 500 ml 1000 ml试剂B试剂名称用量用量用量异丙醇10 ml 50 ml 100 ml醋酸10 ml 50 ml 100 ml水80 ml 400 ml 800 ml考马斯亮蓝R-250 0.005 g 0.025 g 0.05 g总体积100 ml 500 ml 1000 ml试剂C试剂名称用量用量用量醋酸10 ml 50 ml 100 ml水90 ml 450 ml 900 ml考马斯亮蓝R-250 0.002 g 0.01 g 0.02 g总体积100 ml 500 ml 1000 ml试剂D试剂名称用量用量用量醋酸10 ml 50 ml 100 ml水90 ml 450 ml 900 ml总体积100 ml 500 ml 1000 ml。
常规考马斯亮蓝染色试剂盒
简介:
常规考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝R250染色和脱色方法,可用于SDS-PAGE 或非变性PAGE 等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色或Western 转膜后PAGE 胶上残余蛋白的检测。
常规考马斯亮蓝染色试剂盒中的染色液和脱色液经过改良,不含有毒的甲醇,含有刺激性气味的乙酸。
采用常规染色脱色方法累计时间达到2~3h 后可以观察到蛋白条带,采用快速染色脱色方法20min 左右即可观察到蛋白条带。
组成:
操作步骤(仅供参考):
(一)常规染色脱色方法
1、PAGE 电泳后取凝胶放入适量Commassie Blue Stain 中,确保染色液充分覆盖凝胶。
2、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温染色1h 或更长时间。
具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。
凝胶较厚,温度较低,则染色时间宜适当延长。
凝胶较薄,温度较高,则染色时间可以适当缩短。
3、倒出染色液,该染色液可以回收重复使用2~3次。
4、加入适量Commassie Blue 脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
5、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温脱色。
期间更换脱色液2~4次,直至蓝色背景基本上全部被脱去,并且蛋白条带染色效果达到预期。
6、完成脱色后把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。
保存在水中的凝胶会发生溶涨。
如需避免溶涨,可以把胶保存在含20%甘油水溶液中,长期保存可以制备干胶。
(二)快速染色脱色方法
1、PAGE 电泳结束后取胶放入Commassie Blue stain 中,微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾,立即停止加热。
通常对于胶浓度大于10%的胶比较坚韧,在发生煮沸时不易破损;对于胶浓度小于10%的胶,宜尽量避免煮沸,以免出现胶碎裂的情况。
2、随后在染色液温度较高的情况下,在室温摇床上摇动。
3、倒出染色液,染色液可以回收重复使用2~3次。
编号 名称 PT0020 600ml Storage 试剂(A): Commassie Blue Stain 100ml RT 试剂(B): Commassie Blue 脱色液 500ml RT 使用说明书
1份
4、加入适量Commassie Blue脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
5、微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾,立即停止加热。
6、随后在脱色液温度较高的情况下,在摇床上摇动5~10min。
此时通常可以观察到比较清楚的蛋白条带。
8、完成脱色后,把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。
保存在水中的凝胶会发生溶涨。
如需避免溶涨,可以把胶保存在含20%甘油水溶液中,长期保存可以制备干胶。
注意事项:
1、染色时如果把凝胶和染色液一起放置在微波炉中适当加热,可以大大加快染色速度。
但
加热时宜尽量避免沸腾,以免出现因暴沸而导致的凝胶碎裂。
2、如果希望染色的背景更低,希望获得更加清晰的蛋白条带,可以加入适量的室温蒸馏水
进行洗涤。
通过蒸馏水洗涤可以进一步降低背景。
3、常规染色脱色方法耗时较长,但检测灵敏度更高,染色效果更加稳定。
快速染色脱色方
法通常检测灵敏度略低,并且在微波炉加热的过程中有时会出现暴沸导致凝胶碎裂的情况,需特别注意。
4、本染色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。