常规考马斯亮蓝染色试剂盒
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考马斯亮蓝染色套装使用说明货号:P1305保存:室温保存,至少一年有效。
规格:100ml+500ml产品简介:本考马斯亮蓝染色套装(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法,以考马斯亮蓝G-250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色,或Western 转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。
产品内容:考马斯亮蓝染色液100ml考马斯亮蓝脱色液500ml说明书1份使用方法:1、电泳结束后,取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中(至少5倍胶体积),确保染色液可以充分覆盖凝胶。
2、将凝胶置于摇床上缓慢摇动,室温染色至少2小时,低丰度蛋白染色需4小时以上。
3、染色结束后移除染色液,染色液通常可重复利用2-3次,但染色效果会略有影响。
4、将凝胶浸泡于和染色液等量体积的脱色液中,摇床上脱色4-8小时,期间更换3-5次脱色液。
注意事项:1.染色时间4小时以上效果最佳。
2.脱色可根据目的蛋白丰度和脱色效果随时终止,或延长脱色时间。
3.脱色越彻底,检测的蛋白量越低,脱色24小时一般可以检测出0.1ug蛋白量。
4.脱色后,将凝胶保存在水中,拍照或扫描保存图像。
或制成干胶保存。
相关试剂:P1300-500考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液PC0020BCA蛋白浓度测定试剂盒PR1400低分子量蛋白MARKERPR1700预染次高分子量蛋白MARKERI1020IPTG溶液(50mg/ml)A101030%丙烯酰胺(29:1)T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液P1300SDS-PAGE凝胶制备试剂盒。
蛋白质含量测定具体操作——考马斯亮蓝法(南京建成,货号:A045-2)一、实验目的:样品蛋白质的含量测定(本实验为小鼠肝组织10%的组织匀浆上清液样本)二、测定的原理:蛋白质中有-NH3+基团,当棕红色的考马斯亮蓝显色剂加入蛋白质样品中,会发生络合反应,使溶液变成蓝色,通过吸光度的测定来计算蛋白质的含量。
三、实验材料a)仪器:紫外分光光度计、涡旋混匀器、比色皿、2mlEP管、5mlEP管、标记笔、b)试剂:考马斯亮蓝试剂盒、待测样品、双蒸水四、实验步骤a)将考马斯亮蓝试剂一贮备液:双蒸水=1:4进行配置,本实验需要75ml,即取出贮备液15ml和60ml的双蒸水进行试剂一应用液的配制,备用;b)蛋白质标准品从20℃冰箱中取出,融冻,暂时放在4℃冰箱保存;c)标记好25个2ml的EP管、5mlEP管,按顺序放好;准备好200ul和1000ul的移液器枪头d)将各10%的肝组织匀浆上清液从冰箱中取出,融冻,备用;e)将10%的肝组织匀浆上清配制成1%的肝组织匀浆上清,即使用移液器移取0.1ml放于对应的2mlEP管中,分别加入0.9ml的生理盐水,使用涡旋混匀器适当混匀各个组织匀浆;f)将处理后的样品按照下面的操作表,将200ul量程的移液器调至50ul,1000ul量程的调至1000ulg)待样品和标准品加完以后,使用涡旋混匀器混匀,静置10minh)准备好比色皿,和纸i)将紫外分光光度计的波长调至595nm,双蒸水调零,测定各管的吸光度。
j)根据公式:待测样品蛋白=测定管OD值−空白管OD值标准管OD值−空白管OD值∗标准品蛋白浓度五、注意事项a)此法灵敏度高,反应后的显色液可以在2个小时之内是稳定的;b)样本的蛋白浓度必须使用生理盐水稀释至1.3g/l以下,在该范围内呈线性关系;c)考马斯亮蓝法测定组织蛋白的组织匀浆的浓度一般在0.5%-2%;d)不可用石英比色皿,可用玻璃或塑料比色皿,测完成后立即用 95%乙醇冲洗使用完比色皿,使用95乙醇立马清洗比色皿,洗去显色剂;。
考马斯亮蓝染色一产品简介:本考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法,以考马斯亮蓝R250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色,或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。
使用本试剂盒,采用常规染色脱色方法累计时间达到2-3小时后可以观察到蛋白条带;采用快速染色脱色方法20分钟左右即可观察到蛋白条带。
观察到最清晰的蛋白条带则需染色脱色更长时间。
本试剂盒中的染色液和脱色液经过改良,不含有毒的甲醇,但含有刺激性气味的乙酸。
二保存条件:室温保存,至少一年有效。
注意事项:可以使用枪头盒或适当大小的培养皿作为染色和脱色的容器。
本染色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
三使用说明:1. 常规染色脱色方法:a. 电泳结束后,取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中,确保染色液可以充分覆盖凝胶。
b. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温染色1小时或更长时间。
注:具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。
凝胶较厚,温度较低,则染色时间宜适当延长。
凝胶较薄,温度较高,则染色时间可以适当缩短。
通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近,在染色液中几乎看不清凝胶时,可以认为已染色充分。
染色2-4个小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。
c. 倒出染色液。
染色液可以回收重复使用至少2-3次。
d. 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
e. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温脱色4-24小时。
期间更换脱色液2-4次,直至蓝色背景基本上全部被脱去,并且蛋白条带染色效果达到预期。
通常蛋白条带在脱色1-2小时后即可出现。
注:脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸,可以使部分染料吸附在吸水纸上,加快脱色。
脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。
仅供科研版本号:170313考马斯亮蓝G250染料试剂【产品组成】【保存条件】室温,避光,3个月【产品概述】Bradford法是常用的蛋白浓度检测的方法,与传统方法相比,更简单、更稳定、兼容性更好。
Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。
样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M,DTT的浓度可高达5mM。
但受高浓度的去垢剂的影响明显,故在用BradfordProteinAssayKit进行蛋白定量时,需确保SDS低于0.01%,TritonX-100低于0.05%,Tween20,60,80低于0.015%,含高浓度去污剂的蛋白定量,建议采用BCAProteinAssayKit。
考马斯亮蓝G250染料试剂由考马斯亮蓝G250、乙醇、磷酸组成,用于考马斯染料结合(Bradford)分析的总蛋白测量,其特点在于对蛋白样品中可能存在的大多数盐、溶剂、缓冲液、硫醇、金属螯合剂、还原性物质等均不排斥。
检测浓度下限达到25μg/ml,最小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1~20μl,在50~1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
【使用方法】1、稀释蛋白标准(一般为BSA5mg/ml)使其终浓度为0.5mg/ml。
注意:蛋白样品在什么溶液中,蛋白标准也应用什么溶液稀释,也可以用0.9%NaCl或PBS稀释蛋白标准。
2、将标准品按0,1,2,4,8,12,16,20μl加到96孔板的蛋白标准孔中,加蛋白标准稀释液补足至20μl。
3、加适当体积样品到96孔板的样品孔中,补加标准品稀释液至20μl。
4、各孔加入200μl考马斯亮蓝G250染料试剂,室温放置3~5min。
5、酶标仪测定595nm波长处的吸光值,560~610nm之间的波长也可。
6、根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
【注意事项】1、待测蛋白溶解于什么样的稀释液中,蛋白标准也应溶解于什么样的稀释液中,否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致,有可能导致测定不准确。
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线:400-168-3301或800-8283301订货e-mail:******************技术咨询:*****************碧云天网站微信公众号网址:考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法)产品编号产品名称包装P0017A 考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法) 1盒产品简介:本考马斯亮蓝染色试剂盒(Coomassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法,以考马斯亮蓝R250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色,或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。
使用本试剂盒,采用常规染色脱色方法累计时间达到2-3小时后可以观察到蛋白条带;采用快速染色脱色方法20分钟左右即可观察到蛋白条带。
观察到最清晰的蛋白条带则需染色脱色更长时间。
本试剂盒中的染色液和脱色液经过改良,不含有毒的甲醇,但含有刺激性气味的乙酸。
包装清单:产品编号产品名称包装P0017A-1 考马斯亮蓝染色液100mlP0017A-2 考马斯亮蓝染色脱色液500ml—说明书1份保存条件:室温保存,至少一年有效。
注意事项:可以使用枪头盒或适当大小的培养皿作为染色和脱色的容器。
本染色液和脱色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:1.常规染色脱色方法:a.电泳结束后,取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中,确保染色液可以充分覆盖凝胶。
b.置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温染色1小时或更长时间。
注:具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。
凝胶较厚,温度较低,则染色时间宜适当延长。
凝胶较薄,温度较高,则染色时间可以适当缩短。
通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近,在染色液中几乎看不清凝胶时,可以认为已染色充分。
5×考马斯亮蓝G-250(蛋白定量用)货号:PC0015规格:100mL/500mL保存:开封使用后请密封保存,本试剂盒自订购之日起九个月内有效。
产品简介:考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(Imax),由465nm 变为595nm,在一定的浓度范围内,测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。
Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,样品中巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM,但受略高浓度的去垢剂影响,需确保SDS的浓度低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween20,60,80低于0.06%。
自备试剂:PBS、BSA标准品(5mg/ml)操作说明:一.微孔酶标仪法1.完全溶解蛋白标准品,取10ul,稀释至250ul,使终浓度为0.2mg/ml。
待测蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。
但是为了简便起见,也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。
2.5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀,取1ml5×G250染色液,加入4ml双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。
3.将标准品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中,加PBS稀释液补足到20微升。
4.将样品作适当稀释(最好多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20微升到96孔板的样品孔中。
由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
5.各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液,室温放置3-5分钟。
6.用酶标仪测定A595,或560-610nm之间的其它波长的吸光度。
7.根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
二.分光光度计法如无酶标仪,染色反应可在离心管中进行,反应液混匀后加入比色皿中,使用分光光度计测定吸光值。
Bradford法蛋⽩定量试剂盒使⽤说明书使⽤说明书◆Bradford法蛋⽩定量试剂盒◆⽬录号1902◆使⽤⼿册◆实验室使⽤,仅⽤于体外Bradford法蛋⽩定量试剂盒⽬录号:1902⽬录编号包装单位190201 250次190202 1000次190203 2500次试剂盒组成、储存、稳定性:试剂盒组成保存250次1000次2500次蛋⽩标准(5mg/mlBSA)-20℃0.5ml 1ml 3mlBradford染⾊液4℃50ml 200ml 500ml本产品收到后按照上⾯指⽰温度存放各成份,⾄少九个⽉内有效。
蛋⽩标准长期保存-20℃放置,常温运输。
产品介绍:Bradford法蛋⽩定量试剂盒是在世界上常⽤的蛋⽩浓度检测⽅法之⼀Bradford法基础上(考马斯亮蓝结合显⾊法)改进⽽成。
当Bradford染⾊液(考马斯亮蓝)和蛋⽩在酸性条件下结合时,最⼤吸光值波长⽴刻由465 nm转移⾄595nm,同时颜⾊由褐⾊转为蓝⾊,通过测定吸光值⼤⼩并对照标准蛋⽩的吸光值,推算出蛋⽩浓度。
产品特点:1.灵敏度⾼,检测浓度下限达到25µg/ml,最⼩检测蛋⽩量达到0.5µg,待测样品体积为1-20µl。
2.检测速度极快,10-20个样品只需不⾜10分钟即可完成。
3.在50-1000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
注意事项:1.Bradford染⾊液含有刺激性或者腐蚀性化合物,操作时要戴乳胶⼿套,避免沾染⽪肤,眼睛和⾐服。
若沾染⽪肤、眼睛时,要⽤⼤量清⽔或者⽣理盐⽔冲洗。
2.Bradford染⾊液中考马斯亮蓝易聚集成团,每次使⽤前请颠倒6-8次并且竖直抓住瓶⼝做⽔平划圈动作,旋转瓶中液体,帮助充分混匀,但不可以上下振荡混匀。
3.低温会降低Bradford染⾊液的敏感度,因此每次使⽤前应该使Bradford染⾊液回复到室温。
仅仅将需要的Bradford染⾊液复温,可以减少复温时间。
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让您的WB实验多姿多彩
蛋白免疫印迹实验(Western Blot)实验大家肯定都不陌生,要想做出好看的条带,从制胶开始就不容半点马虎。
WB制胶可谓实验室新手的必修课了,想想小编我在当初实验室的时候,就没少帮师兄师姐配置WB凝胶,泛黄的配方表小编还记忆犹新。
WB凝胶配
方表
说起WB凝胶配置,小编可有一肚子苦水要倒,第一个让人头疼的一点就是多种溶液都需要计算量取,每次调移液器就要调半天。
还有各种试剂的保存条件也不一样,配胶之前还需要从冰箱,室温柜子里分别拿出不同的溶液。
这还不算,最容易出问题的促凝剂APS,需要新鲜配置,4度保存不能超过一周,关键是粉末还特容易吸水,打开后需要密封保存。
小编之前就踩过一次坑,APS粉末吸水结块,称量配置后的APS含量不够,凝胶凝结不好,整个WB实验条带跑的七扭八歪。
蛋白质印迹(Western Blot)实验中产品推荐:。
常规考马斯亮蓝染色试剂盒
简介:
常规考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝R250染色和脱色方法,可用于SDS-PAGE 或非变性PAGE 等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色或Western 转膜后PAGE 胶上残余蛋白的检测。
常规考马斯亮蓝染色试剂盒中的染色液和脱色液经过改良,不含有毒的甲醇,含有刺激性气味的乙酸。
采用常规染色脱色方法累计时间达到2~3h 后可以观察到蛋白条带,采用快速染色脱色方法20min 左右即可观察到蛋白条带。
组成:
操作步骤(仅供参考):
(一)常规染色脱色方法
1、PAGE 电泳后取凝胶放入适量Commassie Blue Stain 中,确保染色液充分覆盖凝胶。
2、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温染色1h 或更长时间。
具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。
凝胶较厚,温度较低,则染色时间宜适当延长。
凝胶较薄,温度较高,则染色时间可以适当缩短。
3、倒出染色液,该染色液可以回收重复使用2~3次。
4、加入适量Commassie Blue 脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
5、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温脱色。
期间更换脱色液2~4次,直至蓝色背景基本上全部被脱去,并且蛋白条带染色效果达到预期。
6、完成脱色后把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。
保存在水中的凝胶会发生溶涨。
如需避免溶涨,可以把胶保存在含20%甘油水溶液中,长期保存可以制备干胶。
(二)快速染色脱色方法
1、PAGE 电泳结束后取胶放入Commassie Blue stain 中,微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾,立即停止加热。
通常对于胶浓度大于10%的胶比较坚韧,在发生煮沸时不易破损;对于胶浓度小于10%的胶,宜尽量避免煮沸,以免出现胶碎裂的情况。
2、随后在染色液温度较高的情况下,在室温摇床上摇动。
3、倒出染色液,染色液可以回收重复使用2~3次。
编号 名称 PT0020 600ml Storage 试剂(A): Commassie Blue Stain 100ml RT 试剂(B): Commassie Blue 脱色液 500ml RT 使用说明书
1份
4、加入适量Commassie Blue脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
5、微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾,立即停止加热。
6、随后在脱色液温度较高的情况下,在摇床上摇动5~10min。
此时通常可以观察到比较清楚的蛋白条带。
8、完成脱色后,把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。
保存在水中的凝胶会发生溶涨。
如需避免溶涨,可以把胶保存在含20%甘油水溶液中,长期保存可以制备干胶。
注意事项:
1、染色时如果把凝胶和染色液一起放置在微波炉中适当加热,可以大大加快染色速度。
但
加热时宜尽量避免沸腾,以免出现因暴沸而导致的凝胶碎裂。
2、如果希望染色的背景更低,希望获得更加清晰的蛋白条带,可以加入适量的室温蒸馏水
进行洗涤。
通过蒸馏水洗涤可以进一步降低背景。
3、常规染色脱色方法耗时较长,但检测灵敏度更高,染色效果更加稳定。
快速染色脱色方
法通常检测灵敏度略低,并且在微波炉加热的过程中有时会出现暴沸导致凝胶碎裂的情况,需特别注意。
4、本染色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。