最优考马斯亮蓝染色Protocol

考马斯亮蓝染色液(常规法)的详细信息考马斯亮蓝染色液(常规法)规格：250ml500ml公司提取试剂盒不同样本提取DNA一次时间：15-30min, 并且可以适用于配备仪器大批量提取使用。

同系列产品：大鼠可溶性CD30配体(sCD30L)ELISA试剂盒大鼠可溶性CD40配体(sCD40L)ELISA试剂盒大鼠干细胞因子受体(SCFR)ELISA试剂盒大鼠基质细胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISA试剂盒考马斯亮蓝染色液(常规法)大鼠血管生成素受体Tie1(ANG-R-Tie1)ELISA试剂盒大鼠含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA试剂盒大鼠基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA试剂盒许多因素都能够影响质粒的产量，包括细菌培养液的体积，质粒的拷贝数，培养基的种类及所使用的菌株。

纯化的质粒不需后续处理即可用于DNA的各种分子生物学操作,但若用于体外转录实验,还需配合核糖考马斯亮蓝染色液(常规法)核酸酶抑制剂的使用。

溶液II-NaOH-SDS液:NaOH:核酸在pH大于5,小于9的溶液中,是稳定的。

但当pH>12或pH<3时,就会引起双链之间氢键的解离而变性。

在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1/L,加抽提液时,该系统的pH 就高达12.6,因而促使染色体DNA 与质粒DNA 的变性。

SDS:SDS是离子型表面活性剂。

它主要功能有:(1)溶解细胞膜上的脂质与蛋白,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。

(2)解聚细胞中的核蛋白。

(3)SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R+-蛋白质的复合物,使蛋白质变性而沉淀下来。

但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取过程中,必须把它去除干净,防止在下一步操作中(用RNase去除RNA 时)受到干扰。

DNA 溶液是DNA 以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA 周围的水分子,使DNA 失水而易于聚合。

考马斯亮蓝染色原理
考马斯亮蓝染色原理是一种非常重要的染色技术，它可以有效解决染色过程中的颜色发生改变的问题。

19世纪末，考马斯亮蓝染料在染色领域内开始流行，它成为一种有效的染色方法，能够有效地提供出美观、耐用的染色效果。

考马斯亮蓝染色原理是一种常用的染色技术，它依据矿物质中的亮蓝矿物为原料，以及活性盐的辅助，通过精密的混合和周转，以及微观的改变来发挥其有效的染色效果。

在染色过程中，染色料与活性盐形成一个“涂料-原料”的交互，以及“铸锭处理-熔融”的依赖，从而有效地提供出良好的染色效果。

此外，考马斯亮蓝染色原理还可以提供出一种精确、良好的染色效果。

根据不同的环境条件，可以精确地控制所需要的颜色深浅，并有效地保证染色材料的纯净性，从而获得出精确、良好的染色效果。

此外，考马斯亮蓝染色还可以较好地防止抗菌性漂浮微粒的影响，且比常规染料具有更高的抗氧化性，从而使染色物料的使用寿命大大延长。

另外，考马斯亮蓝染色原理还有效地降低了生产工艺的复杂度。

比起其他染色方法，减少了很多涉及熔融，干燥等复杂工序，有效提高了染色材料的优质性，降低了生产成本。

综上所述，考马斯亮蓝染色原理是一种有效的染色方法，可以有效实现出良好的染色效果，又有效降低了生产工艺的复杂度，从而受到广泛的应用。

它不仅可以用于纺织品的染色，还可以用于化工、油
漆等行业的染色，以及塑料、树脂的加工业的染色，从而发挥其重要的作用。

考马斯亮蓝染色推荐选用前三种染色方法,另有传统考马斯亮蓝染色法和网上经验,染色效果不好,不推荐使用,仅供参考;见后页比对照片操作步骤：1、取出SDS-PAGE凝胶,经超纯水漂洗；以下每步操作皆在摇床上进行;2、固定：将凝胶放入相应的固定液中,固定1小时；3、染色：取出凝胶,放入相应的染色液中,过夜染色；也可依实际情况缩短时间4、脱色胶体法&改良法：凝胶放入纯水中洗脱,换液数次；脱色Neuhoff法：取出凝胶,用M Tris-H3PO4缓冲液漂洗2分钟;再用25%乙醇淋洗＜1 min;然后再用10%乙酸中在室温脱色2小时即可;试剂的配制：1、胶体考马斯亮蓝染色法colloidal Coomassie brilliant blue,cCBB：固定液：40%甲醇、10%乙酸染色液：%磷酸、8%硫酸铵、% CBB-G250、20%乙醇脱色液：H2O2、改良考马斯亮蓝染色法modified Coomassie brilliant blue,mCBB：固定液：40%甲醇、10%乙酸染色液：10%磷酸、10%硫酸铵、% CBBG250、20%乙醇着色1小时即可;脱色液：H2O3、Neuhoff染色法：固定液：12%三氯醋酸染色液：2%磷酸、10%硫酸铵、% CBB-G250、使用前振摇;染色时,取一定体积的染色液,加入1/4体积的甲醇;脱色所需：M Tris-磷酸缓冲液、25%乙醇、10%醋酸4、传统考马斯亮蓝染色法：固定液：%甲醇、%乙酸染色液：%甲醇、%乙酸、% CBB-G250脱色液：5%甲醇、%乙酸5、网上方法：固定液：40%甲醇、10%乙酸染色液：30%甲醇、10%乙酸、% CBB-G250脱色液：30％甲醇,10％乙酸比对照片：每块胶左道是Marker质量原因,未跑开ˇˇ 上样量5μl,右道是BSA分子量68kDa,上样量为3μg.-Neuhoff法传统法胶体法改良法网上法。

考马斯亮蓝染色总结考马斯亮蓝染色是一种广泛应用于生物学实验中的染色技术，它可以用于检测许多不同的分子和细胞类型。

这种染色方法是法国生物学家Louis-Charles Malassez于1867年发明的，后由德国生物学家Richard Kuhn于1933年进行改良，使其成为现代生物学实验的标准技术之一。

本文将对考马斯亮蓝染色的方法、应用以及优缺点进行总结。

一、方法考马斯亮蓝染色的原理是，亮蓝染料可以与DNA的碱基对结合而形成复合物。

这种染色技术需要一些基本试剂，包括亮蓝染料、甲醛、醋酸以及石蜡等。

具体操作步骤如下：1. 取需要染色的细胞或组织样本，用生理盐水进行清洗；2. 将样本固定在载玻片上，用甲醛和醋酸进行固定处理；3. 将载玻片在70％乙醇和95％乙醇中依次浸泡，以去除固定剂；4. 在50％和75％醇溶液中浸泡数分钟，使样本逐渐变暗；5. 用亮蓝染料染色，通常需要在100倍和400倍低倍镜下观察。

二、应用考马斯亮蓝染色可以用于检测DNA、RNA、核蛋白和细胞质等细胞成分。

在分子生物学实验中，考马斯亮蓝染色被广泛应用于检测DNA条带的大小、纯度和含量。

此外，它还可以用于细胞形态和结构的观察，如观察细胞核、染色质和核仁等。

在医学领域中，考马斯亮蓝染色可以用于检测肿瘤、癌细胞、炎症细胞和血液样本等。

从组织样本中提取DNA或RNA 时，也会使用该染色技术。

三、优缺点优点：1.对许多不同类型的细胞和分子具有高度灵敏度和特异性。

2.操作简便，仅需要一些基本试剂和设备。

3.观察结果清晰，可以展示细胞组织的形态和结构。

4.染色技术稳定性好，结果可复制性高。

缺点：1.过程中可能会使样本遭到破坏或溶解。

2.亮蓝染料可能与背景杂质结合，导致结果不准确。

3.需要专业人员进行染色和观察，较为复杂。

4.染色后，样品无法再进行分子生物学的使用，比如PCR 反应等。

结语：考马斯亮蓝染色是一种简便、灵敏并且重要的分子生物学实验技术。

考马斯亮蓝染色及丽春红染色操作规程附录7:考马斯亮蓝染色及丽春红染色操作规程
1. 考马斯亮蓝染色
1.1 染色液配制
醋酸脱色液。

5%(V/V)甲醇，7%(V/V)醋酸，88%HO。

2
固定液。

50%(V/V)甲醇，10%(V/V)冰醋酸，40%HO。

2
考马斯亮蓝染液。

50%(V/V)甲醇，0.05%(V/V)考马斯亮蓝，10%(V/V)冰醋酸，40%HO。

2
1.2.实验步骤
将胶条置于固定液中，摇床固定1 h;? 倒掉固定液，加考马斯亮蓝染液染色2 h;?去离子水漂洗1-2次，脱色液漂洗1次;? 脱色液中脱色1 h，最后置于去离子水中。

2. 丽春红染色
2.1. 染色液配制
10×丽春红染液
丽春红S 2g
三氯乙酸 30g
磺基水杨酸 30g
加蒸馏水至 100ml。

使用时将其稀释10倍，即为应用液。

2.2. 实验步骤转膜完成后，取出膜在甲醇里泡1分钟;?将膜于双蒸水中漂洗数次后，浸入丽春红染液着色;? 室温下，于摇床上轻摇5-30 min;? 将染好的膜置于双蒸水中漂洗数次，不要洗的太久，只需把表面的丽春红洗掉即可，此时可看到红色的蛋白条带。

考马斯亮蓝快速染色液产品编号产品名称包装P0017 考马斯亮蓝快速染色液 250ml产品简介：考马斯亮蓝快速染色液(Commassie Blue Fast Staining Solution)是以考马斯亮蓝G250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳胶的快速、高灵敏染色，或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。

本考马斯亮蓝快速染色液是一种无毒，无刺激性气味的高度环保型染色液。

普通的常规方法需使用剧毒的甲醇及强刺激性的乙酸，而碧云天生产的考马斯亮蓝快速染色液则采取全新配方，实现了无毒和无刺激性气味。

本考马斯亮蓝快速染色液只需一小时或更短时间就可以检测到低达100ng的蛋白电泳条带，而常规方法需3小时以上。

本试剂盒可以进行高灵敏染色，最低可以清楚检测到10ng的蛋白电泳条带，参考图1。

蛋白上样量： 10μg 5μg 2μg 1μg 500ng 200ng 100ng 50ng 20ng 10ng 5ng 2ng 1ng图1. 使用碧云天的考马斯亮蓝快速染色液对不同上样量的BSA蛋白样品用10% SDS-PAGE胶电泳后的两次染色结果。

无需对蛋白和凝胶进行固定，可以不进行脱色，操作更加简单。

本染色液和质谱分析兼容，即经过本染色液染色的蛋白条带或蛋白点可以用于后续的质谱分析。

包装清单：产品编号产品名称包装P0017 考马斯亮蓝快速染色液250ml—说明书1份保存条件：4℃保存，一年有效。

注意事项：本染色液呈酸性，有轻微腐蚀性，使用时请作必要防护。

如果使用微波炉加热，请特别注意避免沸腾。

以免因暴沸而导致凝胶碎裂。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：1. 电泳结束后，取胶放入约50-100ml蒸馏水中，在摇床上摇动5分钟，倒弃液体，再重复两次，共洗涤三次。

注：本步骤的目的是为了洗去凝胶中的SDS等干扰物质。

如果不能充分去除SDS会导致背景较高，如果胶非常厚，每次的洗涤时间需适当延长并且洗涤次数也需适当增加。