考马斯亮蓝染色套装使用说明

考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液使用说明货号：P1300规格：500ml组成：溶液A10ml、溶液B500ml保存：2-8℃保存，1年有效。

产品简介：考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液是一种即用型快速灵敏而且安全的染液，以考马斯亮蓝G-250为染料，可用于SDS-PAGE或者非变性电泳蛋白凝胶的快速染色，染色时间短，半小时内即可检测到蛋白电泳条带。

使用方法：工作液的配制，取100ml溶液B，加入2ml溶液A，混匀，此为工作液。

此工作液配好后请在一周内使用完，过期效果会有一定的影响。

1.将电泳后的PAGE胶（以8cm×10cm大小为例）取下放入容器中，加入50ml双蒸水或去离子水，加热至沸腾后停止，（可选：继续在脱色摇床上摇动5分钟），弃去水溶液。

2.加入25ml快速染色工作液，加热至沸腾后保持沸腾状态30-60秒，停止加热后继续在脱色摇床上摇动5-10分钟，弃去染色液（此时蛋白条带应已可见）。

3.加入约50ml水，加热至沸腾后保持沸腾状态30-60秒，停止加热后继续在脱色摇床上摇动5-10分钟，换水即可完成脱色，观察结果。

注意事项：1.染色前的清洗步骤（第一步）中，水的质量非常重要，质量越好灵敏度越高，研究证明若用自来水加热清洗，染色效果与灵敏度仅与常规甲醇考马斯亮蓝染色（分子克隆第二版）相同。

2.脱色时可用自来水清洗。

3.若要得到无背景的染色胶，可重复脱色步骤或将胶放在水中过夜。

4.经本产品染色的PAGE胶，胶的缩涨度小于5%，染色后的胶可在水中放置数月而无明显脱色。

5.每次加热后，继续在脱色摇床上摇动5分钟，可增强染色效果。

6.本染色液有轻微腐蚀性，请带手套操作。

相关试剂：P10154×蛋白上样缓冲液（含DTT）P1305考马斯亮蓝染色套装（染色液+脱色液）A101030%丙烯酰胺(29:1)T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液SP1060SDS-PAGE凝胶制备试剂盒P001210×丽春红染色液。

考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。

此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

测定原理：在酸性溶液中，考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合形成蓝色复合物；该复合物在620nm处有最大吸收峰，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。

该方法灵敏度高，适合微量蛋白质分析。

自备仪器和用品：离心机、酶标仪、96孔板、移液器和蒸馏水。

试剂组成和配制：试剂一：液体11 mL×1瓶，4℃保存。

样品中可溶性蛋白质提取：1. 液体样品：澄清液体样品可以直接测定。

2. 组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：20的比例（建议称取约0.05 g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水））冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即待测液。

（动物样品常常需要稀释）3. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

测定操作：1. 酶标仪预热30 min。

2. 在96孔板中加入：试剂（μL）测定管空白管样本100蒸馏水100试剂一100 100混匀后，测定波长620 nm吸光值，△A=A测定-A空白。

注意：空白管只需要测定一次。

计算公式：标准曲线：y = 7.1265x - 0.0007 R2 = 0.9997 x: 蛋白标准品浓度(mg/mL)y: 吸光值差值1.按液体样本体积计算：Cpr（mg/mL）=(△A+0.0007)÷7.1265=0.1403×(△A+0.0007)2.按组织样本质量计算：Cpr（mg/g）=(△A+0.0007)÷7.1265×V总÷W=0.1403×(△A+0.0007)÷WV总：提取液体积，1 mL; W：样本质量，g。

蛋白质含量测定具体操作——考马斯亮蓝法（南京建成，货号：A045-2）一、实验目的：样品蛋白质的含量测定（本实验为小鼠肝组织10%的组织匀浆上清液样本）二、测定的原理：蛋白质中有-NH3+基团，当棕红色的考马斯亮蓝显色剂加入蛋白质样品中，会发生络合反应，使溶液变成蓝色，通过吸光度的测定来计算蛋白质的含量。

三、实验材料a)仪器：紫外分光光度计、涡旋混匀器、比色皿、2mlEP管、5mlEP管、标记笔、b)试剂：考马斯亮蓝试剂盒、待测样品、双蒸水四、实验步骤a)将考马斯亮蓝试剂一贮备液：双蒸水=1:4进行配置，本实验需要75ml,即取出贮备液15ml和60ml的双蒸水进行试剂一应用液的配制，备用；b)蛋白质标准品从20℃冰箱中取出，融冻，暂时放在4℃冰箱保存；c)标记好25个2ml的EP管、5mlEP管，按顺序放好；准备好200ul和1000ul的移液器枪头d)将各10%的肝组织匀浆上清液从冰箱中取出，融冻，备用；e)将10%的肝组织匀浆上清配制成1%的肝组织匀浆上清，即使用移液器移取0.1ml放于对应的2mlEP管中，分别加入0.9ml的生理盐水，使用涡旋混匀器适当混匀各个组织匀浆；f)将处理后的样品按照下面的操作表，将200ul量程的移液器调至50ul,1000ul量程的调至1000ulg)待样品和标准品加完以后，使用涡旋混匀器混匀，静置10minh)准备好比色皿，和纸i)将紫外分光光度计的波长调至595nm，双蒸水调零，测定各管的吸光度。

j)根据公式：待测样品蛋白=测定管OD值−空白管OD值标准管OD值−空白管OD值∗标准品蛋白浓度五、注意事项a)此法灵敏度高，反应后的显色液可以在2个小时之内是稳定的；b)样本的蛋白浓度必须使用生理盐水稀释至1.3g/l以下，在该范围内呈线性关系；c)考马斯亮蓝法测定组织蛋白的组织匀浆的浓度一般在0.5%-2%；d)不可用石英比色皿，可用玻璃或塑料比色皿，测完成后立即用 95%乙醇冲洗使用完比色皿，使用95乙醇立马清洗比色皿，洗去显色剂；。

考马斯亮蓝染色一产品简介：本考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法，以考马斯亮蓝R250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色，或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。

使用本试剂盒，采用常规染色脱色方法累计时间达到2-3小时后可以观察到蛋白条带；采用快速染色脱色方法20分钟左右即可观察到蛋白条带。

观察到最清晰的蛋白条带则需染色脱色更长时间。

本试剂盒中的染色液和脱色液经过改良，不含有毒的甲醇，但含有刺激性气味的乙酸。

二保存条件：室温保存，至少一年有效。

注意事项：可以使用枪头盒或适当大小的培养皿作为染色和脱色的容器。

本染色液呈酸性，有轻微腐蚀性，使用时请作必要防护。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

三使用说明：1. 常规染色脱色方法：a. 电泳结束后，取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。

b. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时间。

注：具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。

凝胶较厚，温度较低，则染色时间宜适当延长。

凝胶较薄，温度较高，则染色时间可以适当缩短。

通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。

染色2-4个小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。

c. 倒出染色液。

染色液可以回收重复使用至少2-3次。

d. 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。

e. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色4-24小时。

期间更换脱色液2-4次，直至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染色效果达到预期。

通常蛋白条带在脱色1-2小时后即可出现。

注：脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸，可以使部分染料吸附在吸水纸上，加快脱色。

脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。

考马斯亮蓝染色及丽春红染色操作规程附录7:考马斯亮蓝染色及丽春红染色操作规程
1. 考马斯亮蓝染色
1.1 染色液配制
醋酸脱色液。

5%(V/V)甲醇，7%(V/V)醋酸，88%HO。

2
固定液。

50%(V/V)甲醇，10%(V/V)冰醋酸，40%HO。

2
考马斯亮蓝染液。

50%(V/V)甲醇，0.05%(V/V)考马斯亮蓝，10%(V/V)冰醋酸，40%HO。

2
1.2.实验步骤
将胶条置于固定液中，摇床固定1 h;? 倒掉固定液，加考马斯亮蓝染液染色2 h;?去离子水漂洗1-2次，脱色液漂洗1次;? 脱色液中脱色1 h，最后置于去离子水中。

2. 丽春红染色
2.1. 染色液配制
10×丽春红染液
丽春红S 2g
三氯乙酸 30g
磺基水杨酸 30g
加蒸馏水至 100ml。

使用时将其稀释10倍，即为应用液。

2.2. 实验步骤转膜完成后，取出膜在甲醇里泡1分钟;?将膜于双蒸水中漂洗数次后，浸入丽春红染液着色;? 室温下，于摇床上轻摇5-30 min;? 将染好的膜置于双蒸水中漂洗数次，不要洗的太久，只需把表面的丽春红洗掉即可，此时可看到红色的蛋白条带。

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-168-3301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号考马斯亮蓝G250 (Reagent grade)产品编号 产品名称包装 ST1119-1g 考马斯亮蓝G250 (Reagent grade) 1g ST1119-5g 考马斯亮蓝G250 (Reagent grade) 5g ST1119-25g考马斯亮蓝G250 (Reagent grade)25g产品简介：CAS Number Chemical Formula Molecular WeightPurity Grade 6104-58-1C 47H 48N 3NaO 7S 2854.02-Reagent grade基本信息(General Information)：Name (Chinese) 考马斯亮蓝G250 Name (English) Brilliant Blue G250 Specifications Reagent grade Chemical Formula C 47H 48N 3NaO 7S 2 Synonym (Chinese) Coomassie 亮蓝G250 Synonym (English) Acid blue 90 Coomassie Brilliant Blue G250 Beilstein Registry No. 5230822 EINECS Number 228-058-4 MDL Number MFCD00078482 UNSPSC Code - 产品描述(Description)：Application 考马斯亮蓝G250已用于测定尿蛋白浓度。

用于SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)后的蛋白质条带检测。

货号：MS3201 规格：100管/96样考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定，确保蛋白浓度在0~1000µg/ml 范围内。

测定意义：样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。

此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

测定原理：在酸性溶液中，考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合形成蓝色复合物；该复合物在595nm处有最大吸收峰，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。

该方法灵敏度高，适合微量蛋白质分析。

自备实验用品及仪器：离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸馏水。

试剂组成和配制：试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存。

标准品：液体1mL×1瓶，4℃保存。

样品中可溶性蛋白质提取：1.液体样品：澄清液体样品可以直接测定。

2.组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水））冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即待测液。

（动物样品常常需要稀释）3.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

测定操作：1. 分光光度计/酶标仪预热30 min，蒸馏水调零。

2. 空白管：取EP管，加入40μL蒸馏水，250μL试剂一，混匀后室温静置10min，取200μL 于微量石英比色皿/96孔板，于595nm比色，10~20min完成比色，记为A空白管。

3. 标准管：取EP管，加入40μL标准液，250μL试剂一，混匀后室温静置10min，取200μL 于微量石英比色皿/96孔板，于595nm比色，10~20min完成比色，记为A标准管。

考马斯亮蓝快速染色液产品编号产品名称包装P0017 考马斯亮蓝快速染色液 250ml产品简介：考马斯亮蓝快速染色液(Commassie Blue Fast Staining Solution)是以考马斯亮蓝G250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳胶的快速、高灵敏染色，或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。

本考马斯亮蓝快速染色液是一种无毒，无刺激性气味的高度环保型染色液。

普通的常规方法需使用剧毒的甲醇及强刺激性的乙酸，而碧云天生产的考马斯亮蓝快速染色液则采取全新配方，实现了无毒和无刺激性气味。

本考马斯亮蓝快速染色液只需一小时或更短时间就可以检测到低达100ng的蛋白电泳条带，而常规方法需3小时以上。

本试剂盒可以进行高灵敏染色，最低可以清楚检测到10ng的蛋白电泳条带，参考图1。

蛋白上样量： 10μg 5μg 2μg 1μg 500ng 200ng 100ng 50ng 20ng 10ng 5ng 2ng 1ng图1. 使用碧云天的考马斯亮蓝快速染色液对不同上样量的BSA蛋白样品用10% SDS-PAGE胶电泳后的两次染色结果。

无需对蛋白和凝胶进行固定，可以不进行脱色，操作更加简单。

本染色液和质谱分析兼容，即经过本染色液染色的蛋白条带或蛋白点可以用于后续的质谱分析。

包装清单：产品编号产品名称包装P0017 考马斯亮蓝快速染色液250ml—说明书1份保存条件：4℃保存，一年有效。

注意事项：本染色液呈酸性，有轻微腐蚀性，使用时请作必要防护。

如果使用微波炉加热，请特别注意避免沸腾。

以免因暴沸而导致凝胶碎裂。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：1. 电泳结束后，取胶放入约50-100ml蒸馏水中，在摇床上摇动5分钟，倒弃液体，再重复两次，共洗涤三次。

注：本步骤的目的是为了洗去凝胶中的SDS等干扰物质。

如果不能充分去除SDS会导致背景较高，如果胶非常厚，每次的洗涤时间需适当延长并且洗涤次数也需适当增加。

考马斯亮蓝快速染色液使用说明考马斯亮蓝快速染色液是一种用于染色的化学药剂，适用于各种纺织品和织物，特别是棉和亚麻。

它能够以快速、均匀和持久的方式将颜色渗透到纤维中，使其具有鲜艳且持久的效果。

下面是考马斯亮蓝快速染色液的使用说明：1.准备工作首先，确保工作区域干净整洁，以防止灰尘和污垢附着在待染物品上。

同时，确保待染物品洗净并完全干燥，以免影响染色效果。

2.预备染料溶液在染色前，您需要制作考马斯亮蓝快速染色液的溶液。

按照包装上的指示，将适量的染料粉末加入到一定量的水中，并搅拌直至完全溶解。

请务必遵循正确的浓度和比例，以获得理想的染色效果。

3.浸泡待染物品将待染物品放入染色溶液中，确保其完全浸泡。

您可以使用盆子、桶或染缸来容纳溶液和物品，根据需求选择合适的容器尺寸。

确保物品可以自由活动，以确保染料均匀渗透到整个纤维中。

4.时间控制染色时间是控制染色深浅和颜色饱和度的关键。

根据您想要的颜色强度和深浅程度，选择适当的染色时间。

通常，较长的染色时间会产生更深的颜色，而较短的染色时间则会产生较浅的颜色。

在染色过程中，建议轻轻搅拌物品，以确保染料均匀分布。

5.清洗和固定颜色在染色时间结束后，将物品从染色溶液中取出，并用清水彻底冲洗。

这有助于清除多余的染料和杂质，以确保染料牢固地附着在纤维上，并防止晕染。

您可以使用温水进行冲洗，但请注意避免温度过高，以避免纤维收缩或变形。

6.晾干和修整彻底冲洗后，将物品晾干。

您可以将物品挂起或平放在通风良好的区域，直至完全干燥。

确保物品变得干燥后，您可以对其进行修整，如剪裁、熨烫等，以便达到所需的最终效果。

需要注意的是，染色液和染料是化学药剂，使用时必须遵循以下安全措施：-避免直接接触染料和染色液，尽量佩戴手套和护目镜等个人防护装备。

-在使用过程中，务必将染料和染色液存放在儿童无法触及的地方。

-在染色过程中，确保使用在通风良好的区域，并避免吸入染料和染色液的气味。

-如果发生意外，如染料或染色液溅入眼睛或皮肤上，应立即用清水冲洗，并寻求医生的帮助。