ABO血型反定型试剂红细胞配制

abo血型系统定型原则和实验方法
ABO血型系统定型原则是利用凝集试验技术，通过正定型（红细胞定型）和反定型（血清定型）两组试验来准确鉴定ABO血型。

具体步骤如下：
1. 正定型：取75×12mm干净小试管2支，分别标记抗A、抗B。

按标记滴加抗A、抗B试剂血清1滴。

再各滴加3-5%待检者红细胞悬液1滴，混匀。

2. 反定型：取75×12mm干净小试管3支，分别标记A细胞、B细胞、O 细胞。

3管各滴加待检者血清1滴。

按标记分别滴加混匀的A型、B型、O 型试剂红细胞1滴，混匀。

5管同时2档（3400转/分-15秒）离心。

3. 轻轻摇动试管，观察反应结果。

对于结果解释，如果被检红细胞膜上有与该试剂血清抗体相对应的抗原，或者被检血清中有与该试剂红细胞抗原相对应的抗体，则为阳性，即凝集为阳性。

如果不凝集，则为阴性。

以上是ABO血型系统定型原则和实验方法，仅供参考，建议查阅专业书籍或咨询专业人士获取更准确的信息。

红细胞ABO 血型（反定型）鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO 血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。

二、方法采用试管法检测红细胞ABO 血型（反定型）。

三、原理用已知的A1、B、O标准红细胞测定被检者血清中有无相应的抗A或抗B抗体，结合正定型结果判断ABO血型。

四、适用范围适用于输血前患者与献血者红细胞ABO血型(反定型)确认。

五、仪器设备普通离心机；血型专用离心机；六、试剂1、试剂名称：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒；2、试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；3、批准文号：国药准字S2*******；4、包装规格：A1、B、O试剂各1支，10ml/支；5、贮藏条件；2-8℃保存，不能冰冻。

6、有效期：自检定合格之日起2个月；7、试剂性能：外观、溶血率%、特异性、抗原性均符合检定规程要求。

七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。

2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。

3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。

4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。

八、操作步骤1、取10mmx60mm洁净小试管3支，分别标明A1型细胞、B型细胞、O型细胞，用滴管分别加入受检者血清1滴于试管，再分别用滴管加入A1、B、O型试剂红细胞悬液1滴。

2、，摇动试管，立即以1000rpm离心1min或3400rpm离心15s。

3．先观察是否有溶血，溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染；将试管轻轻摇晃，使沉于管底的红细胞浮起，观察细胞扣情况，并判断凝集强度（见下表）。

如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

红细胞ABO血型（反定型）结果凝集强度判断对照表红细胞凝集反应描述凝集强度镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散混合凝集外观分布溶血，上清液中有游离血红蛋白溶血红细胞凝集成一大块，血清清晰透明4+红细胞凝集成数小块，血清尚清晰3+红细胞凝块分散成许多小块，周围可见到游离红细胞2+肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞1+镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细±胞镜下未见凝集，红细胞均匀分布阴性4、ABO 血型（反定型）表现型反应格局表九、质量控制 1、对新进批号的试剂应作亲和力与效价验定。

ABO血型鉴定正反定型试验方法正定型试验是通过将被测血清与已知的A和B抗原的红细胞混合反应来确定被测血型。

具体步骤如下：1.准备供试者的血液样本。

采集一个血液样本，可以是静脉血或者指尖血。

2.分别将供试者的血液样本分为两个离心管中。

在两个离心管中加入等量的稀释液，使血液与稀释液比例为1：2，充分混合。

3.在一个离心管中加入已知含有A抗原的红细胞悬液，同时在另一个离心管中加入已知含有B抗原的红细胞悬液。

充分混合。

4.将两个离心管分别离心，离心后可观察到两个离心管中红细胞的沉淀情况。

5.如果被试者的血清与含有A抗原的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有B血型。

如果与含有B抗原的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有A 血型。

如果与两者都沉淀，说明被试者具有AB血型。

如果与两者都未发生沉淀，说明被试者具有O血型。

反定型试验是通过将被测血清与已知的A和B型抗体的红细胞混合反应来确定被测血型。

具体步骤如下：1.准备供试者的血液样本。

采集一个血液样本，可以是静脉血或者指尖血。

2.分别将供试者的血液样本分为两个离心管中。

在一个离心管中加入已知含有A型抗体的红细胞悬液，同时在另一个离心管中加入已知含有B 型抗体的红细胞悬液。

充分混合。

3.将两个离心管分别离心，离心后可观察到两个离心管中红细胞的沉淀情况。

4.如果被试者的血清与含有A型抗体的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有B血型。

如果与含有B型抗体的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有A血型。

如果与两者都沉淀，说明被试者具有AB血型。

如果与两者都未发生沉淀，说明被试者具有O血型。

在正定型试验和反定型试验中，如果在任意一次实验中发生了沉淀反应，就能确定被试者的血型。

如果在正定型试验和反定型试验中都未发生沉淀反应，则需要重新进行试验或者采用其他额外的手段来鉴定个体的血型。

需要注意的是，血型鉴定是一种简单、安全、快速且可靠的方法，但在特殊情况下，如婴儿出生后的一段时间内，由于母婴免疫传递可以导致血型存在变化。

ABO反定型红细胞悬液的配制方法1. 简介ABO血型系统是根据人体红细胞膜表面的抗原而划分的，主要有A型、B型、AB型和O型四种血型。

在输血过程中，正确选择合适的血型是非常重要的，以避免发生血型不相容的严重反应。

ABO反定型红细胞悬液是一种用于血型鉴定、抗体筛查以及输血前交叉试验的实验试剂。

2. 材料准备为了制备ABO反定型红细胞悬液，我们需要准备以下材料：•柱层离心管•离心机•A型血液样本•B型血液样本•AB型血液样本•O型血液样本•生理盐水3. 配制步骤3.1. 血型鉴定试验步骤血型鉴定是确定一个人的血型的过程，在配制ABO反定型红细胞悬液之前，我们需要进行该测试。

1.将柱层离心管标记为A、B、AB、O，分别代表后续实验中不同血型。

2.取一定量的A型血液样本，加入一个标记为A的柱层离心管中。

3.取一定量的B型血液样本，加入一个标记为B的柱层离心管中。

4.取一定量的AB型血液样本，加入一个标记为AB的柱层离心管中。

5.取一定量的O型血液样本，加入一个标记为O的柱层离心管中。

6.将加入血液样本的柱层离心管放入离心机中，以1500 rpm离心10分钟，分离红细胞。

3.2. ABO反定型红细胞悬液配制步骤完成血型鉴定步骤后，我们可以开始配制ABO反定型红细胞悬液了。

1.取出离心机中的柱层离心管，将上清液倒入不同的干净离心管中。

2.分别向每个离心管中加入适量的生理盐水，用于稀释上清液。

3.轻轻摇匀离心管，确保红细胞充分分散在生理盐水中。

4.将离心管放入离心机中，以1500 rpm离心10分钟。

5.丢弃上清液，保留红细胞沉淀。

6.向红细胞沉淀中加入适量的生理盐水，用于洗涤红细胞。

7.轻轻摇匀离心管，离心3分钟，丢弃上清液。

8.重复步骤7，洗涤至少3次，以去除多余的血浆成分。

9.最后一次洗涤后，加入适量的生理盐水，使红细胞悬浮。

10.将悬浮的红细胞转移至一个干净的离心管中。

4. 结论通过以上配制步骤，我们成功制备了ABO反定型红细胞悬液。

ABO-Rh正反定型血型定型操作规程一、项目名称、检验方法名称1．项目名称：ABO-Rh正反定型血型定型2．检验方法名称：柱凝集二、方法学原理该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。

正常具有抗原的人红细胞将与相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。

加入红细胞并将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。

三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物1．试剂卡品牌：美国强生奥索(Ortho-Clinical Diagnostica,Inc)2．代号：BioVue -ABO/Rh-Reverse3．包装规格：400卡/箱试剂卡（707100）；100卡/箱试剂卡（707155）4．试剂成分：BioVue ABO-Rh正反定型血型诊断试剂卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液，其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1％叠氮钠，0.01M的EDTA.成分描述第一柱：抗－A试剂抗－A鼠单克隆(lgM)抗体混和；蓝色染料第二柱：抗－B试剂抗－B鼠单克隆(lgM)抗体混和；黄色染料第三柱：抗－D试剂（抗RH）抗－D人单克隆(lgM)抗体第四柱：质控优化增强剂，用于血型检测的质控对照第五，第六柱：反定型稀释液优化增强剂，用于反定型血型检测5．试剂的储存与效期：储存条件： 2～25℃环境中保存。

请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。

并且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。

效期：试剂盒上有记载四、仪器品牌、型号BioVue专用离心机；BioVue专用孵育器五、样本的采集与准备：在采集标本前对病人/献血者无特殊要求，血液采集应符合相关的技术标准及管理规范。

含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。

标本采集后应尽快进行检测。

如果实验不能立即进行，应将标本置于2－8℃保存。

MEK―6318K稀释液配制ABO反定型试剂红细胞很多医院在做ABO反定型试验时，常因ABO反定型试剂红细胞悬液有效期短，不能购买太多，从而导致试剂暂时短缺；另外红细胞悬液在保存或使用不当时也很容易失效，给临床工作带来诸多不便。

如果能用血细胞分析仪使用的稀释液来配成红细胞悬液来进行ABO反定型的检测，会给临床带来很大的便利。

现就其可行性进行研究。

1 资料与方法1.1主要试剂与仪器标准抗-A，抗-B血清，由长春博德生物技术有限责任公司提供；MEK-6318K稀释液（日本光电）、MEK-6318K血细胞分析仪（日本光电）、奥林巴斯医学显微镜（日本）。

血液混匀器（江苏康建）1.2反定型试剂红细胞的制备①分别取5人份健康同型新鲜Rh阳性的A、B、O型红细胞各0.5ml混合；②用无菌等渗生理盐水洗涤红细胞，3000r/min离心3min，共3次；③再用MEK-6318K稀释液洗涤2次，以充分置换红细胞中的生理盐水；④用三种稀释液配成4ml/dl的A、B、O三种血型试剂红细胞；⑤将三种试剂红细胞悬液混合分装在八只压灭菌的试管中，加上胶塞，置4±2℃保存。

每隔2d取一只样品进行检测。

1.3检测项目1.3.1细胞形态观察并计数在显微镜下观察红细胞的形态并用MEK-6318K血细胞分析仪测定红细胞的数量。

1.3.2溶血情况观察和上清液游离Hb（血红蛋白）测定肉眼观察A、B、O三种血型试剂上清液的颜色，初步判断试剂的溶血情况。

然后用MEK-6318K血细胞分析仪测定游离Hb含量。

1.3.3细菌生长情况观察将A、B、O三种血型试剂红细胞摇匀，取一接种环接种于血琼脂培养基上，置37℃温箱培养24h后观察是否有细菌生长。

1.3.4试剂的抗原性和特异性检测分别向含有100ulA、B、O三种血型试剂红细胞的试管中加入同一批号的标准抗-A，抗-B血清各100ul，混合均匀，1000r/min离心1min，轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞浮起，观察凝集强度的变化。

红细胞ABO血型（反定型）鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。

二、方法采用试管法检测红细胞ABO血型（反定型）。

三、原理用已知的A1、B、O标准红细胞测定被检者血清中有无相应的抗A或抗B抗体，结合正定型结果判断ABO血型。

四、适用范围适用于输血前患者与献血者红细胞ABO血型(反定型)确认。

五、仪器设备普通离心机；血型专用离心机；六、试剂1、试剂名称：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒；2、试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；3、批准文号：国药准字S2*******；4、包装规格：A1、B、O试剂各1支， 10ml /支；5、贮藏条件；2-8℃保存，不能冰冻。

6、有效期：自检定合格之日起2个月；7、试剂性能：外观、溶血率%、特异性、抗原性均符合检定规程要求。

七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。

2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。

3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。

4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。

八、操作步骤1、取10mmx60mm洁净小试管3支，分别标明A1型细胞、B型细胞、O型细胞，用滴管分别加入受检者血清1滴于试管，再分别用滴管加入A1、B、O型试剂红细胞悬液1滴。

2、，摇动试管，立即以1000rpm离心1min或3400rpm离心15s。

3．先观察是否有溶血，溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染；将试管轻轻摇晃，使沉于管底的红细胞浮起，观察细胞扣情况，并判断凝集强度（见下表）。

如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

红细胞ABO血型（反定型）结果凝集强度判断对照表4、ABO血型（反定型）表现型反应格局表九、质量控制1、对新进批号的试剂应作亲和力与效价验定。

标准红细胞配置操作规
程
IMB standardization office【IMB 5AB- IMBK 08- IMB 2C】
标准红细胞配置操作规程标准红细胞用于测定ABO血型(反定型)，可以验证正定型结果的准确性，也可以纠正正定型时发生的错误，避免事的发生。

以下介绍标准红细胞的配置规程：
1搜集新鲜的A型、B型、O型血标本各3份以上。

最好是抗凝血，以便可以吸取较多的红细胞。

2取三支洁净10cm×150mm试管标上“A”“B’’“O”等字样，根据平时工作量需要，分别将三份或以上A型血的适量红细胞吸入标有“A”字样的试管中。

B型、O型依次类推。

3用生理盐水加入上述三支试管进行洗涤，洗涤时需加入生理盐水2／3试管以上，并且要轻轻地充分摇匀，然后以3000转／rain离心5min，弃去上清液。

4重复第3步骤三次，使红细胞充分洗清。

5将上法取得的红细胞再用生理盐水配制成5％的红细胞悬液，每10ml加1滴甲醛溶液。

即得用于反定型的标准红细胞。

可在4"C冰箱中保存
2w。

ABO-Rh正反定型血型定型操作规程一、项目名称、检验方法名称1．项目名称：ABO-Rh正反定型血型定型2．检验方法名称：柱凝集二、方法学原理该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。

正常具有抗原的人红细胞将与相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。

加入红细胞并将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。

三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物1．试剂卡品牌：美国强生奥索(Ortho-Clinical Diagnostica,Inc)2．代号：BioVue -ABO/Rh-Reverse3．包装规格：400卡/箱试剂卡（707100）；100卡/箱试剂卡（707155）4．试剂成分：BioVue ABO-Rh正反定型血型诊断试剂卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液，其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1％叠氮钠，0.01M的EDTA.成分描述第一柱：抗－A试剂抗－A鼠单克隆(lgM)抗体混和；蓝色染料第二柱：抗－B试剂抗－B鼠单克隆(lgM)抗体混和；黄色染料第三柱：抗－D试剂（抗RH）抗－D人单克隆(lgM)抗体第四柱：质控优化增强剂，用于血型检测的质控对照第五，第六柱：反定型稀释液优化增强剂，用于反定型血型检测5．试剂的储存与效期：储存条件： 2～25℃环境中保存。

请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。

并且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。

效期：试剂盒上有记载四、仪器品牌、型号BioVue专用离心机；BioVue专用孵育器五、样本的采集与准备：在采集标本前对病人/献血者无特殊要求，血液采集应符合相关的技术标准及管理规范。

含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。

标本采集后应尽快进行检测。

如果实验不能立即进行，应将标本置于2－8℃保存。

ABO/RHD血型定型检测试剂卡操作步骤
1、ABO/RhD血型定型检测试剂卡有六个凝胶管。

其中第一管为抗A凝胶，
第二管为抗B凝胶，第三管为抗D凝胶，第四至第六管为中性胶。

2、用生理盐水将待检者压积红细胞配置成0.8~1%浓度，分别加入第一至
第三管和第六管微管中，每管50ul。

3、将A型、B型反定型红细胞试剂用生理盐水配置成0.8~1%浓度，分别
加入到第四、第五管微管中，每管50ul。

4、将待检者血浆分别加入第四至第六微管中，每管25ul。

5、混匀后置专用离心机离5分钟。

6、离心结束后，取出观察判定结果并记录。

【阳性判断值】阳性结果反应强度：红细胞位于胶表面为4+强阳性反应。

红细胞悬浮在胶中为1+~3+弱阳性反应，越靠近胶底部颗粒越小。

红细胞全部沉积在微管底部为阴性。