(顾卫红)脊髓小脑共济失调的临床和基因学研究

基于毛细管电泳的片段分析和克隆测序在脊髓小脑共济失调动态突变检测中的应用研究陈园园;郝莹;张瑾;张鑫;谢坤铭;丁铭;顾卫红【摘要】Objective To estimate the accuracy and stability of capillary electrophoresis fragment analysis and clone sequencing in detecting dynamic mutations of spinocerebellar ataxia (SCA).Methods Capillary electrophoresis fragment analysis and clone sequencing were used in detecting trinucleotide repeated sequence of 14 SCA patients (3 cases of SCA2,2 cases of SCA7,7 cases of SCA8 and 2 cases of SCA17).Results Capillary electrophoresis fragment analysis of 3 SCA2 cases showed the expanded cytosine-adenine-guanine (CAG) repeats were 31,30 and 32,and the copy numbers of 3 clone sequencing for 3 colonies in each case were 37/40/40,37/38/39 and 38/39/40 respectively.Capillary electrophoresis fragment analysis of 2 SCA7 cases showed the expanded CAG repeats were 57 and 34,and the copy numbers of repeats were 69,74,75 in 3 colonies of one case,and was 45 in the other case.For the 7 SCA8 cases with the expanded cytosine-thymine-adenine (CTA)/cytosine-thymine-guanine (CTG) repeats of 99,111,104,92,89,104 and 75,the results of clone sequencing were 97,116,104,90,90,102 and 76 respectively.For 2 SCA17 cases with the short/expanded CAG repeats of 37/50 and 36/45,the results of clone sequencing were 51/50/52 and 45/44 for 3 and 2colonies.Conclusions Although the higher mobility of polymerase chain reaction (PCR) products containing dynamic mutation in the capillaryelectrophoresis fragment analysis might cause the deviation for analysis of copy numbers,the deviation was predictable and the results were repeatable.The clone sequencing results showed obviousinstability,especially for SCA2 and SCA7 genes,which might owing to their simple CAG repeats.Consequently,clone sequencing is not suited for detection of dynamic mutation,not to mention the quantitative criteria of dynamic mutation sequencing.%目的探讨基于毛细管电泳的片段分析和克隆测序在脊髓小脑共济失调(SCA)动态突变检测中的准确性和稳定性.方法采用基于毛细管电泳的片段分析和克隆测序对14例脊髓小脑共济失调患者(包括3例SCA2型、2例SCA7型、7例SCA8型和2例SCA17型)致病基因三核苷酸重复序列进行检测.结果 3例SCA2基因样本基于毛细管电泳的片段分析显示,扩展片段胞嘧啶-腺嘌呤-鸟嘌呤(CAG)重复序列分别为31、30和32次,每例样本取3个菌落进行克隆测序,CAG重复序列分别为37/40/40、37/38/39和38/39/40次;2例SCA7基因样本基于毛细管电泳的片段分析显示,扩展片段CAG重复序列分别为57和34次,1例取3个菌落进行克隆测序,CAG重复序列为69、74和75次,1例为45次;7例SCA8基因样本基于毛细管电泳的片段分析显示,扩展片段胞嘧啶-胸腺嘧啶-腺嘌呤(CTA)/胞嘧啶-胸腺嘧啶-鸟嘌呤(CTG)重复序列分别为99、111、104、92、89、104和75次,克隆测序分别为97、116、104、90、90、102和76次;2例SCA17基因样本基于毛细管电泳的片段分析显示,短片段/扩展片段CAG重复序列为37/50和36/45次,扩展片段分别取3和2个菌落进行克隆测序,CAG重复序列为51/50/52和45/44次.结论基于毛细管电泳的片段分析在判读重复序列时存在一定偏倚,但可以预估,可重复性佳,不影响基因检测结果的判定;而克隆测序具有明显不稳定性,尤其是SCA2和SCA7基因,可能与其重复序列组成较为单纯有关.克隆测序不适宜作为检测基因动态突变的方法,更不适宜作为判定动态突变序列组成的标准.【期刊名称】《中国现代神经疾病杂志》【年(卷),期】2018(018)003【总页数】6页(P192-197)【关键词】脊髓小脑共济失调;重复序列,核酸;核苷酸类;基因;突变;电泳,琼脂凝胶;序列分析【作者】陈园园;郝莹;张瑾;张鑫;谢坤铭;丁铭;顾卫红【作者单位】100029 北京,中日友好医院运动障碍与神经遗传病研究中心;100029 北京,中日友好医院运动障碍与神经遗传病研究中心;100029 北京,中日友好医院运动障碍与神经遗传病研究中心;100029 北京,中日友好医院运动障碍与神经遗传病研究中心;100029 北京,中日友好医院运动障碍与神经遗传病研究中心;100029 北京,中日友好医院运动障碍与神经遗传病研究中心;100029 北京,中日友好医院运动障碍与神经遗传病研究中心【正文语种】中文三核苷酸重复序列疾病（TRD）系致病基因内三核苷酸重复序列拷贝数在细胞减数分裂过程中发生动态突变，异常扩展导致的一组遗传性疾病。

脊髓小脑性共济失调的基因研究进展
刘钰鹏
【期刊名称】《医学综述》
【年(卷),期】2013(019)015
【摘要】脊髓小脑性共济失调(SCAs)是一类由于遗传因素造成的单基因神经系统退行性疾病,至今已发现了30余种基因亚型,多数是由于致病基因内存在三核苷酸重复片段异常扩增,导致含有多聚谷氨酰胺链的突变蛋白在细胞核内沉积形成核内包涵体.这类疾病临床症状复杂,具有明显的临床变异性和遗传异质性,分子遗传学的研究有助于明确诊断.该文对SCAs的各种亚型、疾病的发病机制和临床表现进行综述.
【总页数】4页(P2722-2725)
【作者】刘钰鹏
【作者单位】第二军医大学海军总医院临床医学院神经外科,上海,200082
【正文语种】中文
【中图分类】R441
【相关文献】
1.脊髓小脑性共济失调12型一家系的临床特征和基因突变分析 [J], 陈江瑛;闫振文;何锐;喻长顺;张素平
2.脊髓小脑性共济失调的基因诊断及治疗研究进展 [J], 王东浩;黄艳梅;杨保胜
3.河南汉族一脊髓小脑性共济失调家系基因突变检测 [J], 王东浩;郭利伟;徐艳芹;杨保胜;黄艳梅
4.2例脊髓小脑性共济失调患者的临床特点及基因测定分析 [J], 陈成芳;施俊峰;王亮亮;李杰;马颖;王国祥;汤武装;赵彦平
DC88C基因突变致脊髓小脑性共济失调40型1例 [J], 赵日光;赵琨;郝朝伟;李福兴;赵娜;苏红军
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脊髓小脑变性和肌肉萎缩的基因分析脊髓小脑变性和肌肉萎缩是一类罕见的神经退行性疾病，主要影响中枢和周围神经系统，导致肌肉力量和协调性逐渐减退。

这些疾病的发病率虽然较低，但临床表现却十分严重，有些甚至会导致患者的失能和死亡。

对于这类疾病的研究和治疗，基因分析显得尤为重要。

首先，我们来了解一下脊髓小脑变性和肌肉萎缩的基本情况。

这类疾病的主要症状包括肌肉无力、重力感、肌肉萎缩、共济失调等，不同类型的疾病有不同的症状表现。

例如，小脑性共济失调（SCA）是一种主要影响小脑的疾病，其特点是协调性障碍、共济失调、颤动等。

脊髓性肌萎缩症（SMA）是一种影响脊髓神经元的疾病，主要表现为肌肉无力和萎缩。

在基因方面，这些疾病都是由一些特定的基因突变引起的。

例如，SCA1型是由CAG重复扩增引起的，这会导致神经元的毒性蛋白质积累，最终引起神经元死亡。

SMA则是由SMN1基因的缺失或变异所致，这个基因编码的蛋白质有助于维持神经元的健康。

SMN缺陷会导致神经元逐渐退化和死亡，最终导致肌肉萎缩。

在对这类疾病进行基因分析时，我们可以采用一系列的技术方法。

例如，PCR扩增、序列分析、基因芯片、全外显子测序等。

这些方法可以检测出患者的遗传突变和缺陷，从而确定疾病的类型和病因。

基于这些分析，我们可以针对患者的个体情况，为其选择最佳治疗方法和方案。

除了基因分析外，我们还可以通过其他的技术工具来研究这类疾病的机制和治疗方法。

例如，我们可以利用小鼠模型和细胞系，研究这些基因突变对于神经元和肌肉功能的影响，探究相关途径的生物学机制，为疾病的治疗提供更多的参考。

目前，针对这类疾病的治疗方法还十分有限，我们需要继续加强疾病的研究和分析，探寻更加精准有效的治疗方法，帮助患者减轻痛苦并提高生活质量。

同时，也需要加强公众对于这些疾病的认识和了解，引起更多人的关注和关心，助力疾病的研究和治疗工作的顺利开展。

总之，脊髓小脑变性和肌肉萎缩是一类十分严重的神经退行性疾病，基因分析和研究是其治疗和研究的重要方法，我们需要加强相关疾病的研究和治疗工作，为人类健康事业发挥积极贡献。

脊髓小脑性共济失调（SCA）并非绝症，干细胞有望成为其治疗的新希望！脊髓小脑性共济失调（SCA），又称小脑萎缩症，是一种以小脑性共济失调和脑干损害为主的中枢神经系统慢性病变遗传病，将导致患者行走动作摇摇晃晃，因此亦被形象地称为'企鹅家族”，严重时会危及患者的生命。

小脑是人体重要的器官，控制身体和四肢的肌肉协调、走路时身体的平衡、动作的平顺、说话的清晰度、吞咽的顺畅及眼球的运转等。

脊髓小脑性共济失调多在20岁至50岁青壮年时期发病，病程可长达二十年，病患由发病初期的口齿不清、行动跌跌撞撞，到末期吞咽困难，终至卧床、插鼻胃管，生活无法自理。

小脑萎缩症是一种常染色体显性遗传病，相关基因定位于人类第9号染色体。

若父母一方患有小脑萎缩症，其子女不分性别都将有50%的概率罹患此病，而且一代比一代发病早，病情重。

除遗传因素，发病还可能与病毒感染、中毒和长期脑供血不足诱导有关。

数据显示，全球大概400万小脑萎缩患者，而我国已超200万，约占全球患者的一半。

小脑萎缩症本身不致命，但致残率高。

若患者没有得到及时治疗，病情愈发严重，渐渐失去正常的思维能力，甚至危及患者生命。

因此，小脑萎缩症最关键的是要及早进行治疗。

随着医学技术的进步，罕见病、遗传病的诊疗水平在不断提升，但迄今为止，仍缺乏能够完全阻止脊髓小脑性共济失调症病情进展的有效治疗。

目前医学临床上主要以减轻症状、缓解病情进展，维持日常生活自理能力等对症治疗为主，疗效常常很不理想。

常规治疗方法如下：1、物理治疗：进行针灸、按摩等手段促进康复，另外针对合并症治疗，亦可广泛使用中药内服、外用，以及理疗；利用水疗、光疗、生物反馈等有针对性促进康复，但是并不能从根本上治愈小脑萎缩患者。

2、手术治疗：手术治疗是一种冒险选择，对患者而言，它可以从根处入手，但是手术风险大，而且治疗效果有待观察，不是最佳的选择。

3、药物治疗：在较轻病情下，可以在医生的叮嘱下服用相关药物，可以对患者的病情进行有效的缓解，但是“是药三分毒”，长期使用药物治疗会对患者的身体产生不良的影响，而且并不能从根本上解决小脑萎缩的问题，所以也不是治疗小脑萎缩的长久之计。

遗传性脊髓小脑型共济失调7型遗传学诊断及临床特征李清华;唐北沙;江泓;沈璐【期刊名称】《临床神经病学杂志》【年(卷),期】2005(18)3【摘要】目的研究中国人遗传性脊髓小脑型共济失调(SCA) 7型 (SCA7)的基因突变和临床特征.方法应用聚合酶链反应 (PCR)、聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)等技术对临床表现为SCA的92个家系112例患者和16例散发SCA患者的SCA7基因内CAG三核苷酸重复序列进行检测,对异常等位基因片段进行DNA 测序,分析基因型和表型之间的关系,并与表型正常的家系成员和健康人对照.结果在1个SCA7家系的6位成员中检测出2例患者的SCA7等位基因内CAG重复数目为71;临床表现主要为共济失调、视力下降、黄蓝色盲及视网膜色素变性.该家系内表型正常的4位成员SCA7等位基因CAG重复数目为7～9,另126例临床表现为SCA的患者、71名表型正常的家系成员及60名健康对照者SCA7等位基因内CAG三核苷酸重复数为 6～21.结论 CAG过度扩增为SCA7的致病原因,分子遗传学分析有助于SCA7的诊断;视网膜色素变性为SCA7的重要特征.【总页数】3页(P164-166)【作者】李清华;唐北沙;江泓;沈璐【作者单位】410008,长沙,中南大学湘雅医院神经内科;410008,长沙,中南大学湘雅医院神经内科;410008,长沙,中南大学湘雅医院神经内科;410008,长沙,中南大学湘雅医院神经内科【正文语种】中文【中图分类】R744.7【相关文献】1.遗传性脊髓小脑共济失调3型2家系临床特征分析 [J], 范红珍;姚文涛;王建华;王贺波2.遗传性脊髓小脑型共济失调7型临床特征及基因突变分析 [J], 王俊岭;严新翔;潘乾;夏昆;唐北沙;宋兴旺;张申;廖书胜;徐倩;彭兰;李晓辉;江泓;沈璐3.河南地区遗传性脊髓小脑共济失调3型患者临床特征及分子生物学的研究 [J], 李学;王泽帅;马建军4.遗传性脊髓型Friedreich和脊髓小脑型共济失调的临床及系谱分析 [J], 王进;袁志刚5.遗传性脊髓小脑性共济失调7型的基因突变及临床特征分析 [J], 黄智恒;徐评议;梁秀龄因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

脊髓小脑性共济失调一家系的基因诊断和产前诊断曹东华;任梅宏;刘晓莉;金春莲;孟昭义;邱广斌【期刊名称】《中华医学遗传学杂志》【年(卷),期】2010(027)003【摘要】Objective To identify the type of a pedigree with spinocerebellar ataxia, and carry out asymptomatic carrier detection and prenatal diagnosis. Methods The blood samples of two patients in the spinocerebellar ataxia pedigree were collected. Based on the clinical characteristics of the pedigree and the disease incidence in China, the regions containing the CAG repeat of the SCA1, SCA2 and SCA3/MJD genes were amplified by polymerase chain reaction (PCR). The numbers of CAG repeats in the normal and abnormal allele fragments were identified by using agarose gel electrophoresis and DNA sequencing. We further carried out tests on the children of the patients and fetus to identify the presence of the abnormal allele. Results The numbers of CAG repeat in the SCA1 and SCA2 genes were in the normal range. The CAG repeat number in one allele of SCA3/MJD gene was in the normal range, while that in the other allele was in the abnormal range. One of the children of the patients and the fetus carried the abnormal allele. Conclusion It was confirmed that the pedigree was SCA3/MJD by gene diagnosis. One of the children of the patients was asymptomatic carrier and the fetus also carried the abnormal allele.%目的确定一脊髓小脑性共济失调(spinocerehellar ataxia,SCA)家系具体分型,并开展症状前患者检测和产前诊断.方法收集该脊髓小脑性共济失调家系中的2例患者的血液标本,结合该家系的临床表现和我国该类疾病的发病率,采用聚合酶链反应对SCA1、SCA2和SCA3/MJD 3个基因的三核苷酸重复片段进行扩增,并通过琼脂糖凝胶电泳和PCR产物测序的方法确定所有正常和异常扩增等位基因内三核苷酸重复次数.明确致病基因后,对患者子女进行症状前检测,并对1例怀孕症状前患者进行了产前诊断.结果 SCA1和SCA2基因内三核苷酸重复次数在正常范围内,SCA3/MJD的2个等位基因中1个等位基因三核苷酸重复次数在正常范围内,另1个等位基因三核苷酸重复次数在异常范围内.患者子女有1人携带异常等位基因,胎儿携带异常等位基因.结论该家系经基因诊断确诊为SCA3/MJD型,有1人为症状前患者,该症状前患者所孕胎儿也为症状前患者.【总页数】4页(P320-323)【作者】曹东华;任梅宏;刘晓莉;金春莲;孟昭义;邱广斌【作者单位】110003,沈阳,中国人民解放军第二0二医院检验科;中国医科大学基础医学院医学遗传学教研室;北京大学人民医院产前诊断中心;中国医科大学基础医学院医学遗传学教研室;中国医科大学基础医学院医学遗传学教研室;110003,沈阳,中国人民解放军第二0二医院神经内科;110003,沈阳,中国人民解放军第二0二医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R71【相关文献】1.辽宁地区一脊髓小脑性共济失调大家系症状前患者的基因诊断研究2.一例婴儿型Sandhoff病家系的基因诊断与产前诊断3.Duchenne肌营养不良一家系基因诊断与产前诊断4.脊髓小脑性共济失调一家系的基因诊断5.四个血友病A家系携带者基因诊断与产前诊断因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。