高效价自身冷抗体致血型正反定型不符例

血型正反定型不符及其原因除对新生儿只检测其红细胞抗原，即只进行正定型外，临床常规检测A BO血型，必须正反定型，正定型是检测红细胞抗原，反定型是检测血清中抗体，判定ABO血型，结果相符。

病人或者献血者（待输血液）ABO正反定型结果不相符合，要详细记录实验，不能确定ABO血型，记录该标本血型结果有疑问。

如果是待输血的标本，该袋血就不能发出使用，应换一袋正反定型相符的血液，或者在时间允许情况下，重新进行试验，如确定是否试验操作错误等原因，即已经明确该袋血ABO正反定型相符，可以重新考虑使用该袋血。

除此之外，不管是什么原因，只要是ABO正反定型不符的血，都不能用于临床输血。

如受血者（病人）标本ABO正反定型不符，必须首先为该受血者准备RhD同型的O型血，以应病人治疗急需。

然后进行研究，查找该受血者ABO正反定型不符的原因。

ABO血型正反定型结果不相符合的原因可能是因为实验操作者本身技术上的错误所造成，也可能是由受检的血液标本问题所致。

（1）实验者操作或技术错误1）假阴性结果：①试管中没有加入抗体试剂或血清，只加入了红细胞。

②没能识别溶血也是阳性反应。

③血清或试剂与红细胞比例不当。

④离心速度、时间不够。

⑤使用了失效的或错误的抗体或/和红细胞试剂。

⑥试验结果记录和解释错误。

2）假阳性结果：①离心速度过大和离心时间过长。

②使用了受到细菌污染的抗体试剂、红细胞试剂或生理盐水。

③使用不干净的玻璃试管等试验器皿。

④试验结果记录和解释错误。

（2）血液标本的问题1）纤维蛋白聚集的红细胞小凝块被误认为是血液凝集，或血浆标本或未完全消除纤维蛋白影响的的血清标本，易出现小凝块，可能被误判为红细胞凝集。

2）出现混合视野凝集现象，病人血液中不只是一个ABO血型的红细胞，如将O型红细胞，或O型造血细胞输给A型人。

病人接受了ABO血型不相容的骨髓细胞移植，并产生了耐受。

比如，A型病人接受了O型人的骨髓后，血循环中有O型红细胞，但血清中只存在抗-B。

ABO血型鉴定错误原因分析与质量控制方法目的总结探讨血型鉴定的影响因素。

方法对226例健康体检人群玻片法和试管法同时进行ABO血型鉴定。

结果两种方法检测结果不是完全相符，除AB 型两种方法检测结果基本一致外，其他血型（A型、B型、O型）的人數存在一定差异。

结论在血型鉴定中，如果出现正反定型结果不相符时，应找到对血型鉴定造成影响的因素，针对因素，采取措施。

标签：血型鉴定；影响因素；质量控制红细胞的两大血型抗原抗体系统是ABO血型系统和RH血型系统，这两大系统在临床输血和遗传学研究上的意义非常重要[1]。

血型鉴定正确与否是保证安全输血的前提。

生理盐水凝集法是临床最常用ABO血型鉴定方法，有玻片法和试管法两种方法。

本文主要对ABO血型鉴定中最常见出现错误原因进行分析及质量控制方法。

1 资料与方法1.1一般资料选择2014年1月～6月我院226例健康体检人群为研究对象，年龄20～28岁，平均年龄（24.3±3.7）岁。

所有研究对象均无严重的传染性疾病和血液疾病。

1.2标本采集抽取EDTA抗凝血后在2h内完成血型鉴定操作。

1.3血型试剂采用上海血液生物医药有限责任公司生产提供的ABO血型反定型用红细胞试剂盒；抗A、抗B血型鉴定单克隆抗体购置于长春博徳生物技术有限公司[2]。

1.4鉴定方法严格按照相关步骤方法进行操作。

1.5统计学方法采用SPSS11.5统计软件包进行相关数据处理，以均数±标准差（x±s）表示计量资料。

采用频数和率表示计数资料，采用χ2检验。

2 结果见表1。

由表1可以看出，两种方法对226名健康体检患者的血型检测结果基本上是一致的。

其中O型人数占比率最多，B型、A型人数次之，AB血型人数占比率最少。

除AB型血型两种方法的检测结果一致外，其他血型（A型血型，B型血型，AB型血型）的人数存在一定的差异。

3 讨论3.1红细胞方面的原因①血型检测时，因患者红细胞悬液过浓或过淡，使反应不明显，误判为阴性反应。

314　喉部重要结构的最佳显示层面 通过对喉中间腔区域连续层面的观察,尽管声韧带在横断面上可识别的程度不如冠状层面[3],但声门裂却很容易观察到,所以可以声门裂为观察其它结构的基准层面。

在前庭襞上层粘膜层,距声门裂以上约10.0mm,可清楚显示杓状软骨尖与小角软骨的结合处、杓间襞及甲状软骨的上结节、喉结等结构;前庭韧带、喉小囊、喉旁间隙等结构选择前庭裂层面;除喉室外,甲杓肌的止点、杓横肌等结构也可喉室层面清晰显示;除声韧带外,甲杓肌、声带肌及其间的分界区在声门裂层面清晰可见,是观察声带肌的理想层面,甲杓肌和声带肌形成两块独立的肌肉,但在MRI上却不容易区分[3];在距声门裂下方110～4.0mm的层面是显示环杓关节的最佳层面,其间关节的组成清晰可辨。

参考文献:[1]杨　琳,高英茂.格氏解剖学[M]1第38版1沈阳:辽宁教育出版社,1996.1637-16521[2]Cham psaur P,Parlier2Cuau C,Brunet C,et al.Serial anatomy of the lar2ynx in MRI:MRI2histologic correlations[J].Sur Radiol Anat,2000,22(4):5-11[3]段菊如,熊俊平1喉的断层解剖及在CT、MRI的应用研究[J]1实用临床医学,2001,2(2):114-1171[4]包　兵,钱　雯,宋济昌1声门型喉癌的CT分析[J]1中国医学计算机成像杂志,2000,6(6):378-3801[5]王建卫,吴　宁,罗德红1螺旋CT及其图像处理技术对喉部肿瘤侵犯德诊断价值[J]1中华放射学杂志,2001,35(12):949-9521 [6]陈　宪,吴月兵,夏康适,等1头颈部间隙的CT解剖研究[J]1中国临床放射学杂志,1995,14(增刊):27-301[7]洪邦泰1楔状中喉切除术[J]1华西医学,1994,8(2):196-1971[8]顾晓宇1声门癌部分喉切除后不同重建方法[J]1南通医学院学报,2001,21(3):3061[9]张绍祥,刘正津,谭立文,等1首例中国数字化可视人体完成[J]1第三军医大学学报,2002,24(10):1231-12321[10]漆光平,姜　平,徐焕俐.人体断层标本制作法[J].湖南医科大学学报,1999,24(2):封三.[11]李国照,郭仰明1喉癌的磁共振成像表现[J]1中华耳鼻咽喉科杂志,1996,31(1):47-491[12]G amsu G,W ebb W R,Shanit J B,et al.CT in carcinoma of the larynxand pyriform sinus[J].A JR,1981,25(4):263-2641[13]李惠民,赵金城,王　鑫1环杓关节运动形态不对称现象的探讨[J]1天津医科大学学报,1998,4(2):150-1511(编辑　汪勤俭)文章编号:100025404(2003)0720591201个案与短篇高效价自身冷抗体致血型正反定型不符1例A case report of discrepancy betw een for w ard typing and reverse typing due to high titer cold auto2antibody马海峰　(河南省三门峡市中心血站,三门峡472000) 高效价的冷反应抗体能遮盖与其同时存在的同种异型抗体,给临床血型鉴定和交叉配血带来困难,作者在实际工作中遇到1例,现报告如下。

ABO正反定型不符原因分析摘要：目的探讨引起患者ABO血型正反定型不符的原因及其处理方法，确保输血安全。

方法应用血型血清学检测方法对ABO血型正反定型不符的血标本进行正反定型、不规则抗体筛查、吸收放散试验、唾液血型物质测定等系列检测，分析引起血型正反定型不符的原因，为患者选择同型的血液进行输注。

结果在输血前的血型血清学检测中发现ABO血型正反定型不符的血标本236例，其中自身冷抗体82例，血浆蛋白异常60例，血型亚型47例，血型抗原或抗体减弱36例，因输血或妊娠发生同种抗体5例，人为操作因素6例。

结论 ABO血型正反定型不符的原因大多数是由自身冷抗体，血浆蛋白异常，血型亚型，血型抗原抗体减弱等引起的。

因此对ABO血型正反定型不符的血标本，应采用多种血型血清学检测方法进行互相验证，以保证血型鉴定无误，确保临床输血安全。

关键词：ABO血型；正反定型；血清学1前言ABO血型系统是人类最早认识也是输血中最为重要的血型系统，ABO血型根据红细胞表面是否具有A或B抗原，将人类血型分为A、B、AB及O型四种，此外还有少数的血型亚型，如A1、A2、A1B、A2B及B亚型等。

ABO血型抗原不仅只存在于红细胞表面，而且还广泛存在于消化道，皮肤上皮细胞，呼吸道，泌尿系统以及人的体液中包括唾液、眼泪、尿液、消化液、胆汁、乳液、羊水、体腔液及卵巢肿液中[1]。

ABO血型系统与人类输血时发生的溶血反应密切相关，具有重要的临床意义。

正确鉴定红细胞血型是确保临床输血安全的首要条件，但在临床实际工作中，常出现ABO血型正反定型不符的现象。

2材料与方法2.1材料2.1.1 标本来源 2012年1月至2017年1月期间在我院住院及门诊的患者。

进行血清学检测中，出现正反定型不符患者236例，男100例，女136例，年龄2d-85y。

2.1.2试剂仪器单克隆抗体由长春博德生物技术有限责任公司提供；ABO标准红细胞、RhD及不规则抗体筛选红细胞I、Ⅱ、Ⅲ型均由上海血液生物医药有限公司提供，戴安娜血型卡及抗人球蛋白卡由Diagnostic Grifols，S．A生产。

正反定型不符及疑难血型鉴定处理分析准确的血型鉴定是临床安全、有效输血的重要基础保证，是使交叉配血实验顺利进行的前提，随着《临床输血技术规范》的实施，标准血型鉴定操作越来越为大家重视，不再以简单的红细胞肉眼玻片法抗原鉴定来确定被检者血型，而是以正定型和反定型双相结果来综合判断。

使输血安全向前迈进了一步。

但也会经常遇到一些正反定型不符的病例，经过一些特殊实验，如抗人球蛋白实验、吸收放散实验血型物质的测定，基因分型等方法，最终确定了血型，现将各种疑难病例分为7类，总结报告如下：1对象与方法1.1检测对象自2001年5月～2008年5月来我站自愿无偿献血者8000名中，共检出血型正反不符者82例。

1.2试剂、仪器仪器：日本以保田普通离心机，达亚美卡式离心机、温浴箱；试剂：抗人球蛋白试剂（上海市血液中心），标准谱细胞（上海市血液中心），凝聚胺法试剂（珠海贝索），Coombs卡（达亚美）。

标准血清抗A抗B抗A1血清、A1、A2红细胞（长春博德生物制品公司），抗D（上海血液生物医药有限公司）1.3实验方法正反定型及抗体筛查鉴定方法均按照《临床输血与输血技术学实验指导》；抗人球蛋白实验方法按照《临床输血与输血技术学实验指导》；血清浓缩法：即在观察完原来实验结果的基础上再次离心，弃掉上清液，再次加入血清（试剂或标本）离心后再观察结果，还可以反复进行以上操作；吸收放散实验：按照《临床输血与输血技术学实验指导》；亚型血型鉴定实验：方法同血型鉴定，试剂为抗A1血清、A1、A2红细胞；唾液血型物质测定：包括被检者唾液的留取，抗血清标化和血型物质测定均按照《临床输血与输血技术学实验指导》。

2结果将正反定型不符结果分类如表3讨论血型不符的输血一旦发生，会导致严重的并发症[1]，Linden等[2]报道在美国每年因溶血反应死亡的病例中，约10例是输血失误引起的。

SaZamn[3]报道，在输血相关死亡病例报告中，51%是由于输入了ABO不相溶的血液制品导致急性溶血反应致死的。

ABO血型鉴定正反定型不一致的原因及应对措施【摘要】总结探讨血型鉴定的影响因素，提出正反定型不一致的若干原因，有技术性问题或红细胞和血清本身的问题，出现正反定型不符时，应如何去应对。

【关键词】血型；正反定型；红细胞【中图分类号】R331.1+41【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）-05-391-01血型由血型基因决定，是血细胞的主要特征之一，在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。

输血安全是临床输血的首要问题，正确的血型鉴定（blood typing）是保证输血安全的前提条件。

血液系统遗传多太性，但是一般来说，血型指红细胞ABO及Bh血型。

A型、B型标准血清与不同血型血液配型，会发生有无红细胞凝集现象，可以根据现象不同区分出不同血液血型。

如正反定型不符合，有技术性问题或红细胞和血清本身的问题，出现正反定型不符时，如何去应对，就这一系列问题浅谈如下：一、医务人员责任心问题。

临床医生在填写输血申请时，没有做血型检测，单凭印象或听信患者的自诉血型而造成血型错误；临床护士在抽取血标本时，未校对患者的姓名、床号，仅凭印象，抽了其他人的血液而造成血型报告错误或交叉配血不合；检验科人员没有对报告核对正确，标本、试剂、试管或玻片弄错，造成血型鉴定错误。

二、分型血清效价太低、亲和力不强。

如抗—A血清效价不高，可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。

红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。

三、受检者红细胞上抗原位点过少，红细胞悬液太浓或太淡。

肠梗阻、结肠、直肠癌或其他下消化道疾病时肠壁通盘性啬，细菌多糖入血，使A节型患者出现获性B现象。

胃或胰腺恶性肿瘤患者血清中可能含有过多的可溶性血型物质，这些物质中和抗血清从而影响正定型结果。

受检者血清中蛋白紊乱（高球蛋白血症），或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。

受检者血清中缺乏应有的抗-A及或抗—B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。

1例IgM型高效价自身冷抗体导致ABO血型正反定型不符的解决办法发表时间：2019-05-17T15:16:14.363Z 来源：《航空军医》2019年3期作者：伊雅霞胡巍巍高欣梅许露丹李吉瑞[导读] 通过对比实验两种方法处理后的血液可有效的排除冷凝集素的干扰，准确的鉴定血型和不规则抗体筛查等试验，保证临床用血安全及时有效。

（黑龙江省鸡西市中心血站158100）摘要：目的探讨1例IgM型高效价自身冷抗体导致ABO血型正反定型不符的解决办法。

方法进行血型正反定型测定以及吸收试验。

结果通过分析吸收后抗体来判定吸收液中含有的抗原与抗体，正反定型相符，从而判断出正确的血型。

结论通过对比实验两种方法处理后的血液可有效的排除冷凝集素的干扰，准确的鉴定血型和不规则抗体筛查等试验，保证临床用血安全及时有效。

关键词：IgM；冷抗体；2-巯基乙醇（2Me）；吸收试验；血型鉴定IgM型高效价自身冷抗体常常导致ABO血型正反定型不符，本室通过用吸收试验和用2-巯基乙醇（2-Me）处理后的血液可准确的鉴定ABO血型。

1.材料与方法1.1 试验对象：本站无偿献血者徐XX，男性，年龄42周岁。

检验科纸板法正反定型不符送血型室进行血型鉴定。

纸板法反应格局见表1表1：纸板法ABO血型反应格局1.2 试剂：ABO血型鉴定用正反定型试剂、2Me及抗体筛查试剂均来源于上海血液生物医药有限责任公司，实验试剂2-8℃保存，所用试剂均在有效期内。

1.3仪器：KA-2200免疫学血液学离心机。

1.4操作方法：血型正反定型测定以及吸收试验均按文献[1]方法操作。

1.4.1试管法：将献血者血液标本离心分离血浆与压积红细胞，将红细胞用温盐水洗涤3次后配制成3%-5%的红细胞悬液备用。

取洁净试管9支正定期型分别标记抗-A、抗-B，滴加抗-A、抗-B试剂各2滴（100表2：试管法ABO血型反应格局1.4.4样本释放液二巯基乙醇（2-Me）试剂的应用：用0.9%生理盐水将待检红细胞制备成浓度为50%的红细胞悬液。

ABO血型鉴定正反向定型不符的原因与分析【摘要】目的分析ABO血型正反向定型不符的原因及防治措施。

方法应用正反向定型、唾液血型物质测定试验及吸收放散试验，检测16例ABO血型正反定型不符标本。

分析其原因，并正确分型。

结果本组16例出现正反向定型不符。

其中冷抗体6例，血浆异常3例，ABO亚型3例，抗原或抗体减弱2例，人为操作因素和试剂因素2例。

结论对ABO血型正反向定型不符，无法定型的血液样本，可针对原因，采取多种方法，正确鉴定ABO血型。

【关键词】ABO血型鉴定；正反定型不符；原因；解决方法正确的血型鉴定，是保证临床输血安全和抢救生命的重要工作。

输血前必须检查血型，选择血型相同的供血者，进行交叉配血，结果完全相合才能输血［1］。

但在临床血型鉴定时，也会遇到正反向定型不符等情况，给临床输血带来隐患，2008年8月至2010年10月，我院共接受各科申请血型鉴定2380例，其中ABO 血型正反定型不符16例，现分析如下。

1 资料与方法1.1 一般资料血型鉴定对象：2380例血型鉴定者，均为我院2008年8月至2010年10月间住院患者；其中男1630例，女750例；年龄1.6~86岁，平均58.6岁；正反向定型不符16例。

1.2 方法1.2.1 试剂来源正定型单克隆抗A、抗B、抗AB试剂由长春生物制品有限公司提供。

反定型标准红细胞A、B、O有上海血液研究所提供。

1.2.2 鉴定方法①血型正反定型：玻片法和试管法；②唾液血型物质的检测：检测分泌型者唾液中的血型物质，并结合临床病史、用药史、输血史等为血型鉴定提供依据；③ABO亚型鉴定及抗人球蛋白试验、抗体鉴定试验等均按照文献操作［2］。

2 结果本组血型鉴定者2380例，其中16例出现正反向定型不符。

经过对16例血液样本各种方法的综合检查，其中冷抗体6例，血浆异常3例，ABO亚型3例，抗原或抗体减弱2例，人为操作因素和试剂因素2例。

3 讨论3.1 血型鉴定的意义随着现代工业、交通的发达，很多肿瘤、创伤的发病率呈上升趋势；而外科手术，器官移植，创伤急救等均需要进行治疗性输血。

【实战经验】血型正反定型不符系列分享分享一：原标题血型正反定型不符原因及对策正确鉴定ABO血型是输血前最重要的一项检测，血型鉴定错误会导致严重的溶血性输血反应甚至是死亡。

目前血型鉴定最常用的方法是卡式微柱凝胶法，此法具有诸多优点，但由于血型抗原抗体反应的复杂性及各种因素的影响，往往会出现正反定型不符，不能鉴定血型的情况。

常见的原因有如下几点：1.血浆中抗体减弱或缺失：白血病、肿瘤、免疫球蛋白水平降低等患者抗体减弱，老年人抗体水平生理性下降，婴幼儿尚未产生抗体或抗体效价低，均影响反定型的鉴定。

可通过加大患者血浆用量(2倍或4倍)的方法进行鉴定。

2.红细胞抗原减弱：最常见的是白血病、恶性肿瘤等[1]，抗原减弱或消失，干扰正定型，凝集减弱或消失，可加大患者红细胞浓度[2]或进行吸收放散实验以确定抗原。

3.不规则抗体：这一类抗体存在于患者血清中，可在反定型中与标准红细胞上的相应抗原发生凝集（而与A或B抗原无关），导致正反不一致。

抗体筛选试验阳性，应用谱细胞可鉴定出不规则抗体种类。

4.自身免疫性溶血性贫血：患者红细胞表面存在致敏自身抗体，DAT（直接抗人球蛋白试验）阳性，有时正定型会发生非特异性凝集。

同时血清中存在的自身抗体也能干扰反定型。

可用37℃生理盐水洗涤患者红细胞，一般可排除干扰。

5.冷凝集素：高效价冷凝集素在体外4℃或室温条件下可与自身红细胞发生非特异性凝集反应，可出现正反定型全凝集的现象。

用37℃生理盐水洗涤红细胞，去除红细胞表面附着的冷凝集素，可获得可靠地正定型结果。

37℃温浴患者标本，可消除血浆中游离的冷凝集素对反定型的影响[3]。

6.亚型：由遗传因素导致，即红细胞A或B抗原弱化，正定型抗A或抗B有时不能检测出抗原而不出现凝集，造成定型困难。

进一步鉴定需正定型增加抗-H、抗-A1、抗-AB，反定型增加O细胞、A1细胞、A2细胞，还应进行吸收放散试验、唾液中血型物质检测等[4]。

7.血浆成分异常：多发性骨髓瘤患者易使红细胞发生缗钱状凝集，在血清中加入1~3滴生理盐水凝集可消失（真凝集不受影响）。

自身冷抗体导致血型签定错误及配血不合1例标签：冷抗体；血型；配血正常人的血清中均含有少量的冷抗体，但效价很低，不影响血型定性和交叉配型，但高效价冷抗体会影响血型定性和交叉配型困难。

现将笔者工作中发现的一例含高效价冷抗体的血型血清学试验报告如下。

1资料与方法1.1一般资料患者,男,52岁,因股骨骨拆需术中输血。

1.2试剂抗A、抗B及筛选红细胞由上海血液生物医药有限责任公司提供。

凝聚胺由贝索生物技术有限公司提供。

血型不完全抗体检测卡由长春博迅生物技术有限责任公司提供。

Ac、Bc、Oc由科室自制。

1.3方法1.3.1在室温下对患者血标本做正反血型定性，用凝聚胺法交叉配血血型定性为“AB”型，反定性Ac、Bc、Oc、自身c均凝集，正反定性相互不支持。

与AB型交叉配血主侧凝集，结果见表1。

将患者红细胞用37 ℃温盐水洗涤5次后，在进行56 ℃热放散试验，取此红细胞和自身血清混合，放 4 ℃冰箱，用自身红细胞来吸收血清中的自身冷抗体，2 h后用无冷抗体吸附的红细胞及无自身冷抗体存在的血清进行血型签定及交叉配血，结果见表2。

1.3.2按照长春博迅生物技术有限责任公司提供的血型不完全抗体检测卡（微柱法）操作规程检测患者血清不完全抗体。

不完全抗体检测，以排除患者血清中可能含有的其他不完全抗体。

2结果未经冷抗体处理前患者ABO血型签定正反定型结果互不相符，交叉配血不合。

经吸放试验后，患者血型签定正反定型结果均为B型，与B型血交叉配合主次侧均不凝集。

患者不完全抗体检测阴性。

3讨论本例患者血型签定正反定性结果不相符，交叉配血主侧出现凝集，微柱法检测不完全抗体阴性，一定程度上排除由其他不完全抗体导致的血型签定结果不相符，首先考滤由冷抗体引起。

将患者的红细胞用37 ℃温盐水洗涤5次后，在进行热放散试验。

用此红细胞和患者的血清混合后放 4 ℃冰箱做吸收试验，由于冷抗体（抗-I）能在低温下和自身红细胞上的I抗原结合，血清中的冷抗体能全部致敏到红细胞上，血清中没有了冷抗体，用没有了冷抗体的血清做反定型血型签定，结果为B型［1］。

血型鉴定中出现ABO血型正反定型不符的原因及措施钟胜英【摘要】目的对血型鉴定中出现ABO血型正反定型不符的原因和处理措施进行探讨.方法抽取2014年1月~2016年12月间,拟输血患者中ABO血型正反定型不符者18例作为研究对象,对其进一步展开吸收放散试验、抗体筛查、唾液血型物质测定、亚型检测,经ABO疑难血型3步分析法对不符的原因进行分析及鉴定.结果本次18例ABO血型正反定型不符者中,有2例为人为因素造成,另外16例的原因包括有生理因素、自身抗体因素、血浆蛋白异常、不规则抗体以及血液疾病等因素,其中不规则抗体因素所占比例最高(P<0.05).结论造成ABO血型正反定型不符的原因较多,在临床血型鉴定中应引起重视,积极采取有针对性的确诊试验,展开鉴定分析,ABO血型鉴定时选择正确辅助手段,进而提高血型鉴定准确性,以保证输血的安全性、有效性.【期刊名称】《中国医药科学》【年(卷),期】2017(007)009【总页数】4页(P133-136)【关键词】血型鉴定;ABO血型正反定型不符;输血安全;疑难血型;影响因素【作者】钟胜英【作者单位】广东省兴宁市人民医院,广东兴宁 514500【正文语种】中文【中图分类】R446.6在实际临床工作中，ABO血型属于输血、器官移植过程中所应用到的一种非常重要的血型系统，确定受血者与供血者之间的ABO血型正确，是有效保证临床输血安全的一个非常重要的前提，也是基本原则。

如果受血者或供血者二者中一方的ABO血型发生误定，失误的输注了异型血，发生严重溶血性输血反应的可能性就会达到增加，对该患者的生命安全构成了严重的威胁[1]。

在发现ABO的正反定型存在不符情况的时候，如何能够迅速准确的找到原因，并及时正确的对血型进行鉴定的临床意义重大，应引起人们的重视[2-3]。

本次研究对血型鉴定中出现ABO血型正反定型不符的原因和处理措施进行探讨，现将过程及结果报道如下。

1.1 一般资料研究中资料来源于2014年1月～2016年12月间拟输血患者中ABO血型正反定型不符者，共计选择18例作为研究对象，年龄在3个月～80岁之间，平均（45.6±12.3）岁。

1例冷凝集造成ABO血型鉴定及配血困难的处理作者：陈德智,申卫和,沈道全来源：《中国医药导报》2012年第01期[关键词] 冷凝集；ABO血型；配血困难[中图分类号] R457.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-7210（2012）01（a）-118-02由于高效价的冷反应自身抗体可以干扰ABO血型鉴定与交叉匹配试验。

本文发现1例冷凝集致ABO血型中B型错定为AB型，导致交叉配血试验，主、次管均凝集，延迟输血。

笔者应用自身抗体吸收试验去除自身抗体，提供适合的血清用于ABO血型反定型、血液交叉匹配试验与同种抗体检测。

现结合实例报道如下：1 临床资料1.1 一般资料患者，男，46岁，因“畏寒、发热、黄疸4个月，加重1 d”入院。

入院查体：T 37.3℃，P 130次/min，R 36次/min，BP 156/98 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa），意识模糊，皮肤、巩膜深度黄染，重度贫血貌，无肝掌、蜘蛛痣，未见皮疹及出血点，无瘀斑，呼吸急促，双肺呼吸音粗，两肺底可闻及少许湿性啰音，腹平软，无压痛、反跳痛，肝肋下2 cm，质软，脾触诊不满意，墨菲征阳性，移动性浊音（-），双下肢无水肿。

入院诊断：1.黄疸待查（胆囊炎、溶血性黄疸）；2.肝性脑病（病危）。

住院时查血常规：RBC 1.92×1012/L，WBC 32.86×109/L，HGB 24 g/L，HCT 9.64%，PLT 25.20×109/L。

肝功能：TBIL 550.1 μmol/L，DBIL 500.9μmol/L，IBIL 49.2 μmol/L，ALT 108.3 IU/L，AST 175.1 IU/L，GGT 118 U/L，ALP 134 U/L，LDH 1 180 U/L，TP 58.6 g/L，ALB 35.9 g/L。

血生化：K+ 6.67 mmol/L，Na+ 138.65 mmol/L，Cl-102.08 mmol/L，Ca2+ 2.09 mmol/L，UREA 35.41 mmol/L，CREA 179.3 mmol/L。

㊃临床研究㊃D O I:10.3969/j.i s s n.1672-9455.2024.05.025A B O正反定型不符的白血病患者血型鉴定与临床分析*李茜,张智慧,高力立,彭沫溱,陈璐,赵梓昕,寸伟,罗臻ә,苏品璨云南昆明血液中心输血研究室,云南昆明650106摘要:目的对1例白血病患者A B O血型鉴定异常结果进行鉴定与回顾性分析,旨在为同类患者血型相容性检测提供参考㊂方法采用血清学检测进行A B O血型鉴定,采用聚合酶链反应-序列特异性引物进行A B O血型基因分型;采用亚硫酸氢盐测序检测A B O启动子甲基化状态㊂结果患者A B O血型正定型结果为O型,反定型结果为A型,正反定型结果不一致;试管法重复试验,4ħ时可见A1c凝集;吸收放散试验结果显示红细胞表面存在A抗原,提示正定型结果为A型;不规则抗体筛查阴性,直接抗人球蛋白试验阴性;基因分型检测基因型为A O1,表型为A型;甲基化检测发现患者A B O基因启动子区甲基化率为66.7%,明显高于随机选取的5例正常对照组标本平均甲基化率㊂结论白血病患者A B O抗原减弱可能导致血型误判,疾病状态下患者A B O基因启动子甲基化程度增高可能与其A B O抗原减弱密切相关,须结合分子生物学基因分型和血型基因甲基化检测方法进一步判断患者血型鉴定异常的原因,保障临床用血安全㊂关键词:白血病; A B O血型鉴定;血清学检测;聚合酶链反应-序列特异性引物;甲基化中图法分类号:R733.7;R457.1+1文献标志码:A文章编号:1672-9455(2024)05-0695-05输血作为一种临床救治患者的常用治疗手段,既可提高患者携氧功能,又能改善其凝血功能障碍,因此,输血前的A B O血型鉴定对保障临床输血安全尤为重要㊂A B O血型是由A B O基因编码决定的,一般情况下人体A B O血型不会发生改变㊂白血病是起源于造血干细胞或祖细胞的恶性克隆性疾病[1-2],白血病患者处于疾病状态可能引起自身体内血细胞或血浆成分发生改变,导致A B O抗原减弱或A B O抗体效价降低,出现A B O血型鉴定正反定型不相符的情况,极易引起血型误判,直接关系临床输血安全[3-4]㊂多种因素均可导致患者A B O抗原减弱,近年来,有研究发现,A B O基因启动子区甲基化程度与A B O抗原表达异常有关[5-8],但相关文献报道较少见㊂本研究通过血清学㊁聚合酶链反应-序列特异性引物(P C R-S S P)检测和A B O基因启动子区甲基化状态检测等检测手段对1例白血病患者的A B O血型鉴定检测异常结果㊁原因及处理方法进行了分析,初步探讨了白血病中A B O基因甲基化状态异常导致A B O抗原表达减弱在输血相容性检测中的临床意义,以期为临床诊疗提供参考依据,现报道如下㊂1资料与方法1.1一般资料血液标本来源于云南省肿瘤医院,患者,女,24岁,患恶性血液病,有2次输血史,患者知情同意本研究并签署知情同意书㊂患者于2022年2月3日初次诊断为白血病,目前患者白细胞计数(W B C)为206ˑ109/L,血红蛋白(H b)为51g/L,血小板计数(P L T)为38ˑ109/L,同时伴有脾脏肿大㊂患者严重贫血,急需输血,因其A B O血型鉴定正/反定型不一致(正定型结果为O型,反定型结果为A 型),医院将患者血液标本送检至血液中心进行A B O 血型鉴定和疑难交叉配血实验㊂1.2仪器 A B O血型定型检测卡配套孵育器和离心机(长春博迅生物技术有限责任公司),K A2200型血型血清学专用离心机(日本久保田公司),电热恒温水浴箱(上海博迅实业有限公司),冰箱(海尔集团海尔电冰箱有限公司),M a g C o r e H F16自动核酸提取仪(中国台湾R B C B i o s c i e n c e公司),T100P C R反应扩增仪(美国B i o-R a d L a b o r a t o r i e s公司),P o w e r P a c T M基础电泳仪(美国B i o-R a d L a b o r a t o r i e s公司), C h e m i D o c X R S+凝胶成像系统(美国B i o-R a d L a b o-r a t o r i e s公司),3730测序列分析仪(美国A B I公司), S W-C J-1D洁净工作台(江苏苏洁净化设备厂),D K-8D型电热恒温水槽(上海森信实验仪器有限公司), D Y Y-8型稳压稳流电泳仪(上海琪特分析仪器有限公司),Y X J-2离心机(湘仪离心机仪器有限公司),H6-1微型电泳槽(上海精益有机玻璃制品仪器厂),U-3010紫外-可见分光光度计(H i t a c h i公司),移液器(范围100~1000μL,20~200μL,0.5~10μL,德国艾本德E P P E N D O R F公司)㊂1.3试剂抗-A㊁抗-B血型定型试剂-单克隆抗体(上海血液生物医药有限责任公司,批号20220101), A B O血型卡正/反定型和R h D血型检测卡-微柱凝胶法(D i a M e d G m b H/B i o-R a d低离子抗人球蛋白卡,批号50093.11.28),抗-A1凝集素(上海血液生物医药㊃596㊃检验医学与临床2024年3月第21卷第5期 L a b M e d C l i n,M a r c h2024,V o l.21,N o.5*基金项目:云南省临床医学中心分中心开放项目(2020L C Z X K F-X Y19)㊂ә通信作者,E-m a i l:k m b l o o d l z@g m a i l.c o m㊂有限责任公司,批号20221019),抗-H单克隆抗体(上海血液生物医药有限责任公司,批号20221110),抗-A B抗体(D I A G A S T,批号464000),抗人球蛋白[抗免疫球蛋白G(抗-I g G),抗-C3d]检测试剂盒(上海血液生物医药有限责任公司,批号20225001),抗-I g G 检测试剂盒(上海血液生物医药有限责任公司,批号20215102),抗C3d检测试剂盒(上海血液生物医药有限责任公司,批号20225201),人A B O血型反定型用红细胞试剂盒(上海血液生物医药有限责任公司,批号20235313),低离子抗人球蛋白卡-微柱凝胶法(D i-a M e d G m b H/B i o-R a d,批号50531.76.10),不规则抗体检测试剂(人血红细胞,长春博迅生物技术有限责任公司,批号20221208),红细胞血型抗体筛选细胞(微柱凝胶法)S e r a s c a n D i a n a3(D i a g n o s t i c G r i f o l s, S.A.西班牙基立福公司,批号23007.01);核酸提取试剂盒(中国台湾R B C B i o s c i e n c e公司,批号P4101-17230);人类红细胞A B O血型基因分型试剂盒P C R-S S P法(天津秀鹏生物技术开发有限公司,批号202004001),M e t h y l E d g e T M B i s u l f i t e C o n v e r s i o n S y s-t e m(P r o m e g a,批号0000470334),焦碳酸二乙酯处理水(碧云天B e y o t i m e,批号111122230306),T a K a R a E p i T a q T M H S(T a K a R a,批号AM20984A),加样缓冲液(T a k a r a,批号A L G988A),B i g D y e测序反应试剂盒(A B I公司,批号91235489),P O P7测序胶(A B I公司,批号2211711),10ˑ电泳缓冲液(A B I公司,批号2208378)㊂1.4检测方法1.4.1血型血清学检测采集患者肘部静脉血进行检测,A B O血型正/反定型鉴定㊁间接抗人球蛋白试验㊁不规则抗体筛查采用微柱凝胶卡法和试管法;直接抗人球蛋白试验(D A T)采用试管法;将抗-A㊁抗-B 分别与经盐水洗涤3次的受检者浓缩红细胞等量混合进行吸收放散试验㊂所有试验操作均按照标准操作规范[9-10]和试剂盒说明书进行㊂1.4.2 P C R-S S P检测取患者乙二胺四乙酸外周抗凝全血400μL,使用自动核酸提取仪提取基因组D N A,采用微量紫外分光光度计检测D N A浓度和纯度㊂按照人类红细胞A B O血型基因分型试剂盒说明书进行P C R-S S P法基因分型P C R扩增试验㊂配制2.0%的琼脂糖凝胶,将5μL扩增P C R产物进行电泳检测,于120V恒定电压条件下电泳40m i n后使用凝胶成像系统成像,记录试验结果并根据试剂盒说明书结果分型表判定基因型㊂1.4.3 A B O基因启动子区甲基化检测采用亚硫酸氢盐测序法(B S P)检测标本A B O基因启动子区C p G岛甲基化状态㊂根据M e t h y l E d g e T M B i s u l f i t eC o n v e r s i o n S y s t e m试剂盒说明书,对患者基因组D N A进行亚硫酸氢盐修饰,使检测标本基因组D N A 中未发生甲基化的胞嘧啶通过亚硫酸氢盐处理后转化为尿嘧啶,甲基化的C p G胞嘧啶则不变㊂在N C B I 数据库下载A B O基因序列,应用M e t h y l p r i m e r e x-p r e s s s o f t w a r e v1.0和M e t h P r i m e r软件选取A B O 基因启动子区富含C p G位点的区域,并设计扩增引物,检测片段分别为175㊁160b p,共包含13个C p G 位点,分别编号为1~13,扩增引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成,上游引物序列1:A T G T T-G T T T A G G T T G G A G T G T A G T G,下游引物序列1: A C C A A C A T A A T A A A T C C T C C A T C T C;上游引物序列2:T T T T A A G T A G T T G G G G T T A T A G A T,下游引物序列2:A C C T A C A A T C C T A A C A C T T T C A A㊂以亚硫酸氢盐修饰后的患者基因组D N A为模板,根据T a K a R aE p i T a q T M H S说明书要求扩增目标序列㊂P C R反应体系为50μL,包括亚硫酸氢盐修饰后D N A模板2μL,T A K A R A E p i T a q T M H S (5U/μL)0.25μL,10ˑE p i T a q P C R B u f f e r(M g2+ f r e e)5μL,25mM M g C l25μL,2.5mM d N T P M i x-t u r e6μL,上下游引物各2μL,其余用无菌水补足㊂P C R条件为94ħ,1m i n;98ħ,10s;57ħ,30s;72ħ,30s;40个循环;72ħ终延伸10m i n;终止在4ħ㊂将P C R产物进行D N A琼脂糖凝胶电泳后对目的条带进行切胶,使用S a n P r e p柱式D N A胶回收试剂盒进行纯化回收;使用H i e f f C l o n e T M Z e r o T O P O-T A C l o n i n g K i t试剂盒对目的片段进行目的片段T A 克隆;使用生工质粒提取试剂盒S K8191U N I Q-10柱式质粒小量抽提试剂盒提取质粒D N A;将质粒使用P s tⅠ单酶切,琼脂糖凝胶电泳检查片段大小,确定是否含有目的片段,鉴定阳性克隆子;将阳性克隆子送生工生物工程(上海)股份有限公司进行序列分析㊂1.5统计学处理采用C h r o m a s(V e r s i o n2.3)软件分析测序峰图,使用甲基化分析软件B I Q A n a l y z e r分析目标序列C p G位点甲基化情况,并将B S P测序结果以圆圈图输出㊂目标序列中有13个C p G岛位点,计算C p G岛甲基化位点数占总C p G岛位点的百分比,计算甲基化率㊂以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1 A B O血型鉴定患者A B O血型正定型结果为O型,反定型结果为A型,正反定型结果不一致,4ħ时试管法可见A1c凝集㊂见表1㊂不规则抗体筛查试验结果显示,患者血浆与3种抗体筛查细胞均无凝集㊂见表2㊂D A T结果显示,抗-I g G+C3d㊁抗-I g G㊁抗-C3d均为阴性㊂吸收放散试验结果显示,患者红细胞表面存在A抗原㊂见表3㊂2.2 P C R-S S P法检测 A B O基因分型检测出患者P C R-S S P基因分型格局1㊁2㊁4㊁6㊁8㊁9㊁11孔为阳性,3㊁5㊁7㊁10孔为阴性㊂对照人类红细胞A B O血型基因分型试剂盒(天津秀鹏生物技术开发有限公司)结果分型表判定患者基因型为A O1,表型为A型㊂见图1㊂㊃696㊃检验医学与临床2024年3月第21卷第5期 L a b M e d C l i n,M a r c h2024,V o l.21,N o.5表1 A B O 血型鉴定正反定型结果方法正定型抗-A 抗-B 抗-A B 抗-H 抗-A 1反定型A l cB cO c A 2c 自身c 微柱凝胶法(G e l )00///04+0/0试管法(R T -I S)0004+002+S000试管法(4ħ-I S)0004+02+3+000试管法(37ħ-I S)04+01+S注:0表示阴性;1+~4+表示阳性,强度以1~4数值表示;S表示凝集加强;/表示未检测㊂表2 不规则抗体筛查试验结果抗筛试剂红细胞R h -h rDCEceCWK e l lKkK p aJ saD u f f yF y aF y bK i d dJ k aJ k bⅠ++00+00+0n t 0++0Ⅱ+0++000+0n t ++++Ⅲ0++0++0n t++抗筛试剂红细胞L e w i sL e aL e bPP 1MN SMNSsL u t h .L u aC o l t .C o bX gX g a微柱凝胶法Ⅰ+0+0+0+00+0Ⅱ0+0+0+++0+0Ⅲ++++++注:0表示阴性;+表示阳性㊂表3 受检者吸收放散试验结果标本来源放散试验A 1cB c O c 患者2+00阴性对照注:0表示阴性;+表示阳性㊂2.3 A B O 基因启动子区甲基化检测 经B S P 检测A B O 基因启动子区部分序列的甲基化水平,待检测标本D N A 经亚硫酸氢盐试剂盒转化处理后甲基化的胞嘧啶不发生改变,经P C R 扩增和T A 克隆测序检测到该C G 位点仍为C G ;而未甲基化修饰的胞嘧啶则转化为尿嘧啶,经P C R 扩增和T A 克隆测序检测到该C G 位点转化为T G ㊂检测标本的甲基化率指检测区域中甲基化的C p G 数量与该区域C pG 总数量的比值㊂将A B O 基因启动子富含C p G 岛区域检测片段大小为175㊁160b p 序列进行TA 克隆测序㊂见图2~4㊂甲基化状态分析结果显示,患者标本AB O 基因启动子区甲基化率为66.7%,高于随机选取的5例正常对照组标本平均甲基化率(<25%),差异有统计学意义(P <0.05)㊂见图5㊂ 注:片段大小从下至上依次为100㊁250㊁500㊁750㊁1000b p 和2000b p;检测目的条带均同时检测内参质控带,内参为人类生长激素基因的保守片段,大小约为1000b p㊂图1 P C R -S S P基因分型注:箭头表示该C G 位点的C 为甲基化的碱基㊂图2 C pG 岛甲基化C G 位点㊃796㊃检验医学与临床2024年3月第21卷第5期 L a b M e d C l i n ,M a r c h 2024,V o l .21,N o .5注:箭头表示C G 位点的C 未被甲基化,C G 转化为T G ㊂图3 C pG 岛非甲基化C G位点 注:D Z 1㊁D Z 2㊁D Z 3㊁D Z 4㊁D Z 5为对照组标本,S C 为受检白血病患者标本;ʻ为非甲基化位点,Ә为甲基化位点;图中分别为患者标本和正常对照组标本A B O 基因启动子175b p 和160b p 区域甲基化状态分析情况㊂图4 患者A B O基因启动子区甲基化状态注:与正常对照组比较,aP <0.001㊂图5 患者标本与正常对照组标本甲基化情况比较3 讨 论白血病是一类造血干细胞异常的克隆性恶性疾病,由于发生病变的白细胞失去分化成熟的能力,停滞于其发育的不同阶段,进而引起患者骨髓和其他造血组织中病变细胞大量增殖积聚并浸润其他器官和组织,导致患者造血功能异常,出现病态造血而无法产生足量的正常血细胞,临床表现为贫血㊁出血㊁感染及各器官浸润症状,输血是白血病非常重要的辅助治疗手段之一[1-2]㊂在临床输血治疗过程中A B O 血型的正确鉴定尤为重要㊂人类A B O 血型抗原由A B O基因编码,A B O 基因位于人类第9号染色体的长臂,属于常染色体显性遗传,一般情况下不会发生变化[11]㊂有研究表明,急性髓系白血病患者处于其病情发作期可能出现红细胞血型抗原减弱㊁消失或变异,其原本的A B O 血型抗原无法正常检出,导致A B O 正/反定型不一致,极易引起血型误判,影响输血安全[12]㊂近年来,分子生物学基因分型技术㊁血型基因甲基化检测技术在A B O 疑难血型鉴定中的广泛应用,其将新技术与传统血型血清学鉴定技术相结合,可快速㊁准确地鉴定疑难A B O 血型,并且进一步合理解释疾病状态下抗原减弱的原因,为更加安全㊁合理地解决临床疑难血型鉴定问题提供了新思路㊂本例患者使用微柱凝胶法进行A B O 血型鉴定试验结果显示,正定型结果为O 型,反定型结果为A型,正反定型结果不一致㊂排除微柱凝胶卡㊁反定型试剂㊁离心设备运行及其他人为因素的干扰后采用试管法分别于室温㊁4ħ和37ħ条件下重复A B O 正反定型试验,结果显示,3个温度下正定型均为O 型,而反定型在4ħ时试管法可见A 1c 凝集,推测患者产生不规则抗-A 1抗体㊂微柱凝胶法进行不规则抗体筛查和试管法进行直接抗人球蛋白试验结果均为阴性,排除是自身抗体造成的A B O 正反定型不符[13]㊂结合患者处于白血病发作期,其A B O 血型鉴定正反定型不符可能是红细胞本身所致,经吸收放散试验后检出患者红细胞表面存在弱A 抗原㊂基于血液免疫学检测试验,由白血病疾病状态下导致受试者A 抗原减弱与A B O 亚型引起的红细胞抗原数量减少的试验检测结果较为相似,难以鉴别,需进一步结合其他检测技术加以鉴别㊂本研究使用分子生物学血型基因分型P C R -S S P 法进行检测,本例患者A B O 基因分型结果为A O 1,表型为A 型,即可排除A B O 亚型的可能,而其正定型结果为弱A 表型,有研究在髓系恶性肿瘤[4]㊁骨髓增生异常综合征[14-15]㊁急性髓系白血病[15-16]㊁慢性粒细胞白血病[17]㊁膀胱癌[18]和口腔癌[8,19]等患者中均检测到A B O 抗原减弱的现象,与本研究结果一致㊂目前,对于血型抗原减弱的确切原因尚未明确,且患者出现A B O 抗原减弱的现象不是持续的,在疾㊃896㊃检验医学与临床2024年3月第21卷第5期 L a b M e d C l i n ,M a r c h 2024,V o l .21,N o .5病缓解后还有可能恢复血型抗原表达[20]㊂推测为机体在白血病状态下的A B O基因表达调控机制发生了改变,而这种调控机制目前尚未明确㊂近年来,甲基化已成为肿瘤研究的热点,甲基化是一种表观遗传修饰方式,参与机体疾病状态下的基因表达调控㊂有研究发现,白血病患者A B O抗原减弱与D N A甲基化导致A B O基因沉默的关系更为密切[18]㊂基于此,推测患者A B O基因启动子区C p G岛甲基化状态的异常可能与其A抗原表达减弱有关㊂本研究对患者标本A B O基因启动子区175㊁160b p2个区域甲基化状态进行检测,结果显示,检测区域患者标本A B O基因启动子区甲基化率为66.7%,明显高于随机选取的5例正常对照组标本平均甲基化率(<25%),差异有统计学意义(P<0.05)㊂有研究表明,A B O基因启动子C p G岛甲基化程度与A B O抗原表达呈负相关,甲基化程度越高A B O基因表达越不活跃,从而导致A㊁B抗原表达均减少[5,8,18];且白血病患者存在不同程度A㊁B抗原减弱[21],与本研究结果一致㊂提示患者白血病状态下A B O基因启动子区甲基化程度增高可能与A B O抗原减弱之间存在较为密切的相关性,因机体抗原减弱的调控机制是多因素共同作用的结果,而A B O启动子甲基化导致的基因表达下调仅可能只是A B O抗原减弱的其中一个因素,其机制还需进一步探索㊂本研究结果提示,本例白血病患者在疾病发作期,其A B O基因启动子区甲基化状态异常可作为导致A B O抗原减弱的重要因素之一,从而干扰A B O正反定型鉴定㊂在临床输血实践中开展血清学疑难血型鉴定的同时进行分子生物学基因分型和血型基因甲基化检测可作为血清学方法的有效辅助手段,有效缩短了输血相容性试验检测时间,保障临床用血安全㊁合理㊁有效,为实现患者个体化血液管理㊁做到精准输血提供了新思路㊂参考文献[1]I MA I Y,MA R U Y,T A N A K A J.A c t i o n m e c h a n i s m s o fh i s t o n e d e a c e t y l a s e i n h i b i t o r s i n t h e t r e a t m e n t o f h e m a t o-l o g i c a l m a l i g n a n c i e s[J].C a n c e r S c i,2016,107(11):1543-1549.[2]B O Y I A D Z I S M,WH I T E S I D E T L.T h e e m e r g i n g r o l e so f t u m o r-d e r i v e d e x o s o m e s i n h e m a t o l o g i c a l m a l i g n a n c i e s [J].L e u k e m i a,2017,31(6):1259-1268.[3]张勇,刘剑荣,陈华良,等.1例疑难血型和疑难配血分析[J].实验与检验医学,2015,33(3):389-390.[4]B I A N C O T,F A R M E R B J,S A G E R E,e t a l.L o s s o f r e dc e l l A,B,a nd H a n t i ge n s i sf r e q u e n t i n m y e l o i d m a l ig n a n-c i e s[J].B l o o d,2001,97(11):3633-3639.[5]B I A N C O-M I O T T O T,HU S S E Y D J,D A Y T K,e t a l.D N A m e t h y l a t i o n o f t h e A B O p r o m o t e r u n d e r l i e s l o s 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精选全文完整版（可编辑修改）红细胞凝集强度判断标准【《输血免疫血液学实验技术》】ABO正反定型不符常见情况有：一、弱反应或缺失抗原。

二、多余的抗原反应。

患者正定型结果均为阴性，但在反定型试验中，与A1细胞不反应，而与B型红细胞出现正常反应强度的凝集，不属于抗体水平减弱的现象，依据反定型结（1）患者正定型结果与正常的凝集强度反应出现明显减弱，依据反定型结果，应该可以预见患者具有A抗原，正定型患者红细胞与抗AB的弱反应且与抗A 缺乏凝集反应提示为A亚型。

患者正定型结果与抗A出现1+混合视野反应，与正常的4+反应强度明显减弱，但在反定型试验中，与A1细胞不反应，而与B型红细胞出现正常反应强（1）患者正定型结果与正常抗A的凝集强度反应出现明显减弱。

依据反定型结果，应该可以预见患者具有A抗原，正定型患者红细胞与抗A、抗AB的弱（1）患者正定型结果与正常的凝集强度反应出现明显减弱，依据反定型结果，应该可以预见患者具有A抗原，正定型患者红细胞与抗AB的弱反应且与抗A患者正定型结果与抗B出现混合视野反应，与正常的4+反应强度明显减弱，但在反定型试验中，与B细胞不反应，而与A1型红细胞出现正常反应强度的（1）患者正定型结果与正常抗B的凝集强度反应出现明显减弱，依据反定型结果，应该可以预见患者具有B抗原，正定型患者红细胞与抗B、抗AB的弱患者正定型结果与抗A出现4+混合视野反应，与正常的4+反应强度出现减弱，但在反定型试验中，与A1细胞不反应，而与B型红细胞出现正常反应强（1）患者正定型结果与正常抗A的凝集强度反应出现明显减弱，依据反定型解决方法:解决方案:在37℃定型,去除自身冷抗体(红细胞用DTT处理血浆用白身红细胞吸收)干扰后定型，或进行血型物质检测2.致敏lgG抗体的红细胞引起自身凝集多凝集是在正定型试验中使用人血清来源的定型血清时出现,现在定型试剂使用鼠单克隆来源的定型血清不存在此问题。

（三）血清中存在针对试剂红细胞保存液成分的抗体。

血型鉴定正反定型不一致常见的原因准确鉴定血型对于临床输血、疾病诊断和治疗等方面具有深远意义。

血型鉴定正反定型一致才能报告正确的血型，导致正反定型不一致常见的原因如下：1、技术因素在实验操作过程中，试剂的贮存条件不当、使用技术的错误、试剂选择的失误、试剂的污染或失效以及离心速度的不恰当等，都可能影响鉴定结果的准确性。

例如，若试剂未按照要求的温度和湿度条件储存，可能会使其活性降低或失效，从而无法准确识别红细胞表面的抗原和血清中的抗体。

2、存在IgM 性质的自身冷抗体在某些自身免疫性疾病或特定生理状态下，患者体内可能产生这种抗体。

当环境温度低于37°C 时，血细胞会自发凝集，干扰血型鉴定的正常流程。

对于此类情况，通常需要采用特殊的处理方法，如使用特定试剂处理细胞及血清，或者在37°C 的条件下进行血清的反定型，并以O型红细胞作为对照。

3、抗原表达弱或缺失在白血病、双胞胎以及某些基因变异的情况下，A、B 抗原的表达可能会被抑制，导致与相应抗体反应不明显。

此外，若A、B 抗原表达过于微弱，即使存在抗原，也可能无法与抗-A 或抗-B 试剂产生有效的反应，而血清中也可能检测不到相应的抗体。

4、血型亚型的存在例如A2型，其血清中可能存在抗-A1，从而在反应中呈现混合视野。

5、自身凝集现象红细胞表面存在致敏的自身抗体，直接抗人球蛋白试验阳性，这会导致正定型时出现非特异性凝集。

同时，血清中存在的自身抗体也会对反定型造成干扰。

6、获得性B 抗原的出现某些疾病或药物的影响可能导致红细胞表面获得性地表达B 抗原，从而使血型鉴定结果出现偏差。

综上所述，血型鉴定正反定型不一致的原因较为复杂，涉及技术操作、自身抗体、抗原表达、亚型等多个方面。

在日常工作中需要综合考虑各种可能的因素，通过进一步的检查和分析，如吸收放散试验、血型基因检测等，准确鉴定血型，确保输血安全有效。

ABO正反定型不符的问题分析及解决办法ABO正定型是用已知的标准血清检测红细胞上未知的抗原ABO反定型是用已知的标准红细胞检测血清中未知的抗体一．引起ABO正反定型不一致的原因分析1.技术因素例如(1) 试剂贮存不当(2) 使用技术错误(3) 使用错误的试剂(4) 使用污染或失效的试剂(5) 离心速度不当2.存在IgM性质的自身冷抗体由于自身冷抗体(冷凝集病,CHD)而导致自身溶血的病人，在低于37℃时血细胞自发凝集，影响正反定型。

3.抗原表达弱或缺失例如a.白血病 b.双胞胎 c.H基因变异4.高水平可溶性血型物质的病人。

5.混合视野：例如(1) 来自近期输注非ABO同型红细胞病人的血样(2) 骨髓移植后不久(3) Tn或A3型红细胞6.缺失或弱抗-A、抗-B例如(1) 新生儿血清(2) 免疫缺陷、紊乱病人(3) 老年人7.前带现象当抗-A或抗-B的效价（如35000）IgG太高时, 立即离心法与A 或B细胞不反应。

8.多凝集：多凝集红细胞，具有不正常的膜结构，可被正常成人血清凝集。

9.不正常血清蛋白：白蛋白/球蛋白比例失调的血清引起红细胞产生缗钱状假凝集。

10. 血样血清中存在抗试剂成分的抗体：例如抗防腐剂的抗体、抗EDTA的抗体等，此种抗体可以通过将红细胞洗涤而解除。

二、ABO正反定型不符的解决方法有以下几个（一）出现弱反应或缺失抗原的解决方法有1.洗涤RBC且延长孵育时间进行试验，如果使用洗涤红细胞后反应加强，则考虑是血型物质的抑制2.酶处理红细胞再次试验3.吸收放散确定是否是亚型。

4.了解输血史(尤其是O型红细胞输注)来分析混合视野5.了解病情诊断（尤其是白血病）6.了解是否是骨髓移植受者7.了解是否是双胞胎8.是否使用从前未使用过的单克隆抗体血清进行了血型鉴定9.分泌型型物质检查10. 进行玫瑰花试验来确定是否混入其它红细胞，或进行细胞分离（二）出现弱反应或缺失抗体例如1.年龄：新生儿及老人。