ABO血型鉴定正反定型试验方法

试管法鉴定ABO血型标准操作规程
试管法鉴定ABO血型标准操作规程
1、目的
为规范输血科ABO血型鉴定的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7条款的要求制定本规程。

2、适用范围
本文件适用于本院输血科ABO血型鉴定的操作过程的规范化管理。

3、方法及原理
3.1方法：试管凝集法
3.2原理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。

可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。

所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。

4、试剂
4.1血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）；
4.2 5%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液；
4.3受检者血清或血浆；
4.4受检者5%红细胞盐水悬液;
5、样本采集及处理
用一次性EDTA-K2真空采血管抽取静脉血1ml，将标示有患者姓名、性别、年龄、住院号、病室/门急诊、床号等信息的标签贴在标本管上，。

ABO血型正、反定型操作规程[目的]保证ABO血型鉴定准确，确保临床输血安全。

[适用范围]XXX医院输血科[职责]具有专业技术的工作人员主要负责本院输血（或备血）标本的ABO血型鉴定（但只对该单份标本负责）。

[相关文件]试剂采购、保存和使用管理程序设备采购、使用管理程序消毒与清洁管理程序标本采集、运输、保存和报废管理程序紧急用血管理程序[相关记录]仪器设备的采购、使用和维护记录仪器的温度记录恒温水温箱的换水和消毒记录消毒液的配置记录清洁消毒记录试剂采购、使用记录标本交接和报废记录紧急用血记录[实验原理]ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。

存在A凝集原的称为A型，存在B凝集原的称为B型。

而血清中还存在凝集素。

当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。

一般A型血清中含有抗B凝集素，B型血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者的红细胞反应（称为正定型），用标准红细胞与被测者血清中的凝集素反应（称为反定型），以确定其ABO血型。

[仪器器械]玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。

[试剂]抗A标准血清、抗B标准血清、A型标准红细胞、B型标准红细胞、O型标准红细胞、生理盐水。

以上试剂均为有合格证件的正品。

[标本收集与处理]1．受检者血清：采集受检者静脉血2~3ml，经1000r/min离心1分钟或室温静置1小时后取上清。

2．2~5%的受检者红细胞：采集受检者静脉血或末梢血，用生理盐水制成2~5％红细胞盐水悬液备用，制备方法见本节质量控制和注意事项。

3．标本出现中度以上溶血者，为不合格标本，不能用于检测。

[实验方法与步骤]血型的正定型（试管法）：⑴、取2支试管，分别标上抗A 和抗B ；⑵、制备待测标本2~5%的红细胞悬液（取1支试管，加入2ml 生理盐水，再加入1滴待测标本红细胞，混匀备用）；⑶、在抗A 管中加入2滴抗A 标准血清，在抗B 管中加入2滴抗B 标准血清；⑷、在抗A 和抗B 管中分别加入1滴已制备好的待测标本2~5%红细胞悬液； ⑸、混匀后，立即对称放入离心机中进行1000r/min 离心1分钟，或室温静置1小时，再轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞浮起，先肉眼观察有无凝集现象，如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

1.方法原理：根据红细胞上有或无A抗原或／和B抗原，将血型分为A型、B型、AB 型及O 型4种。

可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。

所谓正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或／和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或／和抗-B。

DiaMed系统采用微柱凝集技术，在微柱中加入凝胶，凝胶的间隙起到了分子筛的作用，通过离心来分离凝集和非凝集的红细胞，从而达到检测目的。

2.仪器：达亚美离心机3.试剂及配套品： ABO正反定/Rh定型卡，达亚美2号稀释液（ID-Diluent2），标准红细胞A1和B。

4.样本要求：4.1血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。

若需要用血清替代血浆进行检测时，应在用前离心，1500g×10min，以免纤维蛋白残余干扰反应结果。

4.2 样本准备：5%样本红细胞制备：压积红细胞25 μl或全血50 μl悬浮于0.5 ml达亚美2号稀释液中。

5.操作程序 :5.1 取50μl A1,B 标准细胞（0.8%）分别加入A1,B管中。

5.2 取50μl 血清或血浆加入A1,B管中。

5.3 取10μl 5% 样本红细胞加入A, B, D, Ctl管中。

5.4离心10 分钟。

判读结果。

记录。

5.5 阳性（＋）：细胞在凝胶表面凝集成一条红线或散布在凝胶中。

阴性（－）：细胞沉积在管底。

双相（d.p.）：既有阳性结果，同时也有阴性结果。

溶血（Hemo）：红细胞溶解，作为阳性结果对待。

5.6 ABO血型判断6.临床意义6．1临床输血：当循环血量不足或大失血或贫血需进行输血治疗，医学教.育网搜集整理在输血前必须先选择血型相同的供血者，再进行交叉配血，完全相同后才能输血。

6.2在皮肤、肾移植等器官移植的时候选择ABO血型相符的供体。

6.3不孕症和新生儿溶血症病因的分析。

6.4亲子鉴定等。

7.支持性文件：7.1中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程.第二版，东南大学出版社，19977.2 邱艳主编.全血成分血质量要求与血液标准化.中国标准出版社，2003 7.3 刘达庄主编．免疫血液学.上海科学技术出版社，2002.7：128-1377.4王培华主编.输血技术学.人民卫生出版社，第二版，20037.5李勇杨贵贞主编.人类红细胞血型学实用理论与实验技术.第一版,中国科学技术出版社，1999。

ABO疑难定型ABO系统是唯一一个在红细胞上缺乏相应抗原的情况下其血清或血浆中存在对应抗体的最重要的血型系统。

因此ABO定型必须进行正反定型并且正反定型结果相一致的前提下才能准确鉴定ABO血型。

在正定型试验中，一般我们使用抗-A和抗-B来检测红细胞上是否存在A和/或B 抗原，反定型试验中使用A和B型标准试剂红细胞来检测血清/血浆中是否存在抗-A和/或抗-B 抗体。

一般而言，正反定型的结果互相一致。

但在一些特殊的情况下，正反定型的结果相互不一致，在本文中分析了ABO正反定型不一致的原因，并对不同的原因加以分析解决，即分别在正定型和反定型中增加一些试剂来更进一步的细化检测红细胞上的抗原和血清/血浆中可能出现的抗体，并通过型物质测定及吸收放散等方法来准确定型。

一、ABO疑难血型鉴定的方法（一）正反定型：正定型：-A, -B，-AB, -H, -A1反定型：Ac, Bc, Oc, 自身对照1. ABO正定型中各种试剂用途疑难定型中正定型用抗血清抗-A及抗-B抗-AB:确认弱A和弱B抗原,与弱A及弱 B抗原亲和力强,会产生强反应抗-H:用于检查亚型及孟买型, A亚型红细胞上的H抗原多于正常A型抗-A1: 用于A亚型(如A2, A3)检测2. H抗原在红细胞上的分布3. ABO反定型中各种试剂的用途反定型中试剂红细胞的意义A及B细胞: 确认抗-A或抗-B抗体O型红细胞:检查是否存在ABO系统以外抗体干扰ABO反定型自身对照: 用于确认正反定型结果的有效性,排除自身抗体对定型的干扰(如冷凝集等) A2细胞: 用于亚型的鉴定, 尤其是在怀疑是A亚型且又存在抗-A1抗体的情况下（二）型物质测定型物质准备：1~2ml唾液，沸水煮10分钟，离心后得到的上清。

标清的调制：标清用盐水稀释至其效价为1：16中和：将0.5ml型物质与调制后的标清0.5ml等体积混合,室温放置30分钟检测：用Ac检测中和后的抗-A, Bc检测中和后的抗-B.结果判断：如果抗-A被中和，则被检者为A型，如果抗-B被中和，则被检者为B型。

实验一凝集反应（ABO血型的鉴定）[实验目的]1．掌握凝集反应的原理，玻片法和试管法凝集实验的实验方法和结果分析。

2．了解凝集反应基本类型及血型鉴定的各种方法包括正、反定型，血型板鉴定法和血型卡鉴定法。

[实验原理]在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。

人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。

据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。

[实验器材]1．器材：光学学显微镜，消毒缸2．材料：消毒干棉球，一次性采血针，载玻片，玻璃试管，一次性带刻度朔料吸管，医用黄色垃圾袋3．试剂：75%医用酒精，0.9%NaCl注射液，抗血清试剂抗A、抗B[内容与方法](一)玻片法凝集实验1.用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。

滴1至2滴血液于含有1ml生理盐水的试管内，摇匀，制成约0.5%血球悬液。

用干棉球止血。

2．取洁净载玻片1块，在中间用蜡笔画一条竖线，将抗A、B分型试剂分别加1滴于载玻片两端。

3. 用毛细吸管吸取血球悬液，在白瓷板的两个圆孔内各加一滴,并充分混匀，放置5－10分钟。

4.肉眼观察红细胞有无凝集发生。

如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。

若肉眼观察不明显，可在显微镜下观察是否存在微小凝集5.记录凝集情况，判定受检者的血型。

（二）试管法凝集实验1．用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。

滴1至2滴血液于含有生理盐水的试管内，摇匀，制成约0.5%血球悬液。

用干棉球止血。

2．取洁净试管2支，分别标记上A、B字样，将抗A、B分型试剂分别加1滴于相应标记的试管中3．用一次性吸管吸取血球悬液，在2支标记试管中各加一滴,并充分混匀，放置5－10分钟。

试管法ABO血型鉴定（最终定稿）第一篇：试管法ABO血型鉴定试管法ABO血型鉴定1.检验目的鉴定供受血者ABO血型，保证临床输血安全。

2．检验方法试管法 2.1.试管法 2.1.1.实验原理ABO血型鉴定，是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗A和抗B血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原，同时用已知标准A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的天然IgM 类抗A或（和）抗B。

2.1.2.标本要求静脉EDTA抗凝血2.0～3.0ml，以3000r/min离心3分钟，分离上清液。

2.1.3.试剂单克隆或多克隆抗A、抗B试剂，3-5% A、B及O型试剂标准红细胞悬液。

2.1.4.器材离心机，4℃冰箱、显微镜，12×70mm试管(以下称“小试管”),滴管，10mm×60mm透明的玻璃试管或塑料试管。

2.1.5.操作步骤2.1.5．1．正定型（查抗原）：取试管2支，分别标明抗A、抗B，加入抗A和抗B分型血清各2滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混匀。

2.1.5．2.反定型（查抗体）：取试管3支，分别标明A型、B型和O型细胞。

用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B、O型5%试剂红细胞悬液1滴，混匀。

2.1.5．3.立即以3000r/min离心10秒。

（离心时间为离心机校准时间）。

2.1.5．4.轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象,如肉眼观察不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜下观察有无凝集。

2.1.5．5.凝集强度判断标准＋＋＋＋：红细胞凝集成一大片或几片，仅有少数单个游离红细胞，血清清晰透明。

＋＋＋：红细胞凝集成数个大颗粒凝块，有少数单个游离红细胞，血清透明。

＋＋：红细胞凝成数个小颗粒凝块，游离红细胞＜1/2。

＋：红细胞凝成数个小颗粒凝块，游离红细胞＞1/2。