下载文档原格式
从脑脊液和皮下出血点中对奈瑟菌分离及耐药性分析(宁夏回族自治区中宁县人民医院检验科，宁夏中宁755100)标签：奈瑟茵；脑脊液；皮下出血点对2003年11月～2004年2月来我院就诊的38例头痛和昏迷患者的脑脊液和皮下出血点中的奈瑟菌进行分离鉴定和药敏试验，现将结果报告如下：1．材料与方法1．1标本来源38例患者中，多数为舟塔地区和康滩地区的农民，少部分为本地区居民，按常规留取脑脊液和皮下出血点的血样标本。
1．2材料营养琼脂与羊血制成的血平板及巧克力平板。
质控菌株、奈瑟菌ATCC 49226均购自中国药品生物制品检定所。
1．3分离培养与鉴定用无菌接种环将急送的脑脊液接种到事先预热至37℃的血平板或巧克力平板，同时做皮下出血点取材。
先用碘酒消毒出血点，用无菌针头挑破，挤出少量血液，用无菌接种环接种到血平板，两份标本同时置37℃的5％～10％CO2环境烛缸中进行分离培养，并在烛缸内加入一小块湿棉花，以保持一定的湿度。
经18～24h培养后，挑取典型形态的菌落进行生化鉴定与药敏试验。
本室采用全国临床检验操作规程和医用微生物及微生物检验技术进行鉴定，药敏试验采用卫生部生物研究所药敏试纸片按操作说明的程序进行。
2．结果38例脑脊液和皮下出血点均分离出29株奈瑟菌属细菌，分离率为76.3％，菌别分布。
经分离的菌株在血平板或巧克力平板于37℃培养18～24h，菌落为中等大小(约2mm)，中央隆起、光滑湿润、柔软透明，呈灰白色、稍粘，在血平板上无溶血现象，在血清肉汤中呈均匀混浊生长、微呈颗粒或黏稠沉淀，主要生化特性是能分解葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气，能产生靛基酚氧化酶，在盐水中不自凝。
蔗糖、乳糖、果糖、巧克力或血琼脂22℃、多糖合成(碘试验法)DNA酶阴性，我们依照奈瑟菌新的分类法㈣确定为脑膜炎双球菌。
3．讨论脑膜炎双球菌一般寄生于正常人的鼻腔中，此菌由病人或带菌者经飞沫由呼吸道传播。
脑膜炎双球菌的主要致病因素是内毒素，致病性很强。
奈瑟氏菌鉴定一、目的对某一细菌的鉴定水平，可提供以下几方面的价值：（1）决定治病方法；（2）作流行病学研究；（3）了解细菌与感染的关系；（4）进行学术交流。
二、原理根据奈瑟菌的形态染色、培养特性、生化反应、抗原构造等将奈瑟菌由属鉴定到具体种类。
二、标本不同病种及不同检查目的而定，可为脓汁、渗透液、咽拭子、血、脑脊液、食物、呕吐物、粪便等，置于无菌瓶内送检。
三、试剂及器材革兰氏染液、培养皿、培养瓶、生化鉴定管、标准血清、玻片、接种针（环）、酒精灯等。
四、鉴定程序痰液、组织液脑脊液沉淀物血液带菌者鼻咽拭子宫颈尿（阴）道浓性分泌物涂片染色镜检血琼脂平板血平板血平板（G—双球菌、肾形）巧克力琼脂平板巧克力琼脂平板巧克力琼脂平板（5—10％CO2）（5—10％CO2）CO2（5—10％）35℃CO2（5—10％）35℃初步报告可疑菌落可疑菌落可疑菌落纯培养纯培养纯培养涂片染色镜检、观察菌落涂片染色镜检涂片染色镜检特性（G—双球菌，肾型）（G—双球菌，肾型）（G—双球菌，肾型）氧化酶（+）、触酶（+）氧化酶（+）、触酶（+）氧化酶、触酶葡萄糖（+）、麦芽糖（+）硝酸盐还原（+）不分解糖类葡萄糖均（+）余糖（—）普通平板不生长NA（+），普通平板上生长余糖（—）普通平板上不生长脑膜炎奈瑟氏菌卡他布兰汉氏菌淋病奈瑟氏菌五、实验解释及临床意义a)脑膜炎奈瑟氏菌主要引起人类流行性脑脊髓膜炎。
b)淋病奈瑟氏菌引起淋病、尿道炎、前列腺炎、宫颈炎及新生儿淋病性眼结膜炎。
c)卡他布兰汉氏菌近年来致病性越来越引起关注。
七、全防护措施在操作过程中，要穿好工作衣，戴好口罩、手套，必要时戴眼罩，严格按操作规程，结束后，用次氯酸溶液（0.2%）擦拭实验台、显微镜手柄、载物台，浸泡手，然后紫外线消毒30分钟。
八、标本处理废弃标本，培养基等统一由专门人员高压消毒处理。
九、参考文献诊断细菌学，李仲兴等主编、第一版、香港、黄河文化出版社，1992。
1. 掌握奈瑟菌的分离和纯化方法；2. 熟悉奈瑟菌的形态学和生化特性；3. 学会运用显微镜观察奈瑟菌的形态；4. 熟悉奈瑟菌的鉴定方法，提高对奈瑟菌的识别能力。
二、实验原理奈瑟菌是一类革兰氏阴性细菌，广泛存在于自然界中，具有多种生物学特性。
本实验通过对奈瑟菌的分离、纯化、形态观察和生化鉴定，实现对奈瑟菌的鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：淋病奈瑟菌培养物、金黄色葡萄球菌标准菌株、兔鲜血琼脂平板、革兰染色液、氧化酶试剂、葡萄糖发酵试剂等；2. 实验仪器：显微镜、恒温培养箱、无菌操作台、接种环、酒精灯、镊子等。
四、实验方法1. 奈瑟菌的分离和纯化（1）将淋病奈瑟菌培养物接种于兔鲜血琼脂平板上，37℃恒温培养18-24小时；（2）用接种环挑取单个菌落，转接至新的兔鲜血琼脂平板上，37℃恒温培养18-24小时；（3）重复上述步骤，直至获得纯化后的奈瑟菌。
2. 奈瑟菌的形态学观察（1）将纯化后的奈瑟菌涂片，进行革兰染色；（2）在显微镜下观察奈瑟菌的形态、大小、排列等特征。
3. 奈瑟菌的生化鉴定（1）氧化酶试验：将纯化后的奈瑟菌接种于氧化酶试剂中，观察是否产生气泡；（2）葡萄糖发酵试验：将纯化后的奈瑟菌接种于葡萄糖发酵试剂中，观察是否产生酸碱反应。
1. 奈瑟菌的分离和纯化：通过反复划线纯化，成功获得纯化后的奈瑟菌；2. 奈瑟菌的形态学观察：在显微镜下观察到奈瑟菌为革兰氏阴性球菌，呈球形或卵圆形，成对排列；3. 奈瑟菌的生化鉴定：氧化酶试验产生气泡，葡萄糖发酵试验产生酸碱反应。
六、实验讨论1. 奈瑟菌的分离和纯化过程中，注意无菌操作，避免杂菌污染；2. 在观察奈瑟菌的形态时，注意观察其大小、形状、排列等特征，有助于鉴定；3. 奈瑟菌的生化鉴定方法较多，本实验选择了氧化酶试验和葡萄糖发酵试验，可根据实际情况选择其他生化鉴定方法；4. 本实验结果与淋病奈瑟菌的生物学特性相符，成功鉴定出淋病奈瑟菌。
七、实验结论通过本实验，我们掌握了奈瑟菌的分离、纯化、形态观察和生化鉴定方法，提高了对奈瑟菌的识别能力。
微生物检验实验室奈瑟菌属标准操作规程1. 概述奈瑟菌属是一群触酶、氧化酶试验均阳性的革兰阴性球菌，包括脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、解乳糖奈瑟菌、灰色奈瑟菌、粘液奈瑟菌等11个种，临床上以脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌最为重要。
2.标本类型血液、脑脊液、分泌物、痰、穿刺液、脓液标本。
3.鉴定3.1 形态与染色革兰阴性双球菌，肾形或咖啡豆状，，常成双排列，凹面相对。
色的似露滴状菌落。
3.3生化反应：氧化酶、触酶试验阳性；分解葡萄糖和麦芽糖，不分解蔗糖、甘露醇及乳糖；尿素酶、吲哚及硝酸盐还原试验均为阴性。
3.4鉴别要点：3.4.1本菌特征：革兰阴性双球菌，氧化酶和触酶试验阳性，分解葡萄糖、硝酸盐还原试验阴性。
3.4.2奈瑟菌与相似菌的鉴别；见表5-37。
表5-37 奈瑟菌与相似菌鉴别的关键性试验注：“+”为90%以上菌株阳性，“-”为90%以上菌株阴性，“V”为11%~89%菌株阳性。
3.4..3 淋病奈瑟菌和卡他莫拉菌的鉴别淋病奈瑟菌分解葡萄糖，硝酸盐还原试验阴性，而卡他莫拉菌则相反。
两者虽可根据标本来源加以区分，但并非绝对，因为通过性行为，卡他莫拉菌也可引起尿道炎，而淋病奈瑟菌也能引起咽炎，应引起注意。
涂片不典型，作淋病奈瑟菌培养，同时作普通培养，有细菌生长可排除淋病奈瑟菌。
3.5 操作步骤3.5.1 涂片染色观察菌落特征，在血平板上挑取可以菌落，涂片染色镜检。
3.5.2氧化酶试验参见《触酶试验标准操作规程》3.5.3鉴定从血平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。
4.药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件.5.质量控制参见《质量控制程序》6.检验结果解释与分析脑膜炎奈瑟菌对青霉素、磺胺类、链霉素和金霉素敏感。
产酶株引起感染应考虑用头孢曲松或头孢噻肟替代。
检出B-内酰胺类酶阳性的淋病奈瑟菌则提示青霉素、氨苄西林、阿莫西林耐药。
7.临床意义脑膜炎奈瑟菌存在于携带者和脑膜炎患者的鼻咽部，通过飞沫经空气传播，冬末春初为流行高峰。
