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第四章1.杂交瘤技术原理：以聚乙二醇（PEG）为细胞融合剂，使免疫后能产生抗体的小鼠脾细胞与能在体外长期繁殖的小鼠骨髓瘤细胞融合产生杂交瘤细胞，通过次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶核苷（HAT）选择性培养基的作用，只让融合成功的杂交瘤细胞生长，经反复的免疫学检测筛选和单个细胞培养（克隆化），最终获得机能产生所需单克隆抗体又能长期体外繁殖的杂交瘤细胞系。
将这种细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔，可从小鼠腹水中得到高效价的单克隆抗体。
2.细胞株冻融的原则：快冻慢融。
目前均采用液氮保存杂交瘤细胞。
细胞放入液氮前需要逐步降温，如果冻存管放置于-80摄氏度低温冰箱过夜后再放入液氮中，可长期保存。
复苏细胞时，冻存管取出后，立即37摄氏度水浴，使之融化。
第五章1.凝集反应：是指细菌和红细胞或红细胞等颗粒性抗原或表面包被可溶性抗原（或抗体）的颗粒性载体与相应抗体（或抗原）特异性结合后，在适当电解质存在下，出现肉眼可见的凝集现象。
直接凝集反应：在适当电解质参与下，细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原直接与相应抗体结合后出现肉眼可见的凝集现象，称为~。
间接凝集反应：可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒性载体（如正常人O型红细胞、细菌、胶乳颗粒等）的表面，然后与相应抗体（抗原）作用，在适宜的电解质存在条件下出现特异性凝集现象，称为~。
其敏感度高于直接凝集反应和沉淀反应。
正向间接凝集反应：用可溶性抗原致敏载体以检测标本中的待检抗体。
反向间接凝集反应：用特异性抗体致敏载体以检测标本中的待检抗原。
间接凝集抑制反应：用抗原致敏的载体颗粒及相应的抗体作为诊断试剂，检测标本中是否存在与致敏抗原相同的抗原。
2.抗人球蛋白试验的类型及其原理。
原理：Coombs试验又称抗人球蛋白试验，用于检测红细胞不完全抗体，其原理是：不完全抗体多半是7S的IgG类抗体，能与相应的抗原牢固结合，但因其分子量较小，体积小，不能起到桥联作用，在一般条件下不出现可见反应，利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体，可使红细胞凝集。
一、实验目的1. 了解血清总补体活性的检测原理和方法。
2. 掌握血清总补体活性（CH50）测定的操作步骤。
3. 通过实验结果，分析血清总补体活性的临床意义。
二、实验原理血清总补体活性（CH50）是指补体在经典途径中活化的程度。
在CH50测定中，补体通过激活C1～C9等补体成分，使红细胞发生溶血。
通过测定溶血程度，可以评估血清总补体活性。
三、实验材料1. 试剂：溶血素、兔抗羊红细胞抗体、生理盐水、5%羊红细胞悬液、2.5%巴比妥缓冲液、CH50标准品。
2. 仪器：恒温水浴箱、分光光度计、移液器、试管、试管架等。
四、实验方法1. 标准曲线绘制：将CH50标准品用生理盐水稀释成一系列浓度，分别加入5%羊红细胞悬液，37℃水浴30分钟，测定吸光度（A542nm）。
以CH50浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：取待测血清样本，用生理盐水稀释成一定浓度。
按照标准曲线绘制的方法，测定吸光度（A542nm）。
3. 结果计算：根据标准曲线，计算出待测血清样本的CH50活性。
五、实验结果1. 标准曲线绘制：根据实验数据，绘制标准曲线。
2. 样品测定：待测血清样本的吸光度为X。
3. 结果计算：根据标准曲线，计算出待测血清样本的CH50活性为Y。
六、讨论与分析1. 血清总补体活性（CH50）测定原理及方法：CH50测定是一种常用的检测补体活性的方法，通过测定红细胞溶血程度，评估血清总补体活性。
2. 实验结果分析：本次实验中，待测血清样本的CH50活性为Y。
与正常值50-100UL相比，该样本的CH50活性处于正常范围内。
3. 血清总补体活性（CH50）的临床意义：血清总补体活性（CH50）在临床上具有重要的诊断意义。
增高见于急性炎症感染、组织损伤、风湿热急性期、结节性动脉周围炎、皮肌炎、心肌梗死、伤寒、多发性关节炎、癌肿等。
降低见于急性肾小球肾炎、膜增殖性肾小球肾炎、系统性红斑狼疮（SLE）活动期、类风湿关节炎、病毒性肝炎、慢性肝病、亚急性细菌性心内膜炎、遗传性血管神经性水肿等。
总补体测定实验报告1. 引言总补体测定是一种常用的实验方法，用于评估机体免疫系统的功能状况。
该实验通过测定补体活性来确定机体抗体的产生和免疫反应的效果。
本实验旨在探究总补体测定的原理和操作方法，并验证其在评估机体免疫功能方面的应用性。
2. 原理总补体测定依据补体系统的活性来评定机体的免疫功能。
补体是一组由肝脏合成的血浆蛋白酶，与免疫系统密切相关。
在机体受到外界病原体的入侵后，免疫系统会产生相应的抗体。
这些抗体与病原体结合后，会激活补体系统，导致一系列反应，包括细胞溶解、炎症反应等。
通过测定补体系统的活性，可以判断机体免疫功能是否正常。
总补体测定实验通常分为两种方式：CH50（总补体活性）和CH100（补体活化单位）。
CH50的结果表示单位血浆内补体产生溶解半数所需的抗原-抗体复合物；而CH100则表示单位血浆内补体产生溶解100%，即完全活化的能力。
3. 实验方法3.1 实验材料和仪器- 补体测定试剂盒- 96孔板- 微量移液器- 显微镜- 超速离心机3.2 实验步骤1. 取96孔板，标号。
2. 加入不同浓度的抗原和试样血清，包括阳性对照和阴性对照组。
3. 使试样和抗原充分反应，孵育一段时间。
4. 添加适量的试剂盒中的溶剂，停止反应。
5. 加入染色剂，孵育一段时间。
6. 用显微镜观察96孔板中的溶解情况。
7. 通过观察溶解程度和比较阳性对照和阴性对照组的差异，判断补体活性。
4. 实验结果与分析根据实验步骤所述方法操作，观察到阳性对照组的孔溶解程度较大，而阴性对照组的溶解程度较小。
根据比较两者的差异，可以计算出补体活性的数值，确定机体的免疫功能是否正常。
5. 结论本实验通过总补体测定的方法，成功评估了机体的免疫功能。
根据实验结果与分析，可以得出结论：补体活性较高的样本表示机体免疫功能良好，相反，补体活性较低的样本则提示机体免疫功能异常或低下。
总体而言，总补体测定作为一种常用的实验手段，可以通过测定补体系统的活性来评估机体的免疫功能。
50%溶血试验(CH50)测定补体实验溶血CH补体补体实验标题: 50%溶血试验(CH50)测定补体实验摘要: 50%溶血试验即求得能使50%致敏羊红细胞发生溶血的最小量血清，然后计算出每毫升血清中补体含量。
以补体量作为横坐标，溶血百分数作为纵坐标，可得到一个清晰的“S”形曲线。
在50%溶血周围，线段近似一条直线。
因此当补体用量稍有变动，就可对溶血程度发生很大影响。
所以用50%溶血作……关键词:溶血CH补体补体实验50%溶血试验即求得能使50%致敏羊红细胞发生溶血的最小量血清，然后计算出每毫升血清中补体含量。
以补体量作为横坐标，溶血百分数作为纵坐标，可得到一个清晰的“S”形曲线。
在50%溶血周围，线段近似一条直线。
因此当补体用量稍有变动，就可对溶血程度发生很大影响。
所以用50%溶血作为终点要比100%溶血更为敏感。
50%溶血试验定血清中补体含量用以下公式表示：该公式可以从Von Krogh 方程式进一步加以论证：假定X=加入的新鲜血清量y=溶血的百分率，以小数表示V=斜率转变成对数，上述公式就变成材料及器材1．稀释液（磷酸盐缓冲生理盐水）NaCl 17gNa2HPO4 11gKH2PO4 0.27g蒸馏水100ml使用时取此原液50ml，加90ml蒸馏水。
经高压灭菌后即可使用。
加入100%硫酸镁溶液1ml，可增强补体的效能。
2．绵羊红细胞悬液（1×10g/ml）3．溶血素（2U）2．被检血清（新鲜豚鼠血清）3．水平离心机4．水浴箱5．721型分光光度计1．浓度为1×10g/ml的绵羊红细胞配制取经稀释洗涤后的绵羊红细胞配成较5%稍浓的细胞悬液。
取50%细胞悬液1ml，加于14ml蒸馏水中测O.D值为Di按下式求出于一定体积的5%细胞悬液中应加入稀释液的毫升数。
2．致敏绵羊细胞取绵羊红细胞悬液（1×102／ml）加等量的溶血素（2U／ｍｌ）。
充分混合。
置37℃水浴中作用30分钟，每隔10分钟摇动一次以免细胞下降即成5×108／ml致敏羊红细胞。
50%溶血试验(CH50)测定补体实验溶血CH补体补体实验标题: 50%溶血试验(CH50)测定补体实验摘要: 50%溶血试验即求得能使50%致敏羊红细胞发生溶血的最小量血清，然后计算出每毫升血清中补体含量。
以补体量作为横坐标，溶血百分数作为纵坐标，可得到一个清晰的“S”形曲线。
在50%溶血周围，线段近似一条直线。
因此当补体用量稍有变动，就可对溶血程度发生很大影响。
所以用50%溶血作……关键词:溶血CH补体补体实验50%溶血试验即求得能使50%致敏羊红细胞发生溶血的最小量血清，然后计算出每毫升血清中补体含量。
以补体量作为横坐标，溶血百分数作为纵坐标，可得到一个清晰的“S”形曲线。
在50%溶血周围，线段近似一条直线。
因此当补体用量稍有变动，就可对溶血程度发生很大影响。
所以用50%溶血作为终点要比100%溶血更为敏感。
50%溶血试验定血清中补体含量用以下公式表示：该公式可以从Von Krogh 方程式进一步加以论证：假定X=加入的新鲜血清量y=溶血的百分率，以小数表示V=斜率转变成对数，上述公式就变成材料及器材1．稀释液（磷酸盐缓冲生理盐水）NaCl 17gNa2HPO4 11gKH2PO4 0.27g蒸馏水100ml使用时取此原液50ml，加90ml蒸馏水。
经高压灭菌后即可使用。
加入100%硫酸镁溶液1ml，可增强补体的效能。
2．绵羊红细胞悬液（1×10g/ml）3．溶血素（2U）2．被检血清（新鲜豚鼠血清）3．水平离心机4．水浴箱5．721型分光光度计1．浓度为1×10g/ml的绵羊红细胞配制取经稀释洗涤后的绵羊红细胞配成较5%稍浓的细胞悬液。
取50%细胞悬液1ml，加于14ml蒸馏水中测O.D值为Di按下式求出于一定体积的5%细胞悬液中应加入稀释液的毫升数。
2．致敏绵羊细胞取绵羊红细胞悬液（1×102／ml）加等量的溶血素（2U／ｍｌ）。
充分混合。
置37℃水浴中作用30分钟，每隔10分钟摇动一次以免细胞下降即成5×108／ml致敏羊红细胞。
ch50的检测原理及其临床应用1、背景介绍Ch50（Complement 50）是一种用于检测补体系统活性的指标。
补体系统是人体免疫系统中重要的组成部分，参与调节免疫反应并对病原体进行攻击和清除。
Ch50的检测可以评估补体系统的功能是否正常，对许多免疫性疾病的诊断与治疗起着重要的作用。
2、Ch50的检测原理Ch50的检测基于补体系统的活性，主要评估补体系统经典途径的活性。
具体检测过程如下：•步骤1：将待测血清与已知浓度的抗原反应，形成抗原-抗体复合物。
•步骤2：加入补体，并与抗原-抗体复合物发生反应。
•步骤3：检测补体活化所产生的成分。
•步骤4：根据检测结果计算Ch50的值。
3、Ch50的临床应用Ch50的检测结果在许多免疫性疾病的诊断与评估中具有重要意义。
下面列举了一些常见的临床应用：•自身免疫性疾病的诊断：自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等会导致补体系统的异常激活或损害，Ch50的检测可以帮助确定这些疾病的诊断。
•免疫复合物病的评估：某些疾病如免疫复合物病会导致补体系统过度激活，Ch50的检测可以评估补体系统的活性，从而帮助评估疾病的严重程度和预后情况。
•定期监测治疗效果：对于接受免疫调节治疗的患者，定期检测Ch50的值可以监测治疗效果，并调整治疗方案。
4、Ch50检测的注意事项在进行Ch50的检测时，需要注意以下几点：•血清采样：血清采样应避免出现血液污染，以免影响检测结果。
•检测方法选择：根据不同的疾病类型和临床需要，可以选择不同的Ch50检测方法和试剂盒。
•结果解读：Ch50的正常值范围可能因不同的实验室和试剂盒而有所差异，需要结合临床背景综合评估结果。
5、总结Ch50是一种用于评估补体系统活性的指标，对许多免疫性疾病的诊断与治疗具有重要意义。
通过检测Ch50的值，可以评估补体系统的功能是否正常，从而辅助临床诊断和治疗决策。
在进行Ch50的检测时，应注意血清采样和检测方法的选择，结合临床背景综合解读检测结果。
血清总补体溶血活性（CH50）测定操作说明书实验原理利用绵羊细胞与相应抗体（溶血素）结合成的复合物，可激活血清中的补体，导致红细胞溶解，当红细胞和溶血素量一定时，在规定反应的时间内，溶血程度与补体量及活性呈正相关。
在接近50%溶血（CH50）时，二者之间近似直线关系，故以50%溶血作为最敏感的判断终点。
以引起50%溶血所需的最小补体量为一个CH50U，可计算出待测血清中总的补体溶血活性，以CH50U/ml表示。
本试验主要反映补体经典活化途径的溶血功能，其结果与补体C1～C9各组成分的量及活性均有关。
1．试剂及配制(1)缓冲生理盐水：①贮存液：●Na2HPO4·12H2O 2.85g●KH2PO4 0.27g（加蒸馏水至100毫升，4℃保存）●NaCl 17.00g②应用液（缓冲液）：5毫升贮存液加95毫升蒸馏水，再加10%硫酸镁0.1毫升。
当日配制。
12小时内使用。
（2）2%绵羊红细胞（From：南京森贝伽生物公司）：无菌采取绵羊血液，于等量Alsever 液中可保存3周。
用前以缓冲液洗3次，并配成2%细胞悬液。
必要时可用吸光光度法或细胞计数法使悬液细胞浓度标准化。
(3)冻干绵羊红细胞溶血素（From：南京森贝伽生物公司）（规格：0.5ml/瓶，0.5ml蒸馏水复溶）：将本品（效价1：4000），用缓冲液作1：2000倍稀释（即0.5ml溶血素加999.5毫升缓冲液）。
(4)待测血清：新鲜血液室温放置30分钟，再4℃放置60分钟，使血块收缩。
4℃离心（3000r/min）10分钟，取上清，-20℃保存。
2.试管法操作步骤（改良Mayer法）（1）致敏羊红细胞：2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素（1：2000），混匀，置37℃水浴30分钟。
（2）稀释血清：待测血清0.2ml，加缓冲液3.8ml，稀释度为1：20。
（3）配制溶血标准管：2%绵羊红细胞2ml加8ml蒸馏水，混匀，即为全溶血管。
总补体活性（CH50）的简易测定法——公式计算法
冯伟华;何新全
【期刊名称】《华西医学》
【年(卷),期】1996(11)2
【摘要】本文介绍的方法是在经典的试管法的基础上作了如下改进，减少了测定管数；以单管比色代替了多管比色；获得的反应变量不须在对数坐标纸上作图，代之以公式计算结果；血清用量少和不稀释。
其它反应条件均与多管法相同。
实验结果：血清总补体活性为６４．０３单位／ｍｌ和９７．０４单位／ｍｌ时，变异系数分别为２．５％和３．５％；与多管法对８６例血清标本测定比较，相关系数（γ）为０．９７，ｙ＝４．４１＋０．９５３１ｘ，在４５．３３单位／ｍｌ到１４７．７１单位／ｍｌ范围内，其直线相关系数（γ）为０．９９１２。
本法具有简便、快速、准确等优点，能提高工作效率３～４倍，值得临床推广应用。
【总页数】2页(P134-135)
【关键词】总补体;活性;公式计算法;测定;补体
【作者】冯伟华;何新全
【作者单位】华西医大附属第一医院临床免疫室;成都市第一人民医院
【正文语种】中文
【中图分类】R446.62
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因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
总补体(CH_(50))活性溶血检测法与脂质体免疫检测法的评价黄光秀
【期刊名称】《国际医药卫生导报》
【年(卷),期】2004(000)0Z2
【摘要】目的用日本WAKO公司生产的脂质体免疫检测法与经典溶血法检测CH50,对脂质体免疫检测法进行应用评价。
方法取标准品、质控品、病人血清分别用脂质体免疫检厕法与溶血检测法进行测定,记录结果,并作直线回归,相关分析及t检验。
结果脂质体免疫检测法精密度试验批内CV%为1.2%,批间CV%为
1.98%～
2.08%,线性试验相关系数为0.997,回收率99.4%,溶血无明显干扰,与溶血法对比测定结果依然相关。
结论脂质体免疫检测法可靠、操作简便、快速准确、用血量少,适用于自动分析仪,值得推广。
【总页数】2页(P)
【作者】黄光秀
【作者单位】佛山市三水区人民医院检验科;广东佛山28100
【正文语种】中文
【中图分类】R446.6
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