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《医学免疫学》课程实验教案实验一实验名称：E-玫瑰花环形成实验计划学时：4 学时实验目的与要求：1.掌握人T淋巴细胞形成E-花环的实验原理和操作方法。
2.熟悉T淋巴细胞的功能检测方法。
实验仪器、试剂：淋巴细胞分层液（Ficou）、1%绵羊红细胞、肝素抗凝人血、无钙镁Hanks液、水平离心机、0.8%戊二醛、37℃水浴箱、显微镜、其他。
实验对象：实验同学实验原理：体外测定人外周血中T淋巴细胞数量的方法有多种,以玫瑰花环试验最为简易常用，T淋巴细胞数量的变化与机体的细胞免疫功能状态有一定关系。
人周围血液中T淋巴细胞表面有绵羊红细胞受体，与绵羊红细胞相遇时，在其周围形成花环样细胞团，凡能结合三个以上绵羊红细胞者称为E攻瑰花环形成细胞。
正常人的花环形成率为50~70%，大致可以代表周围血中T细胞的百分数。
临床上多用于某些疾病的诊断及疗效的观察。
操作方法：1、取肝素抗凝血1~2ml，用分层液分出淋巴细胞并洗涤，用Hanks液调整细胞浓度为2—2.5×106ml。
2、取小试管加入l ml淋巴细胞悬液及1%羊红细胞0.l ml，混匀置37℃水浴箱5分钟。
3、800～1000 r/min低速离心5分钟，放4℃冰箱2小时。
4、轻轻旋转试管使团块混匀，加2滴0.8%戊二醛液，摇匀，室温静置10分钟，使E花环固定。
5、取悬液一滴放于载玻片上，将稀释的瑞氏染液加入玻片上染色3分钟。
6、弃去染液，待干后油镜观察，计数200个淋巴细胞中形成花环的细胞效，算出百分率。
实验现象与数据：1、淋巴细胞染成深蓝色，羊红细胞染成淡红色。
2、每个淋巴细胞上粘附三个以上羊红细胞者即为玫瑰花环形成细胞。
结果分析与结论：共计200个T淋巴细胞，算出形成花环细胞占全细胞数的百分率。
正常人的花环形成率为50~70%，大致可以代表周围血中T细胞的百分数。
临床上多用于某些疾病的诊断及疗效的观察。
注意事项：1.离心时注意使用800～1000r/min低速离心。
根据实验要求，补充实验步骤“四步法”规范书写实验步骤17.[2024浙江名校联考，8分]流感病毒的遗传物质是一条单链RNA，外面包有一层包膜，所以流感病毒遗传性极不稳定，很容易发生变异，几乎每年流行的流感病毒都会有所不同。
某科研小组为验证流感病毒的遗传物质进行了以下实验。
实验目的：验证流感病毒的遗传物质是RNA。
材料用具：显微注射器，禽流感病毒的核酸提取液，活鸡胚，DNA酶，RNA酶，流感病毒通用荧光RT－PCR检测仪。
回答下列问题：（1）实验材料选用活鸡胚的理由是流感病毒是一种专门寄生在活细胞中的病毒，活鸡胚是培养流感病毒的培养基，用活鸡胚做实验材料比其他活的成体或胚胎更方便、经济。
（2）实验步骤：第一步：取适量的活鸡胚均分成A、B、C三组。
第二步：把禽流感病毒核酸提取液分成相同的三组，其中A组不进行处理，另外两组分别用适量的DNA酶和RNA酶处理后备用。
第三步：用显微注射技术向A组活鸡胚中注射适量的禽流感病毒的核酸提取液，分别向B、C两组活鸡胚中注射等量的分别用DNA酶和RNA酶处理后的禽流感病毒核酸提取液。
第四步：分别从培养后的活鸡胚中提取样品，用荧光RT－PCR检测方法测定病毒含量。
（3）预测实验结果：可用柱形图表示各组的检测结果。
解析（1）实验材料选用活鸡胚的理由是流感病毒是一种专门寄生在活细胞中的病毒，活鸡胚是培养流感病毒的培养基，用活鸡胚做实验材料比其他活的成体或胚胎更方便、经济。
（2）本实验的目的是验证流感病毒的遗传物质是RNA ，结合所给的实验材料，以及实验设计应遵循的对照原则与单一变量原则，可设计实验如下，第一步：取适量的活鸡胚均分成A 、B 、C 三组。
第二步：把禽流感病毒核酸提取液分成相同的三组，其中一组不进行处理，另外两组分别用适量的DNA 酶和RNA 酶处理后备用，即分别去除DNA 和RNA 。
第三步：用显微注射技术向A 组活鸡胚中注射适量的禽流感病毒的核酸提取液，分别向B 、C 两组活鸡胚中注射等量的分别用DNA 酶和RNA 酶处理后的禽流感病毒核酸提取液。
《中国癌症杂志》2012年第22卷第5期CHINA ONCOLOGY 2012 Vol.22 No.5321 CHINA ONCOLOGY红色荧光蛋白和荧光素酶双报告基因转基因小鼠的建立张余琴 林晓琳 贾俊双 谢饶英 樊全荣 赵尊兰 杨升 高飞 姚开泰 肖东△南方医科大学肿瘤研究所，△比较医学研究所暨实验动物中心，广东 广州 510515 ［摘要］ 背景与目的：活体动物体内光学成像(optical in vivo imaging)主要采用生物发光与荧光两种技术。
生物发光是用荧光素酶(luciferase，Luc)基因标记细胞或DNA，而荧光技术则采用荧光报告基团(GFP、RFP、Cyt及dyes等)进行标记，利用一套非常灵敏的光学检测仪器，能够直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为，生物发光成像具有高的灵敏度和特异性，同时生物发光信号可用于精确定量，而荧光成像具有方便、便宜、直观、标记靶点多样和易于被大多数研究人员接受的优点。
本研究基于慢病毒介导的转基因方法制备红色荧光蛋白(red fluorescent protein，RFP)和Luc双报告基因转基因小鼠(即RL转基因小鼠)，将这两种技术融为一体。
方法：制备携带RFP和Luc基因(简写RL基因)的慢病毒，然后将携带RL基因的慢病毒注入小鼠单细胞受精卵卵周隙以感染受精卵，胚胎移植进假孕母鼠以获得仔鼠，应用小动物活体成像仪、体视荧光显微镜和PCR等在蛋白和DNA水平上筛选和鉴定，并获得RL转基因小鼠。
结果：移植卵周隙注射有慢病毒的胚胎125枚给6只假孕母鼠，其中4只假孕母鼠怀孕，共生仔鼠20只；利用小动物活体成像仪检测RFP和Luc表达，在蛋白水平证实20只F0代中，3只高表达RFP和Luc；DNA水平检测证实，3只RFP和Luc阳性的小鼠基因组中确实整合有外源转基因RL，预示基因型鉴定结果很好验证了小动物活体成像仪筛选和鉴定结果。
此外，RL转基因首建鼠基因组中整合的RL转基因可稳定遗传至下一代，并能正常表达。
免疫组学的研究进展唐康侯永利王亚珍陈丽华（中国人民解放军空军军医大学基础医学院免疫学教研室，西安 710032）中图分类号R392.9 文献标志码 A 文章编号1000-484X（2024）01-0185-07［摘要］随着高通量测序技术、生物信息学等相关领域进展以及人类对免疫系统功能认识的逐步深入，免疫组学从最初解析B细胞受体（BCR）、T细胞受体（TCR）基因序列逐渐发展为解析和绘制宿主免疫系统和抗原的互作关系以及宿主免疫系统应答机制的全景图谱，主要包括抗原表位组学、免疫基因组学、免疫蛋白质组学、抗体组学和免疫信息学等方面的研究，并基于大量免疫学研究数据建立了ImmPort、VDJdb和IEDB等免疫学数据库，加速了新抗原表位的发现和免疫应答机制等研究。
免疫组学能够揭示免疫系统与疾病的关联，促进新型疫苗和免疫治疗策略开发，将有效推动个体化医疗和精准药物治疗。
近年免疫组与暴露组等的整合以及与人工智能的融合将对全面理解免疫系统对环境因素的响应和调节机制、解析疾病发生和发展的分子机制产生重大影响。
［关键词］免疫组；免疫组学；免疫信息学；人工智能Advances in immunomics researchTANG Kang， HOU Yongli， WANG Yazhen， CHEN Lihua. Department of Immunology， School of Basic Medicine，Air Force Medical University， Xi'an 710032， China［Abstract］With the progress of high-throughput sequencing technologies and bioinformatics， and deepening understanding of immune system，immunomics has evolved from initially deciphering gene sequences of B cell receptor （BCR）and T cell receptor （TCR） to unraveling and mapping interactions between host immune system and antigens， as well as panorama of host immune system response mechanisms， which now encompasses various research areas， such as antigen epitopeomics， immunogenomics， immunopro‐teomics， antibodyomics and immunoinformatics. Based on a large amount of immunological research data， immunological databases such as ImmPort， VDJdb and IEDB have been established to accelerate discovery of new antigen epitopes and study of immune response mechanisms. Immunomics has revealed the association between immune system and diseases， promoted the development of novel vac‐cines and immunotherapeutic strategies， and effectively drove the development of personalized medicine and precision medicine. In recent years， integration of immunome with exposome and fusion it with artificial intelligence will have a significant impact on compre‐hensively understanding immune system's response and regulatory mechanisms to environmental factors， as well as deciphering molecular mechanisms underlying disease occurrence and progression.［Key words］Immunome；Immunomics；Immunoinformatics；Artificial intelligence免疫组（immunome）是宿主免疫系统与抗原的互作关系以及宿主免疫系统应答机制的全景图谱，包括免疫系统的识别对象、识别受体以及参与免疫应答过程的其他分子［1-3］。
补体介导的细胞毒试验一、实验目的学习并掌握补体介导的细胞毒试验的实验原理及实验步骤。
二、实验原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。
染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。
此即补体依赖性细胞毒试验，利用细胞毒试验可以检查细胞膜抗原，亦可鉴定抗体的特异性。
本实验中，Thy-1 抗原是小鼠胸腺T 细胞特异的表面抗原，在体外利用抗小鼠Thy-1 的单克隆抗体通过补体的协同作用，可杀伤95％以上的胸腺细胞。
三、实验材料1.解剖器械(眼科剪、眼科镊)、平皿、80～100 目不锈钢网2. 试管、lml 吸量管、尖吸管3. 载玻片、盖玻片4. C57BL／6J 小鼠5. 1640溶液6. 抗小鼠Thy-1 的单克隆抗体（最适稀释度，本室制备）7. 补体(豚鼠新鲜血清并经小鼠胸腺细胞吸收，预先测定效价并稀释为最佳稀释度)8. 1％伊红-Y 染液四、实验步骤1. 小鼠胸腺细胞悬液的制备：将4～6 周龄小鼠采用颈椎脱臼法处死，取出胸腺放入已加入约4ml 冷1640溶液的平皿中，在100 目的不锈钢网上研磨后，过筛，放入试管，离心1000rpm，5 分钟，用1640溶液洗两次。
将沉淀的细胞重悬于1640溶液中，配成1×10^7／ml 细胞悬液。
2. 取试管3 支，标明顺序，依据下表依次加入1×107／ml 胸腺细胞悬液、抗小鼠Thy-1 的单克隆抗体(最适稀释度)及1640溶液，放入37℃温箱30 分钟。
3.取出后每管加入1％伊红-Y 染液1 滴，混匀，室温放置2 分钟。
4.重新混匀后分别在一张载玻片上滴片，加盖玻片镜检。
先在低倍镜下观察，再用高倍镜观察，比较3 管中细胞死活情况。
五、实验结果死细胞呈红色，无光泽且肿胀变大；活细胞不着色、有光泽且形态正常。
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《医学免疫学》教学大纲课程编号：03100030课程名称：医学免疫学（Medical Immu no logy ）学分：2.5学分总学时：45学时理论学时：27学时实验学时：18学时先修课程：生物学、生物化学、生理学、病理学适应专业：临床医学五年制使用教材：1. 曹雪涛•医学免疫学（第6版），人民卫生出版社，2013.2. 高劲松、吴高莉.病原生物免疫学实验教程.北京大学医学出版社，2014.参考教材：1. 曹雪涛、何维.医学免疫学（第3版），人民卫生出版社，2015.2. 郝素珍.医学免疫学，人民卫生出版社，2010.3. 司传平、丁剑冰.医学免疫学，高等教育出版社，2014.4. 柳忠辉、吴雄文.医学免疫学实验技术，人民卫生出版社，2014.一、课程在培养方案中的地位、目的和任务免疫学是研究机体防御系统一一免疫系统的组织结构和生理功能的科学，主要包括三部分。
基础免疫学从基因、分子、细胞和整体等不同水平研究免疫系统的结构与功能；抗原的特性；及免疫系统对抗原应答的机制与规律。
临床免疫学包括免疫病理学和临床疾病免疫学。
免疫病理学主要研究在疾病条件下，免疫系统的变化及对抗原应答的规律。
免疫学技术主要包括免疫学诊断、预防、治疗技术原理，以及免疫学实验原理与技术操作。
医学免疫学还广泛渗入到医学各个领域，形成了众多分支学科，成为指导医学实践的理论基础。
因此，医学免疫学是医学教育中的一门主干课程，是医学生必修的医学基础课程。
本课程的任务是，通过教学使学生掌握免疫学的基础理论，基本知识和基本技能，为学习其他基础医学课程及临床医学课程奠定基础。
二、课程基本要求1. 基础理论与基本知识（1）免疫学概论①掌握：免疫和免疫学的基本概念和免疫系统的功能。
掌握免疫器官的组成、结构与功能。
②熟悉：固有免疫和适应性免疫的概念和特点。
③了解：淋巴细胞的归巢与再循环。
（2）免疫分子与抗原分子①掌握抗原的概念、抗原的基本特性、抗原的异物性与特异性；熟悉影响抗原免疫应答的因素和抗原的种类。
医学免疫学实验教学改革与探索高雪;张征峥;李亚光;刘伟;王畅;曾瑞红;魏林;马翠卿【摘要】医学教育伴随着医学模式的转变,已经从传统的生物医学模式,逐步向现代的生物-心理-社会医学模式过渡.医学教育不仅是知识传授、答疑解惑,而应更注重操作实践和能力培养.实验教学是理论联系实际的纽带,是基础医学通往临床医学的桥梁.本课题组结合本科教学审核评估和临床医学专业认证工作的开展,牢固树立人才培养的中心地位,通过契合专业培养方案,开展分层实验教学;在实验教学内容优化配置,引入PBL实验教学模式;通过运用开放性实验教学方法并建立综合的实验考核评价体系发挥实验教学在培养学生的实际操作能力、综合分析能力、逻辑思维能力等方面的积极作用,取得了良好的效果.【期刊名称】《中国继续医学教育》【年(卷),期】2018(010)009【总页数】3页(P10-12)【关键词】医学免疫学;实验教学;教学改革【作者】高雪;张征峥;李亚光;刘伟;王畅;曾瑞红;魏林;马翠卿【作者单位】河北医科大学基础医学院免疫教研室,河北省重大疾病的免疫机制及干预重点实验室,河北石家庄 050017;河北医科大学基础医学院免疫教研室,河北省重大疾病的免疫机制及干预重点实验室,河北石家庄 050017;河北医科大学第一医院放射科,河北石家庄 050031;河北医科大学基础医学院免疫教研室,河北省重大疾病的免疫机制及干预重点实验室,河北石家庄 050017;河北医科大学人体解剖学教研室,河北石家庄 050017;河北医科大学基础医学院免疫教研室,河北省重大疾病的免疫机制及干预重点实验室,河北石家庄 050017;河北医科大学基础医学院免疫教研室,河北省重大疾病的免疫机制及干预重点实验室,河北石家庄 050017;河北医科大学基础医学院免疫教研室,河北省重大疾病的免疫机制及干预重点实验室,河北石家庄 050017【正文语种】中文【中图分类】G642医学免疫学作为基础医学中的一门重要课程，广泛渗透到生命科学的各个领域，成为现代医学和生命科学的前沿学科，但因其抽象繁琐的概念，复杂的逻辑理论体系，成为教学工作中的难点。
