补体结合试验 PPT

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（二）CH50测定方法
1.红细胞浓度的调整
绵羊红细胞（SRBC）采自绵羊颈静脉，制备脱纤维羊血或 用阿氏（Alsever）血液保存液制成抗凝血，4℃保存备用。使 用前，调制成2%～5% SRBC悬液。为使红细胞浓度标准化， 可吸取少量红细胞悬液，加入20～30倍的稀释液，在542nm波 长处测定吸光值以调整红细胞浓度。
➢现 状
影响的因素多、各种制剂需要烦琐的稀释和滴定等， 现代化、自动化抗原抗体检测方法的不断涌现，补体结合试验逐渐被遗弃 补体结合试验作为一种经典的免疫方法类型，其设计和原理仍对新型免疫 方法的建立有着启迪和指导作用
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第五节 补体受体的测定
补体受体： 存在于多种细胞
清除免疫复合物、净化机体内环境 检测补体受体，有助于判断机体抗感染能力和计 数相应的细胞数量
中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、 NK细胞
CR4
gp150/9 5
CD11C/ CD18
iC3b、C3d、C3dg
C5aR/ C3aR
CD88 C5a/C3a(活化G蛋白)
中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、血小板 内皮细胞、肥大细胞、吞噬细胞
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第六节 补体测定的应用
补体相关试验： 诊断梅毒螺旋体感染的华氏反应（已淘汰） HLA分型的补体依赖性细胞毒试验 抗原抗体检测的脂质体免疫试验、免疫粘连血凝试验 抗体形成细胞定量检测的溶血空白斑技术 免疫复合物测定的胶固素结合试验和C1q结合试验
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➢ 参照血清常称之“R（remove）”试剂，即去除某种补体成分之意。已能筛选 到的血清有人C2缺乏、豚鼠C4缺乏、小鼠C5缺乏和家兔C6缺乏的血清

正常值： 0～1∶10。
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相关检查： 虎红平板凝集试验、寒冷凝集试验、抗登 革病毒IgG抗体、血清补体旁路途径活性、 补体C3测定、B因子。
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相关症状： 低补体血症、血管壁及周围有Ig及补体沉 着、血管壁及周围有Ig及补体沉着、皮肤 弥漫性红肿、膜增生性肾小球肾炎。
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简介： 补体的测定包括测定补体总量、溶血
活性、单个补体成份和补体片段量以及补 体参与试验等。
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临床意义： >1∶10为阳性，诊断布氏杆菌病符合
率为97.96%。
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医学检验·各论：补体结合试验 &旋毛虫病、 遗传性补体缺陷病、脑棘球蚴病、手足口 病、Q热、登革出血热、克里米亚-刚果出 血热、阿根廷出血热、拉沙热、鹦鹉热、 西伯利亚立克次体斑疹热、寇热、布氏菌 病、内脏利什曼病、弓形体病。
谢谢！

gt;>>
相关症状： 玫瑰疹、梅毒感染、阴部溃疡。
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相关疾病：
梅毒性葡萄膜炎、钩端螺旋体病、骨与关 节梅毒、钩端螺旋体肺炎、麻痹性痴呆、 老年人梅毒性心脏病、老年人神经梅毒、 先天性梅毒、小儿赖特综合征、钩端螺旋 体病神经系统表现、钩端螺旋体病的肾损 害、神经梅毒、梅毒性关节炎、先天性梅 毒性肝硬化、莱姆病、梅毒性心血管病、 三期梅毒、潜伏梅毒、一期梅毒、螺菌病。
医学检验·各论 螺旋体蛋白补体结合
试验 内容课件模板
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简介：
梅毒螺旋体血细胞凝集试验是梅毒血 清学检测的特异性反应。通过检测患者血 清中有无抗梅毒螺旋体抗原的特异性抗体， 对梅毒病人进行确诊，但不能作为疗效监 测。
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临床意义： 阳性：梅毒性心血管病。
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正常值： 阴性。
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相关检查：
补体结合试验、补体结合试验（CFT）、 密螺旋体活动试验、钩端螺旋体补体结合 试验、脑脊液特异性梅毒螺旋体抗体、华 (Wassermann)氏补体结合试验。
谢谢！

识别阶段
细胞膜
C3转化酶的形成
活 化 阶 段
C4b2b 为C3转化酶
C4b
C5转化酶的形成
活
化
阶
段
C4b2b3b 是C5 转化酶; 它导 致膜攻击复合体(MAC)的形成
C3b
C4b
3. 膜攻击阶段
膜攻击复合体（C5b6789n）形成
C5a C4b2b3b C5 C5b + C6 + C7 C5b67+C8 C5b678 + C9 C5b6789n (膜攻击复合体)细胞裂解
（4）体内还存在多种可溶性的和膜结合的补体调节因子，在它们 的配合和控制下，补体系统的激活或抑制处于精细的平衡状态。
第三节 补体的生物学作用
一、溶解靶细胞 C1~C9
1.抗感染作用 革兰阴性细菌 旁路途径 溶菌杀菌 细菌+相应抗体 经典途径 溶菌杀菌
2.导致组织损伤与疾病 红细胞+相应抗体 C1~C9 溶血反应
被屏障
暴露 C1q结 合位点
1.识别阶段
• 抗原-抗体复合物（EA）形成后，便结合C1中的C1q， 进而激活C1r和C1s，使C1变成有酶活性的C1 。
C1q
C1r
C1s
补体系统的激活
具有催化作用的分子
具有识别作用的分子
识别阶段
2.活化阶段
C3转化酶和C5转化酶的形成
活化的C1s依次酶解C4和C2，产生的C4b和C2b结 合为C4b2b，具有酶活性，称为C3转化酶。它可以 裂解C3，并与裂解片段C3b结合形成C4b2b3b，它 可以裂解C5，至此，完成了经典激活途径的活化阶 段。
补体的生物学功能
MBL 途径
经典途径

医学检验·各论 华(Wassermann)氏补体结合试
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别名： 梅毒血清补体结合试验,华氏反应。
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简介：
一种临床化验检查项目、又叫华氏反 应、化验标本为静脉血、参考值为阴性、 阳性可见于梅毒患者、其他疾病如回归热、 疟疾、红斑狼疮、瘤型麻风等也可呈阳性、 某些梅毒患者也可始终呈阴性反应。
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临床意义： 阳性：梅毒、雅司病。
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正常值： 阴性。
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相关检查：
灭活血清反应素试验、快速血浆反应素环 状卡片试验、寒冷凝集试验、虎红平板凝 集试验、补体结合试验、补体结合试验 （CFT）。
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相关症状： 梅毒肝、梅Wassermann)氏补体结合试验 >>>
相关疾病：
骨与关节梅毒、麻痹性痴呆、老年人梅毒 性心脏病、老年人神经梅毒、脊髓梅毒、 先天性梅毒、神经梅毒、梅毒性关节炎、 先天性梅毒性肝硬化、梅毒性心血管病、 三期梅毒、潜伏梅毒、一期梅毒、二期梅 毒、梅毒、非性病性梅毒。
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0.2 0.2 0.1 全溶血 •2 1：2000 0.1 0.2 0.2 0.1 全溶血 •3 1：3000 0.1 0.2 0.2 0.1 37℃ 全溶血 •4 1：4000 0.1 0.2 0.2 0.1 30分钟 全溶血 •5 1：5000 0.1 0.2 0.2 以最高稀释度的溶血素仍能产生完全溶血为最大有效反应管 0.1 大部分溶血 (1:4000)即为1个单位，一般试验使用2个单位(1:2000) 22 •6 1：6000 0.1 0.2 0.2
按以下公式计算50%溶血的总补体值
1
CH50（U/ml）= 释倍数
血清用量
×稀
总补体活性参考范围:50-100 U /ml 反应总体积2.5ml为常用
25
（三）方法评价
•CP-CH50测定经典途径总补体溶血
活性
•反应的是补体9种成分综合水平
•方法简便、快速，但敏感性较低 •影响因素多：缓冲液pH 、离子强度、
巴比妥缓冲液
2u溶血素
•1 •2 •3 •4 •5 •6 •7 •8
0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45
1.40 1.35 1.30 1.25 0.5 1.15 1.10 1.05
0.5 0.5 0.5 0.5 1.20 0.5 0.5 0.5
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.524
补体的活性有关，与补体的剂量依
赖呈S型曲线。
18
30%-70%呈直线，50%溶血为终点
19
（二）试验方法
•红细胞浓度的调整：2%~5%绵羊红
细胞（SRBC）悬液
•溶血素的配制：是以SRBC免疫家兔
所得的兔抗血清，即兔抗绵羊红细胞 抗体。试验前要灭活补体及进行溶血 素的稀释和滴定。

严重肝病尤其是肝坏死，可判断肝受损程度。
C第F十T呈包一括章：S补试体曲验结系合线统试和验指关和示系系统；，故通常取反应曲线中间部位即50％溶 补体测定技术
血（CH50）为判定终点。 该方法要用新鲜RBC、溶血素、豚鼠血清、影响因素多。
制备无C4的抗原抗体补体复合物（EAR4)
由于抗原抗体复合物激活的是补体的经典途径， C1～9任何一种成分缺陷都可使CH50降低，所以此 实验反映了总补体的活性。
原理及方法同前 临床意义： 正常参考值 男：0.86~2.52g/L;
女：0.86~2.06g/L 含量降低见于：反复感染、急性肾小球肾炎、 免疫复合物病、摸增生性肾小球肾炎
二. C4活性测定
1.原理：
去C4血清（氨水处理的豚鼠血清）+致敏绵羊红细
胞
红细胞不溶解+含有C4的待检血清
红细胞溶解
溶血程度与待检血清中C4活性
思考题 1.简述补体结合试验的原理。 2.补体结合试验如何观察结果？ 3.简述血清总补体溶血活性测定的原理。 4.为什么要以50%溶血作为判断终点。 5.简述血清总补体溶血活性测定的方法评 价及临床意义。 6. 简述C4活性测定的原理，及临床意 义。
制备无c4的抗原抗体补体复合物ear4将待检血清稀释一系列倍数加ear4孵育观察溶血程度方法同ch50测定第十一章补体结合试验和补体测定技术永州职业技术学院杨晓斌补体结合的经典途径激活物
第十一章 补体结合试验和 补体测定技术
永州职业技术学院 杨晓斌
第一节 补体结合试验CFT
一.原理 根据任何抗原抗体复合物可激活、固着 补体的特性，用一定量的补体和致敏红 细胞来检查抗原抗体间有无特异性结合 的一类试验 。
三. 方法评价 1.优点：敏感度高，特异性强。反应结果易 观察，不同物理性状的抗原均适用。不需特 殊设备，宜推广。 2. 缺点：操作复杂麻烦，补体易失活，待检 血清或抗原中可能有抗补体成分。 该实验优点多，缺点也突出。目前临床很少 用。

补体结合试验
一．
如果反应系统中抗原(或抗体)缺乏 ，或两者不对应，则反应的第一阶 段补体游离，与第二阶段加入的指 示系统结合出现溶血，补体结合试 验阴性。试验中将反应系统的待测 抗原(或抗体)作系列倍比稀释可作 定量测定。试验中以50%不溶血为 判断终点。
补体测定的应用
1.诊断病原体感染 2.检测补体的功能 3.补体单个成分及其裂解产物的测定 C1q、C3、C4、C3a和补体受体的测定等。 4.相关疾病时补体的检测 一． 免疫性疾病 二． 与补体有关的遗传性疾病 三． 补体含量显著降低的疾病 四． 高补体血症
经典途径补体总活性的测定
溶 血 %
豚鼠血清1:500
补体介导的溶血反应曲线源自经典途径补体总活性的测定2. 脂质体liposome均相免疫溶破法 一． 用脂质体做固相载体，脂质体内包有 荧光素、有色染料或酶等物质。脂质 体表面偶联抗原或抗体。 二． 当致敏的脂质体与相应的抗体或抗原 特异性结合后，经典途径激活补体， 导致脂质体溶破。 三． 释放出的脂质体内容物的量与补体活 性呈正相关。
补体测定的应用
5. 补体参与的试验 即利用补体作为试剂而设计的 实验: 一． HLA分型的补体依赖性细胞毒试验 二． 脂质体免疫试验 三． 免疫粘连血凝试验 四． 溶血空斑技术 五． 胶固素结合试验 六． C1q结合试验和补体结合试验 6. 流行病学调查
Proteins of the Complement system
Table 1. Proteins of the Complement system Classical Pathway Activation Proteins: C1qrs, C2, C3, C4 Lectin Pathway Alternative Pathway Lytic Pathway

试
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简介：
对人类有致病性的立克次体 (rickettsia)迄今已知约有20余种，我国 已证明有存在斑疹伤寒、恙虫病和Q热等 病，近年也发现有埃立克体感染。人感染 立克次体后，血清中可产生特异性抗体， 利用各种血清学试验方法检测血清抗体， 有助于诊断立克次体病。
相关检查： 补体结合试验、虎红平板凝集试验、胸部 B超 、胸部平片、胸部透视、立克次体凝 集试验。
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相关症状： 皮肤搔痒、严重腹腔感染、羊膜腔感染、 复杂性尿路感染、腹腔感染、产褥感染。
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相关疾病：
斑疹伤寒立克次体肺炎、立克次体病、立 氏立克次体斑疹热、西伯利亚立克次体斑 疹热、康诺尔立克次体斑疹热、立克次体 痘。
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临床意义：
先用低稀度血清初筛，然后再用病程 早期及晚期血清做双倍或4倍稀释以测效 价，如呈4～8倍增长者可明确诊断。恙虫 病有株间差异，可采用流行株同时检查。
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正常值： ＜1∶40。
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0.08×2 ：60＝0.2 ：X
60×0.2
X＝─────＝75
0.08×2
即将豚鼠血清用pH 7.4巴比妥缓冲液作1:75稀释后，每 0.2ml中含2个实用单位的补体。
3、抗原和抗体的滴定：
一般采用方阵滴定法，选择抗原与抗体均呈强 阳性反应的最高稀释度作为抗原和抗体的效价 （或单位）。正式试验时，抗原一般用2~4个 单位，抗体采用4个单位。
反应、指示系统竞争结合补体系统。先加入反应 系统，优先结合补体。若反应系统中待测的Ab（或 Ag）与已知Ag（或Ab）相对应，则Ag与Ab形成IC后 可结合补体；再加入指示系统时，因已没有游离的补 体而不出现溶血，为补体结合试验阳性。若不相对应， 将会有游离的补体参与指示系统的反应，最终会出现 溶血现象，为阴性。
8 1:1600│ 0.25 │ 0.15 │ 0.85 │ 0.25 │分│微溶
9 1:2000│ 0.25 │ 0.15 │ 0.85 │ 0.25 │钟│微溶
1. 10 1:2400│ 0.25 │ 0.15 │ 0.85 │ 0.25 │ │不溶
2. 11 1:3200│ 0.25 │ 0.15 │ 0.85 │ 0.25 │ │不溶
4、补体结合正式试验 按照讲义的表操作
应作抗原或血清对照管，SRBC、溶血素 对照管。
四、结果观察
1、管内液体混浊呈浅红色为不溶血，管内 液体透明呈红色为溶血。
2、第2、3、4管为对照管均应溶血，第5 管为绵羊红细胞对照不应溶血。凡第1管 红细胞发生溶血者为补体结合反应阴性， 而不溶血者为阳性。
3. 12 1:4000│ 0.25 │ 0.15 │ 0.85 │ 0.25 │ │不溶
4. 13 1:4800│ 0.25 │ 0.15 │ 0.85 │ 0.25 │ │不溶