高考生物二轮复习专题专练(29) 微生物的选择培养、鉴定和计数

微生物的培育、分别、计数专题主讲教师：毕诗秀【考试说明对微生物培育、分别和计数部分的要求】微生物的培育、分别、计数要求掌握程度参照本考（1）微生物的分别和培育试纲领中的：（2）某种微生物数目的测定二、考试的能力要求（3）培育基对微生物的选择利用2. 实验与研究能力一、微生物培育的基本程序二、分别微生物纯种的方法1.平板划线法：线的尾端菌液渐渐稀释若线的尾端没有出现单菌落，其可能的可能原由？2.稀释涂布（平板）法3.利用选择培育基进行分别如利用只含尿素为氮源的选择培育基分别尿素分解菌如利用只含纤维素为碳源的选择培育基分别纤维素分解菌4.利用鉴识培育基进行鉴识后分别三、微生物的计数1.液体稀释涂布（平板）法2.显微察看法：用血球计数板计数计数室（中央大方格）的长、宽和高分别为：1 mm 、 1 mm和 0. 1mm3计数室的容积：0.1mm （万分之一毫升）取样：稀释必定倍数的菌液3.比浊法记数微生物细胞数目多→培育液浊度大→发生散射光芒多→分光光度计测得的吸光值增添核酸是遗传物质的凭证北京四中：毕诗秀一、 DNA 是遗传物质的凭证体内细菌转变实验思虑：格里菲斯实验能颠覆“遗传物质是蛋白质”这一学说吗？该实验为以后科学家证明 DNA 是遗传物质供给了什么帮助？体外细菌转变实验问题：（ 1） 1 和 2 结果比较，说明？（2） 1 和 3 结果比较，说明？从整个实验中，你能得出什么结论？（3）艾弗里设计实验的思路是如何的？噬菌体侵染细菌的实验（1）如何对噬菌体进行标志？（2）采用 S 和 P 做标志的原由？（3）混淆时间是否是越长越好？（4）使用搅拌器作用是什么？（5）对搅拌后的培育液进行离心目的？（6）积淀和上清液中主要的成分是什么？（7）进行噬菌体侵染实验的目的？二、 RNA 是遗传物质的凭证（1）烟草花叶病毒感染烟草叶实验是如何做的？实验结论说了然什么结论？（2）病毒重修实验说明所生殖的病毒种类取决于；证明RNA 是遗传物质，能控制。

《微生物的选择培养与计数》导学案一、学习目标1、理解选择培养基的作用原理。

2、掌握稀释涂布平板法和显微镜直接计数法的操作过程。

3、学会通过实验数据进行微生物数量的计算和分析。

二、学习重难点1、重点（1）选择培养基的原理和应用。

（2）稀释涂布平板法的操作步骤和注意事项。

（3）微生物数量的计数方法和原理。

2、难点（1）如何从众多微生物中选择出所需的微生物。

（2）稀释度的确定和计算。

（3）显微镜直接计数法的误差分析。

三、知识梳理（一）选择培养基1、概念：在微生物学中，允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。

2、原理：根据不同微生物的特殊营养需求或对某种化学物质的敏感性不同，在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，从而达到选择的目的。

例如：以尿素为唯一氮源的培养基能够选择出能分解尿素的细菌；在培养基中加入高浓度的食盐，可以选择出金黄色葡萄球菌。

（二）微生物的选择培养1、方法（1）通过改变培养基的营养成分进行选择培养。

（2）控制培养条件（如温度、pH、氧气等）进行选择培养。

2、实例（1）从土壤中分离分解纤维素的微生物土壤中含有能分解纤维素的微生物，但数量较少。

要分离出这些微生物，需要制备以纤维素为唯一碳源的选择培养基。

在这种培养基上，只有能分解纤维素的微生物才能生长繁殖，其他微生物则被抑制。

（三）微生物的计数1、显微镜直接计数法（1）原理：利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。

（2）优点：快速、直观。

（3）缺点：不能区分死菌与活菌，且难以计数微小的细菌。

2、稀释涂布平板法（1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品中的一个活菌。

通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

（2）操作步骤①系列稀释操作a 将 1 g 土样放入 99 mL 无菌水中，制成 10^2 倍稀释液。

b 用移液管吸取 1 mL 10^2 倍稀释液，注入 9 mL 无菌水中，制成10^3 倍稀释液。

高考生物二轮复习专题突破—发酵工程（含解析）一、单项选择题1.(2021山东济南章丘二轮阶段性测试)下列有关微生物的培养技术的叙述,正确的是()A.加入链霉素或者伊红美兰的培养基属于选择培养基B.在以尿素作为唯一氮源的培养基中加入酚酞指示剂培养分解尿素的细菌C.对培养皿进行编号或对菌种进行标注时,应使用记号笔在皿底标记D.利用平板划线法可对微生物进行接种纯化、分离和计数2.(2021山东德州二模)温泉中含有能够分解淀粉的耐热古细菌,在固体培养基中,该类细菌分解淀粉会形成透明圈。

下图表示筛选能高效产生淀粉酶的耐热古细菌的过程。

下列分析正确的是()A.②过程是利用稀释涂布平板法分离并筛选耐热古细菌B.配制Ⅰ号培养基时需要加入琼脂,并且要先灭菌再调节pHC.为防止污染,需要对Ⅰ、Ⅱ号培养基及培养皿进行干热灭菌D.从Ⅰ号培养基中选择透明圈最小的菌落接种到Ⅱ号培养基上3.(2021山东聊城一模)金黄色葡萄球菌是细菌性肺炎的病原体之一。

细菌性肺炎一般需要注射或口服抗生素进行治疗,当细菌出现耐药性时疗效会下降。

A、B、C、D四种抗生素均可治疗金黄色葡萄球菌引起的肺炎。

为选出四种抗生素中疗效最佳的一种,研究者分别将含等剂量抗生素A、B、C、D的四张大小相同的滤纸片a、b、c、d置于金黄色葡萄球菌均匀分布的平板培养基上,在适宜条件下培养48 h,结果如下图所示。

下列相关叙述正确的是()A.对实验中使用的培养皿采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌B.A、B、C、D四种抗生素中,抑菌效果最佳的是抗生素DC.细菌出现耐药性是由于抗生素使细菌发生变异D.滤纸片b周围透明圈中出现一菌落,可能是该菌落发生了基因突变4.(2021山东济南一模)某学校生物兴趣小组利用萝卜、卷心菜等新鲜蔬菜为材料制作泡菜,并对发酵过程中乳酸菌、酵母菌细胞的数量和pH的变化进行了测定,结果如下图所示。

下列叙述错误的是()mL-1是指每毫升菌液可以形成的菌落总数的对数值。

1.2.2 微生物的选择培养和计数一、选择题1.如表所示为某微生物培养基的配方。

下列叙述中错误的是（）A.此培养基属于液体培养基，其中的碳源是（CH2O）B.配制培养基时，溶化后分装前，必须要进行的是调整pH和灭菌C.接种时应在酒精灯火焰附近操作D.若用该培养基选择培养尿素分解菌，应除去青霉素、加入纤维素粉2.若要通过稀释涂布平板法分离纯化土壤中的微生物，其正确操作步骤是（）①土壤取样；②称取1g土壤加入盛有99mL无菌水的锥形瓶中，制备10-2土壤稀释液；③吸取0.1mL土壤稀释液进行平板涂布；④依次将土壤稀释液稀释至浓度为10-3、10-4、10-5、10-6、10-7的溶液A.①②③④B.①③②④C.①②④③D.①④②③3.某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌数量，并从中筛选出能分解石油的细菌.下列操作错误的是（）A.利用平板划线法对细菌进行计数B.以石油为唯一碳源的培养基筛选C.采用稀释涂布平板法分离菌种D.称取和稀释土壤时应在火焰旁4.下列有关微生物分离、纯化及计数的叙述中，错误的是（）A.平板划线法通过连续划线将聚集的菌种分散并计数B.用富含尿素的培养基富集培养尿素分解菌C.稀释涂布平板法通过系列梯度稀释可将微生物分散D.用血细胞计数板计数微生物时，实验结果往往偏大5.在进行酵母菌计数时，某同学先将盖玻片放在血细胞计数板的计数室上，然后吸取摇匀的培养液，滴在盖玻片边缘，让培养液自行渗入。

如图是在显微镜下观察到的一个中方格的酵母菌分布情况，相关叙述正确的是（）A.用血细胞计数板计数酵母菌时只统计方格内的菌体B.探究酵母菌的种群数量变化可以用标志重捕法C.未对酵母菌染色会导致计数值比实际值偏小D.需要对该酵母菌培养液稀释后再重新计数6.下面关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的叙述中，正确的是（）A.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素B.筛选分解尿素的细菌时，应以尿素为培养基中唯一的营养物质C.统计样品中的活菌数目一般用平板划线法D.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,若指示剂变蓝，则表明筛选到了分解尿素的细菌7.在将样品稀释涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基之前，通常要进行选择培养，其目的是（）A.分离纤维素分解菌B.加快纤维素分解菌的生长速度C.使纤维素分解菌均匀地分布在稀释液中D.增加纤维素分解菌的密度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物8.如图表示采用富集方法从土壤中分离能降解对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。

高考生物高频考点67微生物的选择培养和计数一、选择题1．(2022·辽宁法库一中高三月考)“宁可一日无粮，不可一日无茶”，黑茶具有降血压、降血糖、降血脂、调理肠胃、消炎等独特功效，黑茶功效突出的原因在于其含有一种金花菌——冠突散囊菌(一种真菌)，使砖茶里面布满星星点点、密密麻麻的黄色“金花”。

下列有关从土壤中分离冠突散囊菌的叙述，错误的是()A．实验中为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行B．除了第一次划线需将接种环灼烧灭菌外，后续的划线可以不用灭菌即可划线C．用稀释涂布平板法对冠突散囊菌计数时，因细胞重叠，统计的菌落数会比实际值低D．因土壤中各类微生物的数量不同，故分离细菌和冠突散囊菌的稀释倍数不同答案 B2．(2022·山东肥城高三月考)餐厨垃圾中具有高效降解能力的微生物，可用于餐厨垃圾高效无害化处理，科研人员取一定量的餐厨样品，制备不同浓度的样品稀释液，并将样品接种于利用蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂配制的培养基表面进行培养并分离。

下列分析正确的是() A．牛肉膏主要为微生物提供氮源B．接种时需用力将菌种接种到培养基内C．稀释样品获得单个菌落以便判断菌种类型D．经过培养一定能筛选出高效降解能力的微生物答案 C3．屠宰场废弃血污不经过处理直接排放，会对环境造成污染。

传统的处理方法有填埋法和焚烧法等。

填埋法易造成地表环境、地下水资源污染。

焚烧法处理会造成大气污染，且废弃物中所含的蛋白资源不能得到有效利用。

研究人员以屠宰场血污堆积土壤为分离基质，利用血平板培养基(添加了动物血液)，分离出了高效降解血红蛋白的菌株，并初步用于降解废弃血液、生产氨基酸液态肥料。

下列叙述正确的是()A．上述菌株分离纯化过程中用到了稀释涂布平板法和平板划线法B．对分离纯化得到的菌株培养后进行计数，只能采用稀释涂布平板法C．血平板培养基上透明水解圈小的菌落分泌的蛋白酶的活性往往较高D．实验中废弃培养物含有降解血污的微生物，可以直接填埋答案 A解析对分离纯化得到的菌株培养后进行计数，可以采用稀释涂布平板法，也可以采用显微镜计数法进行直接计数，B错误；血平板培养基上透明水解圈大的菌落分泌的蛋白酶的活性往往较高，C错误；实验中废弃培养物含有降解血污的微生物，需要进行灭菌处理后在填埋，避免污染环境，D错误。

1.2.2 微生物的选择培养和计数一、选择题1.在培养基中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长。

利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出（）A.放线菌、霉菌、固氮细菌B.放线菌、金黄色葡萄球菌、固氮细菌C.放线菌、大肠杆菌、固氮细菌D.放线菌、乳酸菌、金黄色葡萄球菌2.某同学将1mL土壤样液稀释100倍，在3个平板上用稀释涂布平板法分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、57和58。

下列叙述错误的是（）A.可得出土壤样液中活菌数大约为5.7×107个/LB.此方法统计的菌落数往往比实际的活菌数目低C.一般选择菌落数在30—300的平板进行计数D.显微镜直接计数法统计的都是稀释液中活菌数3.血细胞计数板是对细胞进行计数的重要工具下列叙述正确的是（）A.每块血细胞计数板的正中央有1个计数室B.计数室的容积为1mm×1mm×0.1mmC.盖盖玻片之前，应用吸管直接向计数室滴加样液D.计数时，不应统计压在小方格角上的细胞4.下列有关分解纤维素的微生物的分离的叙述，说法错误的是（）A.纤维素酶中的C1酶和C X酶可以将纤维素分解为纤维二糖B.分离纤维素分解菌时，可在倒平板时加入刚果红染色，然后接种分解菌C.纤维素酶的发酵方法有液体发酵法和固体发酵法D.要增加纤维素分解菌的浓度，应使用固体培养基进行选择培养5.某生物兴趣小组尝试对土壤中分解尿素的细菌进行分离并计数，相关叙述正确的是（）A.制备选择培养基时，需加入尿素、琼脂、葡萄糖、硝酸盐等物质B.用活菌计数法统计结果，活菌的实际数目往往比统计的菌落数低C.脲酶将尿素分解成氨使培养基的pH降低，加入酚红指示剂后变红D.每克样品中的菌株数=（C÷V）×M，C为某一稀释度下平板上的平均菌落数6.（不定项）地衣芽孢杆菌具有调节动物肠道微生态平衡，增加动物机体抗病力的功能。