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离体蛙⼼灌流实验实验五离体蛙⼼灌流实验⼀实验⽬的1、了解蟾蜍离体⼼脏的灌流的⽅法。
2、观察细胞外液钾离⼦、钙离⼦浓度变化对⼼脏活动的影响。
⼆实验原理⼼脏离体后，如⽤⼈⼯灌流的⽅法，保持其新陈代谢的顺利进⾏，则⼼脏仍能有节律的⾃动收缩和舒张，并可维持较长的时间。
离体⼼脏所需的条件应与动物内环境的理化性质基本相近，因此改变灌流液的理化因素，则可引起⼼脏活动的变化。
1、任⽒液：正常对照含有NaCl、CaCl2、KCl、NaH2PO4、 Na2HPO4和蒸馏⽔，其电解质、晶体渗透压、pH值与蛙的组织液相近。
2、0.65%NaCl灌流：3、2%CaCl2灌流4、 1%KCl灌流5、1:10000 E 灌流6、1:10000 Ach灌流7、⼼得安β1受体阻断剂，抑制肾上腺素与β1受体结合，使E不能发挥作⽤。
8.、阿托品M受体阻断剂，抑制Ach减慢⼼率，加速房室传导，增加⼼房收缩⼒。
三实验器材微机⽣物信号处理系统， physiology系统，学校服务器系统，蟾蜍离体蛙⼼，任⽒液，1%KCl，3%CaCl2，65%NaCl，1/10000 E，⼼得安+1/10000,1/10000 Ach，阿托品+1/10000 Ach。
四实验步骤1、标本制备（观看视频）2、仪器及标本的连接3、具体软件操作：1）离⼦试剂：任⽒液→0.65%NaCl溶液→任⽒液清洗→1%KCl溶液→任溶液→任⽒液清洗⽒液清洗→2%CaCl22）药物试剂：肾上腺素（E）→任⽒液清洗→⼼得安→任⽒液清洗→Ach，任⽒液清洗→阿托品→任⽒液清洗。
五实验结果表1 离体蛙⼼灌流数据记录六结果分析此实验说明⼼脏具有⾃律性，兴奋性，传导性，收缩性，离体⼼脏静脉窦还能产⽣兴奋并传导到⼼房和⼼室，引起⼼脏有节律的兴奋和收缩。
体内细胞所直接⽣存的环境较为稳定，内环境的稳态是细胞、器官维持正常⽣存和活动的必要条件，所以改变灌流的溶液，会引起⼼脏收缩的改变。
实验4-4 蛙类离体心脏灌流引言离体心脏灌流实验是生理学中常用的方法之一。
不同种类的动物可以通过体表切口或开放胸骨来取出其心脏进行灌流。
而离体心脏灌流实验可以帮助研究者了解心脏的解剖学和生理学特征。
本实验将讲解如何进行蛙类离体心脏灌流实验。
实验器材和试剂1.蛙类（建议使用大型蛙类）。
2.离体心脏灌流系统，包括：- 离体心脏灌流装置（含灌流缓冲液、温度控制器等）。
- 稳压泵。
3.灌流缓冲液，常用的为Tyrode's盐溶液。
实验步骤1. 先将离体心脏灌流系统检查一遍，保证各项设备均运转正常。
2. 杀死一只蛙类，立即进行解剖，取出心脏，并将其迅速转移到灌流装置中。
在移植心脏时应注意不损伤其血管和肌肉组织。
在灌流系统中，除了心脏，不能有其他生物组织残留。
3. 确认灌流系统中的灌流缓冲液温度为20~25℃。
在开始灌流之前，要先排除灌流管路中的空气。
4. 打开灌流泵，根据所选择的灌流缓冲液flow rate控制注入速度，一般建议在3~8ml/min。
确保满足心脏需求的氧气和营养物质可以通过灌流液输送到心脏内部。
5. 注入灌流缓冲液的同时，对心脏进行观察，确认心脏速率、收缩波幅度等生理特征。
6. 加入适当的药物来研究心脏对药物的反应性。
此时应读取每个添加药物后的心脏特征和响应（如速率、波幅等）。
7. 在实验结束时，切断灌流管路和心脏连接，灌流系统中的灌流液应该被排除并清洁。
结果和分析离体心脏灌流实验可以观察心脏的生理学特征和对不同药物的反应，这有助于研究者了解心脏的生理学机制。
在进行本实验时，需要注意不仅仅是心脏的特征，还要关注灌流流量和药物导致的生理反应。
在实验的过程中，如果发现心脏节律不齐或收缩波幅度明显下降，这可能是灌流流量不足造成的。
而添加不同的药物，可以帮助研究者了解心脏的调控机制，同时也可以评估药物的疗效。
需要注意的是，不同种类的动物其心脏组织的特征也是不同的，因此需要根据具体的实验目的选择合适的动物进行实验。
离体心脏灌流实验报告离体心脏灌流实验报告心脏是人体最重要的器官之一，它的正常运转对于维持身体的正常功能至关重要。
然而，心脏病是全球范围内的一大健康问题，每年造成数百万人死亡。
为了更好地研究心脏病的发病机制以及开发新的治疗方法，离体心脏灌流实验成为了一种重要的研究手段。
离体心脏灌流实验是指将动物或人体心脏取出后，通过人工装置对其进行血液灌流，模拟体内环境，以便研究心脏的生理和病理过程。
这种实验方法可以提供更加精确和可控的条件，避免了体内环境的干扰，从而更好地研究心脏的功能和疾病。
在离体心脏灌流实验中，首先需要将动物或人体心脏取出，并迅速将其连接到灌流装置上。
灌流装置通常由氧气供应系统、血液泵、温度控制系统等组成，以模拟体内环境。
通过调节血液流速、氧气浓度和温度等参数，可以控制心脏的工作状态，观察其生理反应。
通过离体心脏灌流实验，研究人员可以观察心脏在不同条件下的工作情况，如心脏收缩力、心脏节律等。
同时，还可以通过添加特定的药物或激素，研究其对心脏功能的影响。
这种实验方法可以提供更加直接和准确的数据，有助于深入了解心脏病的发病机制。
除了研究心脏的生理功能外，离体心脏灌流实验还可以用于研究心脏疾病的发展过程。
例如，通过给心脏注射特定的病原体或药物，可以模拟心脏病的发病过程，观察心脏在不同阶段的变化。
这种实验方法可以为心脏病的早期诊断和治疗提供重要的参考。
然而，离体心脏灌流实验也存在一些限制。
首先，由于实验条件的局限性，离体心脏灌流实验无法完全模拟人体内复杂的生理环境，因此得到的结果可能与实际情况存在一定的差异。
其次，由于需要使用动物或人体心脏进行实验，涉及到伦理和道德问题，需要严格遵守相关法律和伦理规定。
尽管存在一些限制，离体心脏灌流实验仍然是研究心脏病的重要手段之一。
通过这种实验方法，研究人员可以更加深入地了解心脏的生理和病理过程，为心脏病的预防和治疗提供重要的理论依据。
未来，随着技术的不断进步，离体心脏灌流实验将进一步发展，为心脏病研究带来更多的突破。
离体蛙心灌流实验报告
实验目的，通过离体蛙心灌流实验，观察心脏在不同药物作用下的生理变化，
为心脏药理学研究提供实验数据。
实验材料与方法，取新鲜的蛙心，进行离体灌流实验。
首先，将蛙心置于离体
心脏灌流装置中，通过主动脉插管进行心脏灌流。
然后，分别加入不同药物溶液，如肾上腺素、乙酰胆碱等，观察心脏的生理变化。
实验过程中，记录心脏的心率、收缩力、舒张力等指标，并进行统计分析。
实验结果，在加入肾上腺素后，观察到蛙心的心率明显增加，心脏收缩力增强，舒张力减弱；而在加入乙酰胆碱后，心率明显减慢，心脏收缩力减弱，舒张力增强。
这些结果表明，肾上腺素具有增强心脏收缩力和加快心率的作用，而乙酰胆碱则具有减慢心率和减弱心脏收缩力的作用。
实验讨论，离体蛙心灌流实验是一种常用的心脏药理学研究方法，通过模拟体
内环境，观察心脏在不同药物作用下的生理变化。
本实验结果与心脏药理学理论相符，说明离体蛙心灌流实验是一种可靠的实验方法，能够为心脏药理学研究提供重要数据。
结论，通过离体蛙心灌流实验，我们观察到了心脏在不同药物作用下的生理变化，验证了心脏药理学理论。
这为心脏药物的研发和临床应用提供了重要参考，也为心脏疾病的治疗提供了新的思路和方法。
在今后的研究中，我们将进一步探索心脏药物的作用机制，寻找更多有效的心
脏药物，并将离体蛙心灌流实验应用于心脏药理学研究的更多领域，为心脏疾病的治疗和预防做出更大的贡献。
通过本次实验，我们对离体蛙心灌流实验有了更深入的了解，并对心脏药理学
研究有了更加清晰的认识。
希望本实验能为相关领域的研究工作提供一定的参考和帮助。
一、实验目的1. 熟悉离体心脏灌流技术的基本操作。
2. 观察和分析不同生理、病理因素对离体心脏功能的影响。
3. 掌握记录和分析心脏功能指标的方法。
二、实验原理离体心脏灌流实验是生理学研究中常用的一种方法，通过将心脏从机体中取出，在体外模拟生理环境条件下进行灌流，观察和分析心脏功能的变化。
实验中，通过改变灌流液的成分、温度、pH值等条件，可以研究不同因素对心脏功能的影响。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：青蛙、蛙心夹、蛙板、蛙类手术器械、二道仪、任氏液、长滴管、铁支架、玻璃管、量筒、秒表等。
2. 实验仪器：显微镜、电子天平、恒温器、恒温水浴箱、高压消毒锅等。
四、实验方法与步骤1. 实验准备（1）取一只青蛙，用蛙类手术器械进行解剖，暴露心脏。
（2）将心脏夹在蛙心夹上，用线固定在蛙板上。
（3）在心脏主动脉下方穿一线，结扎并留出一段备用。
（4）将心脏主动脉左支结扎，于动脉圆锥处剪一向心斜切口，插入灌流管。
2. 灌流实验（1）将灌流管一端插入恒温器中的任氏液中，另一端与心脏主动脉相连。
（2）调整恒温器，使任氏液温度保持恒定。
（3）开启灌流泵，使任氏液以恒定速度灌流心脏。
（4）观察心脏收缩情况，记录心率、收缩幅度等指标。
（5）依次改变灌流液的成分、温度、pH值等条件，观察心脏功能的变化。
3. 实验数据记录与分析（1）记录不同灌流条件下心脏的心率、收缩幅度等指标。
（2）分析不同生理、病理因素对离体心脏功能的影响。
（3）绘制心脏功能曲线，分析实验结果。
五、实验结果与分析1. 灌流液中加入肾上腺素后，离体心脏心率加快，收缩幅度增强。
2. 灌流液中加入乙酰胆碱后，离体心脏心率减慢，收缩幅度减弱。
3. 降低灌流液温度后，离体心脏心率减慢，收缩幅度减弱。
4. 提高灌流液pH值后，离体心脏心率加快，收缩幅度增强。
六、实验结论1. 肾上腺素和乙酰胆碱对离体心脏功能具有调节作用，肾上腺素使心脏兴奋，乙酰胆碱使心脏抑制。
2. 温度和pH值对离体心脏功能有显著影响，低温和碱性环境有利于心脏功能的维持。
一、实验目的1. 掌握离体心脏灌流技术的基本操作方法。
2. 观察不同生理和化学因素对离体心脏活动的影响。
3. 了解心脏生理学中离子和体液调节在心脏功能中的作用。
二、实验原理心脏的正常节律性活动依赖于其内环境的稳定性。
离体心脏灌流实验通过在体外模拟心脏的生理环境，研究各种因素对心脏功能的影响。
实验中，离体心脏被置于特定的灌流液中，通过改变灌流液的成分，可以观察心脏的收缩、舒张以及心率等生理指标的变化。
三、实验材料1. 实验动物：青蛙或鱼类。
2. 实验器材：蛙心夹、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿、棉线、任氏液、生理盐水、NaCl、KCl、CaCl2、乳酸、肾上腺素、乙酰胆碱等。
3. 实验试剂：任氏液、生理盐水、0.65%NaCl、2%CaCl2、1%KCl、3%乳酸、1:10000肾上腺素、1:10000乙酰胆碱等。
四、实验方法与步骤1. 蛙心插管法：将青蛙双毁髓后背位置于蜡盘中，暴露心脏，并在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎。
用蛙心夹固定心脏，将刺激电极插入心室。
2. 灌流液准备：将任氏液或生理盐水加热至37℃，保持恒温。
3. 灌流系统建立：将蛙心夹连接到张力传感器，通过支架固定。
将灌流液从灌流瓶经滴管缓慢滴入蛙心夹，通过张力传感器记录心脏的收缩和舒张。
4. 实验操作：a. 记录正常心脏灌流下的心率和收缩幅度。
b. 分别向灌流液中加入不同浓度的NaCl、KCl、CaCl2、乳酸、肾上腺素、乙酰胆碱等试剂，观察心脏活动的变化。
c. 重复上述步骤，观察不同因素对心脏活动的影响。
五、实验结果与分析1. 正常心脏灌流：在正常灌流条件下，心脏呈现规律的节律性收缩，心率和收缩幅度稳定。
2. NaCl：低浓度NaCl对心脏活动影响较小，高浓度NaCl会导致心率减慢，收缩幅度降低。
3. KCl：低浓度KCl对心脏活动影响较小，高浓度KCl会导致心率加快，收缩幅度降低。
4. CaCl2：低浓度CaCl2对心脏活动影响较小，高浓度CaCl2会导致心率加快，收缩幅度增强。
实验22 蛙类离体心脏灌流【目的要求】1．学习斯氏或八木氏离体蛙心灌流法。
2．观察Na+、K+、Ca2+及肾上腺素、乙酰胆碱等对离体心脏活动的影响。
【基本原理】心肌具有自动节律性收缩活动的特性，可用人工灌流的方法研究心脏活动的规律及其特点，还可通过改变灌流液的成分或加入某些药物来观察其对心脏活动的影响。
【动物与器材】蟾蜍或蛙、蛙心套管（斯氏套管或八木氏套管）、常用手术器械、蛙心夹、套管夹、记纹鼓及通用杠杆或记录仪与张力换能器、万能滑轮、多用仪或刺激器、蜡盘、滴管、培养皿或小烧杯、任氏液、5%NaCl溶液、2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1∶100000肾上腺素溶液、1∶10000O0乙酰胆碱溶液、300u/ml肝素溶液。
【方法与步骤】1．离体蛙心的制备制备离体蛙心的方法有两种。
(1)斯氏蛙心插管法取一只蟾蜍或蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按实验19暴露心脏。
仔细识别心脏周围的大血管（参见图4-1，4-2）。
在左主动脉下方穿一线，距动脉圆锥2-3mm处结扎。
再从左、右两主动脉下方穿一线，打一活结备用。
左手提起左主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在动脉圆锥前端，沿向心方向剪一斜口，然后将盛有少量任氏液（内加入一滴肝素抗凝）的斯氏蛙心套管由此开口处插入动脉圆锥（图4-8）。
当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后方及心尖方向推进。
经主动脉瓣插入心室腔内（于心室收缩时插入）。
不可插得过深，以免心壁堵住套管下口。
此时可见套管中液面随心脏搏动而上下移动，用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液，提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管扎紧（不得漏液），再将结线固定在套管的小玻璃钩上。
剪断结扎线上方的血管。
轻轻提起套管和心脏，在心脏下方绕一线，将左右肺静脉、前后腔静脉一起结扎，注意保留静脉窦与心脏的联系，切勿损伤静脉窦，于结扎线的外侧剪去所有牵连的组织，将心脏离体。
用任氏液反复冲洗心室内余血，使灌流液不再有血液。
保持套管内液面高度恒定（1.5—2cm），即可进行实验。
(2)八木氏蛙心插管法取一只蟾蜍或蛙，同上法暴露心脏。
于左主动脉下方穿一线，再用蛙心夹夹住心尖，使心脏轻轻吊起（参见图4-2），将线向后绕过左、右前腔静脉，左、右肺静脉及右主动脉支，结扎后剪断，也可分别结扎。
再将心脏翻向头端，用线结扎右肝静脉及后腔静脉（勿伤静脉窦），剪断。
于左肝静脉下方穿一线，打一活结备用，用眼科剪沿向心方向剪一斜口，将装有灌流液的八木氏静脉套管从开口处插入肝静脉（尖端勿伤静脉窦）。
若套管插入静脉，则心脏的颜色变浅，此时可继续加入灌流液。
将心脏内余血冲洗干净，然后扎紧静脉套管（图4-9）。
在左主动脉下方穿一条线，先用眼科剪将动脉剪一小口，再将动脉套管沿向心方向插入动脉（尖端不深入动脉圆锥），此时可见套管中有灌流液流出，随即扎紧套管，剪断左主动脉及左肝静脉，使心脏完全离体。
将套管稳妥地固定在灌流支架上，调节两个套管的方向，使灌流液在心缩时能畅通地搏出心室，从动脉套管流出，即可进行实验2．将插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹住心尖（不可夹得过多，以免漏液）。
用记纹鼓记录时，将蛙心夹上的系线与通用杠杆相连（图4-10），调节心搏曲线记录、刺激及记时电磁标三只笔尖与记纹鼓面需接触良好。
如用记录仪描记，则将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与张力换能器相连（图4-11）。
注意：勿使灌流液滴到换能器上。
3．实验观察(1)开动慢鼓记录正常心搏曲线。
(2)向套管内加2—6滴5%NaCl溶液，用电磁标作好加药标记，观察心搏曲线的频率及振幅的变化。
当曲线出现明显变化时，立即吸去套管中的灌流液（作好冲洗标记），用新鲜任氏液清洗2—3次，待心搏恢复正常。
(3)向套管内加入1滴2%CaCl2溶液，观察并记录心搏曲线的变化。
当出现明显变化时，立即更换任氏液（方法同上），待心搏恢复正常。
(4)向套管中加1－2滴1%KCl溶液，记录心搏曲线的变化。
当心搏曲线变化时，立即同(2)法更换灌流液，待心搏恢复。
(5)同(2)法记录套管中加入1—2滴1∶100000肾上腺素溶液后心搏曲线的变化。
(6)同(2)法记录套管中加入1—2滴1∶1000000乙酰胆碱溶液后心搏的变化。
4．将心脏搏动变化的情况填入表4-2。
表4-2几种离子及药物对离体心脏活动的影响【思考题】1．此实验说明心肌有哪些生理特性？2．以本实验为例说明内环境相对恒定的重要意义。
3．各种离子和药物对心搏有何影响，为什么？哺乳动物离体心脏灌流实验哺乳动物离体心脏灌流实验一、实验目的和原理心脏从动物体摘取之后，用有一定压力、温度（37℃）并充氧的修正洛氏液经主动脉根部灌流。
灌流液经冠状动脉口进入冠状血管营养心脏，以维持心脏的节律性活动。
灌流液经冠状血管流入右心房，然后由腔静脉口及肺动脉口流出，在单位时间内的流出量即为冠状动脉血流量（冠脉流量）。
心脏活动可通过张力换能器进行记录，也可用压力换能器（心室内放置水囊）进行记录。
了解哺乳类动物心脏离体灌流方法（Langendorff 氏法）和离体心脏冠脉血流量的测定灌流。
观察肾上腺素、乙酰胆碱对心脏活动及冠脉流量的影响。
二、实验动物大鼠三、实验器材与药品哺乳动物类手术器械一套，注射器，针头，线绳，鼠手术台，灌流液瓶，心脏Langendorff 法灌流装置，恒温循环器，滑轮，烧杯，量筒，修正洛氏液，1:10000,肾上腺素，1:10000 乙酰胆碱。
四、实验方法和步骤1．Langendorff 灌流装置包括恒温、恒压灌流和供气三个部分。
[attach]3[/attach](1).修正洛氏液的配置：成分如下原液 1000ml 2000ml20%NaCl (ml) 45 9010%kCl (ml) 4.2 8.410%CaCl (ml) 2.4 4.85%NaHCO3 (ml) 3 6葡萄糖 2.5 5注意事项：(1)先加蒸馏水(总体积90%左右)，再依次加入上述试剂，但加NaHCO3时应逐滴加入，并不断摇晃混匀，防止形成CaCO3沉淀，最后再加入蒸馏水，补足液体量。
(2).将灌流系统用胶管连接，灌流液瓶灌满灌流液。
调整灌流液瓶的高度使灌流压力达到实验要求，一般要求灌流液瓶中心管的下端距心脏的高度为70～90cm，可按心脏的大小而适当调整。
(3).混合气瓶（或球胆）的减压阀出口用软管接至灌流管内的充气管，调节气瓶上的减压阀，使灌流液中的气泡连续且小而均匀。
(4).调节恒温循环器使心脏插管内的灌流液温度恒定在37℃左右。
为了保证离体心脏的表面有一定的温度和湿度，将心脏置于由玻璃或有机玻璃制成的保温灌流槽内。
保温灌流槽的底部有漏斗形的开口，上方盖子盖住可以保持槽内温度恒定.2．标本制备(1).摘取心脏：取心脏前20min，大鼠腹腔注射肝素液抗凝((3125μ/kg)。
取心脏时腹腔麻醉(20%氨基甲酸乙酯，3ml/kg)后，固定仰置于手术台上。
迅速沿胸前壁正中剪开皮肤，打开胸腔，轻轻提起心脏，小心剪断腔静脉、主动脉及心脏周围组织，迅速将心脏连同一段主动脉取出。
手术过程中注意不要损伤心脏，主动脉根部要留0.5~1cm 长度以备插管用。
心脏取出后立刻置于预先备好的充氧的冷克氏液（4℃左右）中，用手指轻压心室以利于其中的剩余的血排出，防止凝血块形成。
心脏停跳后，迅速剪开心包膜并剪去心脏周围的组织（包括肺组织、气管以及附着于心脏上的其他组织），认清主动脉、腔静脉及肺动脉的解剖位置，在主动脉根部穿一棉线备用。
(2).灌流心脏：将主动脉套进心脏插管口内，用棉线将主动脉和心脏插管结扎在一起并固定。
插管进入主动脉不宜过深，以免损伤主动脉瓣及堵住冠状动脉开口，影响冠状血管的灌流。
心脏经充氧的温修正洛氏液灌流后，在lmin 内即可开始恢复跳动，但起初心率较慢，并常有心律不齐，以后逐渐变快而且心律也逐步恢复正常和稳定（大鼠心脏的心率约200～300 次／min），可维持数小时。
3．仪器参数设置显示方式：采集频率800HZ；通道1：心肌收缩，扫描速度1.0s/div，灵敏度2.5g，时间常数直流，滤波频率30HZ。
4．用蛙心夹在心室舒张期夹住心尖，并将连接蛙心夹的丝线通过滑轮连至张力换能器，调节与张力换能器相连丝线的松紧度，使心肌前负荷约5g，记录心脏活动。
5．调节固定保温灌流槽，使保温灌流槽罩住心脏。
灌流液进入冠状血管后到右心房经腔静脉及肺动脉滴入双层灌流槽中，经槽底部的漏斗形开口流出，用量筒收集一定时间内的流出液即为冠脉流量。
流量基本稳定后，进行下列各项观察。
五、实验观察项目1．记录正常情况下的冠脉流量（ml/min）和心脏活动作为对照。
2．由心脏插管的侧管注入1:10000 肾上腺素溶液0.5ml，观察冠脉流量和心脏活动的变化。
3．由心脏插管的侧管注入1:10000 乙酰胆碱溶液0.5ml，观察冠脉流量和心脏活动的变化。
六、实验结果分析记录和测量各种处理前后冠脉流量和心肌收缩张力、心率，并进行统计处理。
七、实验注意事项1．制作离体心脏标本时操作要迅速，不要损伤心脏。
2．灌流压力和灌流液温度要严格维持恒定。
3．冠状血管要保持通畅。
4．注射各种药物时要观察其影响流量的全过程。
