离体蛙心灌流实验

实验八蛙心灌流一、实验目的1、学习斯氏离体蛙心灌流法2、了解心肌的生理特性。

3、观察、、及肾上腺素（Adr）、乙酰胆碱（ACh）对离体心脏活动的影响。

二、实验原理维持心脏正常收缩的节律和强度，需要有一个适当的理化环境（离子的浓度、比例、溶液的酸碱度、环境温度等），这种环境条件稍有改变，便可影响心脏的正常活动。

心脏的正常节律性活动必须在适宜的理化环境里才能维持，一旦适宜的理化环境被干扰或破坏，心脏活动就会受到影响。

心脏受植物性神经的双重支配，交感神经兴奋时，其未梢释放去甲肾上腺素，使心肌收缩力加强，传导增快，心率加快；而迷走神经兴奋时，其未梢释放乙酰胆碱，使心肌收缩力减弱，心率减慢。

把离体蟾蜍心脏，即失去了神经支配的蟾蜍心脏保持在适宜的环境中，在一定时间内其仍能产生节律性兴奋和收缩活动。

这是由于蟾蜍的静脉窦能够自动按照一定的节律产生兴奋，并传导到其他心肌细胞，从而引起整个心脏有节律地兴奋和收缩。

离体心脏灌流，是在有控制的条件下研究体液因素以及药物对心肌作用机制的重要实验方法。

两栖类动物心脏无冠状循环，心肌的血液供应直接来自心室腔，故灌流时套管插入心室腔内，但灌流哺乳动物心脏时则须通过冠状血管。

本实验是将蛙心离体后，用人工配制理化特性近似蛙血浆的任氏溶液灌流，在一定时间内，可保持节律性收缩和舒张，如改变任氏液的组成成分或浓度，心脏活动的强度和频率将受到影响。

三、动物与器材实验动物：蟾蜍4只/组。

实验器材：蟾蜍解剖器械、生物/桥式前置、刺激/记录电极、蛙心插管、万向轮、蛙心夹、线、滴管、培养皿、支架、木夹、蛙针。

实验试剂：任氏液（含肝素）、0.65%NaCl溶液、2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1∶5000去甲肾上腺素溶液、1∶10000乙酰胆碱溶液、**品溶液、1％乳酸、2.5％NaHCO3。

四、方法与步骤一）离体蛙心制备用刺蛙针捣毁蛙的脑和脊髓，将蛙仰卧固定于蛙板上。

打开胸腔，剪开心包膜，暴露心脏。

蛙类离体心脏灌流一、【目的要求】1、学习离体蛙心灌流法。

2、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh),乳酸对离体心脏活动的影响。

二、【原理】将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。

心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。

外源性给予去甲肾上腺素或乙酰胆碱可产生类似心交感神经或迷走神经兴奋时对心脏的作用。

三、【实验仪器】青蛙、常用手术器械、蛙板(或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、棉线、任氏液。

套管夹、0．65％NaCl、2％CaCl2、1％KCl、1：10000肾上腺素、1：10000乙酰肌碱、3%乳酸。

四、【方法与步骤】1、斯氏蛙心插管法（1）一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按前面的方法暴露心脏。

仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。

在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。

再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。

左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。

选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内2～3 cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。

当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。

此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)。

用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。

蛙类离体心脏灌流一、【目的要求】1、学习离体蛙心灌流法。

2、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh),乳酸对离体心脏活动的影响。

二、【原理】将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。

心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。

外源性给予去甲肾上腺素或乙酰胆碱可产生类似心交感神经或迷走神经兴奋时对心脏的作用。

三、【实验仪器】青蛙、常用手术器械、蛙板(或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、棉线、任氏液。

套管夹、0．65％NaCl、2％CaCl2、1％KCl、1：10000肾上腺素、1：10000乙酰肌碱、3%乳酸。

四、【方法与步骤】1、斯氏蛙心插管法（1）一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按前面的方法暴露心脏。

仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。

在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。

再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。

左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。

选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内2～3 cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。

当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。

此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)。

用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。

一、实验目的学习离体蛙心灌流方法，并观察温度、不同离子、神经递质及酸碱度等因素对心脏活动的影像，加深理解内环境相对稳定的生理学意义。

二、实验原理窦房结或静脉窦是心脏节律性活动的正常起搏点，但要维持心脏的正常纪律性活动，还需要一个适宜的理化环境（即相对稳定的内环境）。

因此，利用蟾蜍的离体心脏，用理化特性近似于血浆的任氏液灌流，在一定时间内仍能保持节律性的舒缩活动。

改变灌流液的成分，这种节律性的舒缩活动会随之发生改变，说明内环境理化因素的相对稳定是维持心脏正常节律性活动的必要条件。

三、实验材料蟾蜍，蛙类手术器材，蛙钉，蛙板，双凹夹，试管夹，蛙心插管，蛙心夹，滴管，张力换能器，滑轮，任氏液，40摄氏度任氏液，无钙任氏液，0.65%NaCl,2%CaCl,1%KCl。

四、实验步骤暴露心脏：取蟾蜍一只，用探针刺毁脑和脊髓后，将蟾蜍仰卧固定在蛙板上，用镊子提起胸骨后端腹部的皮肤，剪一小口，然后将剪刀由切口伸入皮下，向左右两侧锁骨外侧方向剪开皮肤，并向头端掀开皮肤。

用镊子提起胸骨后端的腹肌，在腹肌上，剪一小口，将大剪刀伸入胸腔内，剪断胸肋骨和左右锁骨，使创口成一个倒三角形。

用小镊子提起心包膜，用小剪将心包膜剪开，暴露心脏。

插蛙心：插管用连线蛙心夹在心室舒张期夹住心尖约1mm。

将蛙板倒转，使动物头端靠近实验者。

结扎右主动脉，在左主动脉下穿一线以备固定插管用。

用小剪在靠近动脉圆锥处，朝心脏方向将左主动脉斜形剪开一半（注意：既要剪破血管让血流通出，又不把血管剪断）。

取一管尖大小适宜的蛙心插管，注入少量任氏液入管内，左手用小镊子夹住切口上缘轻轻上提，使切口扩大。

右手持蛙心插管插入动脉内，直达动脉圆锥，然后左手放下镊子，轻轻向右提起蛙心夹上的连线，使心室与动脉圆锥成一直线。

在心室收缩时，右手向前并略向左推动蛙心插管，使之进入心室（如进入心室，插管中的液面会随着心室的舒缩而上下移动）。

最后结扎插管并将结扎线固定于插管侧面的小钩上，防止标本滑落。

离体蛙心灌流实验目的学习离体蛙心灌流的方法；观察钠、钾、钙三种离子对心脏活动的影响。

观察肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。

实验器材动物：蟾蜍器材：斯氏蛙心套管、套管夹、常用手术器械、任氏液、张力换能器、蛙心夹、0.65%NaCl 溶液、5%NaCl溶液、2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1:5000肾上腺素溶液、1:10000乙酰胆碱溶液、300u/ml肝素溶液实验方法与步骤1、离体蛙心的制备：双毁髓→左主动脉结扎→左右两主动脉下方活结备用→剪口，插管（管内盛任氏液与肝素）→结扎备用线（套管＋左右主动脉）→剪断动脉→结扎并剪断静脉。

2、固定套管并用任氏液换洗血液；进入RM6240系统。

3、观察并记录正常心搏曲线；4、向套管内分别加入以下溶液（0.65%NaCl溶液2d 、5%NaCl溶液2d 、1%KCl溶液1-2d 、2%CaCl2溶液1d 、1:5000肾上腺素溶液1-2d 、1:10000乙酰胆碱溶液1-2d ），观察并记录曲线变化。

实验结果此图为蛙心正常心搏曲线此图为换入0.65% Nacl溶液后蛙心收缩曲线的变化由波形图可知，Nacl可使心肌收缩能力减弱，心率减慢，导致心率曲线幅度减小。

此图为加入5%Nacl溶液后蛙心收缩曲线的变化有波形图可知，向任氏液中加入5%Nacl之后心搏曲线的幅度大大降低。

此图为加入Kcl溶液后蛙心收缩曲线的变化KCl导致心脏肌细胞收缩能力减弱，心率减慢。

此图为加入Cacl2溶液后蛙心收缩曲线的变化可使心肌收缩能力增强，心率加快，导致心率曲线幅度由上图可知，CaCl2增加。

此图为加入肾上腺素后蛙心收缩曲线的变化由波形图可知，肾上腺素可使心肌收缩力增强，心率加快。

此图为加入乙酰胆碱后蛙心收缩曲线的变化由上图可知，乙酰胆碱可使心肌收缩能力减弱，心率减慢，导致心率曲线幅度降低。

实验结果分析离体蛙心仍可具有揭露性收缩，是因为作为蛙心正常起搏点的经脉都（其功能相当于人体心脏的窦房结）能产生自动节律，通过传导系统维持心脏的波动，心脏正常德节律性兴奋和收缩活动必须在适宜的礼花环境才能维持，一旦适宜的环境被干扰或破坏，心脏后东就会受到影响。

离体蛙心灌流实验原理veronica 心脏正常的节律性活动必须在适宜的理化环境中进行,一旦适宜的环境被破坏,例如酸碱度及离子浓度的急剧改变等,心脏的活动就会受到影响.在整体内,心脏的活动受自主神经的双重支配,交感神经兴奋时,其末梢释放去甲肾上腺素,使心肌收缩力量增强,心率加快;而迷走神经兴奋时,其末梢释放乙酰胆碱,使心肌收缩力量减弱,心率减慢.强心甙类药物能够增强心肌收缩能力,减慢心率.蟾蜍心脏离体后,用理化特性近似于血浆的Ringer氏液灌流,在一定时间内,可保持其比较稳定的节律性收缩和舒张.改变Ringer氏液的组成成分,如改变Na+、K+、Ca2+ 的浓度及酸、碱度等,心脏跳动的频率和幅度就会发生相应的改变.K+对心脏活动的影响:总体看来心脏对细胞外K+浓度变化比较敏感;但不同部位心肌的敏感性不同,心房肌最敏感,房室束-浦肯野纤维系统次之,窦房结敏感性较低.细胞外[K+]↑时,对兴奋性的影响与其浓度升高的程度有关.当[K+]轻度或中度升高时,细胞内外[K+]梯度减小,K+外流力量减小,静息电位(RP)的绝对值减小,和阈电位(TP)的差值减小,细胞的兴奋性升高;当[K+]大幅度升高时, RP的绝对值减小到-55mv时,钠通道的开放效率降低,钠通道逐渐失活,细胞的兴奋性降低或丧失,严重时,可导致心肌停搏于舒张状态.此时,仅由Ca2+来构成动作电位,故上升支小而缓慢,使兴奋传导性降低.当细胞外[K+]↑时,细胞膜对钾的通透性升高,心室肌细胞复极过程加速,平台期缩短,不应期也缩短.高钾对心肌收缩功能有抑制作用.因为细胞外的钾和钙在细胞膜上有竞争性抑制,因此当膜外[K+]↑时,平台期内流的Ca2+减少,心肌细胞内的Ca2+浓度难于升高,减小了Ca2+的兴奋-收缩偶联作用,从而减低了心肌的收缩能力.4期自动除极速度减慢,导致窦房结自律性降低,心律减慢. Ca2+对心脏活动的影响:细胞外Ca2+在心肌细胞膜上对Na+的内流有竞争性的抑制作用,称为膜屏障作用.因此,细胞外Ca2+浓度发生变化时,与Na+的内流和Ca2+的内流相关的电活动都将受到影响,而对静息电位则无明显作用.当细胞外Ca2+浓度↑时,对Na+的屏障作用↑,由于这种抑制作用,触发Na+快速内流产生0期去极化就比较困难,即TP上移,从而与RP的差距增大,兴奋性降低;发生兴奋后,Na+内流的抑制则导致0期去极化速度和幅度降低,传导性下降.Ca2+内流是慢反应细胞0期去极化和快反应细胞2期的主要离子活动.当细胞外Ca2+浓度↑,使Ca2+内流加快,慢反应细胞0期去极化加快加强,传导性升高.细胞膜对Ca2+的通透性升高,心室肌细胞平台期Ca2+内流增加,心肌收缩力增强增快;当细胞外Ca2+浓度过高时,心脏将停搏于收缩状态,称为钙僵直.去甲肾上腺素对心脏活动的影响:去甲肾上腺素与心肌细胞膜上的β肾上腺素能受体结合,激活腺苷酸环化酶(AC),使细胞内cAMP浓度升高,激活PKA和细胞内的蛋白质磷酸化过程,使心肌细胞膜上的钙通道激活,动作电位平台期Ca2+内流增加,心肌收缩力增强;另外去甲肾上腺素能加强4期的内向电流If,使心率加快.乙酰胆碱对心脏活动的影响:乙酰胆碱与心肌细胞膜上的M型胆碱能受体结合,抑制AC,细胞内cAMP浓度降低,肌浆网释放的Ca2+减少,心肌的收缩力量减弱,心率减慢.乙酰胆碱与窦房结细胞膜上的Ikach通道结合,促进K+的外流,最大复极电位增大,自律性降低,此外还抑制4期的内向电流If,使心率减慢.%NaCl对心脏活动的影响:%NaCl对蟾蜍来说使等渗溶液,完全置换任氏液后,细胞外的Ca2+浓度,K+浓度大大降低,使心肌的收缩能力减弱,心率减慢.3%乳酸对心脏活动的影响:乳酸的PH值较低,当加入乳酸后,细胞外H+浓度升高,H+和Ca2+离子竞争性结合肌钙蛋白的结合位点,抑制Ca2+离子与肌钙蛋白结合,心肌收缩力量减弱.当再加入%NaHCO3后,解除了H+对Ca2+离子的竞争性作用,Ca2+离子又可与肌钙蛋白结合,心肌收缩力量恢复.。

一、实验目的1. 熟悉离体蛙心灌流实验的基本原理和操作步骤。

2. 学习观察和分析理化因素对蛙心活动的影响。

3. 提高实验操作技能和数据分析能力。

二、实验原理离体蛙心灌流实验是生理学实验中常用的方法之一，主要用于研究心脏的生理功能和调节机制。

实验过程中，将蛙心从体内取出，通过人工灌流的方式，模拟心脏在体内的生理环境，观察和分析理化因素对心脏活动的影响。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：蛙、任氏液、生理盐水、KCl溶液、CaCl2溶液、肾上腺素、乙酰胆碱、心得安、阿托品等。

2. 实验仪器：蛙心夹、蛙心套管、显微镜、二道生理记录仪、张力传感器、滴管、培养皿等。

四、实验步骤1. 蛙心提取：将蛙处死，剪开胸腔，取出心脏。

2. 蛙心插管：将蛙心夹夹住心脏尖部，用线固定在蛙板上，松紧以动脉、心房、心室拉直呈水平位为合适。

在主动脉分支下预埋一条棉线做一虚结备用。

将主动脉左支上端结扎，在近动脉球处剪一向心斜切口，左手用眼科镊提起切口缘，右手将注有任氏液的斯氏套管插入动脉干内，然后走手持左侧血管分支上的结扎线向外拉，右手将蛙心套管送入动脉球。

3. 蛙心灌流：将蛙心套管与张力传感器相连，通过滴管向套管内加入任氏液，使心脏在灌流液中保持正常生理活动。

4. 观察和分析：观察心脏的活动情况，记录心脏收缩频率、幅度等指标。

分别向灌流液中加入不同浓度的KCl溶液、CaCl2溶液、肾上腺素、乙酰胆碱、心得安、阿托品等，观察和分析理化因素对心脏活动的影响。

五、实验结果与分析1. 正常心脏活动：在正常灌流液中，心脏保持节律性收缩，收缩频率约为60-80次/分钟，收缩幅度较大。

2. KCl溶液对心脏活动的影响：加入低浓度KCl溶液后，心脏收缩频率减慢，幅度减小；加入高浓度KCl溶液后，心脏出现纤颤，最终停止跳动。

3. CaCl2溶液对心脏活动的影响：加入低浓度CaCl2溶液后，心脏收缩频率加快，幅度增大；加入高浓度CaCl2溶液后，心脏出现纤颤，最终停止跳动。

实验八蛙心灌流钱涛生命科学院一、实验目的1、学习斯氏离体蛙心灌流法2、了解心肌的生理特性。

3、观察、、及肾上腺素（Adr）、乙酰胆碱（ACh）对离体心脏活动的影响。

二、实验原理维持心脏正常收缩的节律和强度，需要有一个适当的理化环境（离子的浓度、比例、溶液的酸碱度、环境温度等），这种环境条件稍有改变，便可影响心脏的正常活动。

心脏的正常节律性活动必须在适宜的理化环境里才能维持，一旦适宜的理化环境被干扰或破坏，心脏活动就会受到影响。

心脏受植物性神经的双重支配，交感神经兴奋时，其未梢释放去甲肾上腺素，使心肌收缩力加强，传导增快，心率加快；而迷走神经兴奋时，其未梢释放乙酰胆碱，使心肌收缩力减弱，心率减慢。

把离体蟾蜍心脏，即失去了神经支配的蟾蜍心脏保持在适宜的环境中，在一定时间内其仍能产生节律性兴奋和收缩活动。

这是由于蟾蜍的静脉窦能够自动按照一定的节律产生兴奋，并传导到其他心肌细胞，从而引起整个心脏有节律地兴奋和收缩。

离体心脏灌流，是在有控制的条件下研究体液因素以及药物对心肌作用机制的重要实验方法。

两栖类动物心脏无冠状循环，心肌的血液供应直接来自心室腔，故灌流时套管插入心室腔内，但灌流哺乳动物心脏时则须通过冠状血管。

本实验是将蛙心离体后，用人工配制理化特性近似蛙血浆的任氏溶液灌流，在一定时间内，可保持节律性收缩和舒张，如改变任氏液的组成成分或浓度，心脏活动的强度和频率将受到影响。

三、动物与器材实验动物：蟾蜍4只/组。

实验器材：蟾蜍解剖器械、生物/桥式前置、刺激/记录电极、蛙心插管、万向轮、蛙心夹、线、滴管、培养皿、支架、木夹、蛙针。

实验试剂：任氏液（含肝素）、0.65%NaCl溶液、2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1∶5000去甲肾上腺素溶液、1∶10000乙酰胆碱溶液、阿托品溶液、1％乳酸、2.5％NaHCO3。

四、方法与步骤一）离体蛙心制备用刺蛙针捣毁蛙的脑和脊髓，将蛙仰卧固定于蛙板上。

打开胸腔，剪开心包膜，暴露心脏。