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目的：规范检验操作，确保检验结果的准确可靠。
适用范围：适用于L—苯丙氨酸的检验.责任者:化验员。
名称:L-苯丙氨酸（L-Phenylalanine）化学名：L—α-氨基—β—苯丙酸（L-α-Amino-β-phenylpropionic Acid）结构式：分子式：C9H11NO2分子量：165。
19 CAS： 63—91-2一、中国药典2005年版（CP2005）本品为L—α-氨基-β-苯丙酸。
按干燥品计算，含C9H11NO2不得少于98。
5％。
在热水中易溶，在水中略溶，在乙醇中不溶；在稀酸或氢氧化钠试液中易溶.检验操作规程：1。
性状：本品为白色结晶或结晶性粉末；无臭，味微苦。
1。
1取本品适量于白色干净纸上观察，可轻闻其味道。
2。
比旋度：本品比旋度范围为－33。
0°至－35.0°2.1样品溶液:取本品1g，精密称定至0。
0001g，加水溶解并稀释成50ml的溶液（每1ml 中约含20mg的溶液）。
样品溶解一定要完全,可用超声机助溶，溶解完溶液需澄清.2.2空白溶剂：取溶解样品用超纯水适量.2.3测定：用读数至0。
001°并经过检定的旋光计检测。
将测定管用空白溶剂冲洗数次，缓缓注入空白溶剂适量（注意勿使发生气泡，测定管两端的玻璃镜片要擦拭干净），置于旋光计内校正读数,即空白溶剂的旋光度要为0.校正完毕以后用相同的方法检测样品溶液并记录下来，用同法读取旋光度3次，取3次的平均数。
2.4计算:比旋度＝V×αL× m× （1－W)式中：V-—稀释倍数；α——所测旋光度的均值；L——测定用管的长度(dm）m——称样量；W--样品的干燥失重量2。
5以上溶液及测定的过程一定要调节温度至20℃±0.5℃3.鉴别:本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(光谱集983图)一致。
4.酸度：本品的pH值应为5。
4~6.0。
4.1pH计校正用标准缓冲液的配置。
90. 苯丙酮尿症概述苯丙酮尿症（phenylketonuria,PKU）是由于苯丙氨酸羟化酶（phenyalanine hydroxylase，PAH）缺乏引起血苯丙氨酸（phenylalanine,Phe）浓度增高，并引起一系列临床症状的常染色体隐性遗传病。
苯丙酮尿症是高苯丙氨酸血症的主要类型。
病因和流行病学PAH 基因变异导致PAH 活性降低或缺乏是PKU 的主要病因。
苯丙氨酸是人体必需氨基酸，其代谢所需的苯丙氨酸羟化酶（PAH）活性降低或缺乏，使苯丙氨酸不能转化为酪氨酸(tyrosine，Tyr)，酪氨酸及其他正常代谢产物合成减少，血液中Phe 含量增加，影响中枢神经系统发育。
同时次要代谢途径增强，生成苯丙酮酸、苯乙酸和苯乳酸，并从尿中大量排出，苯乳酸使患儿的尿液具有特殊的鼠尿臭味。
PAH 缺乏症发病率在不同种族和地区有差异。
爱尔兰约为1/4500，北欧、东亚约为1/10 000，日本约为1/143 000。
我国平均发病率为1/11 800。
根据血Phe 浓度将PAH 缺乏症分为：轻度HPA(120~360μmol/L) 、轻度PKU(360~1200μmol/L)、经典型PKU(≥1200μmol/L)。
临床表现PKU 患儿在新生儿期多无临床症状，出生3～4 个月后逐渐出现典型症状，1 岁时症状明显。
出生数月后因黑色素合成不足，其毛发和虹膜色泽逐渐变浅，为黄色或棕黄色，皮肤白。
由于尿液、汗液含有大量苯乳酸而有鼠尿臭味。
随着年龄增长，逐渐表现出智能发育迟缓，以认知发育障碍为主、小头畸形、癫痫发作，也可出现行为、性格等异常，如多动、自残、攻击、自闭症、自卑、忧郁等神经系统表现。
婴儿期还常出现呕吐、湿疹等。
辅助检查1.血苯丙氨酸测定（1）荧光定量法：检测干血滤纸片中Phe 浓度，正常血Phe 浓度<120μmol/L （2mg/dl），血Phe 浓度>120 μmol/L 提示高苯丙氨酸血症。
最新：新生儿遗传代谢病筛查实验室检测技术规范专家共识摘要我国遗传代谢病筛查实验室众多，在仪器配置、检测方法、阳性切值、管理流程及质量控制等方面存在差异，不同实验室间的检测结果难以比较。
为实现同质化管理，提高筛查质量，中华预防医学会出生缺陷预防与控制专业委员会新生儿遗传代谢病筛查学组和国家卫生健康委员会临床检验中心新生儿遗传代谢病筛查室间质评专业委员会，联合制定新生儿遗传代谢病筛查实验室检测技术规范共识，为全国筛查实验室提供质量管理标准,促进筛查技术的规范化应用。
新生儿遗传代谢病筛查是指在新生儿期对严重危害新生儿健康的先天性、遗传性疾病实施的专项检查，涉及多学科、多部门，由筛查管理、实验室检测、诊治随访三大部分组成［1,21新生儿遗传代谢病筛查实验室检测分为检验前、检验中和检验后3个环节，参与的机构和人员较多，且各筛查实验室在仪器配置、检测方法、阳性切值、管理流程及质量控制等方面存在一定差异，不同实验室间的检测结果难以比较，迫切需要对筛查实验室检测流程进行规范,以实现不同地区间的同质化管理，切实提高筛查质量［3,4］O为此，中华预防医学会出生缺陷预防与控制专业委员会新生儿遗传代谢病筛查学组和国家卫生健康委员会临床检验中心新生儿遗传代谢病筛查室间质评专业委员会组织专家，参考国内外最新文献及我国新生儿遗传代谢病筛查实践经验，制定了新生儿遗传代谢病筛查实验室技术规范共识，以督促各实验室加强质量管理，提供标准化的筛查服务，促进遗传代谢病筛查相关技术的规范应用。
本共识适用于承担新生儿高苯丙氨酸血症(Kyperpheny1a1aninemia,HPAX先天性甲状腺功能减退症(congenita1hypothyroidism,CH∖先天性肾上腺皮质增生症(congenita1adrena1hyperp1asia,CAH\葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(g1ucose-6-phosphatedehydrogenase,G6PD)缺乏症，以及使用串联质谱法对多种遗传代谢病进行筛查的新生儿遗传代谢病筛查中心。
苯丙氨酸定量检测试剂盒（荧光法）说明书【产品名称】通用名称：英文名称：【包装规格】【预期用途】【检验原理】【主要组成成分】【储存条件及有效期】【适用机型】【样本要求】【检验方法】【参考值（参考范围）】【检验结果的解释】【检验方法的局限性】【产品性能指标】【注意事项】【参考文献】【生产企业】【医疗器械生产企业许可证编号】【医疗器械注册证书编号】【产品标准编号】【说明书批准及修改日期】【产品名称产品名称】】通用名称：苯丙氨酸定量检测试剂盒（荧光法） 英文名称：Phenylalanine Kit （FA ） 【包装规格包装规格】】96人份/盒 480人份/盒 【预期用途预期用途】】用于定量检测采集在S&S 903# 滤纸上的新生儿全血样品中苯丙氨酸的浓度。
适用于新生儿苯丙酮尿症（PKU ）的筛查，仅用于体外检测。
苯丙酮尿症（简称PKU ）是一种较常见的常染色体隐性遗传性氨基酸代谢病，发病率约1/10,000。
本病可因苯丙氨酸羟化酶缺乏引起，也可因辅酶因子BH 4缺陷引起。
这些缺陷致使苯丙氨酸不能被转化为酪氨酸，导致大量的苯丙氨酸及其代谢产物在体内堆积，引起中枢神经系统损害。
其临床主要表现为：发育迟缓，毛发、皮肤及虹膜变浅，癫痫，进行性智力低下等。
由于本病的早期发现早期治疗，对患儿的生长发育、智力发育不受影响，因此被我国列为新生儿疾病筛查项目之一。
检测方法还有细菌抑制法、酶法等。
【检验原理检验原理】】在含有琥珀酸缓冲液、二肽溶液和茚三酮溶液的混合液中，茚三酮可以和苯丙氨酸反应，产生一种荧光物质，其中二肽可提高此荧光反应，琥珀酸缓冲液控制PH 5.8±0.1，可保证理想的荧光值和最大的特异性，加入铜溶液后可以使荧光化合物更加稳定并终止反应。
使用荧光读数仪（激发光390nm ，发射光486nm ）测定荧光物质的强弱，即可反映苯丙氨酸的浓度。
【主要组成成分主要组成成分】】名称96人份/盒 480人份/盒 包装琥珀酸缓冲液 （琥珀酸）5ml /瓶 25ml /瓶无色透明玻璃瓶 或白色塑料瓶二肽溶液 （L-leucyl-L-alanine ） 1 ml /瓶 5ml /瓶 茚三酮溶液（茚三酮）2 ml /瓶 10m l/瓶 铜溶液（碳酸钠、酒石酸钾纳、硫酸铜） 25ml /瓶 125m l/瓶96孔微孔板（透明） 1块 5块无色透明塑料袋96孔微孔板（白色）1块 5块 标准血片S 1～S6 （0.24、1.06、2.76、5.32、8.34、13.47 mg/dl ） 1份 2份 铝箔袋质控血片C1、C2 1份2份说明书 1份 质量验证单1份注：标准品或质控血片的浓度若有改变，将在试剂盒内放通知单，同时电话通知。
新生儿疾病筛查检验技术新生儿疾病筛查技术是指用于检测新生儿某些危害严重的先天性遗传代谢性疾病的先进实验室检测技术。
从而早期诊断、早期治疗。
根据我国《母婴保健法》要求至少开展先天性甲低（CH）和苯丙酮尿症（PKU）两项筛查。
CH和PKU患儿在出生后往往缺乏疾病的特异表现，一般要到月龄6个月才逐渐出现固有的临床症状，并日趋加重。
然而，一旦出现了疾病的临床症状，表明疾病已进入了晚期。
即使治疗，智力低下等也难以恢复；相反，若能在出生不久即发现疾病，及时治疗，极大多数患儿能正常发育，其智力亦可达到正常人的水平。
筛查试验结果是早期发现阳性患儿的唯一指征，因此筛查实验室的管理和规范是整个筛查环节的重中之重。
一、苯丙氨酸测定（一）检验方法学以苯丙氨酸（Phe）作为新生儿疾病苯丙酮尿症的筛查指标。
筛查方法主要有荧光分析法、定量酶法、细菌抑制法和串联质谱法。
1.荧光分析法（1）原理：从干滤纸血片上提取出的苯丙氨酸，与茚三酮形成一种荧光化合物。
在激发光波长390nm，发射波长485nm处测定荧光强度。
苯丙氨酸含量与荧光强度成正比，通过检测已知浓度的标准血斑的荧光值并绘制曲线，可求得各样本的苯丙氨酸浓度。
试验中加入二肽L亮氨酰-L丙氨酸后可大大增强此荧光反应，用琥珀酸盐缓冲液严格控制反应条件pH在5.8±0.1，保证理想的荧光值和最大的特异性。
加入铜试剂进一步增强反应并降低背景。
（2）器材：荧光读数仪、60℃恒温孵育箱、孵育/振荡仪、3.2mm打孔器或打孔钳、加样器、八道加样器。
（3）试剂：苯丙氨酸标准品（phenylalanine calibrtors）、苯丙氨酸质控品（phenylalanine controls）、硫酸锌试剂（zinc sulfate reagent）、PKU试剂即茚三酮（PKU reagent）、铜试剂（copper reagent）、PKU 复溶缓冲液（PKU Reconstitution buffer（内含琥珀酸钠缓冲液L 亮氨酰-L丙氨酸和防腐剂）、白色微孔板96孔（white microtiter plate）。
氨基酸的荧光光谱测定一、实验目的1. 了解荧光分析法的基本原理2. 学会荧光光谱仪的操作3. 通过实验了解荧光分析法的定性定量分析应用。
二、实验原理荧光是分子从激发态的最低振动能级回到原来基态时发射的光。
利用物质被光照射后产生的荧光辐射对该物质进行定性分析和定量分析的方法，称为荧光分析。
在一定光源强度下，若保持激发波长λex不变，扫描得到的荧光强度与发射波长λem的关系曲线，称为荧光发射光谱；反之，保持λem不变，扫描得到的荧光强度与λex的关系曲线，则称为荧光激发光谱。
在一定条件下，荧光强度与物质浓度成正比，即F=KC这是荧光定量的基础。
以荧光强度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，在相同的条件下，测样品的荧光强度，从标准曲线上求出含量。
恒波长同步荧光分析法是在同时扫描过程中使激发波长（λem）和发射波长保持固定波长间隔（△λ=λ—λex=常数）。
酪氨酸（Tyr）、色em氨酸（Trp）、苯丙氨酸（Phe）是天然氨基酸中仅有的能发射荧光的组分，可以用荧光分析法测定。
它们的激发光谱和发射光谱有互相重叠的现象。
同步扫描荧光光谱技术可以简化、窄化光谱，减小光谱的重叠性，减小散射光影响，提高选择性。
三、仪器与试剂1. LS-55型荧光光谱仪；2. 移液管、容量瓶、烧杯；3. 氨基酸储备液：色氨酸4μg/mL ：准确称取0.004g色氨酸，溶于少量水中，超声20分种，至完全溶解，移至100mL容量瓶中用水定容,低温保存。
使用时稀释10倍。
苯丙氨酸100μg/mL：准确称取0.01g苯丙氨酸，溶于少量水中，超声15分钟，至完全溶解，移入100mL溶量瓶中用水定容。
低温保存。
4. 去离子水四、实验内容与步骤1. 色氨酸标准溶液的配制：取4个50mL容量瓶，以次加入0.5, 1.0,1.5,2.0mL4μg/mL使用溶液，加去离水定容至刻度，此色氨酸浓度为0.04 , 0.08, 0.12 , 0.16μg/mL 。
串联质谱法和荧光分析法检测滤纸干血片苯丙氨酸的比较田国力;王燕敏;许洪平;郭静;周卓;姚静【摘要】目的比较荧光分析法和串联质谱法检测滤纸干血片上苯丙氨酸(Phe)水平的分布和差异,为实验室开展新生儿高苯丙氨酸血症(HPA)的筛查提供方法学依据.方法选择进行遗传代谢病筛查的滤纸干血片样本62 510例.采用荧光分析法和串联质谱法同步检测新生儿滤纸干血片的Phe浓度,同时还用串联质谱法检测酪氨酸(Tyr)浓度.采用配对Wilcoxon检验和等级相关分析评价2种方法间的差异和相关性,采用Bland-Altman一致性分析评价2种方法间的一致性.结果荧光分析法和串联质谱法均在62 510例新生儿滤纸干血片样本中检出3例HPA,敏感性均为100％.荧光分析法的阳性预期值为33.3％,串联质谱法的阳性预期值为18.8％,若联合Phe/Tyr比值,串联质谱法的阳性预期值可达100％.正常新生儿Phe浓度呈偏态分布,荧光分析法和串联质谱法检测结果＜60 μmol/L者分别占96.31％和95.08％,≥120 μmol/L者仅占0.01％和0.03％.荧光分析法的测定值先低于串联质谱法,至97％位点(Phe≈63 μmol/L)处基本持平,然后逐渐高于串联质谱法,2种方法的测定值呈正相关(r=0.43,P＜0.01).以不同浓度的Phe测定值作Bland-Altman分析,Phe浓度越高,2种方法的偏移越小,Phe＞120 μmol/L的19个样本点全部落在95％的一致性限内,2种方法有很好的一致性,检测结果有可替代性.结论荧光分析法和串联质谱法检测Phe在低浓度时有差异,高浓度时一致性好.2种方法对于HPA的临床判断无影响,均能用于新生儿筛查.串联质谱法可同时检测Phe和Tyr浓度,若联合Phe/Tyr比值,检出HPA的阳性预期值很高.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2016(031)009【总页数】6页(P814-819)【关键词】苯丙氨酸;串联质谱法;荧光分析法;滤纸干血片样本【作者】田国力;王燕敏;许洪平;郭静;周卓;姚静【作者单位】上海交通大学附属儿童医院新生儿筛查中心,上海200040;上海交通大学附属儿童医院新生儿筛查中心,上海200040;上海交通大学附属儿童医院新生儿筛查中心,上海200040;上海交通大学附属儿童医院新生儿筛查中心,上海200040;上海交通大学附属儿童医院新生儿筛查中心,上海200040;上海交通大学附属儿童医院新生儿筛查中心,上海200040【正文语种】中文【中图分类】R446.1高苯丙氨酸血症（hyperphenylalaninemia，HPA）是一种常见的遗传代谢病，是由于体内苯丙氨酸羟化酶（phenylalanine hydroxylase，PA H）活性降低或其辅酶四氢生物蝶呤（tetrahydrobiopterin，BH4）缺乏，导致苯丙氨酸（phenylalanine，Phe）向酪氨酸（tyrosine，Tyr）代谢受阻，血液和组织中Phe浓度增高，Tyr浓度降低。
