XXXXXXXXXXXXX仪器设备标准操作规程
1 目的：建立ELSD 2000ES蒸发光散射检测器标准操作规程。
2 范围：ELSD 2000ES蒸发光散射检测器。
3 责任：化验室操作者。
4 内容：
4.1 接通电源：打开仪器后面板上的电源开关，接通ELSD2000ES电源。操作窗口出现，窗口给出仪器为“待机状态”，并有一个计时器显示仪器在此状态下有多少时间。仪器将自动显示上一次运行关机前最后所采用的方法设置。
4.2 操作窗口：操作窗口是仪器运行时主显示窗口。此窗口提供当前运行方法的以下信息：
·方法：当前加载方法的名称。
·漂移管温度：漂移管的设定温度及当前实际温度读数，单位为℃。
·气体流量：雾化器气体的设定流量及当前实际流量，单位为L/min。
·放大系数：当前放大系数的设定值（可能的数值为1、2、4、8和16）。设定为1代表信号没有放大，随每次放大系数的增大信号基于原数值放大两倍。
·撞击器：当前撞击器的位置，依据当前使用的方法为开或关。
·输出值：当仪器处于“运行”状态时，显示以mV为单位的信号值。当仪器处于“待机”状态时，显示“Standby”和待机时间。
·满量程电压：满量程电压的设置（根据所用数据采集系统设定为10mV或1000mV）。
·出错总数：当前发生的操作错误的总数（如果有的话）。
·窗口键：用于改变仪器状态或进入其他窗口的功能。
【Edit】：快捷键，从“运行”窗口直接切换到“编辑方法”窗口。
【Menu】：从“待机”或“运行”窗口切换到“菜单”窗口。
【Standby】：将仪器从“运行”窗口切换到“待机”状态。
【Zero】：在“运行”窗口下将输出信号调零。
【Run】：运行当前方法的设置，将仪器从“待机”状态切换到“运行”状态。
4.3 仪器状态：ELSD 2000ES有两种不同的操作状态：“待机”（‘Standby’）和“运行”（‘Run’），仪器当前的状态显示在操作窗口上。
4.3.1 待机状态：检测器通电后立即进入“待机”状态。在此状态下，激光，气流，和漂移管加热器都处于关闭状态。操作窗口显示“待机”字样和计时器表示的待机时间。可执行的窗口键是【Menu】和【Run】。
4.3.2 运行状态：在运行状态下，激光，气流，和漂移管加热器都处于打开状态，撞击器状态与设置状态相吻合。输出信号值会有显示。操作窗口会以mV 为单位显示信号输出值。【Edit】，【Menu】，【Standby】和【Zero】窗口键是可执行的。
5日常操作：
5.1 安全：
请遵守以下条例保证ELSD 2000ES操作安全：
1. 实验室保持良好通风以防止溶剂蒸汽积聚。
2. 使用通风柜或其他通风设备以防止吸入排气管逸漏的溶剂烟雾。
3. 在使用可燃溶剂时避免使用明火和点火。
4. 使用惰性气体，最好是氮气，用于含有有机溶剂的流动相的雾化。
5. 请勿除去仪器的盖子，除非在Alltech人员的指导下。
6. 在除去盖子前先切断电源。
注意：内部元件可能很烫。当心：避免眼睛直接接触激光。
7. 使用出错继电器功能防止ELSD 2000ES在不适当的条件下运行。
5.2 操作注意事项：
1. 在撞击器‘开’的模式下，监视500mL废液瓶中液体的高度，需要时倒掉过量的液体。或者，将废液管浸没于放置于地面的大容器的液面下，从而无须经常倒掉过量液体。在撞击器‘关’的模式下，无须经常查看废液瓶，因为无废液排出。
注意：在台面上只能使用仪器提供的500mL废液瓶。较大的容器必须放置于地面上。
2. 当漂移管未达到适当的蒸发温度或雾化气体关闭时，流动相不应开启。否则流动相可能在漂移管中积聚。
3. 重要：只有挥发性的缓冲液允许加入到流动相中。非挥发性缓冲液的颗粒将会被检测器作为样品检测，引起许多基线噪音。
4. 每天检查排气管和浓缩冷阱。如需要倒掉冷凝液体。请勿让瓶子装满，因为这样会造成排出气体通过冷凝液翻气泡，从而增加噪音。
5.3 重要的操作参数：
为每个应用选择最佳参数设置来优化ELSD 2000ES的性能。雾化气体的流量、流动相流速、漂移管温度、和撞击器的位置是获得最佳结果所必须优化的参数。以下段落叙述每个参数和提供建议选择适当的设置：
1. 撞击器的位置：对于每个应用撞击器的正确位置取决于流动相的组成和流速，和被分析物的挥发性。关键是在灵敏度和流动相的充分挥发之间取得适当的平衡。撞击器‘关’的位置最适用于低流量/高含水量的流动相（≤1.0mL/min），或者高有机含量流动相条件下分析非挥发性样品。这一设置将所有样品全部送到光检测池检测以获得最大灵敏度。
撞击器‘开’位置最适用于高流量/高含水量流动相下分析样品，或者分析半挥发性样品。在撞击器开模式下，部分气溶胶旁路到废液管，所以最大流速达5.0mL/min的流动相包括急变梯度下也能获得充分的挥发。撞击器‘开’是分析半挥发性化合物的理想设置，因为允许使用更低的漂移管温度以获得更好的灵敏度。
注意：在高有机含量的流动相下，只有当被分析物是半挥发性化合物时，才使用撞击器开模式。否则，灵敏度被不必要地降低。
2. 雾化气体流量：雾化气体的流量决定雾化时形成的液滴大小。气体流量越高形成的液滴越小，比大尺寸的液滴更容易蒸发。另一方面，小颗粒散射光少，因此比大颗粒产生的信号小。必须用实验来决定产生最佳信号噪音比时的气体流量。适当气体流量的选择很大程度上取决于撞击器位置的设置。
撞击器‘关’：获得有效雾化时的最低气体流量能产生最大信号输出。
撞击器‘开’：撞击器‘开’的模式下所采用的气体流量一般比撞击器‘关’的模式下所采用的气体流量要低许多。流动相流速为1.0mL/min时，气体流量一般为2.2L/min左右或更低。高流动相流速需要高气体流量。如果气体流量设置的太大，则比此漂移管温度下能够充分蒸发的液滴多的液滴将通过撞击器，结果造成基线噪音。如果气体流量设置得太低，那么产生的液滴可能太大以至于增加在撞击过程中的样品损耗大，结果是灵敏度降低。
3. 流动相流速：
撞击器‘关’：撞击器‘关’的设置能够实际用于流速最高不超过1.5mL/min的高有机含量流动相，以及流速不超过1.0mL/min的高含水流动相。流动相流速越高要求气体流量越大、漂移管温度越高，因此使用流动相流速越低越好。
采用微径柱代替4.6mm内径的标准型分析柱允许使用较低的溶剂流速而不影响保留时间。例如，2.1mm内径分析柱采用0.2mL/min流速相当于4.6mm内径的分析柱采用1.0mL/min流速。由于样品的稀释降低，内径越小的分析柱相对于标准型分析柱提高灵敏度。
撞击器‘开’：撞击器‘开’的模式能用于流动相流速高达5.0mL/min的条件下，包括流动相为高含水量和/或急变梯度条件下。
4. 漂移管的温度：适当的漂移管温度设置是基于流动相的挥发性和流速，雾化器的气体流量，和被分析化合物的挥发性。漂移管的温度选择范围是25℃-120℃，以1℃为单位递增。为应用选择的撞击器设置将反映以下这些参数：撞击器‘关’：水性溶剂和挥发性缓冲液比有机溶剂蒸发所需的漂移管温度来的高。流动相流速越高要求漂移管温度越高。气体流量越低产生的液滴越大，因此流动相蒸发所需要的漂移管温度越高。撞击‘关’的模式一般比撞击器‘开’的模式采用较高漂移管温度和更广的范围。
注意：如果漂移管温度设置过高，将产生基线噪音。溶剂可能在雾化器中沸腾而造成雾化不好。当运行一个梯度时，根据最难蒸发的流动相组分来优化参数。
撞击器‘开’：撞击器‘开’的应用比撞击器‘关’的模式要求较低的漂移管温度，一般为约低50℃或更低。一般40℃的温度就足以蒸发流速为1.0mL/min的高水含量流动相。流动相的流速越高要求温度越高。半挥发性化合物甚至能在更低
的漂移管温度下分析以获得更高的灵敏度。如果漂移管温度设定得太高，那么半挥发性化合物太容易被蒸发。如果漂移管温度设定得太低，那么由于流动相蒸发不完全而产生基线噪音。理想的设定温度是在不牺牲灵敏度的条件下产生可以接受的底噪音基线时所使用的最低温度。
5.4 开机程序：
1. 根据电路连接和流路连接，准备仪器，如需要也连接出错继电器。
2. 开启雾化器气体供应。将压力表设定在65-80psig之间。
3. 打开ELSD 2000ES的电源。
4. 当操作窗口出现后，建立所需的方法和配置。
5. 按[Run]键运行方法。
6. 让漂移管温度达到它的设定值。
7. 记录只有气体打开时的基线10-15分钟，观察前面板上显示的以及色谱图上的信号输出。基线必须是稳定，低噪音。噪音必须在毫伏范围，±0.5mV。
8. 如果基线是不稳定和/或漂移，仪器可能还没有达到设定温度。在撞击器‘开’的模式下，只有漂移管温度加热区域是升温的。可通过前面板直接查看漂移管温度。在撞击器‘关’的模式下有两个加热区，漂移管和雾化器。两个区域都必须达到设定温度。能在《Manual Control》的窗口下同时监视这两个温度。
注意：如果从撞击器‘关’的模式转到撞击器‘开’的模式下，这可能需要一点时间等雾化器温度下降并达到平衡。典型的平衡状态下雾化器温度为12-20℃。在这种情况下，可用《Manual Control》窗口来监视雾化器的温度。
9. 如果噪音比预期的大，可能需要做光源测试来确定激光或者电路是否有问题。
10. 在分析柱连接到检测器前，先用流动相冲洗分析柱。冲洗的时间取决于
分析柱存储时间和曾经使用的样品和流动相的类型。在连接到ELSD前确定分析柱没有硅胶‘颗粒’或其它污染物洗脱下来。ELSD 2000ES会很灵敏地检测污染物。
11. 分析柱经过冲洗后，连接到检测器左侧面板上的液体输入接口处（LIQUID INLET）。分析柱和雾化器之间的连接管应尽可能的短。推荐使用0.005″ID的输入管。
12. 将HPLC泵开启，调节到所需的流速。请不要超过推荐的最大溶剂流速。
13. 如有需要时，请检查连接是否有泄漏，并拧紧接头。
14. 观察显示面板上的信号输出，并记录基线。在泵打开时信号初始升高之后，几分钟内信号水平应回落到接近于只有气体打开时的信号水平。如果经充分平衡时间之后信号仍旧高，流动相可能被污染（柱的颗粒，缓冲液，等等），或者是温度或者是气体流量设置太低，使得流动相没有达到最佳蒸发。采取适当措施，让系统重新平衡几分钟。
5.5 关机程序：
1. 关闭流动相
2. 允许只通气体，持续大约5分钟的时间，以清除剩余的液滴。
3. 在操作窗口下按[Standby]键，将仪器置于‘待机’状态。
4. 如需要时，关闭气源。
5. 需要时关闭ELSD的主电源（后面板上的底部左侧）。
注意：
·关机前最后使用的方法会在再次开机时出现。任何临时的方法修改会丢失，只有保存过的参数设置会被显示。
·如果ELSD在几天内不会使用，请将柱出口后雾化器进口断开。重新连接
前请冲洗分析柱。
·仪器不使用时，仪器电源可以不关，不会有问题。激光可通过将仪器置于‘Standby’状态而关闭。
5.6 优化程序
根据应用所采用的撞击器设置，按照下列优化程序：
5.6.1 为撞击器‘关’模式优化参数
漂移管温度：
1. 按照表I 的推荐，为应用设定气体流量和漂移管温度。
注意：如果您在低于1mL/min 流速下工作，优化后的漂移管温度可能比推荐的温度低许多。如果您在高于1mL/min 流速下工作，优化后的漂移管温度可能高于推荐的温度。
2. 在气体和流动相流过柱子条件下，监视检测器的基线噪音。
3. 经过充分平衡后，如果基线还保持较大噪音，以推荐温度为基准，以5℃为单位，增加漂移管温度，观察基线噪音的变化。
4. 一旦获得可接受的基线，以1℃为单位降低温度，直到基线噪音增加。
5. 优化的漂移管温度应该是产生可接受的低噪音基线时的最低温度。
气体流量：
1. 根据上述程序设定漂移管最佳温度。
2. 根据表I 推荐设定气体流量。
注意：如果使用的流动相流速低于1mL/min，优化后的气体流量可能低于推荐值。如果您使用的流动相流速高于1mL/min，优化后的气体流量可能高于推荐值。
3. 设置流动相流速并允许系统平衡。
4. 进样的样品并获得每个组分的峰面积。选择样品浓度允许在同一刻度上观察峰面积和基线噪音。
5. 以推荐设定为基准，以0.2L/min 为单位增加和降低气体流量，观察每次改变后峰面积的变化。
6. 继续降低气体流量并测定峰面积直到基线噪音不可接受。
7. 最佳气体流量应该是在可接受的低噪音基线条件下产生最大峰面积时的最低流量。可在每次流量改变后，通过计算信号比来确定最佳气体流量。
注意：每当流动相组成改变或流量改变后，都要确定最佳条件。
5.6.2 为撞击器‘开’模式优化参数
撞击器‘开’的应用需要不同于撞击器‘关’的优化程序：
漂移管温度/气体流量
1. 设定漂移管温度为40℃（半挥发性采用30℃），气体流量为1.5mL/min，作为初始条件。
2. 设置流动相流速并允许系统平衡。
3. 如有需要时，以1℃为单位升高温度，直到流动相充分蒸发（由稳定的基线指示）。
4. 进样品并获得每个组分的峰面积。选择样品浓度允许在同一刻度上观察峰面积和基线噪音的变化。
5. 以推荐设定为基准，以0.2L/min 为单位改变气体流量，观察每次改变后峰面积的变化。
6. 最佳气体流量在最低基线噪音时能产生最大峰面积。以信号噪音比对峰面积作图来帮助确认最佳气体流量。
注意：每当流动相组成改变或流量改变后，都要重新优化设置。
6 诊断和排除故障
6.1 操作错误的信号：操作窗口将列出当前仪器发生的操作错误的总数。任何时候在操作窗口下按‘enter’键显示错误信号。下面的表格列出可能的错误信息和导致的原因和解决方法：
操作错误
6.2 诊断窗口：带有几种诊断功能可用于故障检修。在《Menu》窗口下按3进入《Diagnostics》窗口菜单：
它提供如下选择；
1.诊断测试：用于进入《Diagnostics Tests》窗口。
2.手动控制：用于监视平衡时漂移管和雾化器的雾化器的温度，也用于故障
排除。
3.错误记录；用于跟踪运行时发生的操作错误。按1,2和3选择以上选项。按[Menu]返回到菜单窗口。
6.3 进行诊断测试：有几种诊断功能可用于故障检修。在《Diagnostics》窗口下按1进入《Diagnostics Tests》窗口菜单：
它提供如下选择：
1. 光源测试：用于检查激光的功能。
2. 雾化器气体压力测试：用于检查雾化器气体压力。
3. 流量计测试：用于检查气体流量计的功能。
4. 通讯测试：用于检查仪器内RS-232电缆的功能，按1，2，3和4从以上选项中选择特定的测试，各项测试的详情请参看“光源测试和通讯测试”。当所有测试完毕后，按[Menu]窗口键返回到[Menu]窗口下。
6.3.1 光源测试：
1. 关闭流动相。在仅通气体的情况下让系统平衡几分钟。
2. 在《Diagnostics Tests》窗口下按1开始光源测试，测试菜单显示：
3. 测试需用40秒钟完成，并可通过屏幕上的计时器监视进程。在光源测试中进行了如下步骤：
·关闭激光，并让检测器平衡。
·采集激光关闭时激光的最大信号，最小信号，和平均信号。在数据采集过程中，当前信号读数显示在‘current’一列中。当数据采集结束后，平均信号数据显示在‘current’一列。
·开启激光，并让检测器平衡。
·记录激光开时的最大信号和平均信号数据。
·激光‘开’和激光‘关’的差值，以及激光信号的偏离值被确定。
·接着显示结果。
4. 光源测试通过条件：激光开/关差值必须大于0.5mV和小于20mV。激光关时稳定在1mV内。光源测试通过的例子如下：
5. 如果测试失败，结果屏幕会显示‘测试失败’，并提供了更详细的错误信息。请参考光源测试结果表了解可能的错误信息和解决方法。
光学测试结果
6. 按任意键返回到《Diagnostics Tests》窗口。
6.3.2 雾化器气体压力测试
1. 在开始测试前检查输入气体压力设置在65-80psig之间。
2. 关闭流动相。等待几分钟让仪器稳定。
3. 在《Diagnostics Tests》窗口下按2开始雾化器气体压力测试，测试窗口显示如下：
4. 测试需用90秒钟完成，并可通过屏幕上的计时器监视进程。在雾化器气体压力测试中进行了如下步骤：
·气流自动打开为2.0L/min,检测器进行平衡。
·最大和最小雾化器气体压力读数被确定。在数据采集时，当前的气体压力读数列在‘Current’一列下。当数据采集结束后，平均信号数据显示在‘Current’一列。
·气体流量返回到测试前的设置，测试结果将被显示。
5. 雾化气体压力测试通过的条件：气体压力最小值不小于3psig。最大值不大于30 psig，在测试期间压力变化小于0.3 psig。
结果通过的例子如下：
6. 如果测试没有通过，结果屏幕会显示‘测试失败’，并接着提供了一个更详细的错误信息。请参考下表，雾化器气体测试结果，了解可能的错误信息和解决方法。
雾化气体压力测试结果
7. 按任意键返回到《Diagnostic Tests》窗口。
6.4 诊断基线噪音：许多原因可导致噪音。使用下表，诊断基线噪音，帮助确定噪音的来源，从‘A’开始依次往下进行诊断直到确定基线噪音的来源。
6.5 故障检修表：
常见故障
6.6 ELSD 2000ES 清洁程序
6.6.1 光池，漂移管和雾化器清洁程序
注意：请严格按照本节中介绍的程序执行否则可能暴露在激光的有害照射下。
处理时间：大约1 小时
有些情况下，光池，漂移管和雾化器需要清洗以除去长期使用检测器后所积聚在表面的颗粒。污染物能引起很大的噪音和降低分析的灵敏度。‘污染’的漂移管有时在手电筒照射下查看漂移管便可确定污染情况（流动相需要关闭）。
清洗程序需要以下工具：
ELSD 配件提供的长柄刷
ELSD 配件提供的六角球型螺丝刀，3/32"（长柄）
螺丝刀
1/4"￥5/16"开口扳手
超声波清洗器压气路上帮助冲开堵塞。
HPLC级水
HPLC级50：50的甲醇：水溶液
注意：在激光开时打开和联锁损坏时有3B 级激光照射。请注意防止暴露在激光的照射下。
1. 关闭仪器电源并拔掉电源线。
2. 从ELSD 后面板上断开所有电子连接，包括信号线和其它接触闭合的接线端。
3. 从仪器背面去除排气出口弯管。
4. 从仪器右侧去掉液体流路。
5. 让仪器放置30 分钟保证内部冷却，卸下外壳上的螺丝（每侧各有4 个，
背面有4 个）。
6. 向仪器后部轻轻滑动取下仪器外壳。
注意：光池和出口管可能仍然是热的。
7. 在电路板上覆盖纸巾或其它防护材料以防止来自于液体的损害。
8. 必须去掉前面板才能看到雾化器。在仪器前面板内部两侧各有 4 个螺丝。先去掉连接在前面板上的带状电缆，接着再去掉螺丝。
9. 轻轻地从仪器上卸下前面板并妥善放置好。
10. 在仪器前面下部位置，雾化器通过一个圆片固定，有2 条管路连接在雾化器上。一条连接液路，另一条连接气路。在清洗雾化器之前使用1/4"开口扳手轻轻的将这两条管路取下。
11. 2 个球形螺丝固定在圆片上。使用六角球型螺丝刀取下这些螺丝。
12. 轻轻旋转将漂移管上的雾化器取下。
13. 除下雾化器上的O 形圈，并检查O 形圈是否磨损，如果有裂痕，在超声后更换O 形圈（货号是600509）。
14. 将雾化器放置在50/50 的甲醇/水（或其它合适的溶剂）中超声。注意：不要超声O形圈。
15. 用超声波超声雾化器大约10 分钟。
16. 如果雾化器完全堵塞，将雾化器进口连接在高压气路上，帮助冲开堵塞。
17. 如果雾化器永久堵塞或无法清洗，应该更换新的雾化器（货号是600514）。
18. 请在去掉雾化器的漂移管下方和废液出口位置放置纸巾或其它吸收溶剂的材料。当清洗漂移管时水会流出漂移管，这会防止液体漏在台面上。
19. 用水浸湿长柄毛刷。从排气出口将长刷插入漂移管。
注意：要小心，不要将刷子插入太深，不然可能会导致撞击器发生无法修复的损坏。
20. 用长刷仔细清洗漂移管的管壁，使附在管壁上的颗粒松动。如果使用水还是无法使颗粒松动，可改用其它适当的溶剂。
注意：要小心，不要将溶剂落在ELSD 内部组件上。
21. 刷完之后，取走长刷，用水/溶剂清除松动的颗粒。
22. 接下来清洗光阱和光池。使用5/16”的扳手小心地将连接在光阱上的尾吹气体管路拆下来。防止尾吹气体管直接接触到光阱。
23. 使用六角球型螺丝刀卸下连接光阱到光池的四个六角螺丝，除下光阱。检查光阱的内部是否有残留。如有需要请使用适当的溶剂擦洗光阱内部去除任何的残渣。光阱的内部必须是黑色的。
注意：不要用丙酮冲洗，它会腐蚀掉光阱和光池内部的黑色涂层。
24. 除下光阱后，可以接近光池并清洗它。检查光池的内部是否有残留。如有需要请使用适当的溶剂擦洗光池内部去除任何的残渣。光池的内部必须是黑色的。
注意：在激光开时打开和联锁损坏时有3B 级激光照射。请注意防止暴露在激光的照射下。
25. 将光阱重新装上，重新拧紧四个六角螺丝，保证光阱的方位放置正确，使得磁性联锁正确连接。小心将尾吹气体管路重新连好。
26. 安装雾化器O 形圈并将雾化器插回到漂移管上，确定雾化器固定好。
27. 使用六角球型螺丝刀安装雾化器固定基座
28. 连接液体和气体到雾化器上。
29. 安装前面板，在每侧各使用4 个螺丝固定前面板，并确定连接地线。
30. 重新连接带状电缆。
31. 安装仪器外壳并上紧螺丝。
32. 插入出口弯管，重新连接电子线路到仪器后部面板（信号线，接触闭合线）。
33. 连接电源线。
34. 推荐通气大约15 分钟以吹干残留的溶剂或水。要进行高温冲洗，将ELSD 设置为撞击器关的模式，温度100C，气体流量2.0 L/min，运行达到设定值后，通入流速为1.0 mL/min的HPLC级水大约30 分钟，这会帮助去除清洗松动的颗粒。
35. 重新开始正常的操作，如果问题还出现，请根据操作手册或联系奥泰各办事处来解决问题。
6.7 电压模块的调节
6.7.1 改变输入电压
1. 检测器切断电源，并将电源插头从检测器的后面板拔掉;
2. 将螺丝刀刀口插入到电源插口旁的小缝隙中，轻轻地撬开保险丝保护板;
3. 取出保险丝保护板;
4. 用镊子或针头钳，把可选择电源的板移出;
5. 按所需电压将塑料电压选择板放置正确;
6. 电压选择板推回到原处。
6.7.2 保险丝的调换
1. 关闭检测器。将电源插头拔掉;
2. 取出保险丝;
3. 除去断的保险丝，并换上新的保险丝。确认保险丝使用匹配输入电压：
6A 250V用于120V电压，3A 250V用于240V电压。
6.7.3清洗管路及进样口
6.7.3.1分析完毕后，断开色谱柱我ELSD检测器，让检测器在无样品条件下工作30分钟到1个小时，以除尽内部的残留样品；再用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正已烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水然后用甲醇-水冲洗，再用分析流速冲洗，各种冲洗剂一般冲洗15～30分钟，特殊情况应延长冲洗时间;
6.7.3.2冲洗完毕后，逐步降低流速至0，关泵，进样器也应用相应溶剂冲洗，可使用进样阀所附专用冲洗接头;
6.7.3.3 关断电源，作好使用登记，内容包括日期、检品、色谱柱、流动相、柱压，使用小时数，仪器完好状态等。
6.8注意事项
6.8.1 应用ESLD检测器时禁止用含盐的流动相,气源调节开关一旦调整好就不要随便调动;
6.8.2随时注意冷阱、排气管口和液体收集瓶;
6.8.3定期清洗漂移管内污物。
蒸发光散射检测器(ELSD)3300 原理与操作 一.操作原理 蒸发光散射检测器的独特检测原理包括以下三个步骤:首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶,然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发,最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。 雾化(Nebulization)： 雾化(Nebulization) 经HPLC 分离的柱洗脱液进入雾化器, 在此与稳定的雾化气体(一般为氮气)混合形成气溶胶。气溶胶由均匀分布的液滴组成,液滴大小取决于分析中采用的气体流量.气体流量越低形成的液滴越大,液滴越大则散射的光越多,从而提高了分析灵敏度,但是越大的液滴在漂移管中越难蒸发。每种方法均存在产生最佳信号噪音比率的最优化气体流量。流动相流速越低要求适当雾化的气体流量也越低。用内径为 2.1mm 的微径柱代替内径为4.6mm 标准型分析柱,能大大降低流动相流速,因而提高分析的灵敏度。 蒸发(Evaporation)： 蒸发(Evaporation) 气溶胶中挥发性成分在加热的不锈钢漂移管中蒸发.为特定应用设置适当的漂移管温度,取决于流动相组成和流速,以及样品的挥发性.高有机含量流动相比高含水量流动相要求蒸发的漂移管温度低。流动相流速越低比流动相流速越高要求蒸发的漂移管温度越低。半挥发性样品要求采用较低的漂移管温度,以获得最佳灵敏度.最佳温度需要通过观察各温度时的信号噪音比率来确定。在ELSD 3300 漂移管中,距离雾化器3 英寸处有一个PTFE 涂层的不锈钢撞击器.气溶胶与撞击器相遇,大的液滴从废液管排出。余下的液滴从撞击器周围通过并经过漂移管进入到光散射检测池被检测。除去大的液滴就允许在低温模式下操作ELSD3300,适用于分析半挥发性样品。流动相和雾化气体中的非挥发性杂质会导致噪音。采用高品质的气体,溶剂和挥发性缓冲液(经过过滤的) ,会很大程度上降低基线噪音.若流动相没有完全挥发会导致基线噪音上升。仔细选择设置检测器的参数保证流动相完全挥发。 检测(Detection)： 检测(Detection) 悬浮于流动相蒸汽中的样品颗粒从漂移管进入到光散射检测池。在检测池中,样品颗粒散射激光光源发出的光而蒸发的流动相不散射。散射光被硅光电二极管检测,产生电信号输送模拟信号输出端口, 被用于模拟输出的数据采集.。ELSD 3300 光路元件的先进设计为您的HPLC 分析提供了优异的灵敏度。 二.软件界面指导 (Navigating the Software Interface) 3300 软件界面的特点是位于液晶显示屏左上角有一个可展开的菜单。下面的部分将详细描述这个软件菜单. 2.1 主菜单(Main Screen) 操作界面是在仪器使用期间显示的主界面。主界面为当前载入方法提供如下信息: 1. 谱图(Chart):当处于"运行"和"清洁"模式时，谱图显示被激活,界面显示谱图长度可达60min. 2.方法名称(Method Name) :当前载入方法的名称. 3.温度(Temperature):漂移管温度的设定值和实际读数,用"℃"表示。温度范围是从25 至120℃.。注: 漂移管共有两个加热区, 分别位于漂移管前端和后端。主界面显示的是这两个区的平均值。
蒸发光散射检测器ELSD 蒸发光散射检测器(ELSD)的原理及特点 蒸发光散射检测器(Evaporative Light-scattering Detector)是通用型检测器，可以检测没有紫外吸收的有机物质，如人参皂苷、黄芪甲苷等。1993才由Alltech公司商业化生产。 一、ELSD原理: 洗脱液的雾化——流动相的蒸发——含有待测物的剩余颗粒的光散射检测 恒定流速的色谱仪(高效液相、逆流色谱、高效毛细管电泳等)洗脱液进入检测器后，首先被高压气流雾化，雾化形成的小液滴进入蒸发室(漂移管，drift tube)，流动相及低沸点的组分被蒸发，剩下高沸点组分的小液滴进入散射池，光束穿过散射池时被散射，散射光被光电管接收形成电信号，电信号通过放大电路、模数转换电路、计算机成为色谱工作站的数字信号——色谱图。 当载气从雾化室把液滴运送到加热漂多管时，蒸发开始。在加热漂移管溶剂被除去，产生微粒或纯溶质的小滴，为了维持颗粒大小的均匀性，在这个步骤中尽量采用低的温度是相当重要的。此外，低温蒸发增强溶质结晶化，溶质颗粒越大，检测光散射的强度就越大。还有，这已被清楚的证明，相同大小的固体颗粒比液体颗粒对散射光更有效。在高的温度下，太剧烈的溶剂挥发会导致颗粒的大小不均匀，或者抑制结晶的形成，反过来又影响液体散射过程。 在这个阶段，洗脱液颗粒或液滴从加热漂移管出来进入检测池，散射入射光从光源到达这里。散射光通过光检测器(光电倍增管或光电二极管)加以定量。光检测器产生的电信号与通过检测池的颗粒数量和大小成比例。在Chromachem检测器，通过居中在可见区的多色光源(卤素灯)产生入射光束。这入射光束集中在光检测池的中间，使光检测器的灵敏度最优化。光检测器是强大的光电倍增管，与入射光束
E L S D蒸发光散射检测器 的原理 Company Document number：WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998
HPLC蒸发光散射检测器的原理 简介 蒸发光散射检测器（Evaporative Light Scattering Detector）设计用于高效液相色谱系统，分析任何挥发性低于流动相的化合物。ELSD的应用范围包括：碳水化合物，药物，脂类，甘油三脂，未衍生的脂肪酸和氨基酸，聚合物，表面活化剂，营养滋补品，及组合分子库等。 蒸发光散射检测器消除了常见于其他HPLC检测器的问题。示差检测受溶剂前沿峰的干扰使得分析复杂化，并且由于对温度极其敏感使得基线很不稳定，与梯度洗脱不相容。另外，示差检测器的响应不如ELSD灵敏。而低波长紫外检测器在急变梯度条件下受基线漂移的困扰，并要求被分析化合物带有发色团。ELSD则不受这些限制。不同于这些检测器，ELSD能在多溶剂梯度的情况下获得稳定的基线，使得分辨率更好、分离速度更快。另外，因为ELSD的响应不依赖于样品的光学特性，所以ELSD检测时样品不要求带有发色团或荧光基团。 操作原理 蒸发光散射检测器的独特检测原理为，首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶，然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发，最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。 步骤1：雾化 雾化 经HPLC分离的柱洗脱液进入雾化器，在此与稳定的雾化气体（一般为氮气）混合形成气溶胶。气溶胶由均匀分布的液滴组成，液滴大小取决于分析中采用的气体流量。气体流量越低形成的液滴越大，液滴越大则散射的光越多，从而提高了分析灵敏度，但是越大的液滴在漂移管中越难蒸发。每种方法均存在产生最佳信号噪音比率的最优化气体流量。流动相流速越低要求适当雾化的气体流量也越低。用内径为的微径柱代替内径为标准型分析柱，能大大降低流动相流速，因而提高分析的灵敏度。 步骤2：蒸发 蒸发 气溶胶中挥发性成分在加热的不锈钢漂移管中蒸发。为特定应用设置适当的漂移管温度，取决于流
XXXXXXXXXXXXX仪器设备标准操作规程 1 目的：建立ELSD 2000ES蒸发光散射检测器标准操作规程。 2 范围：ELSD 2000ES蒸发光散射检测器。 3 责任：化验室操作者。 4 内容： 4.1 接通电源：打开仪器后面板上的电源开关，接通ELSD2000ES电源。操作窗口出现，窗口给出仪器为“待机状态”，并有一个计时器显示仪器在此状态下有多少时间。仪器将自动显示上一次运行关机前最后所采用的方法设置。 4.2 操作窗口：操作窗口是仪器运行时主显示窗口。此窗口提供当前运行方法的以下信息： ·方法：当前加载方法的名称。 ·漂移管温度：漂移管的设定温度及当前实际温度读数，单位为℃。 ·气体流量：雾化器气体的设定流量及当前实际流量，单位为L/min。 ·放大系数：当前放大系数的设定值（可能的数值为1、2、4、8和16）。设定为1代表信号没有放大，随每次放大系数的增大信号基于原数值放大两倍。 ·撞击器：当前撞击器的位置，依据当前使用的方法为开或关。 ·输出值：当仪器处于“运行”状态时，显示以mV为单位的信号值。当仪器处于“待机”状态时，显示“Standby”和待机时间。
·满量程电压：满量程电压的设置（根据所用数据采集系统设定为10mV或1000mV）。 ·出错总数：当前发生的操作错误的总数（如果有的话）。 ·窗口键：用于改变仪器状态或进入其他窗口的功能。 【Edit】：快捷键，从“运行”窗口直接切换到“编辑方法”窗口。 【Menu】：从“待机”或“运行”窗口切换到“菜单”窗口。 【Standby】：将仪器从“运行”窗口切换到“待机”状态。 【Zero】：在“运行”窗口下将输出信号调零。 【Run】：运行当前方法的设置，将仪器从“待机”状态切换到“运行”状态。 4.3 仪器状态：ELSD 2000ES有两种不同的操作状态：“待机”（‘Standby’）和“运行”（‘Run’），仪器当前的状态显示在操作窗口上。 4.3.1 待机状态：检测器通电后立即进入“待机”状态。在此状态下，激光，气流，和漂移管加热器都处于关闭状态。操作窗口显示“待机”字样和计时器表示的待机时间。可执行的窗口键是【Menu】和【Run】。 4.3.2 运行状态：在运行状态下，激光，气流，和漂移管加热器都处于打开状态，撞击器状态与设置状态相吻合。输出信号值会有显示。操作窗口会以mV 为单位显示信号输出值。【Edit】，【Menu】，【Standby】和【Zero】窗口键是可执行的。 5日常操作： 5.1 安全： 请遵守以下条例保证ELSD 2000ES操作安全： 1. 实验室保持良好通风以防止溶剂蒸汽积聚。 2. 使用通风柜或其他通风设备以防止吸入排气管逸漏的溶剂烟雾。
蒸发光散射技术讨论 1、蒸发光检测器属于质量检测器，理论上可以检测到挥发性低于流动相的任何物质，但对有紫外吸收的 样品组份检测灵敏度比较底，重现性比较差（出厂要求重现性RSD<6%即可），现常用于检测没有紫外吸收的物质。 主要原理是，流动相及组份在蒸发室，先被雾化，流动相蒸发，组份形成气溶胶，然后进入检测室，用激光照射照射气溶胶而产生光散射，测定光散射的光强而获得信号。 组份质量（m）与散射光强（I）的关系为：lgI=b·lgm+lgk k和b是与蒸发室温度及流动相性质等试验条件有关的常数。 剩下的就是一些注意事项和简单保养的问题，比如流动相中不能有盐，使用前先升温给气，再进流动相，使用完后先停流动相，后降温，最后停气，光机。 最后说明一下，使用完毕后可将流动相改为水及甲醇，调节温度及气流量冲洗蒸发室，这样可以增加使用寿命，降低噪音。 2、zzz79朋友所说“我们有一台Alltech ELSD 2000，也许是因为蒸发光散射技术本身的问题，重现性特别 差。在方法学学研究时，更是没法做。” 我想您指的重现性较差，可能是说峰面积的重现性比较差吧。如果在每天测定中均采用随行对照品进行校对，含量的重现性还可以说得过去。 我个人认为气体的流速对峰面积的影响非常大，所以如果您使用纯净的气源，精准的气体流速控制，至少在一天内的重现性不成问题。 根据ELSD的工作原理，必须使用对数方程外标两点法进行计算。但是，在实际应用过程中，如果对照品浓度和被测样品浓度较为接近，直接采用峰面积计算也不会有显著性的影响（尽管其不是合理的方法）。 3、比较赞成楼主的说法，ELSD很多人都说它重现性很差，其实我根据我自己的经验，重现性差一般应该 是指其峰面积重现性较差（和UV比较），但其色谱条件的重现性还是比较稳定的。至于标准曲线的做法，我曾经做过一系列的比较实验，也查询了一些资料，目前尚没有定论到底以峰面积和浓度直接做线性还是用自然对数还是以常用对数，三种方法都有。至于我们在实验中应该如何做线性，个人认为：不必拘泥，首先用峰面积和浓度直接做线性，如果相关系数不好，再尝试用对数关系（自然对数或常用对数）。一般都可以解决问题，不象那位同学说的方法学根本没法做，应该还是可以做的。至于楼主所说的，对照品和供试品溶液接近时可直接用峰面积计算，我不是很认同，当很接近时，可以考虑做一个比较窄的范围做线性，你如果直接用两点法做计算的话，必须得有一些数据支持，否则文章是很难发表的，也没有说服力，很容易被人质问，至于做随行对照的问题，按正规要求，不只ELSD，其他检测器的液相也应该这样做，只是因为仪器相对的稳定性所以大家都不做，对于ELSD当然做随行对照最好，至于是否一定要做，我觉得如果是仪器一直都是你一个人在用，而且条件没有变，预热也够充分，那么不做也行，但是这只是考察了自己的一个实验而已，不敢建议大家都不做，在您自己做实验时建议你还是做随行对照的好，也好心里面有底，免得造成不好的影响，呵呵。建议做随行对照。 谈到ELSE仪器的使用上，也有一些体会，但一时难以细细道来，主要就是雾化温度和气体流速的设置上，如果这两个参数设置合理，一般情况下都不会有什么问题，大部分的问题都是出在温度和流速设置不合理上。基线噪音的出现也多是因为两个参数设置不合理而导致雾化器漂移管污染那就只好清洗了，也有个别人因为操作失误而导致问题的但不多见，一般仪器厂商提高的参数设置只能用来参考，实际实验时很少完全和他提供的条件一致的，多比他提供的参数稍微高些，开始设置温度建议高些，
HPLC蒸发光散射检测器的原理 简介 蒸发光散射检测器（Evaporative Light Scattering Detector）设计用于高效液相色谱系统，分析任何挥发性低于流动相的化合物。ELSD的应用范围包括：碳水化合物，药物，脂类，甘油三脂，未衍生的脂肪酸和氨基酸，聚合物，表面活化剂，营养滋补品，及组合分子库等。 蒸发光散射检测器消除了常见于其他HPLC检测器的问题。示差检测受溶剂前沿峰的干扰使得分析复杂化，并且由于对温度极其敏感使得基线很不稳定，与梯度洗脱不相容。另外，示差检测器的响应不如ELSD灵敏。而低波长紫外检测器在急变梯度条件下受基线漂移的困扰，并要求被分析化合物带有发色团。ELSD则不受这些限制。不同于这些检测器，ELSD能在多溶剂梯度的情况下获得稳定的基线，使得分辨率更好、分离速度更快。另外，因为ELSD的响应不依赖于样品的光学特性，所以ELSD检测时样品不要求带有发色团或荧光基团。 操作原理 蒸发光散射检测器的独特检测原理为，首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶，然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发，最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。
步骤1：雾化 雾化 经HPLC分离的柱洗脱液进入雾化器，在此与稳定的雾化气体（一般为氮气）混合形成气溶胶。气溶胶由均匀分布的液滴组成，液滴大小取决于分析中采用的气体流量。气体流量越低形成的液滴越大，液滴越大则散射的光越多，从而提高了分析灵敏度，但是越大的液滴在漂移管中越难蒸发。每种方法均存在产生最佳信号噪音比率的最优化气体流量。流动相流速越低要求适当雾化的气体流量也越低。用内径为2. 1mm的微径柱代替内径为4.6mm标准型分析柱，能大大降低流动相流速，因而提高分析的灵敏度。 步骤2：蒸发 蒸发 气溶胶中挥发性成分在加热的不锈钢漂移管中蒸发。为特定应用设置适当的漂移管温度，取决于流动相组成和流速，以及样品的挥发性。高有机含量流动相比高含水量流动相要求蒸发的漂移管温度低。流动相流速越低比流动相流速越高要求蒸发的漂移管温度越低。半挥发性样品要求采用较低的漂移管温度，
一、目的：规范PL-ElS2100型蒸发光散射检测器的使用。 二、依据：PL-ElS2100型蒸发光散射检测器说明书。 三、责任人：仪分操作人员 四、内容： 4.1系统组成：本系统由1个溶剂输送泵、7725i手动进样阀、PL-ElS2100型蒸发光散射检测、N2000色谱数据工作站和电脑等组成。 4.2工作准备：PL-ElS2100型蒸发光散射检测器要求氮气纯度98%以上。打开氮气供给装置，设定压力为60-100psi。 4.2.1打开PL-ElS2100型蒸发光散射检测器电源开关，仪器开启时处于“STANDBY”模式，加热块关闭，雾化气流速设定为较低的1.2SLM。此模式下可设定仪器参数（EVAP、NEB、GAS）或者加载合适的方法； 4.2.2将工作模式设定为“RUN”，使仪器加热平衡在加热或冷却过程中，仪器会显示“NOT READY”。仪器平衡完毕后会显示“READY”并检查基线。在洗脱液未接入是噪音应低于0.2mv，这表明雾化气洁净干燥。如基线毛刺一般是由于雾化气中的粒子或水分造成的。引入洗脱液并待其平衡15min。 4.2.3再次检查基线，应不超过1mv。如是纯水应不超过0.25mv，纯有机溶剂也应不超过1mv。缓冲体系和稳定剂会明显增加噪音。 4.2.4连接色谱柱，旋开“排气阀”，“purg”键排气至管路无气泡，点击“pump”键停止排气，“排气阀”旋紧，点击“pump”键使泵运行，点击“func”功能键由低至高设定流速。 4.2.5接通电脑和ELSD检测器，然后设定实验分析所需的条件(温度和气体流速) “MODE”键为仪器运行模式；“METHOD”键显示和改变仪器方法；“EVAP”键显示和改变蒸发温度（0-120℃）；“NEB”键显示和改变雾化温度（0-90℃）；“GAS”键显示和改变雾化气流速（0.80-3.25SLM）或者加载合适的方法；将工作模式切换为“RUN”，仪器平衡完毕后会显示“READY”。 4.3进样 4.3.1色谱柱连接到ELSD检测器上且系统已达到平衡。 4.3.2 进样点击检测器“ZERO”键调零，工作站中“零点校正”按钮校正基线零点，再按一下查看基线。 4.3.3 用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量即可以注入进样阀，扳下进样阀，工作站采集数据。 4.4清洗管路及进样口 4.4.1分析完毕后，再用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正已烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水，然后以甲醇-水用分析流速冲洗，特殊情况应延长冲洗时间。 4.4.2冲洗完毕后，逐步降低流速至0，关泵，进样器也应用相应溶剂冲洗，可使用进样阀所附专用冲洗接头。 4.4.3 关断电源，作好使用登记，内容包括日期、检品、使用时间，仪器完好状态等。 4.5注意事项 4.5.1 应用ESLD检测器时禁止用含盐的流动相,气源调节开关一旦调整好就不要随便调动。 4.5.2随时注意排气管口和液体收集瓶。
应用蒸发光散射检测器的含量计算 1.检测器响应和定量分析 响应是随着散射范围的变化而变化，我们假设样品的范围很大，测得的峰面积与样品的质量有如下关系： A=am b（1） a、b是相关系数，它们与液滴大小、溶质浓度、溶质自然特征和蒸发温度等有关。等式1反应出A和m是非线性关系；等式1取对数得到等式2，等式2中㏒A和㏒m是线性关系： ㏒A=b㏒m＋㏒a （2） 2.标准曲线的计算： 例如：称取对照品3.10mg至10ml容量瓶中，定容，其含量为310ug/ml。 进样量5ul，得X1：310 ug/ml×5/1000＝1.55×10-6，其得到的面积为Y1=79.50。 进样量10ul，得X2：310ug/ml×10/1000＝3.10×10-6，其得到的面积为Y2=203.61。 将上述对照品的各稀释浓度及其对应的面积，分别取对数列表如下： _ _ _ ∑（m i－m）（A i－A）∑m i A i－m∑A i 回归系数：b=---------------------------------- = ----------------------------- （1） _ _ ∑（m i－m）2∑m i2－m∑m i 1.496149－0.340845×4.20917 0.061474 b= --------------------------------------------- = ----------------- = 1.356757 0.2776605－0.340845×0.68169 0.0453095 _ _ 截距：a= A－b m （2） a=2.104585－1.356757×0.340845 = 1.64241 设：Y = ㏒Y1=194.35A , X = b㏒m , C = ㏒a , 得：Y = X + C 已知称取供试品0.5330g至25ml容量瓶中，加溶剂至刻度，其含量为213.2ug/ml。 进样量10ul，得X1：21.32×10/1000＝21320×10-6，其得到的面积为Y1=194.35。 Y1=194.35 , ㏒2.288585 = 1.356757㏒m ＋1.64241 2.288585 －1.64241 0.646175 ㏒m = ------------------------------- = ----------------- = 0.476264 1.356757 1.356757
ELSD检测器原理 2.1蒸发光散射检测器原理 ELSD原理适用所有待测物的挥发性低于流动相的分离，事实上，新一代ELSD检测器在操作上提供更低的温度，允许半挥发性被分析物的定量，即使检测器的灵敏度可能较低。不挥发溶质，在分析柱的检测极限可以达到毫微克(ng)水平。 采用SFC，超临界流体（通常是二氧化碳）在周围环境大气压和温度条件大气中进行减压和膨胀，不像HPLC，流动相在减压作用下蒸发，形成气流，运载样品以微小颗粒喷雾的形式采用光散射检测。 应用于SFC的限制和其它形式的液相相同，也就是说，溶剂修饰物必须比被分析物具有更高的挥发性。 图1阐明蒸发光散射检测器依次发生的三个主要步骤： 色谱洗脱液的雾化 色谱流动相的蒸发 对含有待测物的剩余颗粒的光散射 每个步骤都具有明确的功能但也会改变，或者是受其它步 骤的影响，所有市场上的蒸发光散射检测器都包含以上步 骤，但在他们操作方法上会有所不同。 因为ELSD易受非线性响应的影响，所以这篇文章的 一部分专门谈到检测器的响应和定量。 图1 2.1.1雾化 这个步骤把大量体积的液体流动相转变成细小的液滴，从而溶剂更易于蒸发；较大的液滴，在蒸发步骤中需要更高的温度。剩余溶质颗粒越大，散射光的强度就更大。 在所有商业上的ELSD，雾化都是用惰性载气通过文丘里管流动，采用载气同轴包装柱洗脱液，使之通过小孔。液滴的大小和均匀性对于检测的灵敏度和重复性非常重要。在一些型号的ELSD，雾化洗脱液立即进入加热的蒸发管，一般情况下是漂移管，在这里开始进行第二步骤。但是，另一型号的则包含一个雾化室（图1）它被认为可以在三个方面增强检测器的操作。 可形成一个窄的液滴尺寸分布，最大的液滴通过在室的内壁冷凝，然后直接到废物出口或排出，在这里连续地虹吸冷凝液体。所以，用于蒸发保留的液滴所需要的蒸发温度大大降低。 柱洗脱液直接通过蒸发管的比例变化为，以纯水溶液作为淋洗液的小于10%，以有机溶剂混合液作为正相色谱洗脱液的为90-100%。这个比例与原子光谱和连接红外光谱（FTIR）和感应耦合等离子体（ICP）不同检测系统的液相作出的雾化情况非常一致。 雾化过程的温度与漂移管的蒸发温度可以各自进行独立的调节。这使得检测器很容易与SFC系统结合，在SFC系统流动相的快速减压具有很大的吸热性，通常会造成固态二氧化碳的形成。通过准确的调节雾化室的温度，可以避免由于大的温度波动影响重现性和流动相的沉淀。采用HPLC，半挥发性分析物的定量检测也可通过降低雾化室的温度来得以增强。相反的，在凝胶渗透色谱（GPC）中，高温度允许采用非常低挥发性的溶剂。雾化室的加入使得检测器的清洁简单化。 2.1.2 蒸发 当载气从雾化室把液滴运送到加热漂多管时，蒸发开始。在加热漂移管溶剂被除去，产生微粒或纯溶质的小滴，为了维持颗粒大小的均匀性，在这个步骤中尽量采用低的温度是相当重要的。此外，低温蒸发增强溶质结晶化，溶质颗粒越大，检测光散射的强度就越大。还有，这已被清楚的证明，相同大小的固
蒸发光散射检测器的工作原理和主要优势 点击次数：407 发布时间：2009-6-9 10:22:27 蒸发光散射检测器已被广泛应用于碳水化合物、类脂、脂肪酸和氨基酸、药物以及聚合物等的检测。 蒸发光散射检测器工作原理 雾化： 液体流动相在载气压力的作用下在雾化室内转变成细小的液滴，从而使溶剂更易于蒸发。液滴的大小和均匀性是保证检测器的灵敏度和重复性的重要因素。 UM 3000蒸发光散射检测器，通过对气压和温度的精确控制，确保在雾化室内形成一个较窄的液滴尺寸分布，使液滴蒸发所需要的温度大大降低。 蒸发： 载气把液滴从雾化室运送到漂移管进行蒸发。在漂移管中，溶剂被除去，留下微粒或纯溶质的小滴。UM 3000蒸发光散射检测器采用低温蒸发模式，维持了颗粒的均匀性，对半挥发性物质和热敏性化合物同样具有较好的灵敏度。 检测： 光源采用650nm激光，溶质颗粒从漂移管出来后进入光检测池，并穿过激光光束。被溶质颗粒散射的光通过光电倍增管进行收集。溶质颗粒在进入光检测池时被辅助载气所包封，避免溶质在检测池内的分散和沉淀在壁上，极大增强了检测灵敏度并极大地降低了检测池表面的污染。 蒸发光散射检测器主要优势 1）可检测挥发性低于流动相的任何样品；
2）流动相低温雾化和蒸发，对热不稳定和挥发性化合物亦有较高灵敏度；3）广泛的梯度和溶剂兼容性，无溶剂峰干扰； 4）辅助载气提高了检测灵敏度，保持检测池内的清洁，避免污染； 5）高精度雾化和蒸发温度控制，保证高精度检测； 6）可与任何HPLC系统连接。 ELSD与几种常用的检测器之间的对比 ELSD UV RID MS 应用范围通用有光吸收的化合物通用通用 响应质量相关化学相关折光度相关质量相关 灵敏度高高低高 未知物检测能不能能能 流动相影响/梯度不影响本底影响影响不影响 基线稳定性好较好差好
1. 简介 蒸发光散射检测器（Evaporative Light Scattering Detector）设计用于高效液相色谱系统，分析任何挥发性低于流动相的化合物。ELSD ELSD的应用范围包括：碳水化合物，药物，脂类，甘油三脂，未衍生的脂肪酸和氨基酸，聚合物，表面活化剂，营养滋补品，及组合分子库等。 蒸发光散射检测器消除了常见于其他HPLC检测器的问题。示差检测受溶剂前沿峰的干扰使得分析复杂化，并且由于对温度极其敏感使得基线很不稳定，与梯度洗脱不相容。另外，示差检测器的响应不如ELSD灵敏。而低波长紫外检测器在急变梯度条件下受基线漂移的困扰，并要求被分析化合物带有发色团。ELSD则不受这些限制。不同于这些检测器，ELSD能在多溶剂梯度的情况下获得稳定的基线，使得分辨率更好、分离速度更快。另外，因为ELSD 的响应不依赖于样品的光学特性，所以ELSD检测时样品不要求带有发色团或荧光基团。 1.3 操作原理 蒸发光散射检测器的独特检测原理为，首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶，然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发，最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。 步骤1：雾化 步骤2：蒸发 步骤3：检测
雾化 经HPLC分离的柱洗脱液进入雾化器，在此与稳定的雾化气体（一般为氮气）混合形成气溶胶。气溶胶由均匀分布的液滴组成，液滴大小取决于分析中采用的气体流量。气体流量越低形成的液滴越大，液滴越大则散射的光越多，从而提高了分析灵敏度，但是越大的液滴在漂移管中越难蒸发。每种方法均存在产生最佳信号噪音比率的最优化气体流量。 流动相流速越低要求适当雾化的气体流量也越低。用内径为2.1mm的微径柱代替内径为4.6mm标准型分析柱，能大大降低流动相流速，因而提高分析的灵敏度。 蒸发 气溶胶中挥发性成分在加热的不锈钢漂移管中蒸发。为特定应用设置适当的漂移管温度，取决于流动相组成和流速，以及样品的挥发性。高有机含量流动相比高含水量流动相要求蒸发的漂移管温度低。流动相流速越低比流动相流速越高要求蒸发的漂移管温度越低。半挥发性样品要求采用较低的漂移管温度，以获得最佳灵敏度。最佳温度需要通过观察各温度时的信号噪音比率来确定。 检测 悬浮于流动相蒸汽中的样品颗粒从漂移管进入到光散射检测池。在检测池中，样品颗粒散射激光光源发出的光而蒸发的流动相不散射。散射光被硅光电二极管检测，产生电信号输送模拟信号输出端口，被用于模拟输出的数据采集。
◆目的：制定ELSD-UM3000蒸发光散射检测器标准操作规程。 ◆范围：适用于ELSD-UM3000蒸发光散射检测器操作。 ◆职责：检验人员对本规程的实施负责。 ◆内容 1仪器组成、电源 1.1仪器组成：ELSD-UM3000蒸发光散射检测器，配件：XWK-Ⅲ型空气压缩机，相关 连接设备：岛津LC-15C泵、ZW色谱柱柱温箱。 1.2接通电源：将各仪器电源插头插入插座内，依次打开检测器、柱温箱、压缩机、 泵及计算机开关。 2操作 2.1开空气压缩机电源，阀门开一圈半，压力调为指定值。 2.2接柱子：褐色管接柱子入口，透明管接检测器，内部干燥珠必须保持干燥状。 2.3如果使用单泵，开岛津A泵“power”键，仪器由红灯转换为绿灯，更换所需要的流动相，然后将排液阀旋钮逆时针旋转180°以打开排液阀。 2.4按“purge”键运行，开始冲洗。如果排液阀旋钮旋转的度数超过180°，任何排出的流动相都可能包含气泡。这是正常现象。 2.5清洗完成后，以顺时针方向尽量旋转排液阀旋钮，关闭排液阀。按下“pump”键，开始泵的运行。 2.6如果使用双泵，打开两个泵的电源开关，分别更换所需要的流动相、冲洗、运行。 2.7设定泵的最高压力及流速，将流速调节至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示应稳定，用干燥滤纸片的边缘检查柱管各连接处应无渗漏，初始平衡时间一般需30分钟。
2.8开蒸发光散射器检测电源，设置仪器参数。 2.8.1MENU:设温度（T），室温最高到130℃。用方向键的上、下、左、右进行调节。设置完成后按“Enter”。 2.8.2 设流量（F）：雾化器流量（1-4L）；一般设为每分钟2.5，设置完成后按“Enter”。 2.9设置完成上面步骤后，按“RUN”键运行，“RUN”指示灯亮，再按“VALVE”键，“VALVE”指示灯亮。 2.10设置完成。 3工作站 3.1 打开电脑启动N2000在线工作站，选择通道1，OK。 3.2 设实验信息，方法，条件，保存路径。 3.3方法：采集时间第一次可设长些（默认60分钟），但是必须先设定，之后能够调节，设定后的到时间会自动停止。采集也可以手动停止。采样后勾选自动积分。3.4 文件保存名字：自动方式：前缀+计数。保存路径设置 3.5积分：最小面积500-100.设置完成后点击右下角的“采用”完成设置。 3.6报告编辑：勾选系统评价，谱图显示，网格线（背景），实验简介，完成后点击采用。 3.7谱图显示：设定时间，电压。 4 数据采集 4.1点击“查看基线”，待基线平衡后，点击“零点校正”，调整时间，电压到合适范围。 4.2 进样：吸取不少于60μl的样品，插入进样口，打开进样阀至“load”，将样品全部摄入进样口，打下进样阀至“inject”。在电脑上点击“采集数据”，即完成采集。 4.3采集时间完成后。点击“停止采集”，输入实验名称保存即可。 5 谱图处理（离线） 5.1打开离线工作站，打开文件，设置坐标，点击“显示设置”，设置电压时间。 5.2 积分方法：设最小面积，除去杂峰点采用，如有杂峰没有去处，点击“手动”—删除峰。最后调节峰的起落点。
中黄芪甲苷的含量 【摘要】 目的建立高效液相-蒸发光散射检测法测定龙生蛭胶囊中黄芪甲苷的含量。方法色谱柱为Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）。流动相为乙腈 -水(33∶67),流速1.0 ml/min。ELSD参数：漂移管温度105℃，气体流量2.8 ml/min。结果黄芪甲苷在2.45～10.64 μg的线性关系良好(r=0.999 2,n=5)。结论方法简便准确，重现性好，灵敏度高。 【关键词】蒸发光散射检测高效液相色谱；龙生蛭胶囊；黄芪甲苷 Determination of Astragaloside in Longshengzhi Capsules by ， (Xianyang Buchang Pharmaceutical Co., Ltd. 712000, China) Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC-ELSD method for determining the contents of astragaloside in Longshengzhi capsules.MethodsThe chromatographic column was Diamosil C18(250 mn×4.6 mm,5 μm). The mobile phase was ace tonitrile- water(33∶67)and the flow rate was 1.0 ml/min.The drift tube temperature was at 105℃.The gas flow rate was at 2.8 ml/min.ResultsWithin the range of 2.45～10.64 μg, the content of astragaloside had a good linear ratationship (r=0.999 2,n=5).ConclusionThe method is easy,reliable,sensitive and reproducibile. Key words：HPLC-ELSD； Longshengzhi capsules； Astragaloaside 龙生蛭胶囊是由黄芪、地龙、水蛭、赤芍等药材组成，具有补气活血、逐 淤通络的功效。黄芪为其君药，所含黄芪甲苷为其主要活性成分。目前质量标 准多采用薄层扫描法，考虑到薄层扫描操作繁琐，引起误差环节比较多，本文
应用蒸发光散射检测器 的含量计算 标准化工作室编码[XX968T-XX89628-XJ668-XT689N]
应用蒸发光散射检测器的含量计算 1.检测器响应和定量分析 响应是随着散射范围的变化而变化，我们假设样品的范围很大，测得的峰面积与样品的质量有如下关系： A=am b（1） a、b是相关系数，它们与液滴大小、溶质浓度、溶质自然特征和蒸发温度等有关。等式1反应出A和m是非线性关系；等式1取对数得到等式2，等式2中㏒A和㏒m是线性关系： ㏒A=b㏒m＋㏒a（2） 2.标准曲线的计算： 例如：称取对照品3.10mg至10ml容量瓶中，定容，其含量为310ug/ml。 进样量5ul，得X1：310ug/ml×5/1000＝1.55×10-6，其得到的面积为Y1=79.50。 进样量10ul，得X2：310ug/ml×10/1000＝3.10×10-6，其得到的面积为Y2=203.61。 将上述对照品的各稀释浓度及其对应的面积，分别取对数列表如下： ___ ∑（m i －m）（A i －A）∑m i A i －m∑A i 回归系数：b=----------------------------------=-----------------------------（1） __ ∑（m i －m）2∑m i 2－m∑m i 1.496149－0.340845×4.209170.061474 b=---------------------------------------------=-----------------=1.356757 0.2776605－0.340845×0.681690.0453095 __ 截距：a=A－bm（2） a=2.104585－1.356757×0.340845=1.64241 设：Y=㏒Y1=194.35A,X=b㏒m,C=㏒a,得：Y=X+C 已知称取供试品0.5330g至25ml容量瓶中，加溶剂至刻度，其含量为213.2ug/ml。 进样量10ul，得X1：21.32×10/1000＝21320×10-6，其得到的面积为Y1=194.35。 Y1=194.35,㏒2.288585=1.356757㏒m＋1.64241 2.288585－1.642410.646175 ㏒m=-------------------------------=-----------------=0.476264 1.3567571.356757 ㏒m=0.476264取反函数得：m=2.994084 2.994084 供试品的含量％＝------------------×100%=1.404%
应用蒸发光散射检测器的含量计算1.检测器响应和定量分析 响应是随着散射范围的变化而变化，我们假设样品的范围很大，测得的峰面积与样品的质量有如下关系： A=am b（1） a、b是相关系数，它们与液滴大小、溶质浓度、溶质自然特征和蒸发温度等有关。等式1反应出A和m是非线性关系；等式1取对数得到等式2，等式2中㏒A和㏒m是线性关系： ㏒A=b㏒m＋㏒a（2） 2.标准曲线的计算： 例如：称取对照品3.10mg至10ml容量瓶中，定容，其含量为310ug/ml。 进样量5ul，得X1：310ug/ml×5/1000＝1.55×10-6，其得到的面积为Y1=79.50。 进样量10ul，得X2：310ug/ml×10/1000＝3.10×10-6，其得到的面积为Y2=203.61。 将上述对照品的各稀释浓度及其对应的面积，分别取对数列表如下： ___ ∑（m i－m）（A i－A）∑m i A i－m∑A i 回归系数：b=----------------------------------=-----------------------------（1） __ ∑（m i－m）2∑m i2－m∑m i 1.496149－0.340845×4.209170.061474 b=---------------------------------------------=-----------------=1.356757 0.2776605－0.340845×0.681690.0453095 __ 截距：a=A－bm（2） a=2.104585－1.356757×0.340845=1.64241 设：Y=㏒Y1=194.35A,X=b㏒m,C=㏒a,得：Y=X+C 已知称取供试品0.5330g至25ml容量瓶中，加溶剂至刻度，其含量为213.2ug/ml。 进样量10ul，得X1：21.32×10/1000＝21320×10-6，其得到的面积为Y1=194.35。 Y1=194.35,㏒2.288585=1.356757㏒m＋1.64241 2.288585－1.642410.646175 ㏒m=-------------------------------=-----------------=0.476264 1.3567571.356757 ㏒m=0.476264取反函数得：m=2.994084 2.994084 供试品的含量％＝------------------×100%=1.404% 213.2
蒸发光散射检测器(ELSD)简介 前期，在「talk」和「Applications」上介绍了蒸发光散射检测器，许多读者来信要求「进一步介绍ELSD」。这次，就ELSD进行谈话。 ■使用ELSD？ ELSD（Evaporative Light Scattering Detector）是柱洗脱液进行喷雾，流动相溶剂蒸发，留下的不挥发成分用光照射，检测它的散射光的检测器。也就是说，与流动相在一起但未蒸发的物质基本上都可检测，因此称为「Universal Deteetor」。实际上，这种ELSD，早在20多年前已经出现，但由于存在灵敏度和稳定性等难点，未能广泛普及。近年来，特别是由于药品部门的需求提高，经过多次改良，性能也显著提高，再次受到注目。 ■ELSD的原理 图1表示的是岛津ELSD-LT的检测原理。ELSD的检测过程分①柱洗脱液的喷雾，②流动相的蒸发和③不挥发成分散射光的检测三步。柱洗脱液在喷雾器中用氮或空气进行喷雾。然后进入称为漂移管的温度调节管中，流动相蒸发去除，只将不挥发成分送入检测器。在检测器用光照射这些成分，它的散射光用光电倍增管进行检测。图2是检测部的构造图。 ■ELSD vs RID 没有UV吸收，也都能检测……这句话，想起示差折光检测器（RID）。RID是利用试样成分与流动相的折射率的差进行检测，而通常由于它们的折射率多少都有些差，基本上什么都能检测。然而，如果检测原理完全不同的ELSD与RID相比较，会是怎样呢？[ELSD的优点] 首先是灵敏度。利用糖类分析进行比较时，ELSD高5-10倍S/N。其次，使用RID时易产生烦恼的基线漂移。由于RID是检测流动相与试样的极小的折射率差，流动相的折射率必须经常固定，处于稳定状态。但是由于折射率受微小的温度变化和流量变化的影响，即使最新的装置在高灵敏度分析时也很难取得笔直的基线。何况，梯度洗脱还有许多意想不到的情况。而ELSD就没有这些烦恼的事情。特别是适用于梯度洗脱，这点是没有UV吸收的多成分分析中强有力的检测手段。还有，使用RID在试样溶剂与流动相不同时，有时它的溶剂峰会干扰目标成分的峰，但是，ELSD没有这个问题。 [ELSD的注意点] RID上使用的流动相不受特殊的制约，但是，ELSD由于以流动相挥发为大前提，限定为挥发性物质。即，不能使用磷酸缓冲液等。还有，由于尘埃、不溶物，要注意，流动相中的杂质和柱填充剂洗脱物等是产生噪声的原因。其中还有一点……。RID可在宽广的范围内取得直线性，而ELSD由于原理上物质量与散射强度成为指数关系，必需采用双对计算使工作曲线线性化。 ■ELSD所对应领域 ELSD从过去就是用于UV检测困难的糖类和脂质有关的分析，但最近，用作药品领域的杂质确认受到注目。 图1 检测原理（ELSD-LT）图2 检测部的构造12
高效液相色谱-蒸发光散射检测法 同时测定四君子丸中的5种有效成分 四君子丸为四君子汤的现代剂型，由党参、白术、茯苓、炙甘草组成，被《中华人民共和国药典》(2005版)收载［1］。现代药理学研究证明，四君子汤可增强机体的抵抗力，调节机体各方面的功能，对垂体、心血管功能、消化道运动功能和免疫功能有明显的改善作用［2］。四君子丸含有党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ等主要活性成分［3－7］。对于党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的定量分析方法，已有的文献报道均是对其中的一种或两种成分进行测定［8－14］，尚未见对上述5种活性成分同时测定的报道。按照药典［1］的规定，对四君子丸的鉴定仅依靠薄层色谱法进行，结果比较粗放。本文对四君子丸中的上述5种活性成分同时进行了含量测定，可为四君子丸的全面质量控制提供实验依据。 1实验部分 1.1仪器与试药 LC7000高效液相色谱仪(海能仪器)，包括LC7011输液泵，LC7070蒸发光散射检测器;HanonClatity色谱工作站。HIQ SIL C18V色谱柱(250mm× 4.6mm，5μm)。甲醇(色谱纯)，二次蒸馏水(自制)，冰醋酸(分析纯);党参炔苷、苍术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、茯苓酸和甘草酸铵对照品;党参、白术、茯苓、甘草均购于济南漱玉平民药店;用于方法优化的四君子丸样品为自制，每丸平均质量为3.0g，符合中国药典对丸剂的各项规定要求。测定的四君子丸实际样品分别为5个药品生产厂家的产品。 1.2对照品溶液的制备 分别精密称取党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ对照品适量，分别配制质量浓度为6. 03，3.78，12.24，3.62，7.80g/L的储备液。将上述5种储备液各取500μL混合、摇匀，即得含党参炔苷1.21g/L、茯苓酸0.76g/L、甘草酸2.45g/L、苍术内酯Ⅲ0.72g/L和白术内酯Ⅰ1.56g/L的混合对照品储备液。 1.3供试品溶液的制备 取丸剂研碎，并称取1.00g，加入乙醇15mL，超声提取30min，过滤。滤渣再重复提取2次。合并提取液并浓缩，转移至10mL容量瓶中，用乙醇定容，摇匀;取其中1mL于16000r/min速率下离心10min，上清液作为供试品溶液。 1.4色谱条件 色谱柱:HIQ SIL C18V柱(250mm× 4.6mm，5μm);流动相:0.5%冰乙酸水溶液为流动相A，甲醇为流动相B;梯度洗脱程序:0－40min，80%A－20%A;流速: 1.0mL/min;进样量:10μL;漂移管温度:55℃;喷雾器加热级别:60%;载气:氮气，压力0.2MPa;信号增益值:50。 2结果与讨论 2.1色谱条件的优化 2. 1.1检测器的选择 由于欲测定的样品中苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的紫外吸收比较弱，且苍术内酯Ⅲ含量较低，为了提高检测的灵敏度，本文采用蒸发光散射检测器检测。以信噪比(S/N)为指标，分别对蒸发光散射检测器的漂移管温度和载气压力进行了优化。结果在漂移管温度55℃、载气压力0.2MPa(30psi)时，可以获得最佳的信噪比。 2. 1.2流动相及洗脱程序的优化 本文的前期研究工作发现，四君子丸提取物的组成复杂，干扰成分多，欲测定的各组分的保留因子范围较宽，不适宜等度洗脱，因此选择了梯度洗脱。流动相分别选择甲醇-水(含冰乙酸)、甲醇-水(含磷酸)体