应用蒸发光散射检测器的含量计算

高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定氟比洛芬酯注射液中大豆油含量张勉;李超【摘要】目的建立测定氟比洛芬酯注射液中大豆油含量的高效液相色谱-蒸发光散射检测器法.方法以硅胶柱为色谱柱,以正己烷-异丙醇-冰醋酸(99.4∶0.5∶0.1)为流动相,流速为1.0 mL/min;蒸发光散射检测器,漂移管温度为70℃,雾化气压力为35.0 psi,进量为10μL.结果大豆油质量浓度在1.707 ～ 17.072 μg/mL(r =0.998)范围内与峰面积呈良好线性关系,平均加样回收率为100.34％,RSD为1.52％(n=9).结论该法用于测定氟比洛芬酯注射液中大豆油的含量,快速简便,专属性好,结果准确.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2014(023)007【总页数】2页(P26-27)【关键词】高效液相色谱-蒸发光检测器;氟比洛芬酯注射液;大豆油【作者】张勉;李超【作者单位】重庆市食品药品检验所,重庆 401121;重庆市食品药品检验所,重庆401121【正文语种】中文【中图分类】R927.2;R971+.1氟比洛芬酯注射液是以脂微球为药物载体的非甾体类镇痛剂。

药物进入体内靶向分布到创伤及肿瘤部位后，氟比洛芬酯从脂微球中释放出来，在羧基酯酶作用下迅速水解生成氟比洛芬，通过氟比洛芬抑制前列腺素的合成而发挥镇痛作用。

大豆油是制备乳剂的重要原辅料，其含量直接影响乳剂的成型质量，在氟比洛芬酯注射液中大豆油作为氟比洛芬酯的载体，有利于氟比洛芬酯达到靶向部位，更好地吸收。

但由于大豆油为长链甘油三酸酯，紫外特征不强，常规的紫外检测器无法完成对其的测定。

国内仅有一个厂家生产该品种，现行质量标准[1]中未对大豆油进行含量控制。

笔者采用高效液相色谱法分离，利用蒸发光散射检测器测定氟比洛芬酯注射液中大豆油的含量，有效地解决了大豆油在该注射剂中的检测问题，方法准确，操作简便。

1 仪器与试药Waters e2695型高效液相色谱仪。

蒸发光检测器测定黄芪药材中黄芪甲苷的含量作者：卯升宇陈宇赵瑜来源：《科学与财富》2019年第36期摘要：目的：建立一个用蒸发光检测器测定黄芪药材中黄芪甲苷含量的方法。

方法：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ;以乙腈-水（36：64）为流动相，流速1.0ml/min;柱温30℃;用蒸发光散射检测器检测（ET：100℃、NT：40℃、氮气流速：1.60SLM、增益：1）。

结果：精密度试验、重复性试验、准确度试验测试结果均能满足要求，质控结果满意。

结论：该方法简便、准确，可用于黄芪药材中黄芪甲苷的质量控制。

关键词：黄芪;黄芪甲苷;蒸发光检测器;方法确认黄芪甲苷是黄芪中的标志有效成分，收载于《中国药典》2015版一部中，本实验在药典的基础上，优化黄芪甲苷含量测定中蒸发光检测器的具体实验条件，建立一个适用于本实验室的黄芪甲苷HPLC-ELSD 含量测定方法。

1.仪器与试药1.1高效液相色谱仪：美国安捷伦1260高效液相色谱仪。

1.2试药 ;甲醇，色谱级;乙腈，色谱级;氨水，分析纯;乙醇，分析纯;正丁醇，分析纯;超纯水，自制。

黄芪甲苷标准品，来源中国食品药品检定研究院。

1.3天平：电子天平（0.1mg /0.01mg/0.001mg）2.方法与结果2.1供试品制备参照《中国药典》2015年一部“黄芪”【含量测定】项下操作。

2.2色谱条件的优化：鉴于实验室条件的考虑，选取流动相比例、飘移管温度（ET）和雾化器温度（NT）作为主要因素通过正交设计进行考察。

正交试验设计表L9（34）如下：采用直观分析法-极差分析法对上述正交试验的结果进行分析，确定因素主次，遴选出优水平，最终确定色谱条件为飘移管温度：100℃、雾化温度：40℃、流动相比例（乙腈：水-36：64）。

2.3精密度试验：分别精密吸取黄芪甲苷对照品溶液（浓度为：0.281976mg/ml）各10μl，按测定方法重复进样6次，测定峰面积值。

各次测得的峰面积值分别是593.8、593.5、591.3、588.9、588.7、581.6，平均值为589.6，相对标准偏差RSD为0.4%。

应用蒸发光散射检测器的含量计算1.检测器响应和定量分析响应是随着散射范围的变化而变化，我们假设样品的范围很大，测得的峰面积与样品的质量有如下关系：A=am b（1）a、b是相关系数，它们与液滴大小、溶质浓度、溶质自然特征和蒸发温度等有关。

等式1反应出A和m是非线性关系；等式1取对数得到等式2，等式2中㏒A和㏒m是线性关系：㏒A=b㏒m＋㏒a（2）2.标准曲线的计算：例如：称取对照品3.10mg至10ml容量瓶中，定容，其含量为310ug/ml。

进样量5ul，得X1：310ug/ml×5/1000＝1.55×10-6，其得到的面积为Y1=79.50。

进样量10ul，得X2：310ug/ml×10/1000＝3.10×10-6，其得到的面积为Y2=203.61。

将上述对照品的各稀释浓度及其对应的面积，分别取对数列表如下：___∑（mi －m）（Ai－A）∑miAi－m∑Ai回归系数：b=----------------------------------=-----------------------------（1） __ ∑（m i －m ）2∑m i 2－m ∑m i 1.496149－0.340845×4.209170.061474 b=---------------------------------------------=-----------------=1.3567570.2776605－0.340845×0.681690.0453095__截距：a=A －bm （2）a=2.104585－1.356757×0.340845=1.64241设：Y=㏒Y1=194.35A,X=b ㏒m,C=㏒a,得：Y=X+C已知称取供试品0.5330g 至25ml 容量瓶中，加溶剂至刻度，其含量为213.2ug/ml 。

进样量10ul ，得X1：21.32×10/1000＝21320×10-6，其得到的面积为Y1=194.35。

高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定黄连清胃丸中栀子苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ的含量夏伊丽;李煌;朱凤【摘要】目的:应用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法测定黄连清胃丸中栀子苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ的含量.方法:采用C18色谱柱(4.6mn×250 mm,5μm);流速为0.9 ml/min;乙腈-水(30∶ 70)为流动相;ELSD漂移管温度为90℃;载气(N2)流速为2.9 SLPM/min.结果:栀子苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ进样量分别在0.061 8～1.236 0μg(r=0.999 2)、0.047 6～0.952 0 μg(r =0.999 7)和0.184 2～3.684 0 μg(r =0.999 3)时进样量的自然对数值与峰面积的自然对数值呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.67％、98.18％和98.36％,RSD分别为1.09％、1.01％和0.98％(n=6).结论:本方法测定结果准确、灵敏、重复性好.【期刊名称】《中国医院用药评价与分析》【年(卷),期】2014(014)001【总页数】3页(P55-57)【关键词】黄连清胃丸;栀子苷;知母皂苷AⅢ;知母皂苷BⅡ;高效液相色谱-蒸发光散射检测器法【作者】夏伊丽;李煌;朱凤【作者单位】武警浙江省总队医院药剂科,浙江嘉兴314000;武警浙江省总队医院药剂科,浙江嘉兴314000;武警浙江省总队医院药剂科,浙江嘉兴314000【正文语种】中文【中图分类】R965黄连清胃丸是中药复方制剂，处方源自国家药品标准中药成方制剂第九册，由栀子、知母等20 味中药组成，具有清胃泻火的功效，用于口舌生疮、牙龈肿痛、胃热牙痛、暴发火眼等症的治疗［1］。

栀子和知母作为方中主要成分，原质量标准中仅对性状进行了控制，未对方中任何药物进行定量检测，为保证药品质量和临床用药安全有效，本文采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法对栀子中的栀子苷、知母中的知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ进行定量研究，为完善黄连清胃丸质量标准提供依据。

高效液相色谱—蒸发光散射检测器法测定中药茺蔚子中盐酸水苏碱的含量目的建立中药茺蔚子中盐酸水苏碱的高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定方法。

方法Asahipak NH2P 50 4E色谱柱（4.6 mm × 250 mm），流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液（84∶16），体积流量1 mL/min，柱温30℃。

结果盐酸水苏碱在0.487～4.383 μg范围内线性关系良好，r = 0.9999，平均回收率为97.96%，RSD为0.92%。

结论该法灵敏度高，专属性强，可作为中药茺蔚子中盐酸水苏碱的定量测定方法。

[Abstract] Objective To establish HPLC-ELSD determination method of the hydrochloric acid stachydrine in Motherwort Fruit. Methods The separation by HPLC-ELSD was performed on Asahipak NH2P 50 4E column （4.6 mm × 250 mm）with acetonitrile-0.2% phosphoric acid solution （84∶16）as mobile phase，1 mL/min of flow rate and 30℃of column temperature. Results Hydrochloric acid stachydrine at 0.487-4.383 μg had good linear relationship，r = 0.9999，the average recovery was 97.96%，RSD was 0.92%. Conclusion The method is sensitive，specific，it can be used as quantitative determination method of the hydrochloric acid stachydrine in Motherwort Fruit.[Key words] Motherwort Fruit；Hydrochloric acid stachydrine；HPLC-ELSD中藥茺蔚子又名益母草子，为唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt.的干燥成熟果实。

外标两点法对数方程是在应用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）进行药物分析时的含量计算方法。

我们用蒸发光散射检测器时，由于散射光的信号为非线性的，根据ELSD的工作原理，进样质量（ug）和ELSD检测响应值（峰面积A）一般不呈现良好的线性。

因为信号相应值与物质质量的对数呈线性关系，如果对进样质量和峰面积分别取常用对数后，两者呈现良好的线性关系，但是它是一条不经过原点的直线，所以在含量测定时必须使用外标两点法，通常称作外标两点法对数方程。

进两个不同量的对照品（ul）, 将进样质量（ug）和对应的峰面积（A）取对数后，由两点确定方程，方法是将两组数值代入对数方程：lgA=KlgC+b，即可求出式中的K和b。

公式为：lgA=KlgC+b，
A：峰面积
K：为公式中参量
C：进样质量（ug）
b：为公式中参量
计算时将样品峰面积（A）代入方程lgA=KlgC+b，计算出IgC后，再取反对数就可以计算出C了。

高效液相色谱 -蒸发光散射检测器法测定健心颗粒中黄芪甲苷含量健心颗粒由丹参、黄芪等八味中药材组成，其中黄芪的有效成分黄芪甲苷有加强心脏收缩力，保护心肌，抗心力衰竭等作用。

用HPLC-ELSD法测其含量方法成熟，检测方便，稳定性好，因而建立了HPLC-ELSD法测定健心颗粒中黄芪甲苷的方法，通过测定其含量，达到控制健心颗粒质量的目的。

1仪器与试药安捷伦1200型高效液相色谱仪、蒸发光散射检测器（Alltech3300）；HH-S 型恒温水浴锅（郑州长城科工贸有限公司）；KQ-250D型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

对照品来源及纯度：黄芪甲苷对照品由中国药品生物检定所提供。

批号：110781-200801（含量100.0%）。

试剂：乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2方法与结果2.1 色谱条件：（250×4.6mm，5μm）；色谱柱：迪马 Diamonsil C18流动相：乙腈-水（36：64）；柱温：35℃；漂移管温度：70℃；气流：1.5 L·min-1；流速：1ml·min-1；增益：1；进样量：20μl（自动进样）。

理论塔板数：按黄芪甲苷计算不得低于4000。

2.2 提取方法的选择：本文参考了文献[1]和2010年版中国药典[2]，采用两种提取方法进行对比。

方法一：取装量差异项下的本品，混匀，取适量，研细，取约10g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流至提取液无色，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml,微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml,弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm,柱高为12cm），以水50ml洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

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各物质色谱峰面积的自然对数与浓度的自然对数呈良好的线性关系,精密度RSD为0.%～2.75%,最低检测限为0.02～0.04μg,回收率测定值为93.2%～104.5%、快速地定量、定性分析各类混合脂肪酸甘油酯和游离脂肪酸,。

关键词:高效液相色谱;; 物,、二甘酯与三甘酯。

单甘酯、二甘酯是天然油脂代谢的中间产物,是一类重要的食品乳化剂[1]。

其中二甘酯除乳化性外,还具有许多独特的物理化学性质和生理作用,已广泛应用于食品、医药、化妆品等工业[2]。

研究表明,1,3-二甘酯被食用后,不像油脂那样在体内积累,因而在食物中添加二甘酯取代普通食用油脂,不仅不影响食欲,而且可以抑制体重的增加[3]。

另外,1,3-二甘酯对胆汁酸的分泌有抑制作用,可用于腹泻的预防和治疗[4]。

目前,单甘酯和二甘酯的生产方法主要是化学法和酶法,因此对由不同原料合成的甘油酯进行单甘酯、二甘酯与三甘酯的定量、定性至关重要。

高效液相色谱法蒸发光散射检测器测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A 及B 的含量李会军 李 萍(中国药科大学生药学教研室 南京 210038)摘要 目的:建立酸枣仁中酸枣仁皂苷A 及B 的含量测定方法,为该药材提供质量控制标准。

方法:应用高效液相色谱法-蒸发光散射检测器(HPL C-EL SD),Allspere ODS-2(250mm 4 6mm ,5 m)色谱柱,甲醇-水-冰醋酸(70 30 1)为流动相,测定了酸枣仁中酸枣仁皂苷A 及B 的含量。

结果:分析了11批商品药材。

酸枣仁皂苷A 及B 的平均回收率分别为92 4%(RSD =3 8%)和91 8%(RSD =3 9%)。

结论:方法快速简便,重现性良好,可用于酸枣仁药材的质量控制。

关键词 酸枣仁 高效液相色谱法 蒸发光散射检测器酸枣仁为鼠李科植物酸枣Ziz ip hus j uj uba var sp inosa (Bunge)H u ex H. F.Chou 的干燥成熟种子,具有养心安神的功效,是较为常用的镇静催眠中药。

酸枣仁皂苷A 及B 为其镇静催眠的有效成分之一[1],含量测定方法报道的有一阶导数光谱法[2]及薄层扫描法[3],本文首次采用高效液相色谱法利用蒸发光散射检测器(ELSD)对酸枣仁皂苷A 及B 进行了含量测定研究。

实验结果表明该法灵敏度、稳定性和重现性均能满足要求,是一种检测皂苷类成分的有效方法。

1 仪器与试剂日本岛津LC -10AD 液相色谱仪;法国SEDEX55型蒸发光散射检测器;H S 色谱数据工作站(杭州英谱科技开发有限公司);各地酸枣仁药材样品(见表1)均经作者鉴定;酸枣仁皂苷A 及B 对照品由中国药品生物制品检定所提供,纯度 98 5%;试验用水为上海获特满公司产纯净水;甲醇为淮阴化学试剂厂产色谱纯;其它试剂均为南京化学试剂厂产分析纯。

2 色谱及检测条件色谱柱:Allspere ODS-2(250mm 4 6mm ,5 m );预柱:Pellicular C 18(7 5mm 4 6mm);流动相:甲醇-水-冰醋酸(70 30 1);流速:1mL min-1。

外标两点法对数方程是在应用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELS D）进行药物分析时的含量计算方法。

大家都知道在用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）的定量用外标两点法对数方程，并且药典也要求如此！比如银杏叶、知母、黄芪、人参、署预、（中药含有皂苷的），化药也有一些。

但对数方程的列法却各不相同，有很多人是3楼的列法：峰面积和进样量同时去对数。

但就药典的文字理解：“对数方程”是指在方程里有一个对数，而同时取对数列出来的方程叫双对数方程。

根据最小二乘法应该是进样量(ug)与峰面积的对数的线性方程。

我们用蒸发光散射检测器时，由于散射光的信号为非线性的，根据ELSd的工作原理，进样质量和ELSD检测响应值（峰面积）一般不呈现良好的线性。

因为信号相应值与物质质量的对数呈线性关系，如果对进样质量和峰面积分别取常用对数后，两者呈现良好的线性关系，但是它是一条不经过原点的直线，所以在含量测定时必须使用外标两点法，通常称作外标两点法对数方程，在中国药典20 00版2002增补本以及2005版、2010版中，凡采用HPLC-ELSD方法进行含量测定时，均有“采用外标两点法对数方程计算含量”一句。

进两个不同浓度的对照品, 将进样量和对应的峰面积取对数后，由两点确定方程，方法是将两组数值代入直线方程：y=Kx+b，即可求出式中的K和b。

再将求出的K和b代入公式：InA=KInC+b ，即可求出对数方程。

公式为：InA=KInC+bA：峰面积K：为公式y=Kx+b中的KC：进样量b：为公式y=Kx+b中的b计算时将样品峰面积（A）代入方程InA=KInC+b，计算出InC后，再取反对数就可以计算出C了．再电子表格计算较为方便．在Excel中进行直线回归，可得出该方程，最后求出带入计算，就OK了！解析外标两点对数方程计算黄芪药材含量方法：照高效液相色谱法，ODS柱，以乙腈-水（32：68）为流动相，流速1ml/min，经蒸发光检测器检测，用外标两点对数方程计算黄芪药材中黄芪甲苷的含量。