高效液相色谱蒸发光散射检测器精品PPT课件

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高效液相色谱法 PPT课件

①固定相：非极性键合相如十八烷基硅烷（C18，ODS）、辛烷基（C8）
键合硅胶 ②流动相：水为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极性调整剂
常用甲醇－水、乙腈－水等应用：最广。非极性至中等极性的组分，（还有有机酸、碱及盐等极性组分）
1. 保留机制:
疏溶剂理论（solvophobic theory）
（二）紫外检测器(ultraviolet detector)
1.检测原理：朗伯－比尔 (Lambert-Beer) 定律，响应信号（吸光度）与浓度成正比A=εCl
2.特点：灵敏度较高（10-6—10-9 g/ml），噪音低，线性范围宽，稳定性好，适于梯度洗脱，不破坏样品，应用广（分析、制备）。
三.与气相色谱法相比
气相试样
液相试样气相流动相液相流动相气相柱温液相柱温
气体、容易转
气体、常用氢气液体、、氮气
可用的
高柱温
溶剂较多
常温
变为气
固体
体的液
体
第一节高效液相色谱法的主要类型和原理
一、主要类型
四类基本类型色谱法分配色谱法（partition chromatography）吸附色谱法（adsorption chromatography）离子交换色谱法（IEC）空间排阻色谱法（SEC）
（二）流动相的强度和选择性
1.溶剂的极性（强度）正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强 2.溶剂的选择性
不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，故选择性不同
混合溶剂（二元或多元流动相）
以反相色谱流动相的选择为例：
反相色谱常用溶剂的强度因子
水
甲醇
乙腈

高效液相色谱法(HPLC) ppt课件

此法在杂环类药物的鉴别实验中有广泛应用。
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32
流动相选择该注意的几点问题
1、尽量使用高纯度试剂做流动相，防止微量杂质长期积聚而损坏色谱柱；
2、避免流动相与固定相发生相互作用而使柱效下降或损坏柱子；
3、试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积；
4、流动相同时还应满足检测器的需求。
高效液相色谱法（HPLC）
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1
色谱法定义
• 色谱法也叫层析法，它是一种高效能的物理分离技术，将它用于分析化学并配合适当的检测手段，就成为色谱分析法。
• 色谱法中，流动相可以是气体，也可以是液体，由此可分为气相色谱法（GC）和液相色谱法（LC）。固定相既可以是固体，也可以是涂在固体上的液体，由此又可将气相色谱法和液相色谱法分为气-液色谱、气-固色谱、液-固色谱、液-液色谱。
阳离子交换：R—SO3H +M+ = R—SO3 M + H + 阴离子交换：R—NR4OH +X- = R—NR4 X + OH固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；
流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液；
阳离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；
应用：离子及可离解的化合物、氨基酸、核酸等。
而ＨＰＬＣ改变的是流动相极性，使样品各组分
在最佳条件下得以分离。
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10
四、液相色谱分析法的原理
• （二）高效液相色谱的分离过程 •
• 同其他色谱过程一样，ＨＰＬＣ也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。

高效液相色谱蒸发光散射检测器

01
02
03
色谱柱选择
根据目标化合物的性质选择合适的色谱柱，如C18、 C8、氨基柱等。
流动相选择
根据目标化合物的极性和溶解度选择合适的流动相，如水、甲醇、乙腈等。
洗脱程序优化
通过调整洗脱程序中的梯度、流速等参数，实现目标化合物的有效分离和检测。
数据采集、处理及分析方法
01
02
03
04
研究生物大分子、细胞和组织的相互作用，揭示生命活动的奥秘。
政策法规影响及市场机遇挑战
1 2 3
政策法规推动
各国政府加强对食品药品安全和环境保护的监管，推动高效液相色谱蒸发光散射检测器的需求增长。
市场机遇
随着全球经济的复苏和科技创新的加速，高效液相色谱蒸发光散射检测器市场将迎来新的发展机遇。
高效液相色谱蒸发光散射检测器
目录
• 引言 • 蒸发光散射检测器结构与工作原理 • 高效液相色谱蒸发光散射检测器实验方法 • 结果讨论与实际应用案例 • 仪器维护与故障排除指南 • 发展趋势与未来展望
01 引言
高效液相色谱技术概述
高效液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的分离分析技术。 HPLC基于样品中各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，实现组分的分离。
常见故障类型及诊断方法
压力异常
可能原因包括堵塞、泄漏、气泡等，应检查相应部件并采取相应措施。
灵敏度下降
可能原因包括检测器污染、光源衰减等，应清洗检测器或更换光源。
基线不稳
可能原因包括光源老化、流动相污染等，应更换相应部件或清洗流路。
色谱峰异常
可能原因包括色谱柱老化、样品污染等，应更换色谱柱或重新处理样品。

【完整】高效液相色谱仪课件资料PPT

1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等； A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶，用于存放水相流动相。高效液相色谱仪的系统组成
由于HPL C具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用, 流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。
色谱图示例
硅胶层析后活性样品的液相分离图谱
操作过程中应注意的事项
• 流动相 1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围； 2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质； 3、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相；A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶，用于存放水相流动相。
高效液相色谱法只要求样品能制成溶液, 不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。
2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质； 2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；高效——塔板数可达5000/米。色谱柱：
高效液相色谱仪的应用
• 高效液相色谱法只要求样品能制成溶液, 不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。
• 由于HPL C具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用, 流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。液相色谱- 质谱连用技术受到普遍重视, 如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等; 液相色谱- 红外光谱连用也发展很快, 如在环境污染分析测定水中的烃类, 海水中的不挥发烃类, 使环境污染分析得到新的发展。

高效液相色谱仪ppt课件

Si CH3 H3C H
CH3 Si CH3
O Si O
O
Si O
O
O
Si O
O
O Si OO
O
Si O
O
O
Si O
O
O
O Si O
O
O Si O
O
Si O
O
OO O
Si O O Si
O
HO Si
OO
O
主要是由于修饰到硅胶上的硅烷化试剂不同。 C8是修饰的带8个碳原子的硅烷， C18是修饰的带18个碳原子的硅烷。
发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
规格：常规分析柱(常量柱) 内径2～5mm(常用4.6mm， 3.9mm)，柱长10～30cm (15cm，25cm居多）
制备柱（21.2mm、30mm、50mm）半制备柱（〉5mm，7.8mm、9.8mm、10mm）
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16
C18柱（C8柱）
按测量性质：通用型检测器（如示差折光、蒸发光散射检测器）专属型检测器（如紫外、荧光检测器）
按检测方式：浓度型检测器质量型检测器
着重介绍四种检测器：紫外检测器（光电二极管阵列检测器）、
示差折光检测器、荧光检测器、蒸发光散射检测器
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21
a. 紫外检测器(UVD)： b. 应用最广泛的选择性检测器。
• 亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。
• 若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色
谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上
的出峰顺序相反。
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2. 流动相类别

《蒸发光散射检测器》课件

生物工程
用于蛋白质、核酸、细胞等生物样品的分离和检测。
02
蒸发光散射检测器的技术原理
光散射原理
光散射原理是指当光通过不均匀介质时，光会朝各个方向散射。在蒸发光散射检测器中，激光光束通过流动的样品，由于样品的颗粒或分子对光的作用，使得光束发生散射。
散射光的强度与样品颗粒或分子的性质、大小、浓度等因素有关，因此可以通过测量散射光的强度来推算样品中颗粒或分子的浓度。
工作原理
当流动相携带组分经过检测器时，组分会以蒸发的形式从流动相中释放出来，并在流动相的出口处形成小液滴。这些液滴在激光束的照射下会产生散射光，散射光的强度与组分的粒径和浓度成正比，从而可以实现对组分的定量分析。
种类与特点
种类
根据工作原理和结构的不同，蒸发光散射检测器可以分为热喷雾型（TSP）、常温喷雾型（RSP）和超声喷雾型（USP）等。
根据需要定期进行仪器校准，确保检测准确度。
04
蒸发光散射检测器的优势与局限性
优势分析
通用性强
蒸发光散射检测器适用于大多数有机和无机样品，尤其适合于高分子聚合物、大分子物质和颗粒状样品的检测。
稳定性高
蒸发光散射检测器的光源和光电倍增管等关键部件经过特殊设计，具有较高的稳定性和可靠性，能够保证长期稳定运行。
未来发展展望
提高灵敏度和稳定性
通过改进仪器设计和优化实验条件，进一步提高蒸发光散射检测器的灵敏度和稳定性，降低检测下限，提高测量准确性。
拓展应用领域
发展微型化仪器
开发微型化的蒸发光散射检测器，降低仪器成本和体积，便于携带和移动，为现场快速检测提供更多便利。
进一步拓展蒸发光散射检测器的应用领域，特别是在环境监测、生物医学、食品安全等领域的应用。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法

高效液相色谱-蒸发光散射检测法高效液相色谱-蒸发光散射检测法同时测定四君子丸中的5种有效成分四君子丸为四君子汤的现代剂型，由党参、白术、茯苓、炙甘草组成，被《中华人民共和国药典》(2005版)收载［1］。

现代药理学研究证明，四君子汤可增强机体的抵抗力，调节机体各方面的功能，对垂体、心血管功能、消化道运动功能和免疫功能有明显的改善作用［2］。

四君子丸含有党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ等主要活性成分［3－7］。

对于党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的定量分析方法，已有的文献报道均是对其中的一种或两种成分进行测定［8－14］，尚未见对上述5种活性成分同时测定的报道。

按照药典［1］的规定，对四君子丸的鉴定仅依靠薄层色谱法进行，结果比较粗放。

本文对四君子丸中的上述5种活性成分同时进行了含量测定，可为四君子丸的全面质量控制提供实验依据。

1实验部分1.1仪器与试药LC7000高效液相色谱仪(海能仪器)，包括LC7011输液泵，LC7070蒸发光散射检测器;HanonClatity色谱工作站。

HIQ SIL C18V 色谱柱(250mm× 4.6mm，5μm)。

甲醇(色谱纯)，二次蒸馏水(自制)，冰醋酸(分析纯);党参炔苷、苍术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、茯苓酸和甘草酸铵对照品;党参、白术、茯苓、甘草均购于济南漱玉平民药店;用于方法优化的四君子丸样品为自制，每丸平均质量为3.0g，符合中国药典对丸剂的各项规定要求。

测定的四君子丸实际样品分别为5个药品生产厂家的产品。

1.2对照品溶液的制备分别精密称取党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ对照品适量，分别配制质量浓度为6. 03，3.78，12.24，3.62，7.80g/L的储备液。

将上述5种储备液各取500μL混合、摇匀，即得含党参炔苷1.21g/L、茯苓酸0.76g/L、甘草酸2.45g/L、苍术内酯Ⅲ0.72g/L和白术内酯Ⅰ1.56g/L的混合对照品储备液。

高效液相色谱法教学精【全】ppt课件

§1-3 色谱柱的分离效率
一、塔板理论塔板理论认为: 一根柱子可以分为n
段，每段内组分在两相间迅速达到平衡，把每一段称为一块理论塔板。
设柱长为L，理论塔板高度为H，则
H=L/Ｎ
Ｎ为理论塔板数。
理论塔板数一N
①色谱峰对称： N 16(tR )2
说明：
tW
a. 在给定的操作条件下，N几乎相同
三、高效液相色谱法的特点
高压: 以液体作为流动相，液体流经色谱柱时，
受到阻力较大必须对流动相施加高压。一般可达到150～300kg／cm2，甚至可达700kg／cm2以上。
高速:
分析时间较经典液相色谱少得多（交换速度快），一个复杂样品的分析仅需几分钟到几十分钟。
高效:
气相色谱的分离效能很高，高效液相色谱的柱效则更高（化学键合相），一般约可达 6000理论塔板／米
②一定色谱条件下，对k’有差异的组
分，则柱效愈高，分离效果愈好。
塔板理论的特点和不足：
(1)当L一定时，N 越大(H 越小)，被测组
分在柱内被分配的次数越多，柱效越高，所得色谱峰越窄。 (2)柱效不能表示被分离组分的实际分离
效果：如两组分的分配系数K 相同，
无论该色谱柱的柱效多大，都无法分离。
① 柱效较高，ΔK(分配系数)较大，完全分离。 ② ΔK 不是很大，柱效较高，峰较窄，基本分离。 ③ 柱效较低，ΔK 较大，但分离的不好。 ④ ΔK 小，柱效低，分离效果更差。
一．分离度的数学表达式：
Rs
2(tR 2 tR1 ) W2 W1
2(tR 2 tR1 )
1.699 [Y1/ 2(2) Y1/ 2(1) ]
于世林编著)
第一章高效液相色谱法基本原理 §1－1 概述一、色谱法

蒸发光散射检测器ppt课件

ELSD
通用
质量相关高能好好好
UV 有光吸收的化
合物化学相关
高不能一般一般较好
RI
通用
折光度相关低能差差差
MS
通用
质量相关高能好好好
中国药典2005版规定须使用ELSD检测的药品
产品名
1 黄芪 2 炙黄芪 3 银杏叶制剂中萜类内酯
4 银杏叶提取物
5 银杏叶片 6 地肤子 7 知母 8 浙贝母 9 路路通 10 薏苡仁 11 乙肝宁颗粒 12 三金片 13 玉屏风口服液 14 补中益气丸（水丸）
各品牌ELSD性能对比
企业名称
产品型号光源波长检测元件蒸发区温度范围温度变化增量气体消耗量
气体压力范围流动相流速
检测限
噪音水平
UNIMICRO ALLTECH EUROSEP
SOFTA
SEDEX
SFD
PL
ESA
UM–3000 ELSD 2000ES DDL31
Model 400
0.01-3 ml/min 0－5ml/min <4ml/min 0.05－5ml/min 0.1－5ml/min
<1ng葡萄糖
<1ng葡萄糖
2ng
0.1 ng
Glucopyranoside (μ–HPLC)
<0.1mV
<1mV
<1mV
< 3.25 l/min 1.0－2.0l/min
4－7 bars
中国药典2005版规定须使用ELSD检测的药品
产品名
15
硫酸卡那霉素
16
硫酸卡那霉素注射液
17

高效液相色谱培训PPT课件

H20 with 0.1% TFA
50% ACN with 0.1% TFA
210.00
220.00
230.00
240.00
250.00 nm
260.00
270.00
280.00
290.00
h
37
溶剂混合的基线噪音
色谱条件
色谱柱： C18, 5 µm, 3.9x150mm at 35º
C.
流动相： A: 0.1% TFA in Water. B: 0.1% TFA in Acetonitrile.
➢ 特点：分离效率高、分析速度快、应用范围广、操作自动化。
h
3
流动相脱气装置
四元泵
一些商品化仪器
h
检测器柱温箱样品盘
控温箱
4
启动液相色谱仪器的流程
开启HPLC系统各个设备的电源
打开泵、自动进样器、检测器电
源，待设备通过自检后，打开计算
机启动色谱管理软件
准备流动相
过滤，脱气
色谱泵排气
脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡气泡对测定的影响： 1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动
h
14
h
15
h
16
流动相的保存
有机溶剂流动相：
室温下密封，避光保存
缓冲盐流动相：
当日现配现用：低温下密封保存，一般不超过3天防止微生物生长
h
39
基线噪音对积分的影响
Caffeine @ 271 nm
1.183
1.183
1.224
h
40
维护流程图

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检测步骤
• 1）用惰性气体雾化脱洗液 • 2）流动相在加热管（漂移管）中蒸发 • 3）样品颗粒散射光后得到检测。
主要优势
• 1) 可检测挥发性低于流动相的任何样品； • 2) 流动相低温雾化和蒸发，对热不稳定和挥
发性化合物亦有较高灵敏度 • 3) 广泛的梯度和溶剂兼容性，无溶剂峰干扰 • 4) 辅助载气提高了检测灵敏度，保持检测池
2010 级硕士研究生中药分析学课程作业
高效液相色谱蒸发光散射检测器
研究生：指导教师：
朱冉王亚丽教授无忧PPT整理发布
工作原理和仪器结构
蒸发光散射检测(ELSD)器原理：在粒子的数量不变的条件下，光散射强度正比于由溶质浓度决定的粒子大小而进行测量。
工作过程
• 经色谱柱分离的组分随流动相进入到雾化器中，被高速的载气流(氦气或空气)喷成一种薄雾。这些雾粒进入可以控温的蒸发器中，使流动相气化蒸发，溶剂蒸发，不挥发成分成为微小的雾状颗粒并高速通过蒸发器和光源光路。蒸气状态的溶剂通过光路时使光线散射，被光电管收集得到样品信号
内的清洁，避免污染 • 5) 高精度雾化和蒸发温度控制，保证高精度
检测 • 6) 可与任何HPLC系统连接
与几种常用检测器对比
ELSD UV
RID
MS
应用范围通用
有光吸收通用
通用
响应
质量相关化学相关折射度相关质量相关
灵敏度高
高
低
高
未知物检测能
不能
能
能
流动相影响不影响本底影响影响
Thinking In Other People‘S Speeches，Growing Up In Your Own Story
讲师：XXXXXX XX年XX月XX日
写在最后
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
You Know, The More Powerful You Will Be
Thank You
在别人的演说中思考，在自己的故事里成长
• 1）溶剂要有一定的化学稳定性, 不与固定相和样品组分起反应。 2）溶剂应与检测器匹配，不影响检测器正常工作。 3）溶剂对样品要有足够的溶解能力，以提高检测灵敏度。 4）溶剂的粘度要小，保证合适的柱压降。 5）溶剂的沸点低，有利于制备色谱的样品回收
液相色谱流动相溶剂的选择步骤
•
1)选择具有合适物理性质的溶剂，如沸点、粘度、紫外截止波长等 • 2)选择合适洗脱强度的溶剂：简单样品，2 ≤ k'≤ 5；复杂样品，0.5 ≤ k'≤ 20 • 3)改变溶剂的选择性，使被分离组分具有较高的α值
不影响
基线稳定性好
较好
差
好
检测器的性能指标
一.灵敏度-----指信号随组分的浓度(或质量) 的变化率
二.噪音N,漂移M,检测限D 三.最小检测量四.最小检测浓度五.线形范围
色谱法基本要求
1. 握色谱法的基本理论，了解柱效的影响因素；
3. 掌握分离度与柱效、选择因子、容量因子、分析时间之间关系；
4. 了解定性、定量分析方法； 5. 掌握气相色谱流程及气相色谱仪的结构；
6. 掌握气相色谱固定相的特性； 7. 掌握检测器性能指标的描述方法； 8. 掌握液相色谱仪的基本结构及基本概念； 9. 了解液相色谱法的主要类型及固定相、流
动相的选择。
10.了解色谱方法选择。
流动相溶剂的选择
• 液相色谱溶剂的要求