2019年过氧化氢酶米氏常数

过氧化氢酶米氏常数各位读友大家好，此文档由网络收集而来，欢迎您下载，谢谢篇一：过氧化氢酶动力学常数测定实验项目二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定姓名：赵家熙指导教师：谭志文实验室：6503 组员：①章恒炯②③成绩：第三部分：实验记录与分析一、酶活力测定（一）原始数据1.样品原始质量：2.标定数据：（1）KMnO4质量数及配制：158 （2）Na2C2O4质量数：134 （3）标定数据：/L（4）KMnO4实际浓度：/L3.样品滴定数据消耗高锰酸钾溶液（ml）：实验（1）实验（2）对照（1）对照（2）（二）结果计算1．换算系数（1mL KMnO4溶液相当于多少mg H2O2）2.样品酶活计算（每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数表示：mg H2O2/g?min）(A?B)?VT??V1?t酶活(mgH2O2/g·min)=酶活(mgH2O2/g·min)=（A-B）= VT====10min二、动力学常数的测定（一）原始数据（二）求出各管反应前的底物浓度[S]0和反应速度V0（三）以1/V0对1/[S]0作图（用excel 作图）1/s 1/v2008040（四）求出Km（mol/L）和Vmax （mmol/min）Km11?? vv[S]v如（三）中图maxmaxy=+ x=0时y=1/Vmaxy=0时x=-1/KmKm= Vmax=第四部分：课后研讨题1.总结本实验操作过程的注意事项。

1酶的提取和存放一般在0-4℃下进行。

2每个三角瓶内的酶促反应时间要精确控制在5min。

3各反应瓶的滴定终点微红色为同一标准。

4使用前应检查滴定管是否渗漏，滴定过程中应该保证逐滴加入。

2.影响过氧化氢酶活力测定的因素有哪些?1、温度，温度过高或者过低会降低过氧化氢酶的活性。

2、酸碱度，酸或碱浓度太高会使过氧化氢酶失活。

3.过氧化氢酶与哪些生化过程有关?R(Fe2+)+H2O2 = R(Fe3++OH－) R(Fe3+OH－)2+H2O2 = R(Fe2+)2+2H2O+O24.在反应速度的测定中，加入硫酸有哪些作用？终止反应,为下一步的滴定提供酸的环境。

实验一过氧化氢酶米氏常数的测定一、目的了解米氏常数的意义，测定过氧化氢酶的米氏常数。

二、实验原理H2O2被过氧化氢酶分解出H2O和O2，未分解的H2O2用KMNO4在酸性环境中滴定，根据反应前后H2O2的浓度差可求出反应速度。

本实验以马铃薯提供过氧化氢酶，以1/ν~1/[S]作图求Km三、实验器材1.锥形瓶100～150ml（×6）。

2.吸管1.0ml（×2）、0.5ml（×2）、2.0ml（×2）、5ml（×2）、10.0ml（×1）。

3.温度计（0～100℃）。

4.微量滴定管5ml（×1）。

5.容量瓶1000ml（×1）。

四、实验试剂1、0.02mol/L磷酸缓冲液（Ph7.0）取磷酸二氢钾 0.68g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液 29.1ml，用水稀释至100ml,即得。

2、酶液：称取马铃薯5g，加上述缓冲液10ml，匀浆，过滤。

3、0.02mol/L KMnO4：称取KMnO4（AR）3.2g，加蒸馏水1000ml，煮沸15min，2d后过滤，棕色瓶保存。

4、0.004mol/L KMnO4：准确称取恒重草酸钠0.2g，加250ml冷沸水及10ml浓硫酸，搅拌溶解，用0.02ml/L的KMnO4滴定至微红色，水浴，加热至65℃，继续滴定至溶液微红色并30s不褪，算出KMnO4的准确浓度稀释成0.004mol/L即可。

5、0.05 mol/L H2O2：取30% H2O223ml加入1000ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度（约0.2mol/L），用标准KMnO4（0.004mol/L）标定其准确浓度，稀释成0.05mol/L（标定前稀释4倍，取2.0ml，加25% H2SO42.0ml，用0.004mol/LKMnO4滴定至微红色）。

6、25% H2SO4五、操作取锥形瓶6只，按下表顺序加入试剂：表一过氧化氢酶米氏常数的测定管号试剂0123450.05mol/L H2O2/ml蒸馏水/ml酶液/ml9.50.51.008.500.51.258.250.51.677.830.52.57.00.55.004.500.5先加好0.05mol/L H2O2及蒸馏水，加酶液后立即混合，依次记录各瓶的起始反应时间。

实验二过氧化氢酶km值的测定
过氧化氢酶（H2O2）是一种经典的多功能过氧化物。

它可以在氧化还原或化学反应中发挥作用。

因此，它在生物氧化解氧化反应中非常重要。

H2O2可以与其他过氧化物，包括氧原子和自由基，反应形成复杂的反应物组合。

这些反应控制着氧化脱氢反应，而过氧化氢酶（Km）是这种反应序列的关键步骤。

Km是H2O2和其他过氧化物之间氧化脱氢反应的活性位置，它表示H2O2在氧化脱氢反应中显示出其最大活性的浓度。

它是生物体氧化脱氢反应进行的重要指标，可以帮助我们了解这种反应的效率和机理。

测定Km值可以看出这个过程的氧化-脱氢速率，从而优化氧化脱氢反应的效率。

Km值的测定大致可以分为三个部分：进行反应的准备工作、进行该反应的实验操作和数据处理。

首先，用实验室内的设备准备反应液，其中应包括酶溶液、过氧化氢和反应基质。

其次，把反应液倒入试剂瓶，用磁力搅拌器搅拌均匀，使酶蛋白完全溶解。

然后，用光度仪测定溶液的响应时间，并确定反应停止的时间。

最后，对得到的数据进行分析，以确定Km值。

Km值测定是一个比较复杂的实验，需要实验室设备、当心操作和熟练的数据处理。

这些都是关键因素，控制着测定结果的准确性和可信度。

因此，在实验室中必须做好准备，并且试剂、实验仪器要有正确的温度、湿度和搅拌速度，以保证实验的准确性和可靠性。

此外，实验室人员还需要做好安全防护措施，以防止接触有毒物质，确保实验的安全性。

总之，测定H2O2的Km值是比较复杂的，需要安全准备、细心操作和合理数据分析，以获得准确、可靠的结果，为氧化解氧化反应提供参考。

双倒数法测定过氧化物酶的米氏常数学院/专业/班级____________________________________________ 姓名_______________ 合作者___________________________________________________ 教师评定___________【实验目的】以过氧化物酶为例，掌握测定酶促反应初速率和米氏常数的原理及方法【实验原理】1913年，Michaelis 和Menten 运用酶反应过程中形成中间络合物的原理，首先提出了底物浓度和酶促反应速率的关系式，即著名的米氏方程：[][]S K S V v m max +⋅= 式中：v 为反应初速率（微摩尔浓度变化/min ）；V max 为最大反应速率（微摩尔浓度变化/min ）；[S ]为底物浓度（mol/L ）；K m 为米氏常数（mol/L ）。

这个方程式表明当已知K m 及V max 时，酶反应速率与底物浓度之间的定量关系。

K m 值等于酶促反应速率达到最大反应速率一半时所对应的底物浓度，是酶的特征常数之一。

不同酶的K m 值不同，同一种酶与不同底物反应K m 值也不同，K m 值可以近似的反应酶与底物的亲和力大小：K m 越大表明亲和力越小；K m 越小表明亲和力越大。

大多数纯酶的K m 值在0.01~100 mmol/L 。

通过米氏方程的不同变形，可有多种求算米氏常数的方法，一般较常用的双倒数法，即取米氏方程的倒数式：[]max max m V 1S 1V K v 1+⋅=以v 1对[]S 1作图得一直线，该直线与横轴截距[]m K 1S 1=-。

过氧化物酶是一种对氢受体（H 2O 2） 底物有特异性，对氢供体底物缺乏特异性的酶，它可催化过氧化氢氧化许多多元酚或多元胺类底物发生显色、荧光或化学发光反应，可用于微量过氧化氢含量测定，也可以和其它酶反应系统偶联可用于测定许多与生命相关的物质：如葡萄糖、半乳糖、氨基酸、尿酸及胆甾醇等，亦是免疫分子和核酸分析中常用的标记物。

过氧化氢酶米氏常数的测定实验报告1. 实验目的与背景哎呀，大家好！今天咱们来聊聊一个挺有趣的实验——过氧化氢酶的米氏常数测定。

别被这个名字吓到了，其实就是在研究一种酶的“工作效率”而已。

想象一下过氧化氢（H₂O₂）就像是个小小的坏蛋，它可不是什么好东西；而过氧化氢酶呢，就是那个专门来捉拿坏蛋的超级英雄。

这种酶存在于咱们的细胞里，帮忙把过氧化氢分解成水和氧气，保护我们的身体不被这些“坏蛋”害了。

米氏常数（Km）这东西呢，简单来说就是衡量酶对底物亲和力的一个参数。

如果Km值小，说明酶对底物的“喜欢”程度高，咱们的超级英雄很厉害；反之则说明这个超级英雄对底物的“兴趣”不大。

通过测定这个值，我们可以更好地理解这位超级英雄的“战斗力”，也能对相关的生物化学反应有个更清晰的认识。

2. 实验原理与方法2.1 实验原理好的，接下来咱们进入正题——实验原理。

首先，得了解酶催化的基本过程。

简单来说，酶会跟底物结合，形成一个“酶底物复合物”，然后催化底物转变为产物。

在这个过程中，酶的催化速率会受到底物浓度的影响。

米氏常数就是用来描述这种关系的一个参数。

咱们用的是过氧化氢酶，它催化的反应是这样的：2 H₂O₂ → 2 H₂O + O₂。

底物过氧化氢在反应过程中会被转化成水和氧气。

通过测定不同底物浓度下反应速率的变化，可以绘制出反应速率与底物浓度的关系图，从中找出米氏常数Km。

2.2 实验步骤接下来，就轮到实验步骤了。

首先，准备好过氧化氢酶和不同浓度的过氧化氢溶液。

每一种底物浓度都要做几个重复实验，以确保数据的可靠性。

接着，将过氧化氢酶加入到每种浓度的过氧化氢溶液中，开始反应。

然后，定期取样，测定反应产物的浓度。

这时，咱们就要用上光谱仪之类的仪器来检测氧气的产生情况，这可是个大工程，得小心翼翼地操作，别弄得一团糟。

3. 实验结果与讨论3.1 实验数据分析一切准备妥当，实验终于开始啦！拿到数据后，我们就可以用“米氏方程”来分析实验结果了。

过氧化氢酶的作用机理与速率方程推导过氧化氢酶（catalase）是一种存在于生物体细胞中的一种酶类，在细胞代谢过程中起着重要作用。

它能够催化过氧化氢分解为水和氧，并且对生物体内部的氧化应激起到了很大的作用。

而对于过氧化氢酶的催化机理以及其速率方程的推导，都是十分重要的内容。

本文将通过对过氧化氢酶的催化机理和速率方程的详细介绍，加深对过氧化氢酶作用的理解，同时也为相关领域的研究工作者提供一些有益的信息。

一、过氧化氢酶的催化机理过氧化氢酶是一种催化酶，其作用是将过氧化氢分解为水和氧气。

过氧化氢酶在催化水解过程中发挥着关键作用，并且可以在较温和的条件下加速过氧化氢的分解反应。

该酶主要存在于细胞质以及细胞器中，并且对于细胞内部的氧化应激有着很大的作用。

过氧化氢酶的催化机理主要分为两个关键步骤：1.过氧化氢与过氧化氢酶的结合当过氧化氢与过氧化氢酶结合时，过氧化氢酶的活性部位上的铁离子将催化活化过氧化氢的分解，使其分解为水和氧。

这个步骤是整个过氧化氢酶催化反应的第一步，也是比较关键的一步。

2.过氧化氢的分解过氧化氢在与过氧化氢酶结合后，会通过过氧化氢酶活性部位上的催化作用，发生分解反应，生成水和氧气。

这个步骤是整个过氧化氢酶催化反应的第二步，是整个酶催化反应的决速步骤。

总的来说，过氧化氢酶的催化机理主要包括了过氧化氢与过氧化氢酶的结合和过氧化氢的分解两个关键步骤。

在这两个步骤中，过氧化氢酶通过其活性部位上的催化作用，促进了过氧化氢的分解反应，使得其在细胞内部发挥了重要作用。

二、过氧化氢酶催化反应的速率方程推导速率方程是描述酶催化反应速率与物质浓度之间关系的方程。

过氧化氢酶催化反应的速率方程主要描述了反应速率与过氧化氢和过氧化氢酶的浓度之间的关系。

推导过氧化氢酶催化反应的速率方程，可以更加深入地理解过氧化氢酶的催化机理。

过氧化氢酶催化反应的速率方程可以用Michaelis-Menten方程来描述。

该方程为：v = (V_max [S]) / (K_m + [S])其中，v表示反应速率，V_max表示酶的最大催化速率，[S]表示底物（过氧化氢）的浓度，K_m表示米氏常数，该常数表示的是当反应速率是最大速率的一半时底物的浓度。