基因工程试题及答案
1简述基因工程的定义和现代生物技术的内容
基因工程是利用DNA体外重组或PCR扩增技术从某种生物基因组中分离感兴趣的基因，或是用人工合成的方法获取基因，然后经过一系列切割，加工修饰，连接反应形成重组DNA分子，再将其转入适当的受体细胞，以期获得基因表达的过程.
现代生物技术的内容：基因工程技术、蛋白质工程技术、细胞（组织）工程技术、酶
工程技术、发酵工程技术
2请简述基因工程中使用的主要酶类和它们的功能限制性内切酶―主要用于DNA分子的特异切割 DNA甲基化酶―用于DNA分子的甲基化核酸酶―用于DNA和RNA的非特
异性切割核酸聚合酶―用于DNA和RNA的合成核酸连接酶―用于DNA和RNA的连接
核酸末端修饰酶―用于DNA和RNA的末端修饰
其它酶类--用于生物细胞的破壁，转化，核酸纯化，检测等 3载体必备的功能元件是什么，各有什么功能
至少有一个复制起点，因而至少可在一种生物体中自主复制。至少应有一个克隆位点，以供外源DNA插入。至少应有一个遗传标记基因，以指示载体或重组DNA分子是否
进入宿主细胞。
4何为α互补，它在载体构建中有何作用
β―半乳糖苷酶基因有1021 AAs，基因产物不具酶活性，装配为四聚体后才有酶活。该蛋白质可分为两部分：α链和β链。前者负责四聚体装配，后者具β―半乳糖苷酶活性；只有当两者都存在时，才会表现出酶活性，该作用称之为α-互补作用。这两个部分
可独立存在，分别由两个基因编码。为α链编码的基因称之为lacZα(编码145 AAs)。
这两个基因（LacZ和LacZα）均可作为标记基因。通过其是否具有β―半乳糖苷酶活性
作为构建载体的筛选标志。
β―半乳糖苷酶基因的优点:
a. 酶催化X-Gal水解为兰色产物，检测直观
b. lacZα编码5'-端可容许很大的变化而不影响酶活性
c. lacZα和β链基
因的分别表达可使载体小而容量大
5简述利用T7噬菌体启动子的pET系列表达载体的工作原理。
pET载体及其表达系统pET-5a：在载体的基本结构上加入了T7噬菌体启动子序列及
其下游的几个酶切位点。当外源基因插入到这些酶切位点后，就可在特定的宿主细胞中诱
导表达。T7噬菌体启动子：只能由T7噬菌体的RNA聚合酶识别并启动转录，而大肠杆菌的RNA聚合酶不能作用于T7噬菌体启动子。用于表达的宿主细胞必须能表达T7噬菌体的RNA聚合酶。常用的pET表达载体的宿主菌：大肠杆菌BL21（DE3）。通过宿主控制T7 RNA聚合酶的量来实现的，即在宿主细胞中引入一个带有T7噬菌体的溶菌酶编码基因的质粒，如pLysS或pLysE，它们分别低量和高量表达T7噬菌体的溶菌酶。该溶菌酶可抑制T7 RNA聚合酶的活性，从而减少在未诱导情况下外源基因的表达。使启动子的控制效应更严谨。在pET载体上装载lacⅠ基因，提高阻抑物的浓度。可利用T7-lac启动子（在T7启动子序列下游装入一个由25bp组成的lacO操纵子序列），当阻抑物结合在lacO位点时，即使存在T7 RNA聚合酶，外源基因也无法表达。只有当诱导物存在时，才能解开T7 RNA聚合酶基因和外源基因表达的双重阻遏。 6请简述PCR引物设计的要点
① 长度：至少 16bp ，通常为 18-30bp ，更短的引物一般会降低扩增的特异性，但会提高
扩增的有效性。
② 引物的解链温度：两个引物之间的 Tm 值差异最好在 2-5℃ 。对于小于 20 个碱基的引物其 Tm 值可用简易公式计算，即 Tm=4（G+C）+2（A+T）。对于 14-70 个核苷酸的引物可用以下公式计算。
Tm=81.5+16.6（1g[K+]）+0.41（G+C）%-（675/N）
N 表示引物的核苷酸数目， [K+] 表示单价离子即钾离子的浓度。③ 避免引物内部或引物之间存在互补序列（3个碱基），从而减少引物二聚体的形成以及引物内部二级结构的形成。
④ G+C 含量：尽量控制在 40% 至 60% 之间， 4 种碱基的分布应尽可能均匀。尽量避免嘌呤或嘧啶的连续排列，以及 T 在 3' 末端的重复排列。⑤ 引物的 3' 末端最好是 G 或 C ，但不要 GC 连排。 7请简述DNA诱变的种类和特点
一、随机诱变特点：不需要有序列针对性的设计，引起突变的位置及性质是随机的。随机诱变的关键和策略，选择合适的突变频率：目的基因中有1.5-5个碱基发生碱基替换时，诱变结果最理想。根据研究目的对突变体进行定向选择或筛选。做定向进化或试管进化。
1、错误渗入诱变
指在体外DNA扩增过程中，使用具有错配倾向的DNA聚合酶以及反应条件，使碱基错误渗入到新合成的基因中。
2、盒式诱变
包含简单盒式取代诱变和混合寡核苷酸诱变两种方式。
简单盒式诱变：用限制性内切酶去掉特定的片段，然后用含有突变的序列取代。若
使用含随机突变的混合寡核苷酸，则可在限定区域内引入大量的随机突变。 3、增变菌
株的诱变作用 4、化学诱变
用化学诱变剂处理双链DNA片段，将发生随机突变的片段群体克隆到合适的宿主中可
构成一个重组突变体库。常用的化学试剂有：亚硝酸、羟胺、亚硫酸氢盐或肼。 8某研究者通过蛋白质分离纯化的方法，得到了某一真核生物蛋白质并测定了该蛋白质N端的氨基
酸序列，请叙述如何综合利用分子生物学和基因工程技术得到该蛋白质相应的cDNA基因
序列？
提取总RNA，设计引物对mRNA进行RT-PCR，连接到载体，进行质粒转化，阳性克隆
筛选，重组质粒鉴定，原核表达，测序。上游引物设计：可以根据蛋白质N端的氨基酸
序列可以得到几段DNA序列，则是与基因5’的DNA序列，可根据这一段序列设计基因的
上游引物。由于不同的密码子可能编码同一个氨基酸，得到的5’的DNA序列会有好几种，设计的引物也对应有好几种，再则氨基酸那里不同的基因密码子的偏好性会不同，可以根
据该分离的蛋白质氨基酸密码子的偏好性选择设计好了的合适的上游引物。
下游引物：mRNA的poly-A尾巴对于的olig-dT
利用上述引物对mRNA进行逆转录测序得到的就是cDNA基因序列有好几条，然后到genebank中进行比对筛选出引物那段序列一致的cDNA序列，那就是要的蛋白质相应的cDNA序列。
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基因工程试题 一、名词解释(4 ‘*10) 1.基因工程技术：按照人们的愿望，进行严密的设计，通过体外DNA 重组和转移等技术，有目的地改造生物种性，使现有物种在较短的时间内趋于完善，创造出新的生物类型。 2.感受态细胞：受体细胞经一些特殊方法(如CaC12、RbCl (KC1) 等化学试剂)处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性改变，成为能允许外源DNA 分子进入的细胞状态。 3.cDNA文库：从组织细胞中分离得到纯化的mRNA,然后以mRNA为模板，利用逆转录酶合成其互补DNA,再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后导入受体菌内，扩增，构建cDNA文库。 4.鸟枪法：指将某种生物体的全基因组或单一染色体切成大小适宜的 DNA 片段，分别连接到载体DNA上，转化受体细胞，形成一套重组兑隆，从中筛选出含有目的基因的期望重组子。 5.SD序列(Shine-Dalgarno):位于翻译起始密码了•上游的6-8个核苷酸序列(5’ UAAGGAGG 3’)，它通过识别大肠杆菌核糖体小亚基中的16S rRNA 3’端区域3’ AUUCCUCC 5’并与之专一性结合，将mRNA定位于核糖体上，从而启动翻译。 6.包涵体：胞内高效表达时，工程菌因大景合成异源蛋白质所形成的水不溶性积聚物。
7.复合转座子：是由两个重复序列夹着一个或多个结构基因如某些抗药性基因和其它基因组成。存在于R因子及其它质粒中。复合转座子两端的组件由IS和类IS组成。 8.菌落原位杂交：是将菌落或噬菌斑转到固相膜上，原位裂解细胞后使核酸固定在膜上，然后与探针杂交。用标记的核酸探针，经放射自显影或非放射检测体系，在组织细胞间期染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。 9.RACE：是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以mRNA 为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到3, 或5，端之间未知序列的方法。 10.连续式发酵：即在连续发酵反应器中，细胞的总数和培养液总体积同时维持恒定，前提是由培养液流出所造成的细胞损失正好为细菌分裂所产生的新细胞弥补。 二、简答题(6’ *5) 1、一个理想克隆载体应具备的条件有哪些？ 答：⑴分子较小，可携带比较大的DNA片段。 (2)能独立于染色体而进行自主复制并且是高效的复制。 (3)要有尽可能多种限制酶的切割位点，但每一种限制酶又要最少的切割位点(多克隆位点multiple cloning sites, MCS)。
基因工程练习题 一、单项选择题 1．在基因工程中，切割载体和含有目的基因的DNA片段中，一般需使用 A.同种限制酶 B.两种限制酶 C.同种连接酶 D.两种连接酶 2．基因工程常用的受体有 ①大肠杆菌②枯草杆菌③结核杆菌④动植物细胞 A.①②③④ B.①②③ C.②③④ D.①②④ 3．有关基因工程的叙述正确的是 A.限制酶只在获得目的基因时才用 B.重组质粒的形成是在细胞内完成的 C.质粒都可作为载体 D.蛋白质的结构成分为合成目的基因提供资料 4．下列哪项不是基因工程中经常使用的用来运载目的基因的载体 A.细菌质粒 B.噬菌体 C.动植物病毒 D.细菌核区的DNA 5．基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的是 A.人工合成目的基因 B.目的基因与运载体结合 C.将目的基因导入受体细胞 D.目的基因的检测表达 6．不是基因工程方法生产的药物是 A.干扰素 B.白细胞介素 C.青霉素 D.乙肝疫苗 7．在基因工程中用来修饰改造基因的工具是 A.限制酶和连接酶 B.限制酶和水解酶 C.限制酶和运载酶 D.连接酶和运载酶 8．下列哪项叙述不是运载体必须具备的条件 A.具有某些标记基因 B.决定宿主细胞的生存 C.能够在宿主细胞中复制 D.有一个或多个限制酶切点 9．水母发光蛋白由236个氨基酸构成，其中有三种氨基酸构成发光环，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记。在转基因技术中，这种蛋白质的作用 A.促使目的基因导入宿主细胞中 B.促使目的基因在宿主细胞中复制 C.使目的基因容易被检测和选择 D.使目的基因容易成功表达 10．应用基因工程技术诊断疾病的过程中必须使用基因探针才能达到检测疾病的目的。这里的基因探针是指 A.用于检测疾病的医疗器械 B.用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子
第二章习题 一、单选题 1.在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（ B ） A．I类限制酶 B. II类限制酶 C. III类限制酶 D.核酸内切酶 E. RNAase 2.下列关于同裂酶的叙述错误的是( B ) A. 是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。 B. 它们的识别序列完全相同。 C. 它们的切割方式可以相同，也可以不同。 D. 有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。 E. 两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。 3. 多数限制酶消化DNA的最佳温度是（ A ） A. 37℃ B.30℃ C.25℃ D.16℃ E.33℃ 4. 下列关于限制酶的叙述错误的是( B ) A. I类限制酶反应需要 Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸。 B. II类限制酶反应需要Mg2+、ATP。 C. III类限制酶反应需要Mg2+、ATP，S-腺苷蛋氨酸能促进反应，但不是绝对需要。 D. I、III类限制酶对DNA有切割和甲基化活性，II类限制酶对DNA只有切割活性而无甲基化活性。 E. II类限制酶要求严格的识别序列和切割点，具有高度精确性。 5. 如果一个限制酶识别长度为6bp ,则其在DNA上识别6bp的切割概率为( D ) A. 1/44 B. 1/66 C. 1/64 D.1/46 E. 1/106 6. 多数II类限制酶反应最适PH是 ( C ) A. PH:2-4 B. PH:4-6 C. PH:6-8 D. PH:8-10 E. PH:4-10 7. 下列关于限制酶反应的说法错误的是 ( D ) A. 限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。 B. 许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。 C. 有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。 D. 限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。 E. BSA对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的BSA。 8. II类限制酶反应中必须的阳离子是（ C ）
基因工程试题与答案 1、转基因动物的安全性问题 正面观点： （1）转基因工程是不可阻挡的. 基因工程将影响当代重大的环境问题:人口过剩/污染/生 物多样性急剧减退等等. 保护土壤/水/能源成为发展可持续农业的目标。 （2) 转基因食品的功效: 改良植物的食用品质；增加果蔬贮藏、保鲜性能；生产特殊食 品——食品疫苗。 （3）迄今为止并没有发现转基因食品危害人体健康和环境的确切证据。如果转基因生 物技术得不到社会支持，这一研究将被扼杀。 反面观点： 转基因的潜在危害：转基因动植物安全性评价主要集中在环境安全性，食品安全性以及对人 动物健康的影响三方面。 环境安全性分析包括： （1）生存竞争性：转基因植物在生存竞争方面具有的优势可能导致生物多样性的减少， 影响了生物多样性； （2）生殖隔离距离:基因不可控制的水平转移的可能性；与近缘野生种的可交配性：外 源基因是否会漂流扩散至亲缘野生种中，从而破坏自然生态平衡； （3）对非靶生物的影响：转基因植物花粉通过风，雨，鸟，昆虫，真菌，细菌以至整 个生物链传播使外源基因逃逸，从而造成基因污染。
（4）病毒发生异缘重组或异缘包装的可能性：自然界中存在着植物病毒之间的异缘 重 组。 （5）对农业和生态环境的影响，生态平衡. 如产生超级杂草的可能性；种植抗虫转 基 因作物后可能使害虫产生免疫并遗传、从而产生更加难以消灭的“超级害虫”； 食品安全性： （1）转基因毒性. 如英国发现转基因马铃薯会减弱老鼠免疫系统功能，美国发现转 基因 玉米会危害蝴蝶幼虫及其相关生态环境； （2）人的毒理反应或过敏反应. 大肠杆菌细胞膜间隙中含有大量的内毒素，痕量的 内 毒素即可导致人体热原反应。 （3）实质等同性的原则，即某一种生物技术产品或其成分能够与市场上现有的对应 产 品进行比较。如果一种转基因产品能够与现存的一种产品进行比较，并且发现具有实 质同等 性，便能用现产品安全性同种方法对待它。转基因植物所引入的蛋白对人体可能是异 性蛋白 质，在部分人中可能发生食物过敏，特别是幼儿和某些过敏体质的人。 对人动物健康的影响：转入传统食品或作物中的基因可能来自各种物种，有些是人们 不 能或者极少食用的，是否会对人体造成危害；转基因植物食品中的新基因会不会传递 给人畜 的肠道微生物，插入表达，然后危害健康。 动物：1. 外源基因在动物基因组中的随机整合，可能会引起宿主细胞基因的插入突变、 缺失突变及宿主基因的扩增重排和移位，也可能激活正常状态下处于关闭状态的基因，从而
作业一： 一、名词解释： 1、基因：是遗传的物质基础，是DNA（脱氧核糖核酸）分子上具有遗传信息的特定核苷酸 序列的总称，是具有遗传效应的DNA分子片段。 2、基因组该指单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部DNA分子 3、操纵子:原核生物的几个功能相关的结构基因往往排列在一起，转录生成一个mRNA，然 后分别翻译成几种不同的蛋白质。这些蛋白可能是催化某一代谢过程的酶，或共同完成某种功能。这些结构基因与其上游的启动子，操纵基因共同构成转录单位，称操纵子。 4、启动子:是RNA聚合酶结合位点周围的一组转录控制组件，包括至少一个转录起始点。在 真核基因中增强子和启动子常交错覆盖或连续。有时，将结构密切联系而无法区分的启动子、增强子样结构统称启动子。 5、增强子:是一种能够提高转录效率的顺式调控元件，最早是在SV40病毒中发现的长约20 0bp的一段DNA，可使旁侧的基因转录提高100倍，其后在多种真核生物，甚至在原核生物中都发现了增强子。增强子通常占100～200bp长度，也和启动子一样由若干组件构成，基本核心组件常为8～12bp，可以单拷贝或多拷贝串连形式存在。 6、基因表达：是指细胞在生命过程中，把储存在DNA顺序中遗传信息经过转录和翻译，转 变成具有生物活性的蛋白质分子。 二、简答题 1、说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。 答：限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则,即属名+种名+株名的各一个首字母,再加上序号. 基本原则: 3-4个字母组成,方式是:属名+种名+株名+序号; 首字母: 取属名的第一个字母,且斜体大写;第二字母: 取种名的第一个字母,斜体小写;第三字母: (1)取种名的第二个字母,斜体小写;(2)若种名有词头,且已命名过限制酶,则取词头后的第一字母代替.第四字母: 若有株名,株名则作为第四字母,是否大小写,根据原来的情况而定,但用正体. 顺序号: 若在同一菌株中分离了几种限制酶,则按先后顺序冠以I,Ⅱ,Ⅲ,…等,用正体. 2、什么是限制性内切核酸酶的星号活性？受哪些因素影向？ 答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因条件的改变会出现第二
高中生物选修三“基因工程”综合练习 (20题含答案) 请回答下列有关克隆技术和基因编辑的问题： 1）克隆技术是指通过人工手段复制出与原体完全一样的 生物体。目前，克隆技术主要分为三种：体细胞核移植克隆、胚胎分裂克隆和基因克隆。其中，最常见的克隆方法是。 2）基因编辑技术是指通过改变生物体的基因序列来实现 对其性状的调控。CRISPR/Cas9系统是目前最常用的基因编辑技术之一，其中CRISPR指的是，Cas9则是。 3）基因编辑技术的应用非常广泛，其中包括疾病基因治疗、农业生产、生物安全等领域。以疾病基因治疗为例，基因编辑技术可以通过修复或替换患者体内的有缺陷基因，从而达到治疗疾病的目的。目前，基因编辑技术已经被用于治疗包括血友病在内的多种疾病。 答案：（1）体细胞核移植克隆（1分）（2）“类细菌重 复间隔簇”、“CRISPR相关蛋白9”（1分）（3）血友病（1分）逆转录病毒载体是目前应用较多的动物基因工程载体之一。它可以将外源基因插入到受体细胞染色体中，使外源基因随染色体DNA一起复制和表达。研究发现逆转录病毒基因组
（RNA）的核心部分包括三个基因：gag基因（编码病毒的核 心蛋白）、pol基因（编码逆转录酶）、env基因（编码病毒 的表面糖蛋白）。位于这些基因的两端有LTR序列（含有启 动子、调节基因等），控制着逆转录基因组核心基因的表达及转移。下图展示了构建逆转录病毒载体及用于培育转基因小鼠的过程。 1）逆转录病毒的遗传信息储存在RNA中，其中包含四 种核苷酸排列顺序中的四种脱氧核苷酸。 2）过程②中，外源基因一定要插入到病毒DNA的LTR 序列中的启动子后，其主要目的是控制外源基因的表达。 3）过程③中，导入病毒蛋白编码基因（gag，pol和env）的目的是合成组成病毒的蛋白质。 4）过程④中，逆转录病毒载体感染的细胞一般选择内细 胞团细胞，因为这类细胞能发育成新个体的各种组织器官（具有发育的全能性），处于囊胚期。
高三生物基因工程练习题及答案 第一节：选择题 1. 现代基因工程技术的突破是建立在下列发现的基础之上的： A. DNA双螺旋结构 B. 基因重组的概念 C. DNA复制的机制 D. 基因的表达调控机制 正确答案：A. DNA双螺旋结构 2. 下列哪个是基因工程的主要应用领域： A. 农业领域 B. 医学领域 C. 环保领域 D. 以上都是 正确答案：D. 以上都是 3. 基因工程按操作方式可分为以下几类，下面哪个选项顺序正确： A. 提取、分离、重组、转移 B. 分离、转移、提取、重组
C. 提取、分离、转移、重组 D. 分离、提取、转移、重组 正确答案：C. 提取、分离、转移、重组 4. 以下哪项不属于基因工程的基本技术之一： A. PCR B. SDS-PAGE C. DNA测序 D. 基因克隆 正确答案：B. SDS-PAGE 5. 哪个技术代表了原创性的DNA测序方法，为测序领域的巨大进步奠定了基础： A. Sanger测序法 B. PCR法 C. 杂交技术 D. 聚合酶链式反应技术 正确答案：A. Sanger测序法 第二节：填空题
1. 基因工程主要通过重组DNA来完成基因的操纵和转移。其中，常用的DNA序列寻找方法是______。 答案：PCR （聚合酶链式反应） 2. 基因工程筛选转化细胞常用的方法是______。 答案：筛选抗生素（抗生素筛选法） 3. 基因工程中，将外源基因与载体进行重组，得到重组DNA，这个过程称为______。 答案：基因克隆 4. 基因工程常用的工具酶是______。 答案：限制性内切酶 5. 将基因工程所重组得到的DNA片段转入细胞内部的过程称为 ______。 答案：转化（也可接受转染） 第三节：解答题 1. 请描述一下基因工程中的PCR技术的原理和应用。 答案：PCR（聚合酶链式反应）技术是一种体外人工合成DNA片段的技术。其原理是通过DNA解旋、引物延伸和DNA复制等步骤，使得DNA在体外被无限制地复制增加。PCR技术能够在短时间内扩增特定的DNA序列，具有高度灵敏性和特异性。在基因工程中，PCR技
基因工程习题集 一、名词解释：（20×4/） 1、基因 2、克隆 3、基因定位 4、PCR 5、基因工程工具酶 6、组织培养 7、限制性核酸内切酶 8、受体细胞 9、生物技术 10、基因沉默 11、重组DNA技术12、逆转录酶13、单克隆抗体14、核移植技术 15、细胞融合16、胞内酶17、凝胶过滤18、固定化酶 19、蛋白质工程 20、生物反应器 二、单项选择题：(60×2/) 1．下列关于基因工程应用的叙述，正确的是（） A．基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因B．基因诊断的基本原理是DNA分子杂交C．一种基因探针能检测水体中的各种病毒D．原核基因不能用来进行真核生物的遗传改良2．在已知某小片段基因碱基序列的情况下，获得该基因的最佳方法是（）A．用mRNA为模板逆转录合成DNA B．以4种脱氧核苷酸为原料人工合成 C．将供体DNA片段转入受体细胞中，再进一步筛选 D．由蛋白质的氨基酸序列推测mRNA 3．我国科学家运用基因工程技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导人棉花细胞并成功表达，培育出了抗虫棉。下列叙述不．正确的是（） A．基因非编码区对于抗虫基因在棉花细胞中的表达不可缺少 B．重组DNA分子中增加一个碱基对，不一定导致毒蛋白的毒性丧失 C．抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递至近缘作物，从而造成基因污染 D．转基因棉花是否具有抗虫特性是通过检测棉花对抗生素抗性来确定的 4．采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出转基因羊。但是，人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。以下有关叙述，正确的是（） A．人体细胞中凝血因子基因编码区的碱基对数目，等于凝血因子氨基酸数目的3倍B．可用显微注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA分子导入羊的受精卵 C．在该转基因羊中，人凝血因子基因存在于乳腺细胞，而不存在于其他体细胞中 D．人凝血因子基因开始转录后，DNA连接酶以DNA分子的一条链为模板合成mRNA 5.科学家通过基因工程的方法，能使马铃薯块茎含有人奶主要蛋白。以下有关该基因工程的叙述，错误的是（） A.采用反转录的方法得到的目的基因有内含子 B.基因非编码区对于目的基因在块茎中的表达是不可缺少的 C.马铃薯的叶肉细胞可作为受体细胞
专题1 《基因工程》单元测试题 一、单选题(每小题只有一个正确答案) 1.在基因工程中用来修饰改造生物基因的工具是( ) A．限制酶和DNA连接酶 B．限制酶和水解酶 C．限制酶和载体 D． DNA连接酶和载体 2.下列说法正确的是( ) A．质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器 B．用适当的化学物质处理受体细菌表面，将重组DNA导入受体细菌 C．质粒是基因工程中惟一用作运载目的基因的载体 D．利用载体在宿主细胞内对目的基因进行大量复制的过程不能称为“克隆” 3.某研究小组为了研制预防禽流感病毒的疫苗，开展了前期研究工作。其简要的操作流程如下图。 下列有关叙述错误的是( ) A．步骤①所代表的过程是反转录 B．步骤②需使用限制性核酸内切酶和DNA连接酶 C．步骤③可用CaCl2处理大肠杆菌，使其从感受态恢复到常态 D．检验Q蛋白的免疫反应特性，可用Q蛋白与患禽流感康复的鸡的血清进行抗原—抗体特异性 反应试验 4.与“限制性内切酶”作用部位完全相同的酶是( ) A．反转录酶 B． RNA聚合酶 C． DNA连接酶 D．解旋酶 5.转基因抗虫棉的研制过程中，为了检测抗虫基因是否成功导入，最简捷有效的方法是( ) A．用DNA探针检测受体细胞中的目的基因是否存在 B．用DNA探针检测受体细胞中的目的基因是否转录出相应的mRNA C．直接将培育出的棉株叶片饲喂原本的棉花害虫 D．检测标记基因是否正常地表达出来
6.下列哪项不是表达载体所必需的组成( ) A．目的基因 B．启动子 C．终止子 D．抗青霉素基因 7.下列说法正确的是( ) A．限制性核酸内切酶的识别序列是GAATTC，只能在G和A之间切断DNA B． DNA连接酶能够将任意2个DNA片段连接在一起 C．质粒是能够自主复制的小型双链环状DNA分子 D．基因工程的载体只有质粒一种 8.应用生物工程技术培育人们需要的生物新品种或新产品，提高了经济效益。下图表示培育生物新品种的过程，请据图判断下列叙述中不正确的是( ) A．图中①～⑤过程中都发生了碱基互补配对现象 B．图中①过程需要的工具酶是限制酶和DNA连接酶 C．将PrG导入细胞Ⅱ，则Ⅱ最可能是浆B细胞 D．图中⑤过程需要的培养基中一定含有植物激素和无机养料 9.在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是( ) A．化学合成法 B．基因组文库法 C． cDNA文库法 D．多聚酶链式反应 10.中国新闻网报道，阿根廷科学家近日培育出了世界上第一头携带有两个人类基因的牛，因此有望生产出和人类母乳极其类似的奶制品。下列叙述正确的是( ) ①该技术将导致定向变异 ②DNA连接酶将目的基因与载体黏性末端的碱基对连接起来 ③蛋白质中的氨基酸序列可为合成目的基因提供资料
《基因工程》 一、选择题（每小题 分，共 分） ．基因工程的创始人是 。 ．关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有 不太恰当。 由作用于同一 序列的两种酶构成 这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶 这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对 进行修饰 不同的宿主系统具有不同的限制 修饰系统 ．在 的 链上，基因的起始密码子是 （或 ） ． 限制性内切核酸酶可以特异性地识别 。 双链 的特定碱基对 双链 的特定碱基序列 特定的三联密码 以上都正确 ．末端转移酶是合成酶类，具有 活性。 聚合酶 聚合酶 内切酶 外切酶 ．下面关于松弛型质粒 性质的描述中， 是不正确的。 质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，因而有较多的拷贝数。 可以在氯霉素作用下进行扩增。 通常带有抗药性标记。 同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子。 ．关于 的最正确的说法是 。 同 互补的单链 同 互补的双链 以 为模板合成的双链 以上都正确 ．关于 ，下列说法中哪一项不正确 是最常用的 连接酶。 不但能连接粘性末端，还能连接齐平末端。 不但能连接粘性末端。 最适温度 ℃ 。 ．下列关于建立 文库的叙述中， 是错误的 从特定组织或细胞中提取 或 用反转录酶合成 的对应单链 以新合成的单链 为模板合成双链 新合成的双链 克隆到载体上，并导入受体细胞 ．用下列方法进行重组体的筛选，只有 说明外源基因进行了表达。 印迹 原位菌落杂交 二、填空题（每空 分，共 分） ．限制性内切核酸酶分为三类，基因工程中应用的是 。 ．为了防止 的自身环化，可用 去双链 。 ．切口平移 法标记 探针时应用的酶是 。 ．基因工程中的 种主要类型的载体是 、 、 。
《基因工程》 一、选择题（每小题1.5分，共15分） 1．基因工程的创始人是 ( )。 A A. Kornberg B W. Gilbert C P. Berg D S. Cohen 2．关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。 A 由作用于同一DNA序列的两种酶构成 B 这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶 C 这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 D 不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统 3．在DNA的3’-5’链上，基因的起始密码子是 ( ) A ATG（或GTG） B AGT C TAG D TGA 4．II限制性内切核酸酶可以特异性地识别 ( )。 A 双链DNA的特定碱基对 B 双链DNA的特定碱基序列 C 特定的三联密码 D 以上都正确 5．末端转移酶是合成酶类，具有( )活性。 A 3’→5’DNA聚合酶 B 5’→3’DNA聚合酶 C 5’→3’DNA内切酶 D 5’→3’DNA外切酶 6．下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中，( )是不正确的。 A 质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，因而有较多的拷贝数。 B 可以在氯霉素作用下进行扩增。 C 通常带有抗药性标记。 D 同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子。 7．关于cDNA的最正确的说法是( )。 A 同mRNA互补的单链DNA B 同mRNA互补的双链DNA C 以mRNA为模板合成的双链DNA D 以上都正确 8．关于T4 DNA Ligase，下列说法中哪一项不正确? ( ) A 是最常用的DNA连接酶。 B 不但能连接粘性末端，还能连接齐平末端。 C 不但能连接粘性末端。 D 最适温度37 ℃。 9．下列关于建立cDNA文库的叙述中，( )是错误的? A 从特定组织或细胞中提取DNA或RNA B 用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA C 以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA D 新合成的双链DNA克隆到载体上，并导入受体细胞 10．用下列方法进行重组体的筛选，只有( )说明外源基因进行了表达。 A Southem blot B Northem blot C Western印迹 D 原位菌落杂交 二、填空题（每空1分，共25分） 1．限制性内切核酸酶分为三类，基因工程中应用的是____________ _。 2．为了防止DNA的自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。 3．切口平移(nick translation)法标记DNA探针时应用的酶是_____ ___ __。 4．基因工程中的3种主要类型的载体是_______________、_____________、__________。 5．野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是、和。 6．黏粒(cosmid)是杂合载体。 7．引物在基因工程中至少有4个方面的用途：(1) (2) 、 (3) (4) 。 8．Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别：(1)_ __、，(2)________ 9．PCR反应中常用的酶是______ _ 。
基因工程习题及参考答案01 绪论部分 一、填空题 1 .基因工程是年代发展起来的遗传学的一个分支学科。基因工程技术的诞生，使人 们从简单地利用现存的生物资源进行诸如发酵、酿酒、制醋和酱油等传统的生物技术时代， 走向的时代。 2 .随着基因工程技术的诞生和发展，人类可以通过、和等三 种主要生产方式，大量取得过去只能从组织中提取的珍稀蛋白，用于研究或治病。 3 .Cohen等在年构建了第一个有功能的重组DNA分子。 4 .基因工程的两个基本特点是：(1),(2)。 5 .基因克隆中三个基本要点是：;和。 6 .年，美国斯坦福大学等在上发表了题为：“将 新的遗传信息插入SV40病毒DNA的生物化学方法：含有入噬菌体基因和E.coli半乳糖 操纵子白^环状SV40DNA”的论文，标志着基因工程技术的诞生。这一工作具有划时代的意义，但是他们并没有。 7 .克隆基因的主要目的有四：(1);(2); (3) ；(4)。 二、选择题(单选或多选) ()1.因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是 (a)A.Komberg(b)W.Gilbert(c)P.Berg(d)B.McClintock ()2.第一个作为重组DNA载体的质粒是() (a)pBR322(b)ColEl(c)pSCl01(d)pUCl8 ()3.第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是() (a)EcoRI(b)EcoB(c)EcoC(d)EcoRn ()4.PBerg构建SV40二聚体时用了几种不同的酶，其中()的作用是制造隐蔽的5'端。 (a)末端转移酶(b)入外切核酸酶(c)外切酶出(d)DNA连接酶 三、简答题 1 .为什么说基因工程技术是60年代末70年代初发展起来的？ 2 .重组DNA的含义是什么？ 3 .如何理解基因工程的两个特点？ 4 .在Cohen构建有生物功能重组体的第一步实验中，用EcoRI切割了R6-5质粒，然后转化E.coliC600, 在卡那霉素抗性子板上筛选到了pSCl02,它是由R6-5的三个EcoRI片 段组成，请推测这个质粒具有什么遗传特性？ 5 .什么是动物乳腺生物反应器？ 四、问答题 1 .S.NCohen于1973年构建了三个重组体，pSCl02,pSCl05,pSCl09请说明这三个 重组体是如何获得的？各说明了什么？ 2 .基因克隆是如何使含有单个基因的DNA片段得到纯化的？ 五、概念题 1.遗传工程 2.生物技术 3.基因工程 4.细胞工程 5.细胞分泌工程 6.酶工程 7.蛋白质工程 8.发酵工程 9.移动基因10.断裂基因 11.重叠基因12.假基因
基因工程题库及答案汇编 一、填空题 1．基因工程是年代发展起来的遗传学的一个分支学科。基因工程技术的诞生，使人们从简单地利用现存的生物资源进行诸如发酵、酿酒、制醋和酱油等传统的生物技术时代，走向的时代。 2．随着基因工程技术的诞生和发展，人类可以通过、和等三种主要生产方式，大量取得过去只能从组织中提取的珍稀蛋白，用于研究或治病。 3．Cohen 等在年构建了第一个有功能的重组DNA 分子。 4．基因工程的两个基本特点是：(1)，(2)。 5．基因克隆中三个基本要点是：；和。 6．年，美国斯坦福大学等在上发表了题为：“将新的遗传信息插入SV40 病毒DNA 的生物化学方法：含有λ噬菌体基因和E．coli 半乳糖操纵子的环状SV40 DNA”的论文，标志着基因工程技术的诞生。这一工作具有划时代的意义，但是他们并没有。7．克隆基因的主要目的有四：(1)；(2)；(3)；(4)。 填空题答案 1． 70；按人们的需要而定向地改造和创造具有新的遗传性品种。2．细菌发酵；真核细胞培养；乳腺生物反应器。3． 1973 4． (1)分子水平上的操作；(2)细胞水平上的表达。5．克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择 6． 1972；P．Berg；Proc．Natl．Acad．Sci．USA；证明体外重组的 DNA 分子具有生物学功能 7． (1)扩增 DNA； (2)获得基因产物；(3)研究基因表达调控；(4)改良生物的遗传性 二、选择题(单选或多选) 1．因研究重组DNA 技术而获得诺贝尔奖的科学家是( ) (a)A．Komberg (b)W．Gilbert (c)P．Berg (d) B．McClintock 2．第一个作为重组DNA 载体的质粒是( ) (a) pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl8 3．第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是( ) (a)EcoRI (b)EcoB (c)EcoC (d)EcoRⅡ 4．P Berg 构建SV40 二聚体时用了几种不同的酶，其中( )的作用是制造隐蔽的5’端。 (a)末端转移酶(b)λ外切核酸酶(c)外切酶Ⅲ(d)DNA 连接酶 选择题(单选或多选)答案：1．C；2．C；3．a；4．b。 三、简答题 1．为什么说基因工程技术是60 年代末70 年代初发展起来的? 答：这是因为：(1)1967 年发现了连接酶；(2)大肠杆菌的转化技术是 1970 年获得突破；(3)限制性内切核酸酶的分离始于 1970 年；(4)Berg 在 1972 年构建了第一个重组的 DNA 分子。 2．重组DNA 的含义是什么? 答：将一个生物的 DNA 片段插入到一个载体中，并引入到另一生物体中进行繁殖。 3．如何理解基因工程的两个特点? 答：基因工程的两个基本特点是分子水平的操作和细胞水平的表达。分子水平的操作包括 DNA 分离、切割和连接(还有其他一些 DNA 的修饰等)。由于体外重组 DNA 的最终目的是要改变生物的遗传性，所以分子水平的操作和细胞水平的表达是基因工程的两个最基本的特点。 4．在Cohen 构建有生物功能重组体的第一步实验中，用EcoRI 切割了R6-5 质粒，然后转化E．coli C600，在卡那霉素抗性子板上筛选到了pSCl02，它是由R6-5 的三个EcoRI 片段组成，请推测这个质粒具有什么遗传特性? 答：至少可说明两点：(1)pSC 102 含有复制起点，是一个独立的复制子；(2)重组 DNA分子中的卡那霉素抗性基因得到了表达。 5．什么是动物乳腺生物反应器? 答：能够分泌乳汁的转基因动物生产其他来源的基因产品，并通过乳腺分泌出来。 四、问答题 1．S．N Cohen 于1973 年构建了三个重组体，pSCl02，pSCl05，pSCl09 请说明这三个重组体是如何获得的?各说明了什么? 答：pSCl02：用 EcoRI 切割 R6-5，混合转化大肠杆菌，在卡那霉素抗性平板上选择了一个克隆，并从该克隆中分离了重组质粒 DNA，命名为 pSCl02。该质粒是由质粒 R 6-5的 EcoRI 酶切片段Ⅲ、V 和Ⅷ在体内连接的，说明可以利用体内连接构建重组体。 pSCl05：作者分别用 EcoRI 切割质粒 pSC 101、pSC 102,然后加入 DNA 连接酶进行连接后转化大肠杆菌，在四环素和卡那霉素双抗性的平板上筛选到 pSC 105。说明用质粒作为载体，体外连接可得到有功能的重组体。 pSCl09：pSC 101 与 RSF 1010 的共整合，即用 EcoRl 分别切割这两个质粒，然后在体外进行重组。说明两个独立的复制子体外重组后仍具有生物功能。 2．基因克隆是如何使含有单个基因的DNA 片段得到纯化的? 答：大分子量的 DNA 会含有许多特殊限制性内切核酸酶的限制位点，因此用一种限制酶处理一完整染色体或整个基因组会产生许多不同的 DNA 片段，每一个片段带有基因组的一个不同的基因或一个不同的小片段。当全部片段与用同种限制酶处理过的载体分子混合时(图
基因工程试题及答案
作业一： 一、名词解释： 1、基因：是遗传的物质基础，是DNA（脱氧核糖核酸）分子上具有遗传信息的特定核苷酸序列的总称，是具有遗传效应的DNA分子片段。 2、基因组该指单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部DNA分子 3、操纵子:原核生物的几个功能相关的结构基因往往排列在一起，转录生成一个mRNA，然后分别翻译成几种不同的蛋白质。这些蛋白可能是催化某一代谢过程的酶，或共同完成某种功能。这些结构基因与其上游的启动子，操纵基因共同构成转录单位，称操纵子。 4、启动子:是RNA聚合酶结合位点周围的一组转录控制组件，包括至少一个转录起始点。在真核基因中增强子和启动子常交错覆盖或连续。有时，将结构密切联系而无法区分的启动子、增强子样结构统称启动子。 5、增强子:是一种能够提高转录效率的顺式调控元件，最早是在SV40病毒中发现的长约200b p的一段DNA，可使旁侧的基因转录提高100倍，其后在多种真核生物，甚至在原核生物中
(4)高pH(8.0以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等； (6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。 3、影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些？ 答：（1）DNA的纯度（2）DNA甲基化的程度（3）酶切消化反应的温度（4）DNA的分子结构（5）核酸内切限制酶的缓冲液 4、什么是Klenow酶？有哪些活性？在基因工程中有什么作用？ 答：Klenow酶是1974年Klenow用枯草杆菌蛋白酶水解DNA聚合酶I，得到两个片段，其中大片段的分子量为75kDa，它具有5'-3'聚合酶和3'-5'外切核酸酶的活性，小片段具有5'-3'外切核酸酶活性。由于大片段失去了DNA聚合酶I
基因工程试题答案 选择题有多选项，需要同学们自己确定对错，只有几道是多选。 一、单项选择题（共计150题） 1.因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是( c ) (a)A.Kornberg (b)W.Gilbert (c)P.Berg (d)B.McClintock 2.第一个作为重组DNA载体的质粒是( c ) (a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl8 3.关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( b )不太恰当。 (a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成 (b)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶 (c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 (d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统 4.Ⅱ型限制性内切核酸酶：( b ) (a)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列 (b)仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 (c)限制性识别非甲基化的核苷酸序列 (d)有外切核酸酶和甲基化酶活性 (e)仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 5.下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?( bde，c待定) (a)限制酶是外切酶而不是内切酶 (b)限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割 (c)同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的（星活性怎么办？？？不确定） (d)一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端 (e)一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA，产生平末端 6.第一个被分离的Ⅱ类酶是：( c ) (a)EcoK(b)HindⅢ(c)HindⅡ(d)EcoB 7.在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制哪一项最好：( b ) (a)反应时间(b)酶量(c)反应体积(d)酶反应的温度 8.在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2+离子?( d ) (a)EDTA (b)柠檬酸钠(c)SDS (d)EGTA 9.在下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性?( d ) (a)S1单链核酸酶(b)末端转移酶(c)碱性磷酸酶(d)Bal 31核酸酶（钙离子依赖酶） 10.限制性内切核酸酶可以特异性地识别：( b ) (a)双链DNA的特定碱基对(b)双链DNA的特定碱基序列 (c)特定的三联密码(d)以上都正确 11.限制性核酸内切酶切割DNA后产生：a