基因工程复习题
题型：名词解释（10个）30分；填空（每空1分） 20分；选择题（每题1分）10分；简答题（4个）20分；论述题（2个）20分。
第一章绪论
1.名词解释：
基因工程：按照预先设计好的蓝图，利用现代分子生物学技术，特别是酶学技术，对遗传物质DNA直接进行体外重组操作与改造，将一种生物（供体）的基因转移到另外一种生物（受体）中去，从而实现受体生物的定向改造与改良。
遗传工程广义：指以改变生物有机体性状为目标，采用类似工程技术手段而进行的对遗传物质的操作，以改良品质或创造新品种。包括细胞工程、染色体工程、细胞器工程和基因工程等不同的技术层次。狭义：基因工程。
克隆：无性(繁殖)系或纯系。指由同个祖先经过无性繁殖方式得到的一群由遗传上同一的DNA分子、细胞或个体组成的特殊生命群体。
2．什么是基因克隆及基本要点?
3.举例说明基因工程发展过程中的三个重大事件。
A) 限制性内切酶和DNA连接酶的发现（标志着DNA重组时代的开始）；B) 载体的使用；C) 1970年，逆转录酶及抗性标记的发现。
4.基因工程研究的主要内容是什么？
基础研究：
基因工程克隆载体的研究
基因工程受体系统的研究
目的基因的研究
基因工程工具酶的研究
基因工程新技术的研究
应用研究：
基因工程药物研究
转基因动植物的研究
在食品、化学、能源和环境保护等方面的应用研究
第二章基因克隆的工具酶
1.名词解释：
限制性核酸内切酶：一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶。
回文结构：双链DNA中的一段倒臵重复序列，当该序列的双链被打开后，可形成发夹结构。
同尾酶：来源不同、识别序列不同，但产生相同粘性末端的酶。
同裂酶：不同来源的限制酶可切割同一靶序列和具有相同的识别序列
黏性末端：DNA末端一条链突出的几个核苷酸能与另一个具有突出单链的DNA末端通过互补配对粘合，这样的DNA末端，称为粘性末端。
平末端：DNA片段的末端是平齐的。
限制性核酸内切酶的酶活性单位（U）：在酶的最适反应条件下，在50μl容积中，60分钟内完全切割1μg λDNA所需的酶量为1个酶活性单位（unit 或U）
限制性核酸内切酶的星活性：指限制性内切酶在非标准条件下，对与识别序列相似的其它序列也进行切割反应，导致出现非特异性的DNA片段的现象。
连杆（linker）：化学合成的8～12个核苷酸组成的寡核苷酸片段。以中线为轴两边对称，其上有一种或几种限制性核酸内切酶的识别序列，酶切后可产生一定的粘性末端，便于与具有相同粘性末端的另一DNA片段连接。
衔接头（adaptor）：化学合成的寡核苷酸，含有一种以上的限制性核酸内切酶识别序列。其一端或两端具有一种或两种内切酶切割产生的黏性末端。
底物位点优势效应：酶对同一个DNA底物上的不同酶切位点的切割速率不同。
激酶：对核酸末端羟基进行磷酸化的酶。
2. 说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。
用属名第一个字母和种名的头两个字母组成的3个字母斜体的略语表示寄主菌的物种名以及菌株（型）的代号命名。该菌株（种）中发现的不同的酶按照顺序以罗马字母编号I, II, III等。如：Escherichia coli用Eco表示。第四个字母代表菌株或株型、变种名，若酶存在于质粒上，则需大写字母表示非染色体遗传因子。例：Hin d III 从流感嗜血菌株（Haemophilus Influenzue）d 株中分离的第三个酶。Eco R I 表示基因位于Escherichia coli中的抗药性R质粒上。前三个字母用斜体，其他用正体表示。如果酶存在于一种特殊菌株中，三个字母后加上菌株名称符号,名称最后部分往往包含罗马数字,?表示在该特殊菌株中发现这种酶的先后次序。
3. 引起限制性核酸内切酶星活性的可能因素有哪些？
若使用buffer不当, 会有star activity，而star activity是指限制酶对所作用的DNA 及序列失去专一性, 当酶辨认切割位臵的能力降低，导致相似的序列或是错误的辨认序列长度也会作用，而产生错误的结果。所以当DNA同时以两种限制酶处理时，选择可使两种酶之活性反应均可达75﹪以上的restriction buffer，若找不到适当的buffer则先加低盐的buffer使其中一酶作用后，在加入高盐buffer使另一酶作用，若无法以盐的高低分别加入不同的buffer，则先加入一种buffer作用后，加3M NaOAc/95﹪alcohol沉淀DNA，再加另一种buffer作用。
4. DNA片段之间的连接方式有哪些？
具黏性末端的DNA片段之间的连接、具平末端DNA片段之间的连接、DNA片段末端修饰后进行连接、DNA片段加连杆（linker）后的连接。
5. 什么是Klenow酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用?
Klenow DNA 聚合酶是 E.coli DNA polymerase Ⅰ经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去 5'--3' 外切活性的肽段后的大片段肽段，而聚合活性和 3'--5' 外切活性不受影响。也称为 Klenow 片段（Klenow fragment），或E.coli DNA 聚合酶Ⅰ大片段。5→'3'聚合酶
3→'5'外切酶
无小亚基活性
6. DNA聚合酶、RNA聚合酶、反转录酶、末端转移酶、多核苷酸激酶和碱性磷酸酯酶有哪些主要特性？它们在基因工程中的主要用途分别是什么？
第三章基因工程的载体
1.名词解释：
载体:指能够运载外源DNA片段（目的基因）进入受体细胞，具有自我复制能力，使外源DNA 片段在受体细胞中得到扩增和表达，不被受体细胞的酶系统所破坏的一类DNA分子。
克隆载体：用于在受体细胞中进行目的基因扩增的载体。一般具有较低的分子量、较高的拷贝数和松弛型复制子。主要由细菌质粒或与其它质粒、噬菌体及真核生物病毒的DNA重组构建。
表达载体：使目的基因在宿主细胞中得以表达的载体。可将重组体DNA导入适合的受体细胞，使所载的目的基因能够复制、转录和翻译。
穿梭载体:称双功能载体(bifunctional vector)。能在两种不同的生物体内复制的载体。质粒:指独立存在于宿主细胞染色体外、能够自我复制的DNA分子。
松弛型质粒:拷贝数多于10个的质粒。
严谨型质粒;拷贝数为1至几个的质粒。
接合质粒；指质粒所携带的基因的功能是使细胞彼此有效地接触，以便将质粒DNA从供体细胞转移至受体细胞。如：质粒上的tra基因使宿主细胞（大肠杆菌）产生菌毛，合成细胞表面物质，促使宿主细胞与受体细胞接合。
质粒的不亲和性；显性质粒;隐性质粒；质粒的迁移作用；多拷贝质粒；整合质粒；穿梭质粒；表达质粒；探针质粒；pUCl8质粒；pBR322质粒；溶菌生长;溶源生长；原噬菌体；烈性噬菌体；溶原化；柯斯载体或粘粒(cosmid)；cos位点；人工染色体
2. 作为工程载体必备哪些基本条件？
3. 试述质粒载体、噬菌体载体、柯斯载体、M13单链丝状噬菌体载体和酵母人工染色体载体各自的组成特点及其在基因工程中的应用。
4．简述质粒的生物学特性有哪些？
5．构建人工质粒的目的？
6．理想质粒载体应具备的条件及构建需遵循的原则是什么？
7．λ-DNA作为载体的优点是什么？
8. 为什么野生型的 噬菌体DNA不宜作为基因工程载体?该如何改造？
第四章目的基因的制备
1.名词解释：目的基因；基因文库 cDNA文库；
2.常规分离目的基因的方法有哪些？其原理分别是什么？
3．克隆目的基因的方法有哪些?
4．什么是基因组文库(genomic library)?构建基因组文库的原理，涉及哪些基本过程?它同遗传学上的基因库、cDNA文库有什么不同?
第五章目的基因的导入和重组子的筛选
1.名词解释：受体细胞；感受态细胞；转化；转导；转染；体外装配；转换子；重组子；转化率；负筛选；正筛选；a－互补筛选
2. 试述几种常用的转化方法。
3.试述根据载体的选择标记进行重组子筛选的方法和原理。
4.试述根据插入序列的表型特征进行重组子筛选的方法和原理。
5.DNA片断之间的连接方式有哪些？各种连接方式的优缺点及DNA重组中需要注意什么问题？
6．受体细胞选择的原则？
第六章外源基因的表达
1.名词解释：融合蛋白；分泌蛋白；包涵体；外源基因表达体系
2. 大肠杆菌表达载体构成的重要元件有哪些？
3.试比较大肠杆菌、酵母、植物和动物细胞基因表达载体各自组成的特点。
4. 真核基因在大肠杆菌中表达存在的问题和高效表达的对策是什么？
5.基因表达产物的检测方法有哪些？
第七章基因操作的基本技术
1．名词解释：分子杂交；探针；PCR; 引物；随机引物；切口位移；热启动；缺口翻译；Northern 印迹；Southern印迹
2．DNA制备的基本步骤有哪些？
3．碱裂解法和CTAB法的原理。
4．凝胶电泳有哪几类？影响琼脂糖凝胶电泳的参数有哪些？
5．PCR的基本原理是什么？PCR反应体系的组成成份是什么？
6．试述PCR反应的程序及参数。
7．PCR反应引物设计需遵循的原则有哪些？
8．试述核酸分子杂交的类型和基本步骤。
9.探针标记的方法有哪些？
10．说明Southern杂交的原理和方法。
11.Northern印迹与Southern印迹有什么不同?
第八章植物基因工程及应用
1．植物遗传转化方法主要有？
2．基因枪转化的优点？
3．天然的Ti质粒能作为表达载体使用吗？为什么？
4．理想杀虫剂应具备什么特性？
第九章动物基因工程及应用
1.名词解释：转基因生物；共抑制效应；多效性胚胎干细胞
2．转基因共机制效应的特征？
3．导致转基因失活的原因可能有哪些？
4．试述动物基因工程的载体有？
5．如何筛选转基因多效性干细胞？
第十章医学基因工程及应用
1.名词解释: 胰岛素;基因诊断;基因治疗;
2.基因鉴定的作用？
3.如何进行基因治疗？
基因工程原理练习题及其答案
一、填空题
1．基因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。
2．基因工程的两个基本特点是： (1)____________，(2)___________。
3．基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和__________。
4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位臵的___________。
5．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_______，第二、三两个字母取自_________，第四个字母则用___________表示。
6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。7．第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性内切
核酸酶是_____________。
8．限制性内切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。
9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa 的大片段，具有两种酶活性： (1)____________； (2)________________的活性。
10．为了防止DNA的自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。11．EGTA是____________离子螯合剂。
12．测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。
13．切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。
14．欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。
15．反转录酶除了催化DNA的合成外，还具有____________的作用，可以将DNA-
RNA杂种双链中的___________水解掉。
16．基因工程中依据应用对象分有3种主要类型的载体： _______________、_____________、______________。
17．就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：_______________、_____________、______________。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。
18．一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测不出质粒，这种现象叫。
19． pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于，它的四环素抗性基因来自于，它的氨苄青霉素抗性基因来自于。20．YAC的最大容载能力是，BAC载体的最大容载能力是。
21．pSCl01是一种复制的质粒。
22．pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过
和两种质粒改造而来。它的复制子来自，Amp 抗性基因则是来自。
23．噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是；二是。24．野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是
和。
25．黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子来自、COS位点序列来自，最大的克隆片段达到 kb。
26．野生型的λ噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：(1) (2) (3) 。
27．噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的，其中来自质粒的主要结构是，而来自噬菌体的主要结构是。
28．λ噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DNA片段后，总的长度应在噬菌体基因组的的范围内。
29．在分离DNA时要使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目的是
。
30．用乙醇沉淀DNA时，通常要在DNA溶液中加人单价的阳离子，如NaCl和NaAc，其目的是。
31．引物在基因工程中至少有4个方面的用途：(1) (2) (3) (4) 。
32．Clark发现用Taq DNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端，而是有一个突出碱基末端的双链DNA分子。根据这一发现设计了克隆PCR产物的。33．在cDNA的合成中要用到S1核酸酶，其作用是切除在
。
34．乙醇沉淀DNA的原理是。
35．假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件：
(1)________________________________ (2)_____________________________
(3)_________________________________。
36．受体细胞的感受态是___________________________________。
37． DNA重组连接的方法大致分为四种：(1)_____________(2)_______________
(3)___________________________(4)___________________________。
38．将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个___________，各种此类质粒的集合体称之为构建了一个_________________。
39．将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称作一个____________，源于同一批RNA制备物的克隆群则构建了一个_________________。
40．只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成，用___________可以将这段DNA 进行百万倍的扩增。
41．人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为___________时吸附DNA, ___________时摄人DNA。42．目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。
大致可以分为： (1)_______________(2)_______________(3)___________________ (4)____________________________等。
43．PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于___________________________。44．核酸杂交探针可分为两大类： DNA探针和RNA探针。其中DNA探针又分为__________ 探针和__________________探针。
45．如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5’突出的黏性末端，则可以用__________进行3’末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3’突出的黏性末端，可以用__________________进行3’末端标记。
46．单链DNA探针的标记可以采用下列方法：(1)____________________________________ (2)__________________________(3)_____________________________________。47．根据Northern杂交的结果可以说明：__________________________________________。48．差示杂交(differential hybridization)技术需要_________________________________。
49．RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜(尼龙膜) 上，同一放射DNA探针杂交的技术称_______________________。
50．在________________技术中，DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性的DNA探针杂交。
51．可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有____________和_______的活性。
52．根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素： (1)_______________ (2)________________________(3)______________________。
53．Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别：
(1)_______________________________________________________________________
(2)_______________________________________________________________________。54．放射免疫筛选的原理基于以下三点： (1)__________________________________
(2)___________________________ (3)__________________________________。
答案
1．70
2．(1)分子水平上的操作；(2)细胞水平上的表达
3．克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择
4．限制性酶切图谱
5．属名的第一个字母；种名的前两个字母；株名
6．(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积
7．EcoK；EcoRl
8．GGCC；异源同工酶
9．枯草杆菌蛋白酶；(1)5'-3'合成酶的活性；(2)3'-5'外切核酸酶
10．碱性磷酸酶；5’端的磷酸基团
11． Ca2+
12． 5'-3'合成； 3'-5'外切
13． DNA聚合酶I：5'一3'外切核酸酶；5'一3'合成酶
14．S1核酸酶切割；DNA聚合酶补平
15．核酸水解酶H；RNA
16．质粒DNA；病毒DNA；质粒和病毒DNA杂合体
17．复制区：含有复制起点；选择标记：主要是抗性基因；克隆位点：便于外源DNA的插入
18．质粒消除(或治愈)
19， pMBl； pSCl01；pSF2124(R质粒)
20． 1000kb；300kb
21. 严紧
22． pBR322和M13；pMBl；转座子
23．它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA的扩增；对某些噬菌体(如λ噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽
24．没有合适的限制性内切核酸酶识别位点；选择标记
25．质粒；λ噬菌体； 45
26． (1)分子量大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记
27．复制区； IG区
28．75％～105％
29．螯合Mg2+离子，抑制核酸酶的活性
30．中和DNA分子的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力
31．(1)合成探针；(2)合成cDNA；(3)用于PCR反应；(4)进行序列分析
32．T—载体
33．第二链合成时形成的发夹环?
34．乙醇使DNA分子脱水
35．(1)保持正确的可读框 (2)能够使其转录的启动子 (3)具有翻译的起始和终止信号
36．接受外源DNA的生理状态
37．(1)黏性末端连接； (2)平末端连接； (3)同聚物接尾连接； (4)接头连接法38．基因组DNA克隆；基因组DNA文库
39．cDNA克隆；cDNA文库
40．聚合酶链式反应(PCR)
41．0?C；42?C
42．(1)遗传学方法； (2)物理筛选法； (3)核酸杂交法； (4)表达产物分析法
43．插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选
44．基因组DNA；cDNA
45．Klenow酶填补的方法；T4DNA聚合酶
46．(1)用M13噬菌体载体合成单链DNA探针；(2)从mRNA反转录合成单链cDNA探针；(3)用不对称PCR合成单链DNA探针
47．外源基因是否进行了转录
48．两种不同的细胞群体能够表达不同的基因，即在一个群体中能够表达一些基因，而在另一个细胞群体中不能表达这些基因
49．Northern印迹
50．Southern印迹
51．5’→3’合成酶；3’→5’外切核酸酶
52．(1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表达载体；(3)不含内含子
53．(1)印迹的对象不同：Northern是RNA，Southern是DNA；(2)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件
54．(1)抗体能够被吸附到固体支持物上；(2)同一个抗原可以同几种抗体结合； (3)抗体能够被标记
二、选择题(单选或多选)
1．因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是( )
(a)A．Kornberg (b)W．Gilbert (c)P．Berg (d)B．McClintock
2．第一个作为重组DNA载体的质粒是( )
(a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl8
3．关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。
(a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成
(b)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶
(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰
(d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统
4．Ⅱ型限制性内切核酸酶： ( )
(a)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列
(b)仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供
(c)限制性识别非甲基化的核苷酸序列 (d)有外切核酸酶和甲基化酶活性
(e)仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供
5．下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?( )
(a)限制酶是外切酶而不是内切酶
(b)限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割
(c)同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的
(d)一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端
(e)一些限制酶在识别位点内相同的位臵切割双链DNA，产生平末端
6．第一个被分离的Ⅱ类酶是： ( )
(a)EcoK (b)HindⅢ (c)HindⅡ (d)EcoB
7．在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?( )
(a)反应时间 (b)酶量 (c)反应体积 (d)酶反应的温度
8．在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2+离子?( )
(a)EDTA (b)柠檬酸钠 (c)SDS (d)EGTA
9．在下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性?( )
(a)S1单链核酸酶 (b)末端转移酶 (c)碱性磷酸酶 (d)Bal 31核酸酶
10．限制性内切核酸酶可以特异性地识别： ( )
(a)双链DNA的特定碱基对 (b)双链DNA的特定碱基序列
(c)特定的三联密码 (d)以上都正确
11．下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项的是( )。
(a)Sau3A I (b)E．coRI (c)hind III (d)Sau 3A1
12．限制性内切核酸酶的星号活性是指：( )
(a)在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。 (b)活性大大提高
(c)切割速度大大加快 (d)识别序列与原来的完全不同
13．下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?( )
(a)甘油含量过高 (b)反应体系中含有有机溶剂
(c)含有非Mg2+的二价阳离子 (d)酶切反应时酶浓度过低
14．关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当
(a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成
(b)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶
(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰
(d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统
15．在长模板链的指导下引物延伸合成长的DNA互补链时应选用( )
(a)T4DNA聚合酶 (b)Klenow酶．
(c)大肠杆菌DNA聚合酶I (d)T7DNA聚合酶
16．末端转移酶是合成酶类，( )
(a)作用时不需要模板
(b)在Ca2+的存在下，可以在突出的3，末端延长DNA链
(c)在Ca2+的存在下，可以在隐蔽的3，末端延长DNA链
(d)上述说法有两种是正确的
17．在基因工程中，可用碱性磷酸酶( )
(a)防止DNA的自身环化 (b)同多核苷酸激酶一起进行DNA的5，末端标记
(c)制备突出的3，末端 (d)上述说法都正确
18．下列酶中，除( )外都具有磷酸酶的活性
(a)λ核酸外切酶 (b)外切酶Ⅲ (c)单核苷酸激酶 (d)碱性磷酸酶
19．下列哪一种酶作用时需要引物? ( )
(a)限制酶 (b)末端转移酶 (c)反转录酶 (d)DNA连接酶
20．S1核酸酶的功能是( )
(a)切割双链的DNA (b)切割单链的RNA (c)切割发夹环 (d)以上有两项是正确的21．Klenow酶与DNA聚合酶相比，前者丧失了( )的活性。
(a)5，--3，合成酶， (b)3，--5，外切酶 (c)5，---3，外切酶 (d)转移酶22．下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中，( )是不正确的
(a)质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制的制约，
因而有较多的拷贝数
(b)可以在氯霉素作用下进行扩增 (c)通常带有抗药性标记
(d)同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子
23．基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的，真正的天然质粒载体很少，在下列载体中只有( )被视为用作基因工程载体的天然质粒载体
(a)pBR322 (b)pSCl01 (c)pUBll0 (d)pUCl8
24．下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?( )
(a)质粒 (b)黏粒 (c)酵母人工染色体(YAC) (d) 噬菌体 (e) cDNA表达载体
25. 松弛型质粒： ( )
(a)在寄主细胞中拷贝数较多 (b)可用氯霉素扩增
(c)一般没有选择标记 (d)上述(a)、(b)两项正确
26．Col El是惟一用作基因工程载体的自然质粒，这种质粒： ( )
(a)是松弛复制型（b)具有，四环素抗性
(c)能被氯霉素扩增 (d)能产生肠杆菌素
27．同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是：( )
(a)OCDNA>SCDNA>LDNA (b)SCDNA>LDNA>OCDNA
(c)LDNA>OCDNA>SCDNA (d)SCDNA>OCDNA>LDNA
28．pBR322是一种改造型的质粒，含有两个抗性基因，其中四环素抗性基因来自： ( ) (a)ColEl (b)Ri质粒 (c)pSCl01 (d)pUCl8
29．关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确?( )
(a)在不同的宿主中具有不同的复制机制
(b)在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点
(c)在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶
(d)在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率
30．能够用来克隆32kb以下大小的外源片段的质粒载体是( )
(a)charomid (b)plasmid (C)cosmid (d)phagemid
31．第一个作为重组DNA载体的质粒是( )
(a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl8
32. Ti质粒：( )
(a)可从农杆菌转到植物细胞中 (b)作为双链DNA被转移
(c)在植物中导致肿瘤 (d)介导冠瘿碱的合成，作为细菌的营养物和植物的生长激素 (e)需要细菌的vir基因帮助转移 (f)在植物细胞中作为染色体外质粒
33．黏粒(cosmid)是一种人工建造的载体，( )
(a)它具有COS位点，因而可进行体外包装 (b)它具有质粒DNA的复制特性
(c)进入受体细胞后，可引起裂解反应 (d)进入受体细胞后，可引起溶源化反应34．有两种确定核酸中核苷酸序列的方法：化学序列分析法(Maxam-Glbert)和酶学序列分析法(Sanger)。酶学测序法的基本原理／优点是：( )
(a)碱基与特殊染料间不同的相互作用
(b)一个合成引物的延伸和DNA修复合成的可靠终止
(c)限制性位点与DNA末端标记的相关性
(d)可同时对DNA双螺旋的两条链进行测序
(e)反应是DNA特异的，RNA不会带来干扰。这样既减少纯化步骤，也节约了开支。35．关于cDNA的最正确的说法是：( )
(a)同mRNA互补的单链DNA (b)同mRNA互补的双链DNA
(c)以mRNA为模板合成的双链DNA (d)以上都正确
36．用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为：( )
(a)染色体DNA断成了碎片 (b)染色体DNA分子量大，而不能释放
(c)染色体变性后来不及复性 (d)染色体未同蛋白质分开而沉淀
37. 关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确?( )
(a)溶液I的作用是悬浮菌体 (b)溶液Ⅱ的作用是使DNA变性
(c)溶液Ⅲ的作用是使DNA复性
(d)质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性
38. Clark做了一个有趣的实验，发现TaqDNA聚合酶可以不需要模板，在双链DNA的
末端加一个碱基，主要是加( ) ．
(a)dGTP (b)dATP (c)dCTP (d)dTTP
39．根据构建方法的不同，基因文库分为基因组文库、cDNA文库等。在下列文库中，
( )属cDNA文库
(a) YAC文库 (b) MAC文库 (c) 扣减文库 (d) BAC文库
40．下面关于多克隆位点(multiple clone site,MCS)的描述，不正确的—句是( ) (a)仅位于质粒载体中 (b)具有多种酶的识别序列
(c)不同酶的识别序列可以有重叠 (d)一般是人工合成后添加到载体中
41．在cDNA技术中，所形成的发夹环可用( )
(a)限制性内切核酸酶切除 (b)用31外切核酸酶切除
(c)用S1核酸酶切除 (d)用51外切核酸酶切除
42．在DNA的酶切反应系统中，通常：( )
(a)用SSC缓冲液 (b)加入Mg2+作辅助因子
(c)加入BSA等保护剂 (d)上述说法中，有两项是正确的
43．黏性末端连接法，不仅操作方便，而且( )
(a)产生新切点 (b)易于回收外源片段 (c)载体不易环化 (d)影响外源基因的表达
44．在下列表型中，( )是基因工程上理想的受体菌表型
(a)r+m+rec* (b)r-m-rec- (C)r-m-rec+ (d)r+m+rec-
45．关于DNA接头在基因工程中的作用，下列说法中哪一项不正确?( )
(a)给外源DNA添加适当的切点 (b)人工构建载体
(c)调整外源基因的可读框 (d)增加调控元件
46．cDNA文库包括该种生物的( )
(a)某些蛋白质的结构基因 (b)所有蛋白质的结构基因
(c)所有结构基因 (d)内含子和调控区
47．下列关于建立cDNA文库的叙述中，哪一项是错误的?( )
(a)从特定组织或细胞中提取DNA或RNA
(b)用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA
(c)以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA
(d)新合成的双链DNA甲基化
48．下列对黏性末端连接法的评价中，哪一项是不正确的? ( )
(a)操作方便 (b)易于回收片段
(c)易于定向重组 (d)载体易于自身环化，降低重组率
49．关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法不正确?( )
(功具有可诱导性 (b)具有可转移性
(c)细菌生长的任何时期都可以出现 (d)不同细菌出现感受态的比例是不同的50．下面关于用T4多核苷酸激酶标记5' 端制备探针的描述中( )是不正确的。
(a)既能标记DNA，又能标记RNA (b)既能标记双链DNA又能标记单链DNA
(c)只能标记突出的5' 端不能标记其他类型末端
(d)DNA或RNA必须有5'-OH的存在
51．Southem印迹的DNA探针( )杂交。
(a)只与完全相同的片段 (b)可与任何含有相同序列的DNA片段
(c)可与任何含有互补序列的DNA片段’．
(d)可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段 (e)以上都是
52．用下列方法进行重组体的筛选，只有( )说明外源基因进行了表达。
(a)Southem印迹杂交 (b)Northem印迹杂交
(c)Western印迹 (d)原位菌落杂交
53．下列哪一个不是Southern印迹法的步骤?( )
(a)用限制酶消化DNA (a)DNA与载体的连接
(c)用凝胶电泳分离DNA片段 (d)DNA片段转移至硝酸纤维素膜上
(e)用一个标记的探针与膜杂交
54．报告基因( )
(a)以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列
(b)以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区
(c)能用于检测启动子的活性 (d)能用于确定启动子何时何处有活性
55．在利用lacZ失活的显色反应筛选法中，IPTG的作用是( )
(a)诱导宿主的α肽的合成 (b)诱导宿主的ω肽的合成
(c)作为酶的作用底物 (d)作为显色反应的指示剂
56. 切口移位是指在( )作用下，使( )带上放射性标记。
(a)DNA聚合酶I，RNA (b)DNA聚合酶I，DNA
(c)DNA聚合酶Ⅲ，RNA (d)DNA聚合酶Ⅲ，DNA
57．用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的( )
(a)DNA (b)RNA (c)抗体 (d)抗原
58．Southern印迹是用DNA探针检测DNA片段，而Northern印迹则是：( )
(a)用RNA探针检测DNA片段 (b)用RNA探针检测RNA片段
(c)用DNA探针检测RNA片段 (d)用DNA探针检测蛋白质片段
59．用免疫化学法筛选重组体的原理是( )
(a)根据外源基因的表达 (b)根据载体基因的表达
(c)根据mRNA同DNA的杂交 (d)根据DNA同DNA的杂交
60．随机引物标记探针，下列各项中哪一项是不正确的?( )
(a)双链DNA、单链DNA、RNA都是可以标记的 (b)不需要用Dnase I预处理 (c)反应时可用Klenow酶 (d)反应时可用DNA聚合酶1
61．在切口移位标记DNA探针时只能使用( )
(a)Klenow酶 (b)DNA聚合酶I (c)DNA聚合酶Ⅱ (d)DNA聚合酶Ⅲ 62．要对一双链的DNA分子进行31末端标记，可用( )
(a)Klenow酶 (b)DNA聚合酶I (c)T4DNA聚合酶 (d)T7DNA聚合酶
答案
1．c；2．c； 3．b； 4．b 5．b，C，d，e； 6．c； 7．b； 8．d；9．d； 10．B； 11．d；12．a； 13．d； 14．b 15．d； 16．c；17．a，b；18．a；19．c；20．d；21．c；22．C；23．b； 24．C；25．d；26．a，C，d；27．b；28．c； 29．b；30．a；31．c； 32．a,c,d,e，33．a，b，c；34．b； 35．c；36．c； 37．d； 38．b；39．c；40．a；41．c； 42．a，b，c； 43．b； 44．b； 45．d； 46．a；47．a； 48．c； 49．c；50．b；51．c； 52．c；53．b； 54．a,c,d；55．a； 56．b；57．a，b； 58．c；59．a；60．d；61．b； 62．c；
三、简答题
1．说明Sanger DNA测序法的原理。
2．某学生在用EcoRI切割外源DNA片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因?
3．在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么?
4．下面几种序列中你认为哪一个(哪些)最有可能是Ⅱ类酶的识别序列：
GAATCG，AAATTT， GATATC， ACGGCA? 为什么?
5．当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施?
为什么?
6．为什么反转录酶在聚合反应中会出错?
7．什么是测序酶(sequenaseTM)?
8．什么是S1核酸酶作图(S1 nuclease mapping)?
9 YAC载体具有什么样的功能性DNA序列?为什么在克隆大片段时，YAC具有优越
性?
10．列举质粒载体必须具备的4个基本特性。
11．什么叫穿梭载体？
12．如何将野生型的 噬菌体改造成为一个理想的载体?
13． PCR的基本原理是什么?用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息?
14． cDNA克隆与基因组克隆有何不同?
15．怎样将一个平末端DNA片段插入到EcoR I限制位点中去?
16．简述以黏粒为载体构建基因文库的原理。
17．酵母人工染色体要在酵母细胞中稳定存在，必须有哪些基本的结构?
18．何谓YAC? 主要特性是什么?
19． Muller的PCR反应同大肠杆菌体内的DNA复制有哪些不同?你认为根本的差别在哪里?
20．欲将一真核生物的结构基因克隆后转移到原核生物(如E．coli)中进行表达，克隆时应注意哪些问题?
21．假定你分离到一个E．coli的Thy- 突变体，并推测有可能是ThyA基因突变。请设计一个方案用PCR从染色体DNA扩增突变的ThyA基因，测定突变的序列。(注：E．coli 野生型的ThyA基因的序列是已知的)
22．你在做Southern印迹分析，并且刚完成了凝胶电泳这一步。根据方案，下面一步骤是用NaOH溶液浸泡凝胶，使DNA变性为单链。为了节省时间，你略过了这一步，
直接将DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上。然后用标记探针杂交，最后发现放射自
显影片是空白。错在哪里?
23．切口移位(nick translation)标记探针的主要步骤有哪些?
24．用EcoRI和Hind Ⅲ分别切割同一来源的染色体DNA，并进行克隆，在前者的克隆中筛选到A基因，但在后者的克隆中未筛选到A基因，请说明原因。
25．什么是Western印迹?它与Southern印迹有什么不同?
26．用一限制性内切核酸酶切割Lac+ Tet+的质粒载体，已知该酶识别的是4个碱基序列，并产生有两个碱基突出的单链末端，该酶在lac基因内有切割位点，并在第二个氨基酸密码子内，该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后，用DNA聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端，然后重新连接成环，转化Lac- Tet s
受体菌，筛选Tet r转化子，问：Lac的基因型是什么?并说明原因。
27．在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用cDNA 而不用基因组DNA?为什么要在cDNA前加上细菌的启动子?
答案
1．答：
Sanger DNA测序法是建立在两个基本原理之上：(1)核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5'端向3'端聚合(DNA聚合酶参与了细菌修复DNA合成过程)；(2)可延
伸的引物必须能提供游离的3'羟基末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的3'羟基末
端，因此会终止聚合反应的进行。如果分别用4种双脱氧核苷酸终止反应，则会获
得4组长度不同的DNA片段。通过比较所有DNA片段的长度可以得知核苷酸的
序列。
2．答：
盐离子浓度不对，温度不对，甘油浓度过高。
3．答：
回文序列是：5'-CATATG-3，
4．答：
GATATC；AAATTT，因为它们是回文序列。
5．答：
注意星活性，先低盐，后高盐；先低温酶，后高温酶；并且可以直接在换酶前将第一种酶失活，再加第二种酶，否则，易产生星活性。或使用通用缓冲液。
6．答：
由于反转录酶缺少在E．coli DNA聚合酶中起校正作用的3'-5'外切核酸酶活性，所以聚合反应往往会出错，在高浓度的dNTP和Mg2+下，每500个碱基中可能有一个错配。 7．答：
所谓测序酶即是修饰了的T7 DNA聚合酶，是采用缺失的方法，从外切核酸酶结构域中除去28个氨基酸，这样使T7 DNA聚合酶完全失去了3'-5'的外切核酸酶活性，只有5'---3'聚合酶的活性，而且聚合能力提高了3～9倍，测序时常用此酶。
8．答：
S1核酸酶作图是一种对RNA转录产物的末端和剪接位点进行作图的方法。
9. 答：
YAC带有天然染色体所有的功能元件，包括一个着丝粒，一个DNA复制起点，两个端粒。
YAC能够容纳长达几百kb的外源DNA，这是质粒和黏粒办不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色体步移中每次允许更大的步移距离，同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。
10．答：
(1)独立复制； (2)有选择标记； (3)有独特的酶切位点； (4)能转化但不扩散。11．答：
含有细菌质粒和克隆的真核生物DNA片段的杂种质粒，有两个复制起点和既能在细菌又能在真核细胞中进行选择的选择标记，所以，很容易从一宿主转到另一个宿主(来回穿梭)。
12. 答：
(1)削减分子量(除去非必需区和整合区)； (2)削减酶切位点； (3)添加选择标记；
(4)引入终止突变
13．答：
(1)DNA半保留复制的原理，在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸。
(2)至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。
14．答：
基因组克隆包含所有不在cDNA中出现的内含子。
15．答：
化学合成一些长为10bp含有EcoRI识别位点的短的DNA片段，然后与待克隆片段两端连接起来，如果用EcoRI切割这种连接片段，就会产生EcoRI的单链末端。这种片段就可以插入到任何EcoRI的限制性内切酶位点中。
16．答：
(1)COS位点可以自身环化； (2)可以利用COS位点包装λ噬菌体颗粒；
(3)可以感染寄主细胞； (4)利用质粒复制子复制，不整合、不裂解。
17．答：
(1)着丝粒； (2)端粒； (3)ARS序列。
18．答：
(1)含有来自其他生物DNA的酵母人工染色体，叫YAC；
(2)主要特性是可以克隆较大的外源片段。
19．答：
PCR用双引物，体内复制用单引物。
20．答：
应注意的问题有：启动子、密码子、剪接、分泌。
21．答：
为了扩增突变体的thyA基因，先设计一对引物，其中一个引物的序列与thyA基因的5’端相同，另一个引物同该基因的3’端互补。在引物的5’端加上合适Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，以便于后来的克隆。将染色体DNA同引物混合后，进行PCR扩增。
然后进行琼脂糖凝胶电泳，纯化扩增片段，可以直接测序或克隆到合适的载体再测序。22．答：
如果你的杂交探针是双链的，可能因为在加人杂交混合物之前忘记将探针变性而得到空白的放射自显影结果。
23．答：
(1)DNaseI造成切口；
(2)DNA聚合酶III的5’→3’外切核酸酶进行切割；
(3)DNA聚合酶Ⅲ的5’→3’合成酶进行修补；
(4)在修补过程中，随着切口(nick)的移动，将放射性的底物掺人到双链DNA中。24．答：
原因是：HindⅢ的切点在A基因内。
25．答：
Western印迹是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到固相支持物上，然后用特异性的抗体进行检测。它与Southern的不同在于探针的性质不同，在Western印迹中使用的探针是抗体(蛋白质)。
26．答：
基因型是lac-．原因是在该密码子中插入了两个碱基，造成了移码突变，所以Lac的基因是缺陷的。
27．答：
这是因为细菌没有内含子剪接系统，并且不能识别真核生物的启动子之故。
四、问答题：
1．说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。
2．什么是限制性内切核酸酶的星号活性? 受哪些因素影向?
3．影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些?
4．什么是Klenow酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用?
5．细菌碱性磷酸酯酶和小牛肠碱性磷酸酯酶有什么不同?在基因工程中有什么用途? 6．λ外切核酸酶(1ambda exonuclease)基本活性是什么?在基因工程中有什么应用? 7．Mn2+、Mg2+对Dnase I(deoxyribonuclease ?)的活性有什么影响?Dnase I在基因工程中有什么作用?
8．质粒如何维持在细胞中的稳定？
9．由于基因工程是人为改变遗传信息的操作，因此必须注意被操作基因的安全，进行严格的监控，质粒载体的安全性是十分重要的。请问质粒载体的安全条件包括哪几个方面?
10．为什么野生型的 噬菌体DNA不宜作为基因工程载体?
11．什么是蓝白斑筛选法?
12．蓝白斑筛选法为什么也会有假阳性?
13． M13系列载体具有哪些优缺点?
14．黏粒载体具有哪些特点与不足?
15．辅助噬菌体DNA和相应的噬菌粒是如何协同工作的?
16．如果知道某一基因的功能及其相应的蛋白质的氨基酸序列组成，可以通过何种方法克隆该基因?
17．什么是基因文库?
18．什么是基因组文库(genomic library)?构建基因组文库，涉及哪些基本过程?它同遗传学上的基因库有什么不同?
19．什么是cDNA文库(complementDNAlibrary)?同基因组文库有何差别?
20．黏性末端连接法是最常用的连接方法，具有许多优点，但是也有一些不足，请指出这些不足之处。
21．什么是同聚物加尾连接法(homopolymer tails joining)?用何种方法加尾?具有哪些优缺点?
22．何谓接头连接法(1inker ligation)?
23．什么是同裂酶?为什么说用同裂酶进行体外重组效率最高?
24．为了大量获得许多用于生化鉴定的产物，你想将拟南芥中的一个序列已知、编码单
体酶蛋白的基因在单细胞微生物中表达，你如何确保最终能得到产物?
25．某一质粒载体具有Tet r和Kan r的表型，在Kan抗性基因内有一Bgl I的切点。现用
Bgl I切割该载体进行基因克隆，问：(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素?(2)培养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型?(3)如何利用抗性变化筛选到含有插入片
段的重组体?
26．以pBR322 DNA作为载体，从四环素抗性基因区克隆外源DNA时，可采用环丝氨酸富集法筛选重组体，说明其基本原理和基本操作过程。
27．放射性抗体检测法(radioactive antibody test)的基本原理是什么?
28．什么是随机引物(random primer)?如何标记DNA?
29．什么是印迹(blotting)杂交?
30．什么是原位菌落杂交(colony hybridization)?
31．说明Southern杂交的原理和方法。
32．Northern印迹与Southern印迹有什么不同?
33．建立了一个基因文库后，如何鉴定一个携带目的基因的克隆?
答案：
1．答：
限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则，即属名+种名+株名的各一个首字母，再加上序号。基本原则： 3-4个字母组成，方式是：属名+种名+株名+序号；首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写；第二字母：取种名的第一个字母，斜体小写；
第三字母： (1)取种名的第二个字母，斜体小写；
(2)若种名有词头，且已命名过限制酶，则取词头后的第一字母代替。
第四字母：若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定，但用正体。顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I、Ⅱ、Ⅲ、…等，用正体。
2．答：
Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限
制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松
动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因
条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星
活性。
概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量(>5％, v／v)；(2)限制性内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)；(3)低离子强度(<25 mmol／L)；(4)高pH(8．0 以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如
Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。
3．答：
影响DNA连接酶催化连接反应的因素有很多，但温度对连接反应的影响较大。黏性末端链通常以12°C一15°C最好，这种温度有利于末端退火和连接酶的活性稳定。温度高了难以进行末端退火，低于上述温度会降低连接酶的活性。平末端连接以室温为宜，因为平末端连接不存在DNA的退火问题，但是温度高于30℃，连接酶特别不够稳定。平末端连接时连接酶的浓度要比黏性末端连接时高10-100倍。DNA中有残存的tRNA不会抑制DNA连接酶的活性，但是，如果NaCl的浓度高于150mmol／L，则对连接反应有强的抑制作用。
另外反应体系中有NH4+离子的存在，对E．coli DNA连接酶具有激活作用。E．coli DNA 连接酶需要NAD+作辅助因子，而T4 DNA连接酶需要ATP。
4．答：
Klenow酶是1974年Klenow用枯草杆菌蛋白酶水解DNA聚合酶I，得到两个片段，其中大片段的分子量为75kDa，它具有5'-3'聚合酶和3'-5'外切核酸酶的活性，小片段具有5'-3'外切核酸酶活性。由于大片段失去了DNA聚合酶I中会降解5'引物的5'-3'外切核酸酶的活性，所以在基因工程中更有用。
Klenow酶主要有下列用途：
(1)修复反应，制备平末端
可用Klenow酶修复限制性内切核酸酶或其他方法产生的5'或3'突出末端，制备平末端，这样可以使原来具有不相容的黏性末端的DNA片段通过平末端重组。如在反应系统中加入放射性同位素标记的脱氧核苷酸，用这种末端填补的方法可以制备3'末端标记的探针。
用Klenow酶修复5'突出末端的反应主要是利用了Klenow酶的DNA聚合酶活性，是填补反应；而修复3'突出末端则是用Klenow酶的3'-5'外切核酸酶的活性，是切割反应。
用Klenow酶的切割反应来修复3'突出末端是不理想的，改用T4DNA聚合酶或其他的酶是更好的选择。
(2) 标记DNA3'突出末端(protruding end)
该反应分两步进行：先用3'-5'的外切核酸酶活性除去3'突出末端，产生3'隐含末端，然后在高浓度的标记底物( -32p-dNTP)存在下，使降解(3'-5')作用与聚合(5'-3')作用达到平衡。这种反应也叫交换或取代反应(exchange／replacement reaction)。不过这一反应用T4DNA聚合酶的效果更好，因它的3'-5'外切核酸酶活性较强。
(3)其他的一些用途：包括用双脱氧末端终止法进行DNA序列分析、用于cDNA第二链的
合成、在定点突变中用于合成第二链、用引物延伸法(primer extension)制备单链DNA 探针等。
5．答：
主要差别是：CIP68°C时失活，而BAP68°C稳定，且耐酚抽提。应用：
(1)dsDNA的5'端脱磷酸，防止DNA的自身连接。但是用CIP处理后，最好将CIP除去后，
再进行连接反应。
(2)DNA和RNA脱磷酸，然后用于多核苷酸激酶进行末端标记。
6．答：
外切核酸酶是从噬菌体感染的E．coli中分离纯化的，能够从双链DNA上依次切下5'单核苷酸，作用底物是双链DNA的5'磷酸末端，不能切割羟基化5'端。该酶虽然能切割单链DNA,但效率较低(下降200倍)。不能切割带切口或缺口的dsDNA。该酶作用时是行进性的，一步一步进行的。在基因工程中主要用于除去双链DNA突出的5'末端，以便让末端转移酶加尾。
7．DNase I是一种内切核酸酶，在Mg2+存在下，DNase I随机切割DNA两条链中的任意一条链；当Mn2+代替Mg2+时，DNase I几乎是在双链DNA两条链相对的位臵上打开缺口，使双链DNA断裂，产生的末端几乎是平末端或只突出1～2个核苷酸的DNA片段。
DNase I有许多用途：(1)在切口移位标记中，制造切口；(2)在足迹法中保护DNA；
(3)除去RNA制备物中的DNA；(4)体外转录中除去DNA模板；(5)检测染色体中的转录活
性区；(6)产生可在噬菌体M13载体上进行测序的随机克隆。
8．质粒通过以下几种机制维持在细胞中的稳定：
(1)多聚体质粒的分解
如果质粒在复制时形成多聚体的话，在细胞分裂过程中质粒丢失的可能性就会增加。一个多聚体是由多个单体相互连接而成的。多聚体的形成可能是由于在复制终止时发生错
误或者是由于单体间重组的结果。由于多聚体在细胞分裂时将作为一个质粒进入一个子细胞，这样，多聚体的形成就大大降低了质粒的有效拷贝数，因此，多聚体也就大大增加了细胞分裂时质粒丢失的机会。为了避免这种情况的发生，很多质粒都具有位点专一性重组的系统，可以破坏多聚体。
(2)分离(partitioning)
质粒通过一种分离系统来防止在细胞分裂过程中质粒的丢失，这种机制保证在细胞分裂过程中每个子细胞至少可得到一个质粒拷贝，这是由称为par功能(Par functions)完成的。所谓par功能是指某些质粒，包括F、R1等质粒上具有的一些短的区域，这些区域能够增强质粒拷贝的合适分配。如果从质粒中将这种区域拿掉，质粒丢失的频率就会相当高。已经深入研究过P1质粒的分离系统，发现P1质粒的分离系统由一个顺式激活par序列和两个蛋白ParA和，ParB的基因构成，其中一个蛋白同par位点结合。
关于par位点是怎样增强质粒适当分离的机制有两种模型，按照这两种模型，细菌的膜具有真核生物有丝分裂纺锤体的功能，在细胞分裂之前将质粒分开。par位点是质粒同质膜结合的区域，在细胞分裂时，由于膜的生长，质粒的两个拷贝就被拉到两个子细胞中。这两个模型对于细胞分裂时，质粒同质膜的结合是怎样保证每个细胞至少得到一个质粒的解释是不同的。
模型．A：par位点同细菌质膜的一个假定位点结合。在这个模型中，每一种质粒都有它自己独特的同质膜结合的位点。当细胞生长时，位点也加倍，每一个质粒拷贝结合一个位点。由于这些位点随着细胞分裂而分开，每一个质粒拷贝将分配到一个子细胞。这就保证了质粒不会丢失。该模型要解决的问题是质膜上必须有许多独特的位点以供不同的质粒拷贝结合，这似乎不太可能。
将模型A稍微改动一下，就可以满足质粒分离所需的位点。如果我们假定质粒结合的位点不在质膜而是在细菌的染色体上就可以了。染色体上有很多的位点，并且随着DNA的复制而加倍，这些位点可供质粒结合。剩下的唯一问题就是在质膜上有同染色体结合的独特位点，这样，质粒将随着染色体的分离而分离。
模型B同模型A基本类似，在这个模型中，质粒的两个拷贝在同质膜结合之前必须通过它们的par位点相互配对。然后这两个质粒在细胞分裂过程中随着质膜位点的分离而分离。高拷贝数的质粒常常具有增加质粒适当分离的位点，但是这些区域并没有相同的结构，并不以相同的机制起作用。例如，质粒pSCl01的par区可以增加质粒的超螺旋，至于超螺旋的增加如何帮助质粒的适当分离是不清楚的。可能是增强了质粒分离后的迅速复制，防止了下次分裂时的丢失。
(3)质粒溺爱(plasmid addiction)
即使质粒具有分离功能，质粒也会从增殖的细胞中丢失。在一类复仇的细胞中，质粒能够编码一些杀死丢失了质粒的细胞。像F质粒、R1质粒、以及P1噬菌体都有这种功能。
这些质粒编码一些毒性蛋白质，这些蛋白质一旦表达就会杀死细胞。根据质粒的来源不同，毒性蛋白质可通过各种方式杀死细胞。
例如，质粒的毒性蛋白Ccd,通过改变DNA螺旋酶来杀死细胞，由于螺旋酶的改编，引起了双螺旋DNA的断裂。质粒R1的杀手蛋白Hok,破坏细菌细胞质膜的功能，引起细胞活力的丧失。为什么毒性蛋白仅仅是在细胞丢失了质粒之后立即杀死细胞?当细胞含有这种质粒时，沉溺系统的蛋白质或RNA可作为一种解毒药，既能阻止毒蛋白的合成，又能同毒蛋白结合并阻止毒蛋白起作用。
然而，这些其他基因的产物要比毒性蛋白不稳定得多，所以它们会很快失活。如果一个细胞丢失了质粒，既没有毒性蛋白也没有解毒剂的合成。但是，由于解毒剂更不稳定，当解毒剂失活后，毒性蛋白就可以起杀伤作用。这些系统使细胞对质粒产生溺爱，并防
止细胞丢失质粒。
9．(1)非传递性和不被带动转移。对于多数基因克隆操作来说，都不希望载体能够进行自主传递，也不希望被带动转移。
(2)具有条件致死突变，如温度敏感质粒pJC307(ColEl的衍生质粒)在哺乳动物正常体温
下就丧失复制能力，可防止克隆基因扩散，只存在于限定的宿主细胞中。(3)一般情况下不希望与宿主染色体发生重组，因为重组后有可能给宿主带来突变。
(4)有较小的宿主范围。
10．(1)菌体DNA没有容载能力，因为噬菌体的头部对DNA包装的量是有限制的，不能大于基因组的105％，所以要将λ噬菌体改造成载体，必须削减分子量。
(2)野生型的λDNA对于一些常用的酶都有多个识别和切割位点，不便于克隆。
(3)没有可供选择的标记。
(4)野生型的λ噬菌体具有感染性，因此不够安全。
11．这种方法是根据组织化学的原理来筛选重组体。主要是在λ载体的非必要区插入一个带有大肠杆菌β—半乳糖苷酶的基因片段，携带有lac基因片段的λ载体转入lac的宿主菌后，在含有5—溴—4—氯—3—引哚—β—D—半乳糖苷(X-gal)平板上形成浅蓝色的噬菌斑。外源基因插人lac(或lac基因部分被取代)后，重组的噬菌体将丧失分解X-gal的能力，转入lac-宿主菌后，在含有5—溴—4—氯—3—引哚—β—D—半乳糖苷 (X-gal)平板上形成白色的噬菌斑，非重组的噬菌体则为蓝色噬菌斑。
12．β—半乳糖苷酶的N末端是非必需的，，可以进行修饰，并不影响酶的活性或α肽的互补性。如果插入的外源DNA引起α肽的可读框的改变，或者插入片段在正确的可读框中含有终止密码的话，就会形成白色噬菌斑。如果插入DNA的碱基数正好是3的倍数，或者插入的DNA中不含有终止密码的话，仍然会形成蓝色噬菌斑。这种插入物的长度可达几百个碱基对。M13载体的这种性质可以用来检测和选择产生新的终止密码或改变可读框，即移码突变。13．M13克隆系统具有很多优点：
(1)克隆的片段大：M13噬菌体的DNA在包装时不受体积的限制，所以容载能力大，有报
道，有些噬菌体颗粒可以包装比野生型丝状噬菌体DNA长6—7倍的DNA(插人片段可达40kb)。
(2)可直接产生单链DNA，这对于DNA测序、DNA诱变、制备特异的单链DNA探针都是十
分有用的。
(3)单链DNA和双链DNA都可以转染宿主，并可根据人工加上的选择标记进行筛选。
M13克隆系列的不足：
(1)较大的外源片段插入后，在扩增过程中往往不够稳定，一般说，克隆的片段越大，发
生丢失的机率越大。
(2)单链载体分子感染的细胞中，往往是单链和双链混杂，分离双链比较麻烦。
14．主要特点有：
(1)具有质粒复制子，进入寄主细胞后能够像质粒一样进行复制，并且能够被氯霉素扩增。
(2)具有质粒载体的抗生素抗性基因的选择标记。
(3)具有λ噬菌体的包装和转导特性。
(4)容载能力大。克隆的最大片段在45kb，最小片段为19kb。
(5)简化了筛选。如果载体的分子量在5kb的话，得到的转导子几乎排除由载体自连的可
能性，因为要被成功包装，至少要7个分子的载体自连，尽管如此，也是不能被包装的，因为COS位点太多了。
黏粒载体也有如下不足：(1)如果两个黏粒之间有同源序列，可能会发生重组，结果会使被克隆的片段重排或丢失。
基因工程期末试题复习要点整理 基因工程是70年代出现的一门科学，是生物学最具生命力和最引人注目的前沿科学之一，是现代生物技术的代表，是生命科学类专业中的一门重要的专业课。本课程主要介绍基因工程概述、重组DNA基本技术及原理、基因克隆、基因的分离及鉴定、基因工程的表达系统、基因工程的应用等。通过本课程的学习，使学生掌握基因工程技术的基本原理和了解该技术在动物、植物和微生物等方面的应用，为今后从事生物学教学、生物技术研究和产品开发，或进一步的研究生学习科研打下坚实的理论及专业基础。扬州大学试题纸 一、名词解释：共10题，每题2分，共20分。 1. 基因: 是DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。 2. 定位克隆: 获取基因在染色体上的位置信息，然后采用各种方法对该基因进行定位和克隆 3. 融合基因: 是指应用DNA体外重组技术构建的一类具有来自两个或两个以上的不同基因核苷酸序列的新型基因。 4. 转化子: 导入外源DNA后获得了新遗传标志的细菌细胞或其他受体细胞，又称重组体。 5. 人工接头：是人工合成的具有一个或数个特定限制性内切酶识别和切割序列的双股平端DNA短序列。 6. RT-PCR: 是指以mRNA在反转录酶作用下合成cDNA第一链为模板进行的PCR。 7. ORF : 起始于AUG、止于UAA、UGA、UAG的连续的密码子区域，是潜在的编码区。 8. MCS: 指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的DNA片段。 9. gene targeting : 基因工程中利用活细胞染色体DNA可与外源DNA的同源性DNA序列发生重组的性质，来进行定点修饰改造染色体上某一目的基因的技术 10. 5’RACE: 是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以mRNA为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到5’端之间未知序列的方法。 四、简答题：共4题，共20分。 1．简述获得目的基因常用的几种方法。（5分）
基因工程原理复习题思考题 5、简单叙述同尾酶和同裂酶的差别。 同尾酶：来源不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端，连接后不能被相关的酶同时切割。 同裂酶：识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。分完全同裂酶和不完全同裂酶（PS：完全同裂酶：识别位点和切点完全相同。 不完全同裂酶：识别位点相同，但切点不同。） 6、连接酶主要有哪些类型？有何异同点？影响连接酶连接效果的因素主要有哪些？ 类型：DNA连接酶和RNA连接酶 异同点： 相同点：都能以DNA为模板，从5'向3'进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应。 不同点：DNA聚合酶识别脱氧核糖核苷酸，在DNA复制中起作用；而RNA聚合酶聚合的是核糖核苷酸，在转录中起作用。 7、试分析提高平端DNA连接效率的可能方法。（传说中的网上答案） 1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好。 2、在体系中加一点切载体的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。这样可避免载体自连，应该可以大大提高平端连接的效率。 3、足够多的载体和插入片段是最重要的。 4、平端的连接对于离子浓度很敏感 5、尽可能缩小连接反应的体积 6、建议放在四度冰箱连接两天效率更高比14度好 8、基因工程中常用的DNA聚合酶主要有哪些？ 1）大肠杆菌DNA聚合酶 2）Klenow fragment 3）T7 DNA聚合酶 4）T4 DNA聚合酶 5）修饰过的T7 DNA聚合酶 6）逆转录酶 7）Taq DNA聚合酶 第四章基因克隆的载体系统 1、作为基因工程载体，其应具备哪些条件？ 具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性（可转移性）； 具有合适的筛选标记； 具有较高的外源DNA的载装能力； 具有多克隆位点（MCS）； 具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。 3、载体的类型主要有哪些？在基因工程操作中如何选择载体？ 基因工程中常用的载体(vector)主要包括质粒(plasmid)、噬菌体(phage)和病毒(virus)三大类。这些载体均需经人工构建，除去致病基因，并赋予一些新的功能，如有利于进行筛选的标志基因、单一的限制酶切点等。 4、质粒转化原理，影响转化率的因素有哪些？
211大学试题 课程名称药理学开课学院医学院 使用班级考试日期 题号一二三四五六七八总分核查人签名 得 分 阅卷教师 一、名词解释（每题2分，共20分） 1. 副作用： 2. 配体： 3. 半数有效量： 4. 生物利用度： 5. 半衰期： 6. 后除级： 7. 耐受性： 8. 抗菌谱： 9. MIC ： 10. 化学治疗： 命题教师： 共 4 页第1 页 学 生所在学院专 业、班级学 号姓 名
211 大学试题第2页 二、填空题（每空1分，共20分） 1. 药物体内过程包括、、、。 2. 毛果芸香碱对眼的作用是、、 。 3．可用于缓慢型心律失常的药物是和。 4．胺碘酮对心肌最显著的电生理特性影响是，临床主要用于。 5．苯二氮卓的药理作用有、、和中枢性肌松作用。6．许多药物通过干扰某些酶的活性而显示其作用，写出下列药物的作用机理所影响的酶：阿斯匹林青霉素 喹诺酮利福平 奥美拉唑新斯的明 三、选择题（每题1分，共20分） 1．药动学是研究（） A 机体如何对药物进行处理 B 药物如何影响机体 C 药物发生动力学变化的原因 D 合理用药的治疗方案 E 药物的量效关系 2．过敏性休克首选下列哪种药（） A 去甲肾上腺素 B 肾上腺素 C 苯海拉明 D 糖皮质激素 E 多巴胺 3．新斯的明通过抑制胆碱酯酶发挥间接拟胆碱作用，但不可应用于（） A 重症肌无力 B 阵发性室上性心动过速 C 腹胀气 D 青光眼 E 尿贮留 4．下列哪种不良反应为阿斯匹林过量所致( ) A 胃肠道反应 B 凝血障碍 C 过敏反应 D 水杨酸反应 E 瑞夷综合症 5．下列哪一疾病不是β受体阻断剂的适应症( ) A 支气管哮喘 B高血压 C 甲状腺功能亢进 D 心绞痛 E 窦性心动过速 6. 氯丙嗪临床主要用于（） A 抗精神病、镇吐、人工冬眠 B 镇吐、人工冬眠、抗抑郁 C 退热、防晕、抗精神病 D 退热、抗精神病及帕金森病 E 低血压性休克、镇吐、抗精神病 7. 维拉帕米是（） A β受体阻断药 B Ca++通道阻滞药 C Ｈ1受体阻断药 D Ｈ2受体阻断药 E Na+通道阻滞药 8. 中枢性降压药是（） A 可乐定 B 利血平 C 拉贝洛尔 D 肼苯哒嗪 E 硝苯地平
老舍《茶馆》高考文学类文本阅读练习及答案 （二）现代文阅读Ⅱ（本题共4小题，16分） 阅读下面文章，完成6～9题。 茶馆（节选） 老舍 时间与前幕相隔十余年，现在是袁世凯死后，帝国主义指使中国军阀进行割据，时时发动内战的时候。初夏，上午。 地点同前幕。 【幕启：北京城内的大茶馆已先后相继关了门。“裕泰”是硕果仅存的一家了，可是为避免被淘汰，它已改变了样子与作风。现在，它的前部仍然卖茶，后部却改成了公寓。前部只卖茶和瓜子什么的，“烂肉面”等等已成为历史名词。厨房挪到后面去，专包公寓住客的伙食。茶座也大加改良：一律是小桌与藤椅，桌上铺着浅绿桌布。墙上的“醉八仙”'大画，连财神龛，均已撤去，代以时装美人——外国香烟公司的广告画。“莫谈国事”的纸条可是保存了下来，而且字写得更大。王利发真像个“圣之时者也”，不但没使“裕泰”灭亡，而且使它有了新的发展。】 【因为修理门面，茶馆停了几天营业，预备明天开张。王淑芬正和李三忙着布置，把桌椅移了又移，摆了又摆，以期尽善尽美。】 【王淑芬梳时兴的圆髻，而李三却还带着小辫儿。】. 【二三学生由后面来，与他们打招呼，出去。】 王淑芬（看李三的辫子碍事）三爷，咱们的茶馆改了良，你的小辫儿也该剪了吧 李三改良！改良！越改越凉，冰凉！ 王淑芬也不能那么说！三爷你看，听说西直门的德泰，北新桥的广泰，鼓楼前的天泰，这些大茶馆全先后脚儿关了门！只有咱们裕泰还开着，为什么不是因为栓子的爸爸懂得改良吗 李三哼！皇上没啦，总算大改良吧可是改来改去，袁世凯还是要做皇上。袁世凯死后，天下大乱，今几个打炮，明几个关城，改良哼！我还留着我的小辫儿，万一把皇上改回来呢！ 王淑芬别顽固啦，三爷！人家给咱们改了民国，咱们还能不随着走吗你看，咱们这么一收拾，不比以前干净，好看专招待文明人，不更体面可是，你要还带着小辫儿，看着多么不顺眼哪！ 李三太太，您觉得不顺眼，我还不顺心呢！
基因工程原理练习题及其答案 一、填空题 1．基因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2．基因工程的两个基本特点是：(1)____________，(2)___________。 3．基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和__________。 4．碱裂解提取溶液I中的葡萄糖的作用________________、_______________、______________________________。 5．同一质粒不同构型在电泳过程中迁移速率为。 6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。7．第一个分离的限制性切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性切核酸酶是_____________。 8．限制性切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。 9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性：(1)____________；(2)________________的活性。10．为了防止DNA的自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。11．EGTA是____________离子螯合剂。 12．测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。 13．切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。 14．欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。 15．反转录酶除了催化DNA的合成外，还具有____________的作用，可以将DNA- RNA杂种双链中的___________水解掉。 16．基因工程中有3种主要类型的载体：_______________、_____________、______________。 17．就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：_______________、_____________、______________。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 18．琼脂糖凝胶的分辨力与胶浓度的关系是。 19．如果改变反应条件就会影响酶的专一性和切割效率，称为________________。20．影响限制性切酶活性的因素________________、________________、________________、________________。 21．连接反应的实用温度为________________。 22．pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过 和两种质粒改造而来。它的复制子来自，Amp 抗性基因则是来自。
《药理学》常考大题及答案整理 李沁 写在前面：这份东西是根据一位马师兄（很抱歉我忘记名字了）的题目提纲整理的，里面的 一些对章节学习的提示也是来自于他。大题基本都COVER到了，答案我是尽量按照书上的，可能会有漏的点请大家自己补充，PS，由于我只是一名考试党，只能说尽量帮助大家度过 考试。对于考试中的非主流题目虽然不能担保了，但是背完它大题基本就没问题的。另外，下划线表示我没找到书上的答案。 资料有风险，参考需谨慎！第二章第三章：药效学和药动学 基本上不出大题，但是喜欢出选择题，所以还是要理解一些关键性的概念（比如药效学里头 的神马效能，效价强度，治疗指数，激动药和拮抗药啊，药动学里头的ADME过程中的一 些关键概念等）（还有就是药动学那里的一些公式可以不用理会，考试不考计算）。 总论部分兰姐会讲得比较细，只要大家把她讲的内容掌握就差不多了。 以前考过的大题有： 1效价强度与效能在临床用药上有什么意义？ （1）效价强度是达到一定效应（通常采用50%全效应）所需剂量，所需剂量越小作用越强，它反映药物对受体的亲和力。其意义是效价强度越大时临床用量越小。 （2）效能是药物的最大效应，它反映药物的内在活性，其意义一是表明药物在达到一定剂 量时可达到的最大效应，如再增加剂量，效应不会增加；二是效能大的药物能在效能小的药 物无效时仍可起效。 2什么是非竞争性拮抗药？ 非竞争性拮抗药是指拮抗药与受体结合是相对不可逆的，它能引起受体够性的改变，从而干 扰激动药与受体的正常结合，同时激动药不能竞争性对抗这种干扰，即使增大激动药的剂量 也不能使量效曲线的最大作用强度达到原有水平。随着此类拮抗药剂量的增加，激动药量效 曲线逐渐下降。 3肝药酶活化剂对合用药物的作用和浓度的影响？ 第六章到十一章：传出神经系统药 一般会出简答题，但不会出论述题。 从第七章到十一章的内容都比较重要，但是从历年大题来看以β受体阻断药考得最多，其次 是阿托品。
基因工程 第一章基因工程概述 1、基因工程的概念(基因工程基本技术路线PPT) 基因工程（Gene Engineering）,是指在基因水平上的遗传工程,它是用人为方法将大分子(DNA)提取出来,在离体条件下用适当的工具酶进行切割后,把它与作为载体的DNA分子连接起来,然后与载体一起导入某一更易生长、繁殖的受体细胞中,以让外源遗传物质在其中“安家落户”,进行正常的复制和表达,从而获得新物种的一种崭新的育种技术. 2、基因工程的历史 基因工程准备阶段：1972，第一个重组DNA分子的构建，构建人：Paul Berg及其同事PPT 基因工程诞生：1973，Cohen & Boyer首次完成重组质粒DNA对大肠杆菌的转化 基因工程发展阶段的几个重要事件： 一系列新的基因工程操作技术的出现； 各种表达克隆载体的成功构建； 一系列转基因菌株、转基因植物、转基因动物等的出现 3、基因工程的内容（P9） 4、基因克隆的通用策略（P12）(基因组文库(鸟枪法)+分子杂交筛选) 第二章分子克隆工具酶 5、限制性核酸内切酶的概念、特点、命名、分类(问答) 概念：一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶，主要存在于细菌体内 特点（参加PPT） 命名：依次取宿主属名第一字母，种名头两个字母，菌株号，然后加上序号。
如：从Haemophilus influenze Rd中提取到的第三种限制型核酸内切酶被命名为Hind Ⅲ，Hin指来源于流感嗜血杆菌，d表示来菌株Rd，Ⅲ表示序号。 分类：依据酶的亚单位组成、识别序列的种类以及是否需要辅助因子可分为：Ⅰ型酶、Ⅱ型（Ⅱs型）酶和Ⅲ型酶。 真核细胞中有4中DNA聚合酶：α，β，γ，线粒体DNA聚合酶 原核生物中3中DNA聚合酶：Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ 6、几个基本概念 粘性末端：两条多聚核苷酸链上磷酸二酯键断开的位置是交错的，对称地分布在识别序列中心位置两侧，这样形成的DNA片段末端称为~。 平末端：两条多聚核苷酸链上磷酸二酯键断开的位置处在识别序列的对称结构中心，这样切割的结果产生的DNA片段末端是平齐的，称之为~。 同裂酶：一些来源不同的限制性核酸内切酶具有相同的识别序列。如：BamHI和BstI均可识别GGATCC。 同尾酶：有些限制性内切酶虽然识别序列不同，但是切割DNA分子产生相同的DNA末端。如：TaqI：TCGA；ClaI：A TCGA T；AccI：GTCGAC 星星活性：某些限制性核酸内切酶在特定条件下，可以在不是原来的识别序列处切割DNA，这种现象称为Star活性。 DNA物理图谱：（多为质粒图谱）
基因工程的原理及技术练习题 1．下列关于限制酶的说法正确的是（） A.限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中很少 B.一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C.不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端 D.限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键 【答案】B 【解析】 限制酶主要从原核生物中分化出来，A错误； 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，B正确； 不同的限制酶切割DNA后会形成黏性末端、平末端，C错误； 限制酶的作用部位是磷酸二酯键，D错误，故选B。 2．下列叙述不正确的是（） A.质粒在宿主细胞内可整合到染色体DNA上 B.质粒是独立于细菌拟核DNA之外的小型细胞器 C.基因工程操作中的质粒一般都是经过人工改造的 D.烟草花叶病毒可作为基因工程中的运载体 【答案】B 【解析】 质粒是细胞中的小型环状DNA，进入细胞后可以整合到宿主细胞的染色体
DNA上，A正确。 质粒是DNA，不是细胞器，B错误。 质粒一般不能直接用于基因工程，所以需要人工的改造，C正确。 在基因工程中可以做运载体的有：质粒、动植物病毒、λ噬菌体衍生物，烟草花叶病毒是植物病毒，可以做运载体，D正确。 3．下列有关基因工程的相关叙述，不正确的是（） A.目的基因主要指编码蛋白质的结构基因 B.基因表达载体的构建是基因工程的核心 C.限制酶不能切割烟草花叶病毒的核酸 D.DNA连接酶可催化脱氧核苷酸链间形成氢键 【答案】D 【解析】 目的基因要表达目的性状，故A正确。 目的基因依赖基因表达载体导入受体细胞，故B正确。 目前发现的限制酶都是切割DNA的酶，不能切割烟草花叶病毒的RNA，故C正确。 DNA连接酶可催化脱氧核糖和磷酸之间形成磷酸二酯键，故D错误。
（二）现代文阅读（本题共4小题，16分） 阅读《茶馆》选段，完成6~9题。 人物介绍：王利发：裕泰茶馆的掌柜。 常四爷：旗人，在满清时吃皇粮。第一幕中因一句“大清国要完”被抓起来，坐了一年的监狱。出狱后参加义和团，以后又凭力气靠卖菜为生。 秦仲义：裕泰茶馆的房东，是维新运动后出现在政治舞台上的新生民族资本家。他有一个自认为很远大的理想，就是“实业救国”。 [常四爷提着小筐进来，筐里有些纸钱和花生米。他虽年过七十，可是腰板还不太弯。] 常四爷什么事这么好哇，老朋友！ 王利发哎哟！常四哥！我正想找你这么一个人说说话儿呢！我沏一壶顶好的茶来，咱们喝喝！（去沏茶） [秦仲义进来。他老的不象样子了，衣服也破旧不堪。] 秦仲义王掌柜在吗？ 常四爷在！您是…… 秦仲义我姓秦。 常四爷秦二爷。 王利发（端茶来）谁？秦二爷？正想去告诉您一声，这儿要大改良！坐！坐！ 常四爷我这儿有点花生米，（抓）喝茶吃花生米，这可真是个乐子！ 秦仲义可是谁嚼得动呢？ 王利发看多么邪门，好容易有了花生米，可全嚼不动！多么可笑！ 怎样啊？秦二爷！ （都坐下） 秦仲义别人都不理我啦，我来跟你说说：我到天津去了一趟，看看我的工厂！ 王利发不是没收了吗？又物归原主啦？这可是喜事！ 秦仲义拆了！ 常四爷拆了？ 王利发拆了？ 秦仲义拆了！我四十年的心血啊，拆了！别人不知道，王掌柜你知道：我从二十多岁起，就主张实业救国。到而今……抢去我的工厂，好，我的势力小，干不过他们！可倒好好地办哪，那是富国裕民的事业呀！结果，拆了，机器都当碎铜烂铁卖了！全世界，全世界找得到这样的政府找不到？我问你！ 王利发当初，我开的好好的公寓，您非盖仓库不可。看，仓库查封，货物全叫他们偷光！当初，我劝您别把财产都出手，您非都卖了开工厂不可！ 常四爷还记得吧？当初，我给那个卖小妞的小媳妇一碗面吃，您还说风凉话呢。 秦仲义现在我明白了！王掌柜，求你一件事吧：（掏出一二机器小零件和一支钢笔管来）工厂拆平了，这是我由那儿捡来的小东西。这支笔上刻着我的名字呢，它知道，我用它签过多少张支票，写过多少计划书。我把它们交给你，没事的时候，你可以跟喝茶的人们当个笑话谈谈，你说呀：当初有那么一个不知好歹的秦某人，爱办实业。办了几十年，临完他只由工厂的土堆里捡回来这么点小东西！你应当劝告大家，有钱哪，就该吃喝嫖赌，胡作非为，可千万别干好事！告诉他们哪，秦某人七十多岁了才明白这点大道理！他是天生来的笨蛋！ 王利发您自己拿着这支笔吧，我马上就搬家啦！
基因工程复习题分；30个）分；填空（每空1分） 20分；选择题（每题1分）10题型：名 词解释（104分。2个）20个）20分；论述题（简答题（绪论第一章 名词解释：1.基因工程：按照预先设计好的蓝图，利用现代分子生物学技术，特别是酶学技术，
对直接进行体外重组操作与改造，将一种生物（供体）的基因转移到另外一种遗传物质DNA生物（受体）中去，从而实现受体生物的定向改造与改良。遗传工程广义：指以改变生物有机体性状为目标，采用类似工程技术手段而进行的对遗传物质的操作，以改良品质或创造新品种。包括细胞工程、染色体工程、细胞器工程和基因工程等不同的技术层次。狭义：基因工程。 克隆：无性(繁殖)系或纯系。指由同个祖先经过无性繁殖方式得到的一群由遗传上同一的DNA 分子、细胞或个体组成的特殊生命群体。 2．什么是基因克隆及基本要点 3.举例说明基因工程发展过程中的三个重大事件。 A) 限制性内切酶和DNA连接酶的发现（标志着DNA重组时代的开始）；B) 载体的使用；C) 1970年，逆转录酶及抗性标记的发现。 4.基因工程研究的主要内容是什么 基础研究： 基因工程克隆载体的研究 基因工程受体系统的研究 目的基因的研究 基因工程工具酶的研究 基因工程新技术的研究 应用研究： 基因工程药物研究 转基因动植物的研究 在食品、化学、能源和环境保护等方面的应用研究 第二章基因克隆的工具酶 1.名词解释： 限制性核酸内切酶：一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶。 回文结构：双链DNA中的一段倒置重复序列，当该序列的双链被打开后，可形成发夹结构。 同尾酶：来源不同、识别序列不同，但产生相同粘性末端的酶。 同裂酶：不同来源的限制酶可切割同一靶序列和具有相同的识别序列 黏性末端：DNA末端一条链突出的几个核苷酸能与另一个具有突出单链的DNA末端通过互补配对粘合，这样的DNA末端，称为粘性末端。 平末端：DNA片段的末端是平齐的。 限制性核酸内切酶的酶活性单位（U）：在酶的最适反应条件下，在50μl容积中，60分钟内完全切割1g DNA所需的酶量为1个酶活性单位（unit 或U） 限制性核酸内切酶的星活性：指限制性内切酶在非标准条件下，对与识别序列相似的其它片段的现象。DNA序列也进行切割反应，导致出现非特异性 的．
1．药物的何种不良反应与用药剂量的大小无关：D A．副作用B．毒性反应C．继发反应D．变态反应E．特异质反应 2．毛果芸香碱对眼的作用是：C A．瞳孔缩小，眼内压升高，调节痉挛B．瞳孔缩小，眼内压降低、调节麻痹C．瞳孔缩小，眼内压降低，调节痉挛D．瞳孔散大，眼内压升高，调节麻痹E．瞳孔散大，眼内压降低，调节痉挛 3．毛果芸香碱激动M受体可引起：E A．支气管收缩B．腺体分泌增加C．胃肠道平滑肌收缩 D．皮肤粘膜、骨骼肌血管扩张E．以上都是 4．新斯的明禁用于：B A．重症肌无力B．支气管哮喘C．尿潴留D．术后肠麻痹 E．阵发性室上性心动过速 5．有机磷酸酯类的毒理是：D A．直接激动M受体B．直接激动N受体C．易逆性抑制胆碱酯酶 D．难逆性抑制胆碱酯酶E．阻断M、N受体 6．有机磷农药中毒属于烟碱样症状的表现是：C A．呕吐、腹痛B．出汗、呼吸道分泌增多C．骨骼肌纤维震颤 D．呼吸困难、肺部出现口罗音E．瞳孔缩小，视物模糊 7．麻醉前常皮下注射阿托品，其目的是D A．增强麻醉效果B．协助松弛骨骼肌C．抑制中枢，稳定病人情绪 D．减少呼吸道腺体分泌E．预防心动过缓、房室传导阻滞 9．肾上腺素不宜用于抢救D A．心跳骤停B．过敏性休克C．支气管哮喘急性发作 D．感染中毒性休克E．以上都是 10．为延长局麻作用时间和防止局麻药吸收中毒，常在局麻药液中加少量：B A．去甲肾上腺素B．肾上腺素C．多巴胺D．异丙肾上腺素E．阿托品11．肾上腺素用量过大或静注过快易引起： A．激动不安、震颠B．心动过速C．脑溢血D．心室颤抖E．以上都是E 12．不是肾上腺素禁忌症的是：B A．高血压B．心跳骤停C．充血性心力衰竭D．甲状腺机能亢进症E．糖尿病13．去甲肾上腺素使用时间过长或用量过大易引起：C A．兴奋不安、惊厥B．心力衰竭C．急性肾功能衰竭D．心动过速 E．心室颤抖 14．酚妥拉明能选择性地阻断：C A．M受体B．N受体C．α受体D．β受体E．DA受体 15．哪种药能使肾上腺素的升压效应翻转：D A．去甲肾上腺素B．多巴胺C．异丙肾上腺素D．酚妥拉明E．普萘洛尔16．普鲁卡因不用于表面麻醉的原因是：B A．麻醉作用弱B．对粘膜穿透力弱C．麻醉作用时间短D．对局部刺激性强E．毒性太大 17．使用前需做皮内过敏试验的药物是：A A．普鲁卡因B．利多卡因C．丁可因D．布比卡因E．以上都是 18．普鲁卡因应避免与何药一起合用：E A．磺胺甲唑B．新斯的明C．地高辛D．洋地黄毒甙E．以上都是
第五单元 17茶馆(节选) 1．给下列词语中加点汉字注音，或看拼音写汉字。 趿．拉( ) 文绉绉．( ) 珍馐．( ) zā()摸 2．下列词语书写完全正确的一项是( ) A．兵荒马乱珍馐美味瞌头作揖云消雾散 B．天灾人祸废尽心机莫谈国事垂头丧气 C．横眉立目惹事生非荒诞无稽不容分说 D．满面春风穿着讲究另眼相看理直气壮 3．(黄冈中考改编)下面各句中标点符号使用不合乎规范的一项是( ) A．风来了，荷叶为什么就不能迎风招展谁规定了它的下场非得是宁折不弯风让它欢欣、雨也让它喜悦，荷盘中的一汪水，被荷叶摇成一颗亮晶晶的玉珠。 B．在育才中学举行的“5.12”防震疏散演练中，九(2)班落实任务最好的是三、四组。 C．罗丹用石头雕塑了一只鹰，鹰被雕塑得栩栩如生，好像真的在天空中展翅高飞一样。 有人问他：“你是怎样把石头雕塑得飞起来的，罗丹大师” D．东六宫大都作为古代艺术品的陈列专馆，展出宫内收藏的青铜器、绘画、陶瓷……4．(襄阳中考)下列句子没有语病的一项是( ) A．香港少数人发起的“占中”非法集会让每一个爱国爱港的中国人义愤填膺。 B．在努力建设法治社会的今天，无论领导还是群众，毫无例外，都必须遵纪守法。 C．推进农村新型城镇化建设，关键是改进农民科技知识水平，加速农业现代化进程。 D．积极融入“一带一路”大战略，建设汉江流域中心城市，已成为复兴襄阳的时代。5．老舍先生说：“一个大茶馆就是一个小社会。”作者在《茶馆》中着力刻画了一批“小人物”。下列人物分类正确的一项是( ) ①王利发②松二爷③康顺子④秦仲义 ⑤吴祥子⑥刘麻子⑦宋恩子⑧唐铁嘴 ⑨常四爷⑩庞太监 A．①②④⑤/⑦⑨/③/⑥⑧/⑩ B．①②③⑨/④/⑤⑦⑩/⑥⑧ C．①②③/④⑥/⑤⑦⑧⑩/⑨ D．①③/②/④/⑤⑥⑦/⑧⑨⑩ 6．本文主要通过对话展示矛盾冲突，秦仲义和庞太监两人表面热热乎乎，实际上都是语藏锋机，话里有话。试结合剧本背景，揣摩下面人物语言的潜台词。 秦仲义：庞老爷！这两天您心里安顿了吧 庞太监：那还用说吗天下太平了：圣旨下来，谭嗣同问斩！告诉您，谁敢改祖宗的章程，谁就掉脑袋！ (1)秦仲义潜台词：________________________________________________________ ________________________________________________________________________ (2)庞太监潜台词：_______________________________________________________ ________________________________________________________________________
一 1.载体的功能 1.运送外源基因高效转入受体细胞 2.为外源基因提供复制能力或整合能力 3.为外源基因的扩增或表达提供必要的条件 2.基因工程学科建立的理论和技术发明 1.三大理论：DNA是遗传物质、1953年提出DNA的双螺旋结构、提出中心法则和遗传密码 2.三大技术：工具酶的发现、载体的发现、逆转录酶的发现 3.质粒的特点 质粒是一类存在于细菌和真菌细胞中能独立于染色体DNA而自主复制的共价、闭合、环状DNA分子，也称cccDNA.通常在1~100范围内。 自主复制性、可扩增性、可转移性、不相容性 4.描述PBR322质粒筛选过程 PBR322质粒有两个标记基因，氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因。 若在康四环素抗性基因上插入外源DNA,则 1.先将转化液涂布在含有氨苄青霉素的平板上，未长的菌落是未导入质粒的菌落 2.再将上述平板上存活的菌落影印到含有四环素平板上，在四环素上不长但在氨苄青霉素 上长的转化子即为重组子。 5.简述PUC系列质粒筛选重组子的过程 PUC是在PBR322质粒上改造的 若在lacZ’标记基因上插入外源DNA，则 将转化液涂布在含有Amp的平板上，蓝色菌落为非重组子，白色菌落为重组子，没长的未导入质粒。 6.基因工程操作的基本流程 1.离：从供体细胞中分离出基因组DNA 2.切、连：用限制性核酸内切酶分别将外源DNA和载体分开,用DNA连接酶将含有外源基 因的DNA片段接到载体分子上，构成重组DNA分子 3.转、增：将重组DNA导入受体细胞，段时间培养转化细胞，以扩增DNA重组分子或使其 整合到受体细胞的基因组中 4.筛：筛选经转化处理的细胞，获得外源基因高效稳定的基因工程菌或细胞 5.表达：筛选好的菌或细胞导入到受体中使其高效稳定表达 7.为什么说逆转录酶的发现对基因工程学科的建立至关重要 1.对分子生物学的中心法则进行修正和补充 2.使真核基因的制备成为可能可将mRNA反转录形成DNA用于获得目的基因 3.在致癌病毒的研究中发现癌基因，为肿瘤发病机理的研究提供有价值线索 8.蓝白斑筛选 是一种基因工程常用的重组菌筛选方法。野生型大肠杆菌产生的β-半乳糖苷酶可以将无色
药理学题库及答案 一．填空题 1．药理学的研究内容是（）和（）。 2．口服去甲肾上腺素主要用于治疗（）。 3．首关消除较重的药物不宜（）。 4．药物排泄的主要途径是（）。 受体激动时（）兴奋性增强。 5．N 2 6．地西泮是（）类药。 7．人工冬眠合剂主要包括（）、（）和（）。8．小剂量的阿司匹林主要用于防治（）。 9．山梗菜碱属于（）药。（填药物类别） 10．口服的强心甙类药最常用是（）。 11．阵发性室上性心动过速首选（）治疗。 12．螺内酯主要用于伴有（）增高的水肿。 受体阻断药主要用于（）过敏反应性疾病。 13．H 1 14．可待因对咳漱伴有（）的效果好.但不宜长期应用.因为它有（）性。 15．胃壁细胞H+泵抑制药主要有（）。 16．硫酸亚铁主要用于治疗（）。 17．氨甲苯酸主要用于（）活性亢进引起的出血。 18．硫脲类药物用药2-3周才出现作用.是因为它对已经合成的（）无效。硫脲类药物用药期间应定期检查（）。 19．小剂量的碘主要用于预防（）。 20．伤寒患者首选（）。 21．青霉素引起的过敏性休克首选（）抢救。 22．氯霉素的严重的不良反应是（）。 23．甲硝唑具有（）、（）和抗阿米巴原虫的作用。 24.主要兴奋大脑皮层的中枢兴奋药物药物有__________,主要通过刺激化学感 受器间接兴奋呼吸中枢的药物有____________。
25.久用糖皮质激素可产生停药反应.包括（1）._______________（2）.__________ 26．抗心绞痛药物主要有三类.分别是；和药。27．药物的体内过程包括、、和排泄四个过程。 28．氢氯噻嗪具有、和作用。30．联合用药的主要目的是、、。31．首关消除只有在（）给药时才能发生。 32．药物不良反应包括（）、（）、（）、（）。33．阿托品是M受体阻断药.可以使心脏（）.胃肠道平滑肌（）. 腺体分泌（）。 34．氯丙嗪阻断α受体.可以引起体位性（）。 35．腹部手术止痛时.不宜使用吗啡的原因是因为吗啡能引起（）。36．对乙酰氨基酚也叫（）。 37．解热镇痛药用于解热时用药时间不宜超过（）。 38．洛贝林属于（）药。 39．硝酸甘油舌下含服.主要用于缓解（）。 40．心得安不宜用于由冠状血管痉挛引起的（）型心绞痛。 41．小剂量维持给药缓解慢性充血性心衰.常用药物是（）。 42．螺内酯主要用于伴有（）增多的水肿。 43．扑尔敏主要用于（）过敏反应性疾病。 44．对β 受体选择性较强的平喘药有（）、（）等。 2 45．法莫替丁能抑制胃酸分泌.用于治疗（）。 46．硫酸亚铁用于治疗（）。 47．氨甲苯酸可用于（）活性亢进引起的出血。
《茶馆》试题 《茶馆》习题精选及答案_ 1、对下面加线词语解说有错误的一项是（D）A、你聪明，还能把那点意思闹成不好意思吗？（意思：指宋恩子和吴祥子要王利发每月给他俩的钱。）B、卖青菜哪！铁杆庄稼没有啦，还不卖膀子力气吗？（“铁杆庄稼”喻指清朝的旗人都由官府按月供给的钱和粮。清朝被推翻了，当然这种惯例也就取消了。）C、可是呀，这兵荒马乱的年月，能有个事儿作也就得念佛。（此处意为“感谢神灵”）D、诸位，太令过来了！（指抓逃兵的军官） 2、戏剧冲突是戏剧文学的两大重要内容之一（另一为戏剧语言）、《茶馆》片断中，最基本的矛盾冲突是什么？选出分析正确的一项（C） A、王利发同各个茶客的矛盾冲突。 B、王利发、康大顺、常四爷等人与刘麻子、唐铁嘴、吴祥子等人的矛盾冲突。 C、王利发、康大顺、常四爷等同旧时代的矛盾冲突。 D、康大顺与刘麻子的矛盾冲突。 3、下面判断有误的一项是（D） A、《茶馆》作者老舍，原名舒庆春，字舍予。他的主要作品有长篇小说《二马》、《骆驼祥子》、《四世同堂》，中篇小说《我这一辈子》，短篇小说《月牙儿》等；话剧有《龙须沟》、《方珍珠》、《茶馆》等。 B、《茶馆》全剧共三幕，每一幕写一个时代。第一幕写的清代，时间是1898年秋，正是戊戌变法刚刚失败，谭嗣同等人被问斩后不久。第二幕写的是清朝被推翻后军阀混战时期。裕泰茶馆掌柜王利发第一次实行改良，以图从萧条中挽救茶馆，使其免于淘汰。第三幕写的是国民党统治时期、抗日战争胜利之后这段生活。最后茶馆被人霸占，王利发悬梁自尽。 C、《茶馆》以人物（王利发）的悲剧命运、茶馆的变迁为线索，在全局上与历史横断面交织，展示人物之间复杂的矛盾冲突。 D、《茶馆》通过茶馆的变迁及各类人物的遭遇，反映了封建社会的面貌，表明了反动统治必然灭亡的历史趋势。 4、对下面人物语言解释有误的一项是（A） A、哼！皇上没啦，总算大改良吧！可是改来改去，袁世凯还是要作皇上。袁世凯死后，天下大乱，今儿个打炮，明儿个关城，改良！哼！我还留着我的小辫儿，万一把皇上改回来呢！这段话交代了全剧的时代背景。《茶馆》中有很多台词都不仅限于它们字面上所表达的意思，须仔细体会，才能领悟其深义。说说下面台词的深刻含义是什么？ ①唐铁嘴……大英帝国的烟，日本的“白面儿”，两大强国侍候着我一个人，这点福气还少吗？ 答：________、①暗示帝国主义侵略势力渗透
基因工程复习题 题型：名词解释（10个）30分；填空（每空1分） 20分；选择题（每题1分）10分；简答题（4个）20分；论述题（2个）20分。 第一章绪论 1.名词解释： 基因工程：按照预先设计好的蓝图，利用现代分子生物学技术，特别是酶学技术，对遗传物质DNA直接进行体外重组操作与改造，将一种生物（供体）的基因转移到另外一种生物（受体）中去，从而实现受体生物的定向改造与改良。 遗传工程广义：指以改变生物有机体性状为目标，采用类似工程技术手段而进行的对遗传物质的操作，以改良品质或创造新品种。包括细胞工程、染色体工程、细胞器工程和基因工程等不同的技术层次。狭义：基因工程。 克隆：无性(繁殖)系或纯系。指由同个祖先经过无性繁殖方式得到的一群由遗传上同一的DNA分子、细胞或个体组成的特殊生命群体。 2．什么是基因克隆及基本要点? 3.举例说明基因工程发展过程中的三个重大事件。 A) 限制性内切酶和DNA连接酶的发现（标志着DNA重组时代的开始）；B) 载体的使用；C) 1970年，逆转录酶及抗性标记的发现。 4.基因工程研究的主要内容是什么？ 基础研究： 基因工程克隆载体的研究 基因工程受体系统的研究 目的基因的研究 基因工程工具酶的研究 基因工程新技术的研究 应用研究： 基因工程药物研究 转基因动植物的研究 在食品、化学、能源和环境保护等方面的应用研究 第二章基因克隆的工具酶 1.名词解释： 限制性核酸内切酶：一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶。 回文结构：双链DNA中的一段倒置重复序列，当该序列的双链被打开后，可形成发夹结构。 同尾酶：来源不同、识别序列不同，但产生相同粘性末端的酶。 同裂酶：不同来源的限制酶可切割同一靶序列和具有相同的识别序列 黏性末端：DNA末端一条链突出的几个核苷酸能与另一个具有突出单链的DNA末端通过互补配对粘合，这样的DNA末端，称为粘性末端。 平末端：DNA片段的末端是平齐的。 限制性核酸内切酶的酶活性单位（U）：在酶的最适反应条件下，在50μl容积中，60分钟内完全切割1μg λDNA所需的酶量为1个酶活性单位（unit 或U） 限制性核酸内切酶的星活性：指限制性内切酶在非标准条件下，对与识别序列相似的其它序列也进行切割反应，导致出现非特异性的DNA片段的现象。
药理学题目精选 题型一、名词解释5个×4’=20’ 二、填空题20多分 三、简答题5个×8’=40’ 四、论述题1个10多分 一、名词解释 1、不良反应：指不符合用药目的并对机体不利的反应。 2、副作用：药物在治疗量时产生的，与用药目的无关的作用。 3、毒性反应：主要由于用药剂量过大或用药时间过久，药物在体内蓄积过多引起的对机体有明显损害的反应。 4、首关消除：有些口服的药物，首次通过肝脏时即发生灭活，使进入体循环有药量减少，药效降低，这种现象称 为首关消除。 5、反跳现象：指长期用药后突然停药时所出现的症状，使病情加重的现象。 6、药酶诱导剂：能加速药酶的合成或增强药酶活性的药物。 7、血浆半衰期：指血浆中的药物浓度下降一半所需的时间。 8、耐受性：有少数人对药物的敏感性低，必须应用较大剂量，才能产生应有的作用。 9、生物利用度：是指给药后药物吸收进入血液循环的速度和程度的量度。 10、后遗效应：停药后血药浓度已降至阈浓度以下时残存的药理效应。 11、治疗指数：指半数致死量与半数有效量的比值，此值愈大，药物的安全性愈大。 12、肝肠循环：有些药物在肝细胞与葡萄糖醛酸等结合后排入胆中，随胆汁到达小肠后被水解，游离药物又被重吸 收进入血液经肝门静脉再次进入肝脏，称为肝肠循环。 13、变态反应：是指机体受药物刺激后发生的异常免疫反应，亦称为过敏反应。 14、安全范围：是指最小有效量和最小中毒量之间的剂量范围，此范围越大，药物的毒性越小，安全性越大。 15、耐药性：是指病原体或肿瘤细胞对药物的敏感性降低的一种状态。 16、一级动力学消除：是指体内药物在单位时间内消除的药物百分率不变，也就是单位时间内消除的药物量与血浆浓度成正比，（T1/2恒定，与血浆浓度无关），一般在药量小于机体的消除能力时发生，其给药时间与对数浓度曲线呈直线，故又称线性动力学消除。 17、零级动力学消除：是指药物在体内以恒定的速度消除，即不论血浆药物浓度高低，单位时间内消除的药物量 不变，体内药物消除速度与初始浓度无关，又称非线性动力学消除。 18二重感染：长期大剂量应用广谱抗生素，敏感菌被抑制，破坏了体内正常菌群生态平衡，致使一些抗药菌和真菌乘机繁殖，造成的再次感染，又称菌群交替症。 19 肾上腺素升压作用的翻转：给药后迅速出现明显的升压作用，而后出现微弱的降压作用。若事先给有α受体阻滞作用的药物（若氯丙嗪）再给肾上腺素，此时由于β2受体作用占优势，使升压转为降压。 20．受体：存在于细胞膜上、胞浆内或细胞核内的具有特殊功能的大分子蛋白质，它们能选择性地识别和结合配体(包括递质、激素、自体活性物质及某些药物)，并通过中介的信息转导与放大系统触发生理反应或药理效应。 21 抗生素：某些微生物在代谢过程中产生的对其它微生物具有抑制或杀灭作用的化学物质，也可人 工合成。 22．首剂现象：病人首次使用哌唑嗪（1 分）的90 分钟内出现体位性低血压，表现为心悸、晕厥、意识消失。（ 1 分） ……还有很多
茶馆阅读题答案 【篇一：《茶馆》名著阅读题目检测】 姓名班级成绩 1、第一幕中，_______曾做过国会议员，现在裕泰茶馆天天念经。 2、康顺子和康大力是_______关系。 3、常四爷因为_______而坐了一年多的牢房。 4、唐铁嘴后来不抽大烟，改抽_______。 5、王利发的妻子是_______。 6、裕泰茶馆的门面房的所有者是_______，后来投身实业救国。 7、第一、第二、第三幕时间分别发生在_______、_______、 _______时期。 8、烂肉面是第_______幕出现的面食 9、刘麻子是_______而死的。 10、第三幕中，假若有什么突出惹眼的东西，那就是“莫谈国事”的 纸条更多了，在这些条子旁还 贴着_______的新纸条。 11、老舍先生说：“一个大茶馆就是一个小社会。”作者在《茶馆》 中着力刻画了一批“小人物”。下列人物分类正确的一项是（） ①王利发②松二爷③康顺子④崔久峰 ⑤吴祥子⑥刘麻子⑦宋恩子⑧唐铁嘴 ⑨常四爷⑩巡警⑾老林⑿老陈 a、①②④⑤/⑦⑨⑾/③/⑥⑧/⑩⑿ b、①②③⑨/④/⑤⑦⑩/⑥⑧⑾⑿ c、①②③/④⑾/⑤⑦⑧⑩/⑨⑿ d、①③/②/④⑾⑿/⑤⑥⑦/⑨⑩⑧ 12、裕泰茶馆惟一没变的是什么？王利发为什么对此不加以改变呢？ 13、《茶馆》中，王利发为了让茶馆生存下去，进行了哪些改革？《茶馆》检测答案 1、崔久峰 2、母子 3、大清国要完 4、白面 5、王淑芬 6、秦仲义
7、1898年戊戌变法袁世凯倒台军阀混战抗战胜利后 8、第一幕 9、逃兵就地正法 10、茶钱先付 11、b 12、“莫谈国事”的纸条没变。在黑暗统治下，老百姓没有言论自由，王利发怕惹火上身。 13、 1.把茶馆后院辟成租给大学生的公寓 2.用小桌和藤椅替代以前的茶座或铺上了桌布，用美国的广告画替 代了醉八仙大画 3.用唱戏来招揽客人 4.打算请女招待 5.增加了“茶钱先付”的字条 《茶馆》检测答案 1、崔久峰 2、母子 3、大清国要完 4、白面 5、王淑芬 6、秦仲义 7、1898年戊戌变法袁世凯倒台军阀混战抗战胜利后 8、第一幕 9、逃兵就地正法 10、茶钱先付 11、b 12、“莫谈国事”的纸条没变。在黑暗统治下，老百姓没有言论自由，王利发怕惹火上身。 13、1.把茶馆后院辟成租给大学生的公寓 2.用小桌和藤椅替代以前的茶座或铺上了桌布，用美国的广告画替 代了醉八仙大画 3.用唱戏来招揽客人 4.打算请女招待 5.增加了“茶钱先付”的字条 【篇二：茶馆的练习题及其答案】 txt>一、朗读课文“一群男女难民在门外央告”到“待一会儿准关城门，就什么也买不到啦嘿”，注意把王利发的圆滑、世故的性格表现出来。 二、欣赏下列语句，回答括号中的问题，体会其中蕴含的意义。１、北京城内的大茶馆已先后相继关了门。“裕泰”是硕果仅存的一 家了，……