《基因工程》
一、选择题（每小题1.5分，共15分）
1．基因工程的创始人是( )。
A A. Kornberg
B W. Gilbert
C P. Berg
D S. Cohen
2．关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。
A 由作用于同一DNA序列的两种酶构成
B 这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶
C 这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰
D 不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统
3．在DNA的3’-5’链上，基因的起始密码子是( )
A ATG（或GTG）
B AGT
C TAG
D TGA
4．II限制性内切核酸酶可以特异性地识别( )。
A 双链DNA的特定碱基对
B 双链DNA的特定碱基序列
C 特定的三联密码
D 以上都正确
5．末端转移酶是合成酶类，具有( )活性。
A 3’5’DNA聚合酶
B 5’3’DNA聚合酶
C 5’3’DNA内切酶
D 5’3’DNA外切酶
6．下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中，( )是不正确的。
A 质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，因而有较多的拷贝数。
B 可以在氯霉素作用下进行扩增。
C 通常带有抗药性标记。
D 同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子。
7．关于cDNA的最正确的说法是( )。
A 同mRNA互补的单链DNA
B 同mRNA互补的双链DNA
C 以mRNA为模板合成的双链DNA
D 以上都正确
8．关于T4 DNA Ligase，下列说法中哪一项不正确? ( )
A 是最常用的DNA连接酶。
B 不但能连接粘性末端，还能连接齐平末端。
C 不但能连接粘性末端。
D 最适温度37 ℃。
9．下列关于建立cDNA文库的叙述中，( )是错误的?
A 从特定组织或细胞中提取DNA或RNA
B 用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA
C 以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA
D 新合成的双链DNA克隆到载体上，并导入受体细胞
10．用下列方法进行重组体的筛选，只有( )说明外源基因进行了表达。
A Southem blot
B Northem blot
C Western印迹
D 原位菌落杂交
二、填空题（每空1分，共25分）
1．限制性内切核酸酶分为三类，基因工程中应用的是____________ _。
2．为了防止DNA的自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。
3．切口平移(nick translation)法标记DNA探针时应用的酶是_____ ___ __。
4．基因工程中的3种主要类型的载体是_______________、_____________、__________。
5．野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是、和。
6．黏粒(cosmid)是杂合载体。
7．引物在基因工程中至少有4个方面的用途：(1) (2) 、(3) (4) 。
8．Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别：(1)_ __、，(2)________
9．PCR反应中常用的酶是______ _ 。
10．感受态的大肠杆菌细胞在温度为______ _时吸附DNA, _________时摄人外源DNA。
11.用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为。
12. 除具有较低的分子量外，一个理想的质粒载体必需包括______、__________、_______三个部分。
13．转基因植物操作中常用的载体是。
14. pcDNA3.1用于。
三、名词解释（每小题4分，共20分）
1．目的基因：
2．基因工程：
3．载体：
4．Western印迹：
5．核酸分子杂交：
四、简答题（每小题10分，共20分）
1. 基因工程的基本操作程序?
2. 怎样制备目的基因?
《基因工程》评分标准与参考答案
一、选择题：每小题1.5分，共15分；多选不得分。
1d; 2b; 3a; 4b; 5b; 6c; 7c; 8c; 9a; 10c
二、填空题: 每空1分，共25分
1．II类酶。
2．碱性磷酸酶；5’端的磷酸基团
3．DNA聚合酶I。
4．质粒DNA；病毒DNA；质粒和病毒DNA杂合体
5．没有合适的限制性内切核酸酶识别位点；选择标记
6．质粒和噬菌体
7．合成探针；合成cDNA；用于PCR反应；进行序列分析
8．印迹的对象不同：Northern是RNA，Southern是DNA；)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性电泳9．Tag DNA 聚合酶
10．0C；42C
11．染色体变性后来不及复性
12．复制起点；选择标记；克隆位点
13．Ti质粒
14．外源基因导入哺乳动物细胞
三、名词解释（每小题4分，共20分）
1．在基因工程中被操作的DNA序列；又称外源基因（foreign gene/exogenous gene)，主要是指编码蛋白质的结构基因（structural gene）；它们可以从自然界中已有的物种基因组(genome)中分离出来，也可以用人工的方法合成。
2．按照人们的意愿，进行严密的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，有目的地改造生物种性，生产生物活性物质，甚至创造新物种的技术。
3．携带外源基因进入受体细胞的DNA分子。
4．Western印迹是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到固相支持物上；然后用特异性的抗体进行检测；可说明基因是否进行了表达。
5．用标记的探针检测出DNA或RNA同源序列的技术；原理是碱基互补；常用的有Southern blot、Northern blot和原位杂交。四、简答题（20分）
1．目的基因的制备；目的基因与载体连接；目的基因导入受体细胞；目的基因的表达与检测。或者：转、接、切、增、检（加以解释）。
2．直接分离法、构建基因文库分离法、PCR扩增法、人工合成法等。（加以解释）
五、实验与论述题（20分）
①由于基因已被测序，可通过RT-PCR方法克隆该基因；
②也或通过基因文库分离法获得该基因；
③基因可以在大肠杆菌中作为融合蛋白质或分泌蛋白质进行表达。
具体操作如下：
④制备目的基因；⑤连接到T-载体；⑥转化大肠杆菌，提质粒；⑦测序；⑧酶切，回收目的基因，连接到原核表达载体；⑨再转化大肠杆菌，大量培养；⑩分离、纯化和检测表达产物。