基因工程练习题
一、单项选择题
1．在基因工程中，切割载体和含有目的基因的DNA片段中，一般需使用
A.同种限制酶
B.两种限制酶
C.同种连接酶
D.两种连接酶
2．基因工程常用的受体有
①大肠杆菌②枯草杆菌③结核杆菌④动植物细胞
A.①②③④
B.①②③
C.②③④
D.①②④
3．有关基因工程的叙述正确的是
A.限制酶只在获得目的基因时才用
B.重组质粒的形成是在细胞内完成的
C.质粒都可作为载体
D.蛋白质的结构成分为合成目的基因提供资料
4．下列哪项不是基因工程中经常使用的用来运载目的基因的载体
A.细菌质粒
B.噬菌体
C.动植物病毒
D.细菌核区的DNA
5．基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的是
A.人工合成目的基因
B.目的基因与运载体结合
C.将目的基因导入受体细胞
D.目的基因的检测表达
6．不是基因工程方法生产的药物是
A.干扰素
B.白细胞介素
C.青霉素
D.乙肝疫苗
7．在基因工程中用来修饰改造基因的工具是
A.限制酶和连接酶
B.限制酶和水解酶
C.限制酶和运载酶
D.连接酶和运载酶
8．下列哪项叙述不是运载体必须具备的条件
A.具有某些标记基因
B.决定宿主细胞的生存
C.能够在宿主细胞中复制
D.有一个或多个限制酶切点
9．水母发光蛋白由236个氨基酸构成，其中有三种氨基酸构成发光环，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记。在转基因技术中，这种蛋白质的作用
A.促使目的基因导入宿主细胞中
B.促使目的基因在宿主细胞中复制
C.使目的基因容易被检测和选择
D.使目的基因容易成功表达
10．应用基因工程技术诊断疾病的过程中必须使用基因探针才能达到检测疾病的目的。这里的基因探针是指
A.用于检测疾病的医疗器械
B.用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子
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C.合成β—球蛋白的DNA
D.合成苯丙氨酸羟化酶的DNA片段
11．基因工程第一步的一种方法是把所需的基因从供体细胞内分离出来，这要利用限制性内切酶。一种限制性内切酶能识别DNA子中的GAATTC顺序，切点在G和A之间，这是应用了酶的
A．高效性 B.专一性 C．多样性
D.催化活性受外界条件影响
12．上海医学遗传研究所成功培育出第一头携带白蛋白的转基因牛，还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法，使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高30多倍，转基因动物是指
A.提供基因的动物
B.基因组中增加外源基因的动物
C.能产生白蛋白的动物
D.能表达基因信息的动物
13．作为基因的运输工具——运载体，必须具备的条件之一及理由是
A.能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因
B.具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达
C.具有某些标记基因，以使目的基因能够与其结合
D.对宿主细胞无伤害，以便于重组DNA的鉴定和选择
14．下列黏性末端属于同一种限制酶切割而成的是：
A．①② B．①③ C．①④ D．②③
15．下列平末端属于同一种限制酶切割而成的是
②④②③ D.C.A.①③ B.①④
．下列有关基因工程的叙述中，不正确的是16 连接酶将黏性末端的碱基对连接起来A.DNA 分子基因探针是指用放射性同位素或荧光分子等标记的DNAB.
C.基因治疗主要是对有基因缺陷的细胞进行替换
D.蛋白质中氨基酸序列可为合成目的基因提供资料技术的条件的是．下列属于17PCR 片段DNA ①单链的脱氧核苷酸序列引物②目的基因所在的聚合酶DNA DNA ③脱氧核苷酸④核糖核苷酸⑤连接酶⑥10
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⑦DNA限制性内切酶
A.①②③⑤
B.①②③⑥
C.①②③⑤⑦
D.①②④⑤⑦
18．下列有关PCR技术的叙述正确的是
A.作为模板的DNA序列必须不断的加进每一次的扩增当中
B.作为引物的脱氧核苷酸序列必须不断的加进每一次的扩增当中
C.反应需要的DNA聚合酶必须不断的加进反应当中
D.反应需要的DNA连接酶必须不断的加进反应当中
19．蛋白质工程中，直接需要进行操作的对象是
A.氨基酸结构
B.蛋白质的空间结构
C.肽链结构
D.基因结构
20．有关基因与酶关系的叙述正确的是
A.每个基因都控制合成一种酶
B.酶的遗传信息编码在内含子的碱基序列中
C.基因的转录、翻译都需要酶
D.同一生物体不同细胞的基因和酶是相同的
21．某科学家从细菌中分离出耐高温淀粉酶（Amy）基因a,通过基因工程的方法，将a转到马铃薯植株中，经检测发现Amy在成熟块茎细胞中存在。这一过程涉及A.目的基因进入受体细胞后，可随着马铃薯的DNA分子的复制而复制，传给子代
细胞并表达
B.基因a导入成功后，将抑制细胞原有的新陈代谢，开辟新的代谢途径
C.细菌的DNA分子较小，可直接作为目的基因，导入受体中不需要整合到马铃薯的DNA分子中
D.目的基因来自细菌，可以不需要运载体直接导入受体细胞
22．下列关于质粒的叙述，正确的是
A.质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器
B.质粒是细菌细胞质中能自主复制的小型环状双链DNA分子
C.质粒只有在侵入宿主细胞后在宿主细胞内复制
D.细菌质粒的复制过程一定是在宿主细胞外独立进行
23．关于基因工程的叙述，正确的是
A.基因工程经常以抗菌素抗性基因为目的基因
B.细菌质粒是基因工程常用的运载体
C.通常用一种限制性核酸内切酶处理含目的基因的DNA，用另一种限制酶处理运载体DNA
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D.为育成抗除草剂的农作物新品种导入的抗除草剂的基因只能以受精卵为受体24．下列育种没有使用生物工程技术的是获取高产青霉素的菌 B.获得能分泌含抗体的乳汁的母牛A. 生长较快的鲤鲫鱼 D.利用工程菌生产的人胰岛素C.片段，注射到羊的受精卵中，该受精25．科学家将含人的α—胰蛋白酶基因的DNA
卵发育的羊能分泌含α一抗胰蛋白质的奶。这一过程没有涉及RNA A.DNA以其一条链为模板合成按照碱基互补配对原则自我复制B DNA
C. RNA以自身为模板自我复制 RNA密码子的排列顺序合成蛋白质
D. 按照
二、简答题二、简答题大肠杆菌能1979年，科学家将动物体内的26．胰腺菌够合成胰岛素的基因与大肠杆杆分子重组，并且在大肠的DNA答菌体内表达成功。请根据图回质粒问题：RNA
原胰岛素信使从取的是采（1）此图表示②反转录酶的____________中获取目的基因过程。 DNA
①以①DNA是（2）图中为模板，______________③链单___________形成④链在酶的作用下合成双DNA，基DNA，从而获得了所需要的因⑤在图中②代表的是________，（3）末端。______DNA）切出______它的作用下将质粒（）图中③代表___________________DNA，含______________________（4。
（5）图中④表示将__________________。⑤表示____________DNA随大肠杆菌
的繁殖而进行_____________。
27．干扰素是治疗癌症的重要药物，它必须从血中提取，每升人血只能提取0.5
μg，
所以价格昂贵。现在美国加利福尼亚州的基因公司用如下图的方式生产干扰素。
试分析原理和优点。
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的方法，）从人的淋巴细胞中获取出干扰素基因，一般可用1 _______
（此基因在基因工程中称为。，其作用部位是磷酸二酯2 （）此基因与细菌的质粒相结合要依靠。键，然后将目的基因移植到酵
母菌体内，酵母菌在基因工程中叫
（3）科学家在培养转基因植物时，常用中的质粒做运载体。质
粒是基因工程最常用的运载体，它具备运载体的哪些条件？
①；②；
③。④
。）细菌质粒能与干扰素基因能够拼接其原（4。人的干扰素因是
___________________说基因在酵母菌体内合成了人的干扰素， __________。明
了．科学家将人的生长素基因与大肠杆菌的28并成功地在大肠杆菌DNA分子进
行重组，中得以表达。过程如右图据图回答：分子DNA(1)人的基因之所以能与
大肠杆菌的进行重组，原因是
_______________________________________
取是采的过程①表示(2)的方法来获取目的基因。其过
程可表示。为：___________________过程用人工方法，使体外重组的(3)(3)
图中细胞的途径。一___ DNA分子转移到受体细胞内，主要是借鉴细菌或病
毒_____________________处理，使细胞处于能般将受体大肠杆菌用
细胞，再将表达载体溶于缓冲液的生理状态，这种细胞称为_______________
___________混合，在一定的温度下完成转化。中与，理由 B(4)检测大
肠杆菌是否导入了质粒或重组质粒，可采用的方法是。是：
或重组质粒的大肠杆菌，放在含有四环素的培养A(5)如果把已经导入了普通质
粒。，原因是：基上培养，发生的现象是
增加粮食产量，黄河分）为扩大可耕地面积，29（8
三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。分子所用的DNA（1）获得耐盐基因后，构建重组连DNA处，限制性内切酶作用于图中的
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”）处。（填“a”或“b 接酶作用于
法。将重组（2）DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和
作为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，（3）既要用放射性同位素标记的方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。探针进行分子杂交检测，又要用
DNA技术为核心的基因工程正在改变着人类的生活。请回答下列问题。30、以重组。和1）获得目的基因的方法通常包括
（。和）切割和连接DNA分子所使用的酶分别是
（2，后者的形状（3）运送目的基因进入受体细胞的载体一般选用病毒或
。成
，所以在转化后通常需要进 DNA（4）由于重组分子成功导入受体细胞的频率操作。行）将人胰岛素基因分别导入大肠杆菌与酵母菌，从两者中生产的胰岛素在功能5（序列上是相同的。和
]
现代生物科技专题生物-31．（8分）[继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答：。
（1）将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用方法是
因入中，原因，）（2进行基因转移时通常要将外源基转。是技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组。（3）通常采用
细胞中特异表（4）在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的达。BamHIEcoRI32、图为某种质粒表到载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶、RR为终为四环素抗性基因，P启动子，的酶切位点，ampT为青霉素抗性基因，tct在内的多种BamHI已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、ori止子，为复制原点。酶的酶切位点。
据图回答：体DNA与质粒该表达载（1）将含有目的基因的进分别用EcoRI
酶切，酶切产物用ＤＮＡ连接酶的DNA片段之间连接形成其中由两个行连接后，、、产物有
组若要从这些连接产物中分离出重。三种
质粒，需要对这些连接产物进行。
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种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将（32）用上述这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产；物是
）在上述实验中，为了防止目的基因和基因和质粒表达载体在酶切后产生的末3（。端发生任意连接，酶切时应选用的酶是
33．基因工程又叫基因拼接技术。的工具是限制酶，它能识别某一特定核苷酸序列，使两在该技术中，切割DNA (1)片段末端有断开。限制酶切割产生的DNA 个核苷酸之间的
。两种形式，分别是、
分可的来源不同酶缝合针”是连接，根据酶子因 (2)基工程中常用“分、为
两类，其中前者只可以连接，后者既可以连接
。也可以连接
34．生物学家通过基因工程培育出了能够通过乳房生物反应器生产人的血清蛋白。，“分子手术刀” _ _ （1），）（2 “分子缝合针”
“分子运输车”。 3（）
结____________获取目的基因；目的基因与（4）操作步骤：从人的____________和终止子。然___________合构建基因表达载体；在基因表达载体中还应插入，通过发育形成的牛体细胞含人的后把基因表达载体导入牛的____________，证明基，成熟的牛产的的奶中含有
____________________________________ 因操作成功。
___________ ）人的基因在牛体内能表达,说明人和牛5
（）常作为标记基分）在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（（35．14kan因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那
霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。抗虫基因A
B
重组质粒土壤农杆菌含重组质粒土壤农杆菌构建导入培养选择kan含质粒侵
染 D C 转基因抗虫植株愈伤组织再生植株离体棉花叶片组织分化检测诱导选
择10
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请据图回答：
（1）A过程需要的酶有_______________________________________________。（2）B过程及其结果体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件是
_____________________________________________________________________ __。
（3）C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入
___________。
（4）如果利用DNA分子杂交原理对再生植株进行检测，D过程应该用
_______________________________________________________________作为探针。
（5）科学家发现转基因植株的卡那霉素抗性基因的传递符合孟德尔遗传规律。
①将转基因植株与________________________杂交，其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为1：1。
②若该转基因植株自交，则其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为________。
③若将该转基因植株的花药在卡那霉素培养基上作离体培养，则获得的再生植株群体中抗卡那霉素型植株占____________%。
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基因工程 一名词解释 DNA，1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外 来 从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护 自身的 DNA不被讲解。限制酶和甲基转移酶组成限制与修饰系统。 2、各种限制与修饰系统的比较 Ⅱ型Ⅰ型Ⅲ型 识别位点4~6bp，大多为回文序列二分非对称5~7bp 非对称 切割位点在识别位点中或靠近识别位点无特异性，至少在识别位点外100bp 识别位点下游 24~26bp 简答 1. 何谓 Star activity？简述Star activity的影响因素及克服方法？ 答：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特征称为星星活性。 pH 引起星星活性的的因素：①高甘油浓度（>5%）；②酶过量（ >100U/μl ）；③低离子强度（ <25mmol/L）；④高(> ；⑤有机溶剂如DMSO （二甲基亚砜）、乙醇、乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺等；⑥用其它二价阳离子 星星活性的抑制措施：①减少酶的用量，避免过量酶切，减少甘油浓度；②保证反应体系中无有机溶剂或乙醇；③提高离子强度到100 ～ 150mM（在不抑制酶活性的前提下）；④降低反应pH至；⑤使用Mg2+作为二价阳离子。 2. 试回答影响限制性内切核酸酶切割效率的因素？（影响酶活性的因素？） 答：外因：反应条件、底物纯度（是否有杂质、是否有盐离子和苯酚的污染）、何时加酶、操作是否恰当，反应体系的选择、反应时间的长短 内因：星星活性、底物甲基化、底物的构象 3、 DNA末端长度对酶切割的影响 答：限制酶切割 DNA 时，对识别序列两端的非识别序列有长度要求，也就是说在识别序列两端必须要有一定数量的 核苷酸，否则限制酶将难以发挥切割活性。在设计PCR引物时，如果要在末端引入一个酶切位点，为保证能够顺利切 割扩增的 PCR产物，应在设计的引物末端加上能够满足要求的碱基数目。一般需加 3 ～4 个碱基对。 4、何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？ 答：将外源 DNA 或目的基因携带入宿主细胞的工具称为载体。载体应具备：①在宿主细胞内必须能够自主复制（具 备复制原点）；②必须具备合适的酶切位点，供外源DNA 片段插入，同时不影响其复制；③有一定的选择标记，用于 筛选；④其它：有一定的拷贝数，便于制备。 5 抗性基因（ Resistant gene）是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理？ 答：氨苄青霉素抗性基因（ ampr）、四环素抗性基因（tetr ）、氯霉素抗性基因（ Cmr）、卡那霉素和新霉素抗性基因（ kanr , neor ）以及琥珀突变抑制基因supF 。 ⑴青霉素抑制细胞壁肽聚糖的合成，与有关的酶结合，抑制转肽反应并抑制其活性。氨苄青霉素抗性Ampr 编码一个酶，可分泌进入细胞的周质区，并催化β - 内酰胺环水解，从而解除氨苄青霉素的毒性。 ⑵四环素与核糖体 30S 亚基的一种蛋白质结合，从而抑制核糖体的转位。 Tetr 编码一个由 399 个氨基酸组成的膜 结合蛋白，可阻止四环素进入细胞。 6. 何为α - 互补？如何利用α - 互补来筛选插入了外源DNA 的重组质粒？ 答：α - 互补指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β - 半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现互补。α - 互补是基于在两个不同的缺陷β－半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。实现α- 互补主要有两部分组成：LacZ △ M15 ，放在 F 质粒或染色体上，随宿主传代；LacZ' ，放在载体上，作为筛选标记，当在 LacZ' 中插入一个片断后，将不可避免地导致产生无α- 互补能力的β－半乳糖苷酶片断。在诱导物IPTG 和底物 X-gal （同时可作为生色剂）的作用下，含重组质粒的菌落不能产生有活性的β－半乳糖苷酶，不能分解 X-gal ，呈现白色，而含非重组质粒的菌落则呈现兰色。以此达到筛选的目的。 7、试简述λ噬菌体的裂解生长状态Lytic growth 和溶原状态 Lysogenic state 两种循环的分化及其调节过程？ 答：裂解生长状态是λ噬菌体在宿主中大量复制并组装成子代λ噬菌体颗粒，导致宿主细胞裂 解。溶原状态为λ噬菌体基因组 DNA 通过位点专一性重组整合到宿主染色体DNA 中随宿主的繁殖传到子代细胞。调节过程：由感染复数
第二章习题 一、单选题 1.在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（ B ） A．I类限制酶 B. II类限制酶 C. III类限制酶 D.核酸内切酶 E. RNAase 2.下列关于同裂酶的叙述错误的是( B ) A. 是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。 B. 它们的识别序列完全相同。 C. 它们的切割方式可以相同，也可以不同。 D. 有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。 E. 两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。 3. 多数限制酶消化DNA的最佳温度是（ A ） A. 37℃ B.30℃ C.25℃ D.16℃ E.33℃ 4. 下列关于限制酶的叙述错误的是( B ) A. I类限制酶反应需要 Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸。 B. II类限制酶反应需要Mg2+、ATP。 C. III类限制酶反应需要Mg2+、ATP，S-腺苷蛋氨酸能促进反应，但不是绝对需要。 D. I、III类限制酶对DNA有切割和甲基化活性，II类限制酶对DNA只有切割活性而无甲基化活性。 E. II类限制酶要求严格的识别序列和切割点，具有高度精确性。 5. 如果一个限制酶识别长度为6bp ,则其在DNA上识别6bp的切割概率为( D ) A. 1/44 B. 1/66 C. 1/64 D.1/46 E. 1/106 6. 多数II类限制酶反应最适PH是 ( C ) A. PH:2-4 B. PH:4-6 C. PH:6-8 D. PH:8-10 E. PH:4-10 7. 下列关于限制酶反应的说法错误的是 ( D ) A. 限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。 B. 许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。 C. 有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。 D. 限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。 E. BSA对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的BSA。 8. II类限制酶反应中必须的阳离子是（ C ）
2. 第一个作为重组DNA载体的质粒是() (a) pBR322 (b)ColEI (c)pSCI01 (d)pUCI8 3. 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有()不太恰当 (a) 由作用于同一DNA序列的两种酶构成 (b) 这一系统中的核酸酶都是U类限制性内切核酸酶 (c) 这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 (d) 不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统 4. H型限制性内切核酸酶：() (a) 有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列 (b) 仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 (c) 限制性识别非甲基化的核苷酸序列(d)有外切核酸酶和甲基化酶活性(e) 仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 5?下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?() (a) 限制酶是外切酶而不是内切酶 (b) 限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割 (c) 同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的 (d) 一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端 (e) 一些限制酶在识别位点内相同的位臵切割双链DNA，产生平末端
6 .第一个被分离的U类酶是：() (a) EcoK (b)Hind 川(c)Hind U(d)EcoB 7?在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?() (a) 反应时间(b)酶量(c)反应体积(d)酶反应的温度 8. 在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2+离子?() (a) EDTA (b)柠檬酸钠(c)SDS (d)EGTA 9. 在下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性?() (a) S1单链核酸酶(b)末端转移酶(c)碱性磷酸酶(d)Bal 31核酸酶 10 .限制性内切核酸酶可以特异性地识别：() (a)双链DNA的特定碱基对(b)双链DNA的特定碱基序列 (c)特定的三联密码(d)以上都正确 11.下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项的是()。 (a) Sau3A I (b)E . coRI (c)hind III (d)Sau 3A1 12 .限制性内切核酸酶的星号活性是指：() (a)在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。(b)活性大大提高 (c)切割速度大大加快(d)识别序列与原来的完全不同 13 .下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?() (a)甘油含量过高(b)反应体系中含有有机溶剂 (c)含有非Mg2+的二价阳离子(d)酶切反应时酶浓度过低 14. 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有()不太恰当
专题1 《基因工程》单元测试题 一、单选题(每小题只有一个正确答案) 1、在基因工程中用来修饰改造生物基因得工具就是( ) A．限制酶与DNA连接酶 B．限制酶与水解酶 C．限制酶与载体 D． DNA连接酶与载体 2、下列说法正确得就是( ) A．质粒就是广泛存在于细菌细胞中得一种颗粒状细胞器 B．用适当得化学物质处理受体细菌表面，将重组DNA导入受体细菌 C．质粒就是基因工程中惟一用作运载目得基因得载体 D．利用载体在宿主细胞内对目得基因进行大量复制得过程不能称为“克隆” 3、某研究小组为了研制预防禽流感病毒得疫苗，开展了前期研究工作。其简要得操作流程如下 图。下列有关叙述错误得就是( ) A．步骤①所代表得过程就是反转录 B．步骤②需使用限制性核酸内切酶与DNA连接酶 C．步骤③可用CaCl处理大肠杆菌，使其从感受态恢复到常态2D．检验Q蛋白得免疫反应特 性，可用Q蛋白与患禽流感康复得鸡得血清进行抗原—抗体特异性反应试验 ) ( 、与“限制性内切酶”作用部位完全相同得酶就是4． A．反转录酶 B． RNA聚合酶 C． DNA连接酶 D．解旋酶 5、转基因抗虫棉得研制过程中，为了检测抗虫基因就是否成功导入，最简捷有效得方法就是( ) A．用DNA探针检测受体细胞中得目得基因就是否存在 B．用DNA探针检测受体细胞中得目得基因就是否转录出相应得mRNA C．直接将培育出得棉株叶片饲喂原本得棉花害虫 D．检测标记基因就是否正常地表达出来 6、下列哪项不就是表达载体所必需得组成( ) A．目得基因 B．启动子 C．终止子 D．抗青霉素基因 7、下列说法正确得就是( ) A．限制性核酸内切酶得识别序列就是GAATTC，只能在G与A之间切断DNA
基因工程测试题 一、选择题： 1.人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成。通过转基因技术可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是( ) A.大肠杆菌 B.酵母菌 C.肺炎双球菌 D.乳酸菌 2.下列有关基因工程的叙述，正确的是( ) A．DNA连接酶将碱基对之间的氢键连接起来 B．目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发生基因突变 C．限制性核酸内切酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越大 D．常用的载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等 3.我国科学家运用基因工程技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞并成功表达，培育出了抗虫棉。下列叙述不正确的是( ) A.抗虫基因的提取和运输需要专用的工具酶和载体 B.重组DNA分子中替换一个碱基对，不一定导致毒蛋白的毒性丧失 C.抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递到近缘作物，从而造成基因污染 D.转基因抗虫棉是否具有抗虫特性是通过检测棉花对抗生素抗性来确定的 4.如图是获得抗虫棉的技术流程示意图。卡那霉素抗性基因(kan r)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养
基上生长。下列叙述正确的是( ) A.构建重组质粒过程中需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶 B.愈伤组织的分化产生了不同基因型的植株 C.卡那霉素抗性基因(kan r)中有该过程所利用的限制性核酸内切酶 的识别位点 D.抗虫棉有性生殖后代能保持抗虫性状的稳定遗传 5.上海医学研究所成功培育出第一头携带人白蛋白基因的转基因牛。他们还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法，使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高30多倍，以下与此有关的叙述中正确的是( ) A.“转基因动物”是指体细胞中出现了新基因的动物 B.“提高基因表达水平”是指设法使牛的乳腺细胞中含有更多的人白蛋白基因 C.只有从转基因牛乳汁中才能获取人白蛋白，是因为人白蛋白基因只在牛乳腺细胞中含有 D.转基因牛的肌肉细胞中也有人白蛋白基因，但不发生转录、翻译，不能合成人白蛋白 6.下列关于蛋白质工程和基因工程的比较，不合理的是( )
2021年高三生物二轮复习专题练习4含答案解 析：基因工程 一、选择题 1.下列关于基因工程应用的叙述，正确的是( ) A．基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因 B．基因诊断的基本原理是DNA分子杂交 C．一种基因探针能检测水体中的各种病毒 D．利用基因工程生产乙肝疫苗时，目的基因存在于人体B淋巴细胞的DNA中 2.1970年，特明和巴尔德摩证实了RNA病毒能依赖RNA 合成DNA的过程，并发现了催化此过程的酶。下面为形成cDNA 的过程和PCR扩增过程示意图。请根据图解分析，下列说法不．正确的是( ) A．催化①过程的酶是逆转录酶 B．从图示可以看出要将碱基对之间的氢键断开可以用核酸酶H和高温处理 C．从图中信息分析可知，②⑤过程为DNA复制，催化⑤过程的酶能耐高温 D．如果RNA单链中有碱基100个，其中A占25%，U占15%，则通过该过程合成的一个双链DNA片段中有胞嘧啶30
个 3.在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是( ) A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸 B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C．将重组DNA分子导入烟草原生质体 D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞 4.如图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。判断下列说法正确的是( ) A．将重组质粒导入细菌B常用的方法是显微注射法 B．将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，能生长的只是导入了重组质粒的细菌 C．将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒A的细菌 D．目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长 5.在基因工程操作中限制性核酸内切酶是不可缺少的工具酶。下列有关限制性核酸内切酶的叙述错误的是( )
xxxXXXXX 学校XXXX 年学年度第二学期第二次月考 XXX 年级xx 班级 姓名：_______________班级：_______________考号：_______________ 一、选择题 （每空？ 分，共？ 分） 1、下列有关基因工程和蛋白质工程的叙述，正确的是 A ．蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程是相同的 B ．基因工程合成的是天然存在的蛋白质，蛋白质工程合成的可以不是天然存在的蛋白质 C ．基因工程是分子水平操作，蛋白质工程是细胞水平（或性状水平）操作 D ．基因工程完全不同于蛋白质工程 2、PCR 是一种体外迅速扩增DNA 片段的技术，下列有关PCR 过程的叙述，不正确的是 A ．变性过程中破坏的是DNA 分子内碱基对之间的氢键 B ．复性过程中引物与DNA 模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成 C ．延伸过程中需要DNA 聚合酶、ATP 、四种核糖核苷酸 D ．PCR 与细胞内 DNA 复制相比所需要酶的最适温度较高 3、35．采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出了转基因羊。但是人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。下列有关叙述，正确的是（ ） A ．人体细胞中凝血因子基因的碱基对数目，小于凝血因子氨基酸数目的3倍 B ．可用显微注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA 分子导入羊的受精卵 C ．在该转基因羊中，人凝血因子基因只存在于乳腺细胞，而不存在于其他体细胞中 D ．人凝血因子基因开始转录后，DNA 连接酶以DNA 分子的一条链为模板合成mRNA
4、ch1L基因是蓝细菌拟核DNA上控制叶绿素合成的基因．为研究该基因对叶绿素合成的控制，需要构建该种生物缺失ch1L基因的变异株细胞．技术路线如图所示，对此描述错误的是（） 5、下图表示基因工程中目的基因的获取示意图，不正确的是： A、同种生物的基因组文库大于cDNA文库 B、③表示PCR技术，用来扩增目的基因 C、从基因文库中要得到所需目的基因，可根据目的基因的有关信息来获取 D、只要基因的核苷酸序列已知，就只能通过人工合成的方法获取 6、图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序 列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为：C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。下列分析中正确的是：
基因工程 学校: ___________ 姓名： ___________ 班级： __________ 考号： ____________ 一、选择题 1 .下列关于限制酶的说法不正确的是 （ ） A. 限制酶广泛存在于各种生物中，微生物中很常分布 B. 自然界中限制酶的天然作用是用来提取目的基因 C. 不同的限制酶切割 DNA 勺切点不同 D. —种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 【答案】B 【解析】 试题分析：限制酶广泛存在于各种生物中，其中微生物中分布很常见，所以 A 正确；自 然界中限制酶的天然作用是用来对自身生物细胞的保护， 所以B 错误；限制酶具有特异 性，所以C 正确；因限制酶具有特异性，所以 D 正确。 考点：本题考查基因工程限制酶的内容，意在考查考生对所学知识的理解。 2 .科学家将控制某药物蛋白合成的基因转移到白色来亨鸡胚胎细胞的 DNA 中，发育后 的雌鸡就能产出含该药物蛋白的鸡蛋，在每一只鸡蛋的蛋清中都含有大量的药物蛋白； 出的鸡，仍能产出 含该药物蛋白的鸡蛋。据此分析不 B .这种变异属于可遗传的变异 D .该种变异属于定向变异 【答案】C 【解析】 试题分析：根据题干信息分析，将目的基因（控制某药物蛋白合成的基因）导入了来亨 鸡胚胎细胞的 DNA 中,发育成的鸡产生了该药物蛋白的鸡蛋， 说明目的基因在这些鸡中 表达了，A 正确；这些含该药物蛋白的鸡蛋孵 出的鸡，仍能产出 含该药物蛋白的鸡蛋， 说明这 种变异属于可遗传的变异， B 正确；该技术为第一代基因工程技术，并没有利用 蛋白质工程对控制蛋白质合成的基因的结构进行改造， C 错误；基因工程的原理是基因 重组，且是对生物性状的定向改造，即这种变异是定向的， D 正确。 考点：基因工程 3 .以SARS 病毒核衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体，下列正确的是（ ） A. 用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体 B. 体外培养单个浆 B 细胞可以获得大量针对 SARS 病毒的单克隆抗体 C. 将等量浆B 细胞和骨髓瘤细胞混合，经 PEG 诱导融合后的细胞均为杂交瘤细胞 D. 用该单克隆抗体与 SARS 病毒核衣壳蛋白特异性结合的方法可诊断出该病毒感染者 【答案】D 【解析】 试题分析：单 克隆抗体是浆细胞与骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞分泌的， A 错误；单独的效应B 淋巴细胞有产生抗体的能力，但没有无限增殖的本领， 因此在体外培养的情况下是不可能得到大量的单克隆抗体的，B 错误；将等 量浆细胞和骨髓瘤细胞混合，经PEG 诱导融合后的细胞有浆细胞自身融合细 胞、骨髓瘤细胞自身融合细胞和杂交瘤细胞三种，C 错误；单克隆抗体具有 特异性强、灵敏度高的特点，因此利用该单克隆抗体与SARS 病毒核衣壳蛋 白特异性结合的方法可诊断出病毒感染者，D 正确。 考点：本题主要考查单克隆抗体制备的相关知识，该内容是动物细胞工程中的重 点内容，考生要 而且这些含该药物蛋白的鸡蛋孵 正确的一项是（ ） A .这些鸡是基因工程的产物 C.该过程属于蛋白质工程技术
5 高二生物《基因工程和细胞工程》测试题姓名班级 （时间：90分钟分数：100分） 一．选择题（本大题包括25题，每题2分，共50分。每题只有一个选项符合题意。） 1．以下说法正确的是（） A.所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B．质粒是基因工程中惟一的运载体 C．运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接D．质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器 2．植物体细胞杂交与动物细胞工程中所用技术与原理不．相符的是（） A．纤维素酶、果胶酶处理和胰蛋白酶处理——酶的专一性 B．植物组织培养和动物细胞培养——细胞的全能性 C．植物体细胞杂交和动物细胞融合——生物膜的流动性 D．紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养——细胞分裂 3．有关基因工程的叙述正确的是（） A.限制性内切酶只在获得目的基因时才用 B.重组质粒的形成在细胞内完成 C.质粒都可作运载体 D.蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 4．能克服远缘杂交障碍培育农作物新品种的技术是（） A.基因工程 B.组织培养 C.诱变育种 D.杂交育种 5．下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是( ) A．培养人的效应T细胞能产生单克隆抗体 B．培养人的B细胞能够无限地增殖 C．人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株 D．用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞 6．PCR技术扩增DNA,需要的条件是( ) ①目的基因②引物③四种脱氧核苷酸 ④DNA聚合酶等⑤mRNA⑥核糖体 A、①②③④ B、②③④⑤ C、①③④⑤ D、①②③⑥ 7．以下对DNA的描述，错误的是（） A.人的正常T淋巴细胞中含有人体全部遗传信息 B.同种生物个体间DNA完全相同 C.DNA的基本功能是遗传信息的复制与表达 D.一个DNA分子可以控制多个性状 8. 蛋白质工程中直接需要进行操作的对象是（） A.氨基酸结构 B.蛋白质空间结构 C.肽链结构 D.基因结构 9．细胞工程的发展所依赖的理论基础是（） A.DNA双螺旋结构模型的建立 B.遗传密码的确立及其通用性的发现 C.生物体细胞全能性的证明 D.遗传信息传递的“中心法则”的发现 10．下列不是基因工程中的目的基因的检测手段的是：（） A.分子杂交技术 B.抗原—抗体杂交 C.抗虫或抗病的接种 D.基因枪法 11．在以下4种细胞工程技术中，培育出的新个体中，体内遗传物质均来自一个亲本的是（） A.植物组织培养 B. 单克隆抗体 C. 植物体细胞杂交 D.细胞核移植 12．动物细胞融合与植物细胞融合相比特有的是（） A.基本原理相同 B.诱导融合的方法类 C.原生质体融合 D.可用灭活的病毒作诱导剂 13．下列哪一项属于克隆（） A．将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中 B．将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内 C．将鼠骨髓细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞
基因工程练习题 1、在基因工程中使用的限制性核酸内切酶，其作用是( ) A、将目的基因从染色体上切割出来 B、识别并切割特定的DNA核苷酸序列 C、将目的基因与运载体结合 D、将目的基因导入受体细胞 2、基因工程中常用细菌等原核生物作受体细胞的原因不包括( ) A、繁殖速度快 B、遗传物质相对较少 C、多为单细胞，操作简便 D、DNA为单链，变异少 3、基因工程是DNA分子水平的操作，下列有关基因工程的叙述中，错误的是( ) A、限制酶只用于切割获取目的基因 B、载体与目的基因可以用同一种限制酶处理 C、基因工程所用的工具酶是限制酶，DNA连接酶 D、带有目的基因的载体是否进入受体细胞需检测 4、运用现代生物技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因整合到棉花细胞中，为检测实验是否成功，最方便的方法是检测棉花植株是否有( ) A、抗虫基因 B、抗虫基因产物 C、新的细胞核 D、相应性状 5、转基因动物转基因时的受体细胞是( ) A、受精卵 B、精细胞 C、卵细胞 D、体细胞 6、基因工程中常见的载体是( ) A、质体 B、染色体 C、质粒 D、线粒体 7、水母发光蛋白由236个氨基酸构成，其中Asp、Gly、Ser构成发光环，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是( ) A、促使目的基因导入宿主细胞中B、促使目的基因在宿主细胞中复制 C、使目的基因容易被检测出来 D、使目的基因容易成功表达 8、运用现代生物技术的育种方法，将抗菜青虫的Bt基因转移到优质油菜中，培育出转基因抗虫的油菜品种，这一品种在生长过程中能产生特异的杀虫蛋白质，对菜青虫有显著抗性，能大大减轻菜青虫对油菜的危害，提高油菜产量，减少农药使用，据以上信息，下列叙述正确的是( ) A、Bt基因的化学成分是蛋白质 B、Bt基因中有菜青虫的遗传物质 C、转基因抗虫油菜能产生杀虫蛋白是由于具有Bt基因 D、转基因抗虫油菜产生的杀虫蛋白是无机物 9、人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成，通过转基因技术，可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是( ) A、大肠杆菌 B、酵母菌 C、T 噬菌体 D、质粒DNA 4 10、不属于质粒被选为基因运载体的理由是（） A．能复制 B.有多个限制酶切点C．具有标记基因D．它是环状DNA
基因工程试题及答案 【篇一：基因工程题库以及答案】 因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2．基因工程的两个基本特点是： (1)____________， (2)___________。 3．基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和 __________。 4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的___________。 5．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_______，第二、三两个字母取自_________，第四个字母则用___________表示。 6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。 7．第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。 8．限制性内切核酸酶bsuri和haeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。 9．dna聚合酶i的klenow大片段是用_____________切割dna聚合酶i得到的分子量为76kda的大片段，具有两种酶活性： (1)____________； (2)________________的活性。 10．为了防止dna的自身环化，可用_____________去双链 dna__________________。 11．egta是____________离子螯合剂。 12．测序酶是修饰了的t7 dna聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。 13．切口移位(nick translation)法标记dna的基本原理在于利用 _________的_______和______的作用。 14．欲将某一具有突出单链末端的双链dna分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。 15．反转录酶除了催化dna的合成外，还具有____________的作用，可以将dna- rna杂种双链中的___________水解掉。
基因工程 学校: _________ 姓名： ___________ 班级：____________ 考号：____________ 一、选择题 1．下列关于基因表达载体构建的相关叙述中，不正确的是（） A. 需要限制酶和DNA1接酶 B. 抗生素抗性基因可作为标记基因 C. 在细胞外进行 D. 启动子位于目的基因的首端，是启动翻译的一段DNA 【答案】D 【解析】构建基因表达载体过程中需要用限制酶切割目的基因和载体，最后用DNA连接酶把目的基因和载体连接起来，A正确；抗生素抗性基因可以用作标记基因，B正确； 基因表达载体的构建过程一般在体外进行，C正确；启动子位于目的基因的首端，是启 动转录的一段DNA D错误。 2. 不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A. 能复制 B. 有多个限制酶切点 C. 具有标记基因 D. 它是环状DNA 【答案】D 【解析】 试题分析：质粒作为运载体理由是在宿主细胞内能稳定复制增殖, 具有标记基因, 具有多个限制酶切点，是环状DNA分子但不是作为运载体的条件，D项错误。 考点：本题考查基因工程中运载体的作用。 3. 上下列对酶、ATP激素、神经递质、载体、抗体等物质的叙述，正确的有 ①控制酶合成的直接模板是mRNA ②人在剧烈运动时，肌细胞产生ATP的速率增大 ③激素具有微量、高效、可重复使用的特点 ④神经递质发挥作用时，突触后膜电位会由外正内负变为外负内正 ⑤细胞膜上的载体与基因工程的载体的本质相同 ⑥杭体合成和分泌的过程，体现了细胞器之间的分工和协作 A. —项 B. 两项 C. 三项 D. 四项 【答案】B 【解析】酶的本质是蛋白质或RNA而控制RNA合成的模板应为DNA单链，①错误。人剧烈运动时需要消耗大量能量，此时肌细胞产生ATP的速率将增大，② 正确。激素发挥作用后将会被灭活，③错误。神经递质有兴奋性递质和抑制性递质，其中只有兴奋性递质才能使突触后膜的电位由外正内负变为外负内正，④错误。细胞膜上的载体的本质为蛋白质，而基因工程的载体的本质为DNA⑤ 错误。抗体是分泌蛋白，其合成和分泌过程需要多种细胞器参与，体现了细胞器之间的分工和合作，⑥正确。 4. 科学家将B干扰素基因进行定点突变后通过载体导入大肠杆菌表达，使干扰素第17 位的半胱氨酸改变成丝氨酸，结果大大提高了储存稳定性，该生物技术 为（） A. 基因工程 B. 蛋白质工程
1.简述本学期从基因组DNA提取到重组质粒鉴定的实验流程？ 答：①基因组DNA的提取；②PCR扩增目的基因；③凝胶电泳分离纯化PCR扩增的DNA片段以及DNA的体外连接；④重组质粒的转化及转化子的筛选；⑤重组质粒的抽提；⑥重组质粒的酶切鉴定。 2.如何正确使用微量移液器？ 答：①选取合适量程的移液器；②根据取液量设定量程；③安装（吸液）枪头；④按至第一档，将枪头垂直伸入液面下适当位置吸液；⑤按至第二档将液体打入容器；⑥弃掉枪头；⑦将量程调至最大，放回原处。 3.在琼脂糖凝胶电泳点样时，DNA通常和什么试剂混匀，其主要成分和作用是什么？ 答：loading Buffer。主要成分为溴酚蓝，二甲苯青和甘油。 溴酚蓝和二甲苯青起指示作用；甘油加大样品密度，从而沉降于点样孔中，以免浮出。 4.简述制作1%的琼脂糖凝胶电泳的操作步骤。 答：①取0.5g琼脂糖置于锥形瓶，量取50ml 1×TBE溶液于瓶中，微波炉加热至琼脂糖溶解；②将移胶板放入胶室中，选取合适梳子垂直安插在移胶板上方，待琼脂降温至55℃下后，缓慢导入该胶室里；③量取合适量1×TBE溶液导入洗净的电泳槽，并正确插好电泳线； ④等凝胶凝固后，将梳子垂直拔出；⑤点样；⑥轻放移胶板至电泳槽的合适位置；⑦打开电泳仪的开关，调好参数，开始电泳；⑧一定时间后，停止电泳，取出凝胶板，然后经BE染色放入成像系统显色、观察。 5.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？（实验书P75） 答：①样品DNA的大小和构象；②琼脂糖浓度；③电泳电场；④温度；⑤缓冲液；⑥嵌入染料的存在与否； 6.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么？（实验书P31） 答：注意不要吸取中间的变性蛋白质层。 7.在基因组DNA提取过程中常用酚、氯仿、异戊醇试剂，它们各有什么作用？ 答：酚——是蛋白质变性，抑制DNA酶的降解作用；氯仿——除去脂类，同时加速有机相与水相的分层；异戊醇——降低表面张力，从而减少气泡的产生。 8.提取DNA实验中，通常可选用哪些试剂沉淀DNA？ 答：冷的无水乙醇、冷的异丙醇、终浓度为0.1～0.25mol/L 的NaCl 9.简述在DNA提取实验中个试剂的作用（SDS，EDTA，酚/氯仿/异戊醇、无水乙醇，70%乙醇）。 答：SDS——破坏细胞膜，解聚核蛋白；EDTA——整合金属离子，抑制DNase活性；酚/氯仿/异戊醇——见第7题；无水乙醇——沉淀DNA；70%乙醇——洗涤DNA沉淀。 10.简述PCR扩增技术的原理及各种试剂的作用（Mg2+，dNTP，引物，DNA，缓冲液，Taq DNA聚合酶）。 答:(1)利用半保留复制的原理，以待扩增的DNA为模板，通过一系列酶在体外引物介导下，
选修3——基因工程高考题 1．（2017?新课标Ⅰ卷.38）（15分） 真核生物基因中通常有内含子，而原核生物基因中没有，原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。已知在人体中基因A（有内含子）可以表达出某种特定蛋白（简称蛋白A）。回答下列问题： （1）某同学从人的基因组文库中获得了基因A，以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白A，其原因是_____________________________________________。 （2）若用家蚕作为表达基因A的受体，在噬菌体和昆虫病毒两种载体中，不选用______________作为载体，其原因是_______________________________________________________________。（3）若要高效地获得蛋白A，可选用大肠杆菌作为受体。因为与家蚕相比，大肠杆菌具有_____________________________________________________（答出两点即可）等优点。 （4）若要检测基因A是否翻译出蛋白A，可用的检测物质是___________________（填“蛋白A 的基因”或“蛋白A的抗体”）。 （5）艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么，这一启示是_______________________________________________________________________________。2．（2017?新课标Ⅱ卷.38）（15分） 几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题： （1）在进行基因工程操作时，若要从植物体中提取几丁质酶的mRNA，常选用嫩叶而不选用老叶作为实验材料，原因是________________________________。提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是______________________________________。 （2）以mRNA为材料可以获得cDNA，其原理是________________________________。 （3）若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是________________________________________________________（答出两点即可）。（4）当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是__________________________。 （5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是____________________________________________。 3.（2017?新课标Ⅲ卷.38）（15分）编码蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示。 回答下列问题： （1）现要通过基因工程的方法获得蛋白乙，若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT……CAGGAAGGA），则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙，原因是_____________________________________________________________。（2）某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为________________，加入了________________作为合成DNA的原料。 （3）现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2。 ①由图2 可知，当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是________________________。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO2浓度，CO2的作用是________________________。 ②仅根据图、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少______________（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。 4．（2017·天津理综卷9）（20分）玉米自交系（遗传稳定的育种材料）B具有高产、抗病等优良性质，但难以直接培育成转基因植株，为使其获得抗除草剂性状，需依次进行步骤I、II试验。 Ⅰ．获得抗除草剂转基因玉米自交系A，技术路线如下图。 （1）为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是______（单选）。 ①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点 ②G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点
第二章 1. 名词解释：核酸内切酶、核酸内切限制酶、同裂酶、同尾酶、核酸外切酶、末端脱氧核苷酸转移酶 答： 核酸内切酶：是一类从多核苷酸链的内部催化磷酸二酯键断裂的酶。 核酸内切限制酶：是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列（4—8bp），并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。 同裂酶：识别位点的序列相同的限制性内切酶。 同尾酶：识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。 核酸外切酶：是一类从多核苷酸链的一头开始催化降解核苷酸的酶。 末端脱氧核苷酸转移酶：可以不需要模板，在单链DNA或突出的双链DNA 3’-OH端随机 添加dNTPs的酶 2. 限制性内切核酸酶的命名原则是什么？ 答：限制性内切核酸酶按属名和种名相结合的原则命名的，即：属名+种名+株名+序号； 首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写； 第二字母：取种名的第一个字母，斜体小写； 第三字母：(1)取种名的第二个字母，斜体小写； (2)若种名有词头，且已命名过限制酶，则取词头后的第一字母代替。 第四字母：若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定，但用正体。 顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I、Ⅱ、Ⅲ、…等，用正体。 3．部分酶切可采取的措施有哪些？ 答：1）缩短保温时间 2）降低反应温度 3）减少酶的用量 4. 在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp 的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么? 答：回文序列是：5'-CATA TG-3， 5．什么是限制性内切核酸酶的星号活性? 受哪些因素影响? 答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松 动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因 条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星 活性。 概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量(>5％, v／v)；(2)限制性 内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)；(3)低离子强度(<25 mmol／L)；(4)高pH(8．0 以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如 Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。 第三章 1．如何将野生型的λ噬菌体改造成为一个理想的载体? 答：①删除λ噬菌体的非必需区，留出插入空间；并在余下的非必须区内制造限制酶切点 ②引进某些突变表型，作为选择标记 ③突变某些基因，使它成为安全载体 ④删除λDNA必须区段上常用的限制酶切点
人教版高中生物选修三基因工程单元检测 试题 单元检测一专题1基因工程 （时间: 45分钟满分：100分） 一、选择题（共12个小题，每小题5分，共60分） 1. 下列关于基因工程的叙述，错误的是（） A. 目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B. 限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物 活性 D. 载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促 进目的基因的表达 2.基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的是（） A.人工合成目的基因 B?目的基因与载体结合 c.将目的基因导入受体细胞 D?目的基因的检测和表达 3?下列有关基因工程的叙述中，错误的是（） A. DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B ?限制性核酸内切酶用于目的基因的获得
C.目的基因需由载体导入受体细胞 D.大多数限制酶的识别序列由6个核昔酸组成 4.如下图所示，若用两种识别切割序列完全不同的限制酶E和F从基因组DNA上切下目的基因，并将之取代质粒pZHZl（3. 7kb, lkb = 1000对碱基）上相应的E-F区域（0. 2kb）,那么所形成的重组质粒pZHZ2（） A.既能被E也能被F切开 B?能被E但不能被F切开 c.既不能被E也不能被F切开 D?能被F但不能被E切开 5.下列四条DNA片段，可以是由同一种限制酶切割而成的是（） A.①② B.②③c?③④D?②④ 6.下面是5种限制性核酸内切酶对DNA分子的识别序列和剪切位点图Z表示剪切点，切出的断面为黏性末端）限制酶1：— I GATc—； 限制酶2：—cATG 限制酶3：一G I GATcc—； 限制酶4：—ccGc I GG—；