无菌工艺验证-培养基模拟灌装试验培养基灌装试验方案LuiaStoppa
无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会
Nanjing,thePeople’RepublicofChina–16-20November2022培训目的评估无菌生产模拟试验(培养基灌装或肉汤灌装)
了解在培养基灌装试验方案设计过程中的关键点，以符合法规要求学会如何对失败进行评估，以及可能带来的后果在团队中进行讨论
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2|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022培训目的
无菌生产工艺:
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3|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022培养基灌装的原则为什么无菌工艺的验证必须符合制药行业的规范？“无菌药品”的含义是“没有活体微生物”在无菌检测过程中，实际上并没有对每个产品进行检测，所以应采取所有努力减少污染的风险(洁净厂房、HVAC、压差、清洗程序、监测计划)
尽管采取这些措施，但污染永远是一个潜在的风险，因为无菌工艺操作是在一个受控但是非灭菌的环境中进行的，并且样品取样数量太小，所以只有严重污染才可能被发现。
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4|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022
培养基灌装的原则制药相关法规:-法规：FDA“,无菌生产工艺生产无菌药品的行业指南–cGMP”-EUGMPPartI附录1–-PIC/SPI007-2“无菌生产工艺验证指南”虽然培养基灌装试验必须复制无菌生产条件，但是模拟试验与药品实际生产过程采取完全相同的方式是不可能的。什么培养基？灌装多少数量？多长时间？
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6|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022培养基灌装的原则通常情况下，应该包括产品实际操作过程中可能发生的“最差条件”
必须考虑可能采取那些干预措施
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7|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022模拟试验:液体无菌灌装生产线压盖机
压塞机
清洗设备隧道烘箱无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会
8|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022灌装设备
模拟试验:培养基
灌装方案需要考虑的关键因素:试验的数量和频率培养基(产品的替代品)灌装的数量容器(玻璃瓶)体积灌装体积生产速度(或灌装速度)灌装过程的持续时间工作班次监测措施干预措施–常规的和非常规的培养方法可接受
标准无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会
9|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022模拟试验:培养基灌装方案
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10|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022培养基灌装方案关键因素:试验的次数和频率培养基模拟试验的初始
验证，至少需要成功的连续进行3次独立的模拟试验(建议在不同的工作
日进行试验)。首次验证后，培养基模拟试验通常每年进行2次。当生产
线发生变更，并且经过评估可能对无菌生产工艺有潜在危险时，应当进行
额外的培养基灌装试验。
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11|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022培养基灌装方案关键因素:培养基(1/3)培养基必须适应广谱微生物的
生长，包括需氧菌、酵母菌和霉菌(非选择性培养基)。推荐使用大豆消化
酪素琼脂培养基(SCD),以及大豆胰蛋白胨肉汤(TSB).如果产品在缺氧条件、通常在氮气保护下灌装时，需要使用厌氧培养基:液体硫乙醇酸盐培养基(FTM).
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12|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022培养基灌装方案关键因素:培养基(2/3)培养基必须适应微生物的生长(促生长试验)。被试验的微生物可以从药典(美国、欧盟、日本)中选择。
另外推荐使用1~2种最常见的环境分离菌。通常情况，在培养结束后，一
些玻璃瓶(从生产开始、中间、结束时取样)进行微生物接种，接种量
<100CFU,分别培养3天(细菌)和5天(酵母菌和霉菌)。
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13|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022
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14|Nanjing,thePeople’Republico fChina,16-20November2022培养基灌装方案关键因素:灌装数量灌
装的数量应该能够真实的反应批量；但允许根据需要，采取最低灌装数量，前提是应足以反应操作员工疲劳时对产品质量潜在的影响，并且足以体现了尽可能发生的干预措施。一些法规中建议应该根据批量确定灌装的数量。
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15|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022培养基灌装方案关键因素:容器体积(1/2)应该考虑到灌装容器的极端尺寸。最大的容器(通常由于充填体积较大而导致最小的充填速度)通常开口较大，所以从环境中微生物侵入的潜在风险是最大的。最小的容器(通常由于充填体积较小而导致最大的充填速度)体现了最大的操作难度；小的容器更容易破碎，稳定性差，在设备中更容易破裂或堵塞。
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16|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022培养基灌装方案关键因素:容器体积(2/2)在最初的验证中，可以二次选用最大的容器，第三次选用最小的容器。在日常的评估中，其它规格尺寸的容器也应该包括在验证计划中。不能使用琥珀色的容器，而应该使用透明的容器，保证可以目视检测到微生物的生长。
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培养基灌装方案关键因素:灌装体积培养基灌装体积不需要与现实中常规的灌装体积一致。应确定足够的灌装体积，保证可以充分接触到容器密封部位的表面(当它倒置和旋转时),并且足以目视检测到微生物在培养后的生长情况。较小的容器不能灌装的太满，因为容器上部的空间中应保持足够的空气，以支持需氧微生物的生长(通常应该保留25%的空间)。
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培养基灌装方案关键因素:生产线(或灌装)速度培养基灌装的速度，应符合实际生产的灌装速度范围。如果超过了限度，应该进行评估。每次模拟试验中确定的速度应该是符合要求的。较高的生产速度，可以适用于生产过程中经常受到干扰或手工操作较多的生产工艺。较低的生产速度，可以应用于在无菌区域中无菌部件长时间暴露的生产工艺。在灌装生产线的起始验证中，一次可以选用最低速度，另外二次可以选用最高速度。在生产线的日常评估中，模拟试验的速度应该进行变换。无菌药品生产-SFDAGMP 检查员高级研讨会19|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-
20November2022
培养基模拟灌装试验方案（无菌粉末分装粉针剂）
目录 1.目的 (3) 2.范围 (3) 3.验证组织及职责 (3) 4.方案说明 (4) 5.工艺概述 (4) 6.验证前检查 (5) 7.验证内容 (6) 8.验证周期 (13) 9.验证总结、评价与建议 (14) 10.验证报告的审核批准 (14) 11.验证合格证 (14)
1.目的 对于无菌生产来说，即使所有与产品无菌性有关的设备部件、容器以及原料都经过有效地灭菌处理，但当这些生产要素在实际工艺条件下组合在一起时，仍有可能因各种原因导致产品被污染。对于非最终灭菌的无菌生产工艺必须进行培养基灌装来验证。培养基灌装是用于评估整个无菌工艺过程，用于表明如果严格按照工艺要求生产，产品的无菌性有可靠保证。 2.范围 本验证方案适用于无菌粉末分装粉针剂生产线的培养基模拟灌装试验。 3.验证组织及职责 3.1验证职责 3.2验证方案的培训 验证实施前，QA部门对验证相关人员培训，填写《员工培训记录表》。
4.方案说明 4.1验证过程中偏差处理的要求 执行《偏差管理规程》 4.2验证过程中变更的要求 执行《变更管理规程》 4.3验证过程中记录填写的要求 执行《记录管理规程》 4.4其他要求 5.工艺概述 5.1产品： 5.1.1性状：白色结晶或结晶性粉末。 5.1.2规格：0.25g/瓶。 5.1.3包装：10ml西林瓶。 5.1.4批量：24000瓶。 5.2胶塞处理：纯化水清洗、硅化、注射用水清洗、灭菌。（121℃，20分钟） 5.3西林瓶处理：纯化水清洗、注射用水清洗、压缩空气吹干、隧道烘箱灭菌。（灭菌段温度320℃≥5分钟，冷却温度﹤40℃） 5.4铝盖干热灭菌。（180℃，120分钟） 5.5无菌药粉通过分装机充填到西林瓶中，盖胶塞、轧铝盖、灯检、贴签、包装。 5.6工艺流程图如下：
分发部门： 培养基模仿灌装（小容量注射剂）无菌生产工艺验证小组 一、概述 厂区无菌操作生产线，按GMP及其附录规定进行设计，是专用于小容量注射剂非最后灭菌产品生产使用。某某产品因无法进行F0≥8分钟湿热灭菌，以达到SAL≤10-6，但处方可以通过微生物滞留过滤器过滤，
故采用除菌过滤和无菌工艺相结合灭菌办法。 无菌生产工艺是制药领域中最难工艺之一，保证产品无菌是该工艺最大难点，减少无菌工艺药物污染风险两项重要办法为：①人员培训 ②无菌工艺验证。 按SFDA 化学药物注射剂基本技术规定：培养基灌装验证是对设备、环境以及人员操作一种系统验证，是判断无菌保证水平核心手段。故在正式生产前必要按某某产品生产工艺进行培养基模仿灌装验证。 1 本次验证核心生产工艺流程图 2 验证原理 将培养基暴露于设备、容器密封系统表面和核心环境条件中，并模仿实际生产完毕工艺操作。对装有培养基密闭容器进行培养以检查微生物生长并评价成果，拟定实际生产中产品污染也许性。对于失败验证进行菌种分析并调查，确认并解决也许导致失败因素后，重新进行验证。 3验证次数 按GMP 附录1规定因该生产线为新建厂区设施，为培养基模仿灌装实验初次验证，故需进行持续三个批次验证活动。 二、验证目 1通过该工艺验证活动证明新设计厂房采用既定无菌生产工艺能保证产品无菌规定； 2通过该工艺验证活动证明无菌操作有关人员资格，减少人员带入无菌风险；
3通过该工艺验证活动保证生产符合现行GMP法规规定。 三、验证范畴和实行时间 1本验证方案合用于厂区小容量注射剂车间无菌生产线正式投入使用前某某品种小容量注射剂无菌生产工艺培养基模仿灌装验证活动； 2筹划验证明行时间为3月~4月持续三个批次。 四、验证小组和职责 1 验证小组 依照验证内容和验证管理文献规定，成立验证小组，验证小构成员见下表，小组人员应在最后验证报告中签名确认。在验证明行前，方案起草人应对所有有关参加人员进行验证方案培训，做好培训记录，并将记录附于验证报告后。
1 主题内容与适用范围 本文件规定了培养基模拟灌装试验的程序和要求。 本文件适用于培养基模拟灌装试验的管理。 2 引用标准 《药品生产质量管理规范》2010年修订 3 术语 培养基模拟灌装试验（以下简称试验）：英文名称MFT——Media Fill Test的英文缩写，是用一种模拟替代物质来模拟整个无菌生产过程，在所得的模拟产品中加注培养基，再对所得的全部培养基样品进行无菌培养。培养基模拟试验是无菌生产工艺的验证手段，是任何非最终无菌药品生产必须进行的一项验证。 最差条件：导致工艺及产品失败的概率高于正常工艺的条件或状态，即标准操作规程范围以内工艺的上限和下限。但这类最差条件不一定必然导致产品或工艺的不合格。 4 职责 4.1 生产部门负责试验方案的制定、组织实施、试验报告的撰写、偏差的报告等。 4.2 质监中心负责试验培养基的促生长试验、灌装物的培养等。 4.3 质量保证部负责试验过程的监督管理。 5 管理规定 5.1 试验目的：规范公司培养基模拟灌装试验，评估无菌原料药和无菌制剂的生产工艺，为所生产产品无菌性的可信限度达到可接受的合格标准提供证据，证明其具有生产无菌原料药和无菌制剂的能力并具有可重现性，符合现行GMP要求和相关技术指南要求。 5.2 试验要求 5.2.1 试验频次 培养基模拟灌装试验的首次验证，每班次应当连续进行3次合格试验。培养基模拟灌装试验按照生产工艺每班次半年进行1次，每次至少一批。单一规格品种再验证周期为半年，正常生产的多规格品种每一规格再验证周期为一年。每位无菌操作人员每年至少参加一次成功的培养基模拟灌装试验。空气净化系统、设备、生产工艺及人员重大变更后，应当重复进行培养基模拟灌装试验。 5.2.2 试验批量及容器的数量、装量 培养基灌装批量及容器的数量、装量应当足以保证评价的有效性。批量较小的产品，培
分发部门： 培养基模拟灌装（小容量注射剂）无菌生产工艺验证小组 一、概述 厂区无菌操作生产线，按2010版GMP及其附录要求进行设计，是专用于小容量注射剂非最终灭菌产品生产使用。
故采用除菌过滤和无菌工艺相结合的灭菌方法。 无菌生产工艺是制药领域中最难的工艺之一，确保产品无菌是该工艺最大的难点，减少无菌工艺药品污染风险的两项重要措施为：①人员的培训 ②无菌工艺验证。 按SFDA 化学药品注射剂基本技术要求：培养基灌装验证是对设备、环境以及人员操作的一种系统验证，是判断无菌保证水平的关键手段。故在正式生产前必须按某某产品生产工艺进行培养基模拟灌装验证。 1 本次验证关键生产工艺流程图 2 验证原理 将培养基暴露于设备、容器密封系统的表面和关键环境条件中，并模拟实际生产完成工艺操作。对装有培养基的密闭容器进行培养以检查微生物的生长并评价结果，确定实际生产中产品污染的可能性。对于失败的验证进行菌种分析并调查，确认并解决可能造成失败的原因后，重新进行验证。 3验证次数 按2010版GMP 附录1要求因该生产线为新建厂区设施，为培养基模拟灌装试验的首次验证，故需进行连续三个批次的验证活动。 二、验证目的 1通过该工艺验证活动证明新设计厂房采用既定的无菌生产工艺能保证产品的无菌要求； 2通过该工艺验证活动证明无菌操作相关人员资格，降低人员带入无菌的风险； 3通过该工艺验证活动确保生产符合现行GMP 法规要求。 三、验证范围和实施时间
产工艺培养基模拟灌装验证活动； 2计划验证实施时间为2013年3月~4月连续三个批次。 四、验证小组和职责 1 验证小组 根据验证的内容和验证管理文件要求，成立验证小组，验证小组成员见下表，小组人员应在最终验证报告中签名确认。在验证实施前，方案起草人应对所有相关参与人员进行验证方案的培训，做好培训记录，并将记录附于验证报告后。
无菌工艺验证-培养基模拟灌装试验培养基灌装试验方案LuiaStoppa 无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会 Nanjing,thePeople’RepublicofChina–16-20November2022培训目的评估无菌生产模拟试验(培养基灌装或肉汤灌装) 了解在培养基灌装试验方案设计过程中的关键点，以符合法规要求学会如何对失败进行评估，以及可能带来的后果在团队中进行讨论 无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会 2|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022培训目的 无菌生产工艺: 无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会 3|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022培养基灌装的原则为什么无菌工艺的验证必须符合制药行业的规范？“无菌药品”的含义是“没有活体微生物”在无菌检测过程中，实际上并没有对每个产品进行检测，所以应采取所有努力减少污染的风险(洁净厂房、HVAC、压差、清洗程序、监测计划) 尽管采取这些措施，但污染永远是一个潜在的风险，因为无菌工艺操作是在一个受控但是非灭菌的环境中进行的，并且样品取样数量太小，所以只有严重污染才可能被发现。 无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会 4|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022
培养基灌装的原则制药相关法规:-法规：FDA“,无菌生产工艺生产无菌药品的行业指南–cGMP”-EUGMPPartI附录1–-PIC/SPI007-2“无菌生产工艺验证指南”虽然培养基灌装试验必须复制无菌生产条件，但是模拟试验与药品实际生产过程采取完全相同的方式是不可能的。什么培养基？灌装多少数量？多长时间？ 无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会 5|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022 无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会 6|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022培养基灌装的原则通常情况下，应该包括产品实际操作过程中可能发生的“最差条件” 必须考虑可能采取那些干预措施 无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会 7|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022模拟试验:液体无菌灌装生产线压盖机 压塞机 清洗设备隧道烘箱无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会 8|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022灌装设备 模拟试验:培养基 灌装方案需要考虑的关键因素:试验的数量和频率培养基(产品的替代品)灌装的数量容器(玻璃瓶)体积灌装体积生产速度(或灌装速度)灌装过程的持续时间工作班次监测措施干预措施–常规的和非常规的培养方法可接受
无菌生产工艺验证——培养基灌装试验 徐丹周艳（浙江金华康恩贝生物制药有限公司，浙江金华，321016） 摘要：介绍培养基灌装模拟试验法用于无菌生产工艺的验证，涉及培养基的选择、试验频率、灌装数量、环境监控、合格标准和质量评价等具体要素，以及发现偏差后的查究方法和纠偏措施。 关键词：无菌工艺；验证；培养基灌装试验 无菌生产工艺是制药领域难度最大的工艺之一。许多产品无法最终灭菌，因此它们在进行配制、灌装等暴露作业时就必须尽可能避免被微生物污染。而影响产品是否无菌的因素相当多，如生产区的设计及其设备布局、生产时的环境状况、所有与生产相关的设备及物料的污染状况、人员操作和卫生状况等，每一个环节对最终产品的质量都举足轻重。为了确保无菌生产工艺系统无菌的可靠性和适应性，需通过一定的验证方法来对其进行验证。目前，多数厂家采用培养基灌装试验来证明其无菌工艺的可靠性。 1 培养基试验的前提条件 首先，所有的相关设备及工艺均事先通过确认或验证，如洁净区环境须通过静态验证（空气的悬浮粒子、浮游菌、沉降菌及表面微生物均应符合相应的规定），操作人员的卫生及其操作行为均须经过严格的培训，生产主要设备（如灌装机、冻干机等）以及与生产相关的其它辅助工艺（湿热灭菌、干热灭菌、除菌过滤等），均须通过确认或验证。 2 培养基灌装试验 2.1 培养基的选择 为了尽可能地检出无菌生产工艺系统中可能会给实际产品造成污染的微生物，所选用的培养基应尽可能适应广谱微生物的生长，包括细菌、霉菌和酵母菌等。验证试验前，可用下述方法［1］来鉴别验证用培养基的可行性。首先严格按照培养基生产商的要求进行配制和灭菌，然后将无菌培养基分装至一定数量的无菌小瓶或试管内。同时，制备好三种微生物［枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和白色念珠菌（Candida albicans）］的悬浮液，菌液浓度控制为100～1000个菌/ml。将上述准备好的无菌培养基分成三等份，且每份至少两瓶（支），分别加上上述菌悬液各0.1ml。将接有枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌培养基于30～35℃下培养，接有白色念珠菌的培养基于20～22℃下培养。如果在7d内，每种微生物培养基均至少有50％长菌，则认为该培养基可用于无菌工艺验证试验。 实践证明，营养肉汤培养基或大豆胰蛋白胨液体培养基（soybean-casein digest medium［2］）均适用于培养基灌装试验。 2.2 培养基灌装试验的频率［3］ 新建的或生产工艺进行过重大更改后的无菌工艺生产线，必须经至少连续三批合格的培养基灌装试验后方可证明被验证工艺的可靠性。 常规生产条件下的再验证频率，每年至少两次，每次至少灌装一批。 若一条生产线生产多种不同规格的无菌产品，则每年对不同规格的产品至少进行一次培养基灌装试验，并保证每个在无菌工艺生产线上工作的人员，每年至少参加一次成功的培养基灌装试验。 2.3 灌装体积合灌装数量 一般来说，每只容器的灌装体积不得少于其总容积的三分之一［4］，这样才能保证有足够数量的培养基与容器的内表面充分接触，并且便于观察到微生物的生长状况。 确定培养基的灌装数量时必须考虑以下两个主要因素。一是应符合统计学要求，即在 95％的置信限至少能检出千分之一的污染率；二是被验证工艺的日常实际生产批量。因此，当某无菌生产线的实际生产批量大于3000瓶时，则培养基的灌装批量不得少于3000瓶；当无菌生产线的实际生产批量最多不超过3000瓶时，则按日常最大批量灌装即可［4，5］。
粉针剂无菌工艺验证——培养基模拟灌装试验 摘要】目的为确保粉针无菌分装生产过程对产品不产生污染，保证粉针生产药 品质量。方法先注入液体培养基，再以无菌甘露醇干燥粉为替代物，模拟分装 于注射剂瓶，盖胶塞，轧铝盖。分装样品先后在30～35℃与20～25℃下培养7d，并作阴性、阳性对照。结果无菌灌装环境及操作人员表面微生物检查合格, 阴性、阳性对照成立, 试验样品微生物未检出。结论无菌粉针灌装过程中，经培训的操 作人员在规定的洁净环境中按操作规程操作所生产的产品可以确保无菌。 【关键词】粉针剂无菌工艺验证培养基灌装试验 无菌药品的生产须满足其质量和预定用途的要求，应最大限度降低微生物、 各种微粒和热原的污染。生产人员的技能、所接受的培训及其工作态度是达到上 述目标的关键因素。无菌药品的生产必须严格按照精心设计并经验证的方法和规 程进行。产品的无菌或其它质量特性绝不能依赖于任何形式的最终处理或成品检验。 培养基模拟灌装试验——使用培养基作为药品的替代品（Placebo）进行无菌 模拟生产，对无菌工艺进行验证。培养基灌装在某种意义上是一种挑战性试验， 因为几乎在所有情况下，微生物在培养基中的繁殖和生长要比在实际产品中更容易。能全面反映整个生产过程采用无菌工艺生产无菌产品的能力。而且也是各国 药品法规要求的基本内容。 1 验证准备工作 1.1所有的相关设备及其工艺均应事先通过确认或验证, 如洁净生产区环境须 通过静态验证 (空气的悬浮粒子、浮游菌、沉降菌及表面微生物均应符合相应的 规定)，操作人员的卫生及其操作行为均须经过严格的培训, 生产主要设备 ( 如分 装机等)以及与生产相关的其它辅助工艺 ( 如淋洗、湿热灭菌、干热灭菌去热原、 除菌过滤等)，均须通过确认或验证。 1.2甘露醇粉末无菌的处理[1] 事先需要伽马辐照灭菌（钴60，用量约15～25kGy），并进行无菌性、抑菌 性和溶解度的测试。在甘露醇粉末的抑菌性试验中，每天观察微生物生长情况， 全部样品对照品试管中均有明显的微生物生长，说明甘露醇对枯草杆菌和白色念 珠菌均无抑制作用。甘露醇粉末溶解性试验中全部溶解。灌装时，每瓶内的粉末 量不宜过多，否则会对培养基溶液的促菌生长造成不良影响，实践证明，每5ml 液体培养基内甘露醇含量不宜超过0.3g。通过上述实验证明甘露醇粉末符合无菌 模拟灌装验证要求。 1.3培养基的微生物生长性能 培养基要经过微生物性能试验和无菌性能试验，证明本次制备的培养基符合 模拟灌装验证要求，以保证用于无菌模拟灌装装试验的培养基的有效性。实践证明，营养肉汤培养基或大豆胰蛋白胨液体培养基均适用于培养基模拟灌装试验。[2] 2 粉针剂无菌分装模拟验证 2.1验证方法 首先，严格按照培养基生产商的要求进行配制和灭菌, 然后将无菌培养基手 工灌装至一定数量的无菌注射剂瓶内。其次，按无菌分装标准操作程序分装无菌 甘露醇至灌有无菌培养基的注射剂瓶,对分装过程进行记录。分装后按分装顺序分 别进行编号，分装后的全部样品应在14天内每天检查培养的全部样品的微生物
. 审批 部门 姓 名署名 日 期 草拟人质量管理部 草拟人生产技术部 草拟人针剂车间 审查人针剂车间 审查人生产技术部 审查人质检中心 审查人质量管理部 同意人质量负责人 散发部门： 培育基模拟灌装（小容量注射剂）无菌生产工艺考证小组 一、概括 厂区无菌操作生产线，按2010版GMP及其附录要求进行设计，是专用于小容量注射剂非最后灭菌产品 生产使用。 某某产品因没法进行F0≥8分钟湿热灭菌，以达到SAL≤10-6，但处方能够经过微生物滞留过滤器过滤， .
故采纳除菌过滤和无菌工艺相联合的灭菌方法。 无菌生产工艺是制药领域中最难的工艺之一，保证产品无菌是该工艺最大的难点，减少无菌工艺药品污 染风险的两项重要举措为：①人员的培训②无菌工艺考证。 按SFDA化学药品注射剂基本技术要求：培育基灌装考证是对设备、环境以及人员操作的一种系统验 证，是判断无菌保证水平的重点手段。故在正式生产前一定按某某产品生产工艺进行培育基模拟灌装验 证。 1本次考证重点生产工艺流程图 安瓿的冲洗称量配料工用具冲洗和灭菌 除菌过滤 干热灭菌 灌封 灯检 D级背景C级背景A级背景一般区 考证原理 将培育基裸露于设备、容器密封系统的表面和重点环境条件中，并模拟实质生产达成工艺操作。对装有 培育基的密闭容器进行培育以检查微生物的生长并评论结果，确立实质生产中产品污染的可能性。关于 失败的考证进行菌种剖析并检查，确认并解决可能造成失败的原由后，从头进行考证。 考证次数 按2010版GMP附录1要求因该生产线为新建厂区设备，为培育基模拟灌装试验的初次考证，故需进行连续三个批次的考证活动。 二、考证目的 经过该工艺考证活动证明新设计厂房采纳既定的无菌生产工艺能保证产品的无菌要求； 经过该工艺考证活动证明无菌操作有关人员资格，降低人员带入无菌的风险； 经过该工艺考证活动保证生产切合现行GMP法例要求。 三、考证范围和实行时间 1本考证方案合用于厂区小容量注射剂车间无菌生产线正式投入使用前某某品种小容量注射剂无菌生.
培养基模拟灌装验证
一、目的 建立培养基模拟灌装验证的管理规程，确保培养基模拟灌装验证符合生产工艺及GMP要求。 二、适用范围 适用于制剂车间生产的产品需要培养基模拟灌装验证的整个工艺过程，包括从部件、材料的灭菌准备，一直到完成灌装和容器密封的整个过程。 三、责任者 制剂车间、生产部、公用事业部、质量控制部、物流部、质量保证部及验证部遵照执行。 四、缩写与定义 1. 最差条件（worst case） 在SOP范围内（或超出），由工艺参数的上、下限和相关因素组成的一个或一系列条件。与理想条件相比时，最差条件使产品或者生产工艺失败的几率为最大，这样的条件不一定导致产品或生产工艺的失败。 2. 干预（Intervention） 操作人员在无菌操作区域内的操作活动。 3. 正常干预（Inherent Interventions） 在无菌工艺灌装过程中发生的正常的在计划中的活动（例如，设备安装、装量调节、胶塞的再补给、灌装容器的再补给、环境监测、取样等等）。 4. 纠正干预（Corrective Interventions）
在无菌工艺灌装过程中的纠正或调整的活动，其不属于计划性。（例如，灌装容器的破损、倒瓶、掉塞、更换灌装针、灌装设备维修） 五、健康、安全和环境 无 六、程序 1. 验证小组职责： 1.1 验证部 1.1.1 负责编制培养基模拟灌装验证管理规程。 1.1.2 协助起草并审核培养基模拟灌装验证方案及培养基模拟灌装验证报告。 1.1.3 验证工作的组织与协调，参与并监督培养基模拟灌装验证的实施，模拟灌装样品的接收、培养及结果观察。 1.1.4 对验证过程中偏差、变更处理过程追踪。 1.2 质量保证部 1.2.1 审核培养基模拟灌装验证方案及培养基模拟灌装验证报告。 1.2.2 验证工作的组织与协调，参与并监督培养基模拟灌装验证的实施，负责验证过程中取样。 1.2.3 负责培养基模拟灌装验证环境监控，参与模拟灌装样品的接收、培养及结果观察。 1.2.4 参与验证过程中偏差、变更处理。
培养基模拟灌装无菌生产工艺验证方案 一、研究目的及背景 无菌生产是制药和食品工业中至关重要的一项工艺。培养基是无菌生 产过程中不可或缺的一部分，它提供了细菌、真菌等微生物的生长所需的 营养物质。因此，为了确保产品质量和安全性，对培养基的无菌灌装工艺 进行验证是非常重要的。 本研究的目的是验证培养基的无菌灌装工艺的有效性，以确保生产过 程中的无菌状态。通过验证，可以确定灌装工艺的可行性和合理性，并提 供指导和保障无菌生产的稳定性和安全性。 二、研究方法 1.确定灌装工艺的关键参数和控制点：包括温度、压力和速度等因素。通过前期的实验研究和参考相关文献资料，确定灌装工艺的最佳参数设置。 2.建立合适的实验方案：选择合适的微生物作为试验菌株，并使用合 适的培养基进行培养。根据已有的灌装工艺参数，进行一定数量的灌装试验，并尽可能模拟实际生产过程。 3.进行灌装工艺验证试验：根据实验方案，按照一定的时间和数量进 行培养基的灌装试验。同时，进行相应的对照试验，采集样品进行微生物 学检验。 4.微生物学检验：采集灌装好的培养基样品，通过无菌条件下培养， 观察是否有微生物生长。并进行定性定量分析，以判断培养基是否被污染。
5.数据分析和结果评估：根据实验结果，对培养基的无菌灌装工艺进 行评估。比较实验组和对照组的差异，并统计相关数据，计算灌装工艺的 合格率和不合格率。 6.结果报告和验证方案调整：将实验结果进行总结和分析，撰写验证 方案报告。根据结果对灌装工艺进行调整和改进，并制定相应的控制措施。 三、实施计划和进度安排 1.研究期限：本研究计划为期三个月。 2.实施计划： -第一周：搜集相关文献资料，确定研究目的和方法。 -第二周：设计实验方案，确定试验菌株和培养基。 -第三周至第五周：进行实验，进行灌装试验并采集样品。 -第六周至第七周：进行微生物学检验，观察和分析实验结果。 -第八周：数据分析和结果评估，撰写验证方案报告。 -第九周至第十二周：根据结果调整灌装工艺，并制定相应的控制措施。 四、预期成果和意义 1.提供培养基的无菌灌装工艺验证方案，为无菌生产提供指导和保障。 2.确保产品质量和安全性，减少可能的污染和损失。 3.提高灌装工艺的可行性和合理性，提高生产效率和降低成本。 4.对灌装工艺进行调整和改进，提高无菌生产的稳定性和可靠性。
XXXXX制药有限公司 培养基无菌灌装模拟试验 再验证方案 文件编号： YZML101P -09 所在车间：冻干粉针车间 起草人：日期： 2009年6月25日审核人：日期：2009年7月04日批准人：日期： 2009年7月05日
验证方案的起草与审批 验证方案的起草 验证方案的审批 验证进度计划 提出完整的验证计划，经验证小组批准后实施，整个验证活动分三个阶段完成。
验证方案目录 第一部分：概述 (4) 1、验证目的 (4) 2、验证概述 (4) 3、验证领导小组分工及职责 (4) 4、被模拟工艺 (5) 5、模拟试验中使用的设备设施 (6) 6、培养基的选择 (6) 7、微生物培养条件 (7) 8、工艺模拟的批量，批次 (7) 9、灌装体积、灌装速度及灌装用容器的确定 (7) 10、验证最差条件 (7) 11、可接受的合格标准 (8) 第二部分：试验实施 (9) 1、试验实施前的准备工作 (9) 1.1 培养基无菌性试验 (9) 1.2 培养基促生长试验 (9) 1.3 无菌环境控制与监测 (9) 2、试验实施过程 (11) 2.1厂房、空间清洁 (11) 2.2试验相关工序准备 (12) 2.3培养基配置、除菌过滤过程 (12) 2.4模拟灌装 (12) 2.5模拟冻干 (13) 2.6轧盖 (13) 2.7微生物培养 (13) 3、盖胶塞密闭系统挑战试验 (15) 4、偏差的处理 (15) 5、试验结果分析与评估 (16) 6、验证的维护 (17)
第一部分：概述 1、验证目的 评价一个无菌工艺操作能力的最有用的方法之一是工艺模拟，其提供了一个可能影响最终产品无菌的无菌工艺操作变更进行评价的方法，它可以用于鉴别无菌操作工艺中，可以导致产品微生物污染的潜在缺陷，通过模拟无菌冻干粉针的灌装试验，证明冻干粉针灌装过程中所采用的无菌灌装工艺参数和相关的SOP对于防止微生物污染水平达到可接受的合格标准，或提供保证所生产产品的无菌性的可信限度达到可接受的合格标准的证据。无菌工艺人员的资格和保证，以及验证生产系统的要素（包括厂房、公用系统、设备）和生产过程中工艺变化因素（物料、人员、方法）对产品质量，尤其是无菌结果影响的程度，以证明以后在正常生产条件下能生产出符合规定标准的无菌产品。 2、验证概述 冻干粉针生产线主要包括胶塞清洗机、超声波洗瓶机、隧道烘箱、灌装机、轧盖机,和贴签机。根据GMP的要求，在厂房、设施、设备均已经过全面验证的情况下，且操作人员熟练掌握了岗位SOP后，用大豆胰蛋白胨消化肉汤培养基代替无菌原料进行了模拟灌装培养基试验，可以直观、方便、准确地反映出无菌灌装过程的污染情况及问题。本次验证在第一次验证通过的基础上进行的再验证，根据再验证安排，车间经过六个生产后，再次考察车间的无菌保证。 3、验证领导小组分工及职责 公司成立验证领导小组，负责所有验证工作的领导和组织，负责审批验证方案和验证报告。 验证领导小组针对每一个具体验证项目成立专门验证工作小组，负责该验证项目的验证方案起草、实施、组织与协调，负责验证结果记录与评定，负责完成验证报告。 3.1验证小组成员
无菌制剂培养基模拟灌装工艺 验证(总39页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1 -CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除
验证小组人员名单
培养基模拟灌装验证方案
目录 1 概述 2 验证目的 3 适用范围 4 相关部门职责 5 验证条件 6 验证引用的文件 7 培养基 8 培养基模拟灌装试验条件 9 培养基模拟灌装试验的频率 10培养基模拟灌装量和灌装数量的确定 11培养基模拟灌装最差条件的设计 12培养基配制和无菌灌装操作过程 13 取样计划 14试验样品的培养 15 试验结果评价 16环境监控和微生物限度控制 17清场与清洁 18培养基灌装过程监控记录 19偏差调差 20纠偏措施 21异常情况处理程序 22变更 23拟定再验证周期 24验证结果评定与结论 附录附录1：人员培训 附录2：系统验证及设备验证确认
附录3：纯化水检验报告单 附录4：注射用水检验报告单 附录5：环境监测报告单 附录6：胰酪胨大豆肉汤培养基适应性实验结果 附录7：胰酪胨大豆肉汤培养基灵敏度检查结果 附录8：培养基及内包材确认 附录9：最差条件确认 附录10：内包材检验结果 附录11：未参加培养灌装瓶原因说明 附录12：培养基的培养观察记录 附录13：培养基的培养阳性结果和培养基灌装失败情况说明 附录14：培养基灌装过程中监控统计表 附录15：灌装生产结束清洁记录 附录16：质控过程监控 产品基本信息： 1 概述 培养基模拟灌装主要用的是胰酪胨大豆肉汤培养基，适用于黑龙江天龙药业江北新厂滴眼剂车间生产线。依据批准的滴眼剂车间培养基模拟灌装验证方案，实施培养基模拟灌装试验；评价无菌生产工艺的可信限度达到可接受的合格标准，确认滴眼剂车间生产过程的可靠性，有效性。本方案规定了滴眼剂车间培养基模拟灌装的验证方法和标准。 2 验证目的 通过对滴眼剂灌装过程中采用与正常生产工艺相同的条件和操作方法（包括生产环境等），向8ml滴眼瓶内灌装经过除菌过滤的无菌培养基，在适当条件下培养，并对培养品观察、结果判定的验证，来确定滴眼剂车间生产无菌灌装工艺的无菌保证水平，判定无菌生产要素是否能够达到可接受的合格标准的能力，以确认无菌生产工艺过程的可靠性。 3 适用范围
培养基模拟灌装 【基本概念】 无菌丄艺模拟试验就是指采用微生物培养基替代产品（无菌粉末分装的培养基灌装试验实际 是将产品替代品溶入培养基中，不是直接替代产品）对无菌工艺进行评估的验 证技术。无菌 工艺模拟试验也被称为培养基灌装或培养基灌装试验。通常需要将培养基暴露于设备、容器 密封系统的表面和关键环境条件中，并模拟实际生产完成工艺操作。然后，将装有培养基的 密闭容器进行培养以检查微生物的生长，并对结果进行评价，借以确定实际生 产中产品被污 染的概率。 【法规】 [1]中国GMP无菌附录 第四十七条无菌生产工艺的验证应当包括培养基模拟灌装试验。 应当根据产品的剂型、培养基的选择性、澄清度、浓度和灭菌的适用性选择培养基。应当尽 可能模拟常规的无菌生产工艺，包括所有对无菌结果有影响的关键操作，及生产中可能出现 的各种干预和最差条件。 培养基模拟灌装试验的首次验证，每班次应出连续进行3次合格试验。空气净化系统、设备、
生产丄艺及人员重大变更后，应当重复进行培养基模拟灌装试验。培养基模拟灌装试验通常 应当按照生产工艺每班次半年进行1次，每次至少一批。 培养基灌装容器的数量应当足以保证评价的有效性。批量较小的产品，培养基灌装的数量应 当至少等于产品的批量。培养基模拟灌装试验的LI标是零污染，应当遵循以下要求：（一）灌装数量少于5000支时，不得检出污染品。 （二）灌装数量在5000至10000支时： 1.有1支污染，需调查，可考虑重复试验； 2.有2支污染，需调查后，进行再验证。 （三）灌装数量超过10000支时： 1.有1支污染，需调查； 2.有2支污染，需调查后，进行再验证。 （四）发生任何微生物污染时，均应当进行调查。 [2]EU GMP Annex 1 Manufacture of Sterile Medicinal Products 66.Validation of aseptic processing should include a process simulation test using a nutrient medium （media fill）. Selection of the nutrient medium should be made based on dosage form of the product and selectivity, clarity, concentration and suitability for sterilisation of the nutrient medium. 67.The process simulation test should imitate as closely as possible the routine aseptic manufacturing process and include all the critical subsequent manufacturing steps. It should also take into account various interventions known to occur during normal production as well as worst-case situations・ 68.Process simulation tests should be performed as initial validation
培养基模拟灌装无菌生产工艺验证方案 目录 1 概述 2 验证目旳 3 合用范围 4 验证小组组员与职责 5 文献资料及培训确认 6 编制根据 7 验证计划 8风险评估分析 9 验证内容 10验证成果旳分析与评价 11验证周期
验证立项申请表
验证方案会签审批表
1、概述
1.1我企业小容量注射剂车间2号生产线，按GMP2023版及其附录规定进行设计，是专用于 小容量注射剂非最终灭菌产品生产使用。维生素C注射液（5ml:0.5g）因无法进行F ≥ 0 8分钟湿热灭菌，以到达SAL≤10-6，但处方可以通过微生物滞留过滤器过滤，故采用除菌过滤和无菌工艺相结合旳灭菌措施。 1.2培养基灌装验证是用和实际生产工艺相似旳条件与操作措施（包括生产环境），向安瓿 内灌装经除菌过滤旳培养基，然后将此模拟制品在合适条件下培养，以确认工艺过程旳可靠性。对设备、环境以及人员操作旳一种系统验证，是判断无菌保证水平旳关键手段。 在正式生产前必须按维生素C注射液（5ml:0.5g）生产工艺进行培养基模拟灌装验证。 1.3验证次数 按2023版GMP附录1规定,因该生产线为新建设施，本次为规格为5ml培养基模拟灌装试验初次验证，故需进行持续三个批次旳验证活动。 2、验证目旳 2.1证明无菌生产区旳设计及其设备布局，环境及卫生状态、人员无菌操作等各方面原因均 能保证产品旳无菌性。 2.2确定生产最差条件下仍能保证产品旳无菌性。 2.3通过培养基模拟灌装试验保证生产符合现行GMP法规规定。 3、验证范围 本验证方案合用于小容量注射剂车间无菌灌装生产线（二线）正式投入使用前培养基模拟灌装试验旳验证。 4、验证小组组员与职责 4.1验证小组组员
无菌模拟灌装试验的模拟工艺和培养基的选择 我们有一产品叫手术用凝胶，凝胶生产是无菌生产工艺，按规定要每6个月进行一次无菌模拟灌装，我们做无菌模拟工艺试验主要依据是《医疗器械生产质量管理规范》和《无菌工艺模拟指南》，其中《无菌工艺模拟指南》这个指南其实主要针对的是2010版GMP出的指导性文件，顺带管理一下医疗器械，这个文件与2010版GMP的发布时间有大约9年的时间差，在2010年GMP发布以后，有可能是在无菌模拟工艺的实践中出现了一些问题，所以国家药品监督管理部门在2018年出台了这么一个文件，来规范无菌模拟试验具体来怎么去做，也就是说从2018年10月1日起，这个时间点之前你做无菌模拟试验做的不规范、有缺陷、存在风险，它是过去时，过去了，不再说了，但是在这个文件发布之后如果再开始实施无菌模拟实验，也就是我们说的培养基模拟灌装验证，这时候我们就有了一个非常规范的指南来约束我们。 无菌工艺模拟实验工艺起点在哪？ 这在《无菌模拟实验指南》中第5条说的很清楚“第5条：无菌生产工艺及模拟范围，培养基模拟灌装试验应从第一步无菌操作开始，直至无菌产品完全密封结束，如果在产品的制备阶段已经采用了无菌生产工艺，此部分工艺应作为模拟实验的一部分”在强调药品质量风险管理的今天，也没有忘记风险评 1/ 6
估，所以后面加了一句话，“企业应根据风险评估确定无菌模拟试验开始的起点工序”貌似把无菌模拟工艺试验给说清楚了，但是真正是怎么做的吗？ 常规无菌模拟的生产流程大概是这样的。配制罐（总混罐）→预过滤→终端过滤→灌装。通常的过程大概就是这样。为确证我的产品是不是符合无菌生产工艺，微生物限度是否在限度以内，我不得不用培养基来走一遍整个无菌工艺流程，通过营养物质在工艺中的运转，最后灌装到包装中，全程模拟工艺路线。工艺起点看似起点很清楚，确实对于某些产品，工艺的起点很清楚，举个与器械无关的产品比如我们的疫苗产品对于疫苗生产工艺来说我们的工艺起点在哪里呢？ 在新冠肺炎肆虐的今天，疫情至今尚未解除，我们是更期待有效药物还是更期待有效的疫苗呢？大家心里应该很清楚，在现在大分子药物开发作为主流的今天特别是疫苗生产，他的生产工艺，生产时间都很长，疫苗的生产工艺大概工程流程为反应罐→浓缩→透析→降低生物负荷→结合反应→浓缩透析→层析→除菌过滤→灌装。如果按照上述所说也从第一步来进行模拟试验的话，这个时间应该会很长，疫苗生产有时候在反应罐的时间就会达到1到2周的时间，这个时间很正常，整个工艺走下来1个月甚至更长，假如我们也从无菌操作的开始工序来进行模拟，半年进行一次，一年只有12个月，那么生产活动会受到很大的影响，所以疫苗生产就会遇到工艺起点的问题，有什么法规可依吗？可见生物制品的无菌模拟灌装还是有一定的技术限制的，从这点来说，如 2/ 6
CFDA起草无菌制剂培养基模拟灌装试验指南 1. 目的为指导和规范无菌药品生产的培养基模拟灌装试验，充分评药品生产企业的无菌操作水平，确保所生产无菌药品的安全、有效、质量稳定，依据《药品生产质量管理规范》及附录，制定本指南。 2. 范围本指南根据无菌生产工艺的特点阐述了非最终灭菌的无菌产品培养基模拟灌装试验的基本要求及流程，适用于采用无菌生产工艺生产无菌制剂。 3. 定义本指南所指的培养基模拟灌装试验，是指采用无菌的培养基或适当的介质，模拟药品生产中无菌操作的全过程(不仅仅是灌装过程)，以评价该无菌工艺无菌保证水平的一系列活动。 4. 原则在对无菌生产工艺充分认知和生产经验累积的基础上，非最终灭菌产品企业应结合工艺、设备、人员和环境等要素定期开展培养基模拟灌装试验，以确认无菌生产过程的可靠性。开展培养基模拟灌装试验应遵循以下原则： 4.1 以现行GMP 法规要求为准则，评价无菌生产过程的法规符合性，不符合规范要求的无菌工艺过程，不能通过模拟试验来证实其无菌控制措施的合理性。 4.2 对无菌生产过程实施风险评估，识别生产过程风险点以并评估现有控制措施的有效性，评估结果将在试验方案设计时给予考虑。 4.3 应结合无菌生产过程所涉及到的工艺、设备、人员以及操作时限等因素有针对性开展模拟试验，尽可能模拟实际无菌生产全过程，并应特别关注“开放”操作、人工干预等高风险过程。 4.4 如同一生产线生产多个包装规格的产品，应评价模拟试验方案对各产品无菌工艺过程的适用性。应对有显著差异的无菌工艺过程逐一开展模拟试验。
5.无菌生产工艺及模拟范围无菌产品的无菌生产工艺通常为： 经除菌过滤或其他方法获取无菌药液或无菌粉末，在无菌条件下进行液体灌装或粉末灌装，密封。冻干制剂在液体灌装的基础上增加了冷冻干燥工艺。培养基模拟灌装试验应从第一步无菌操作开始，直至无菌产品完全密封结束。如果在产品制备阶段已经采用了无菌生产的工艺，此部分工艺也应作为模拟验证的一部分。 6. 模拟试验方案的设计及实施过程要求 6.1. 培养基模拟灌装试验的前提条件在培养基模拟灌装试验之前应确认及无菌工艺相关的支持性系统和灭菌系统的验证已完成，并达到了可接受的标准。 6.1.1. 工艺设备、公用系统和辅助设施按照预期要求完成了设计、安装和运行确认; 6.1.2. 生产设备、公共系统、辅助设施灭菌方法完成了相应的验证，物品及厂房、设施所使用消毒剂及消毒方式完成了相关的验证。 6.1.3. 药液及及产品接触的气体、设备组件、容器、器具灭菌工艺完成了相应的验证。 6.1.4. 无菌关键区域的气流及环境监测达到了设计要求。 6.1.5. 根据无菌生产工艺要求建立了相关操作规程文件。 6.1.6. 参及模拟灌装试验的人员接受了GMP、无菌操作、微生物知识以及实施模拟试验的培训。 6.1. 7. 进入洁净区的全部人员通过了更衣程序的确认，并采用文件形式，可视化标识管理或其他方式，确认了每位参及者可进入的的区域和其所允许的无菌操作项目。 6.1.8. 容器密封性验证已经完成。