实验四植物基因组DNA的提取

植物基因组提取及DNA的浓度测定一、实验目的1、掌握用CTAB法提取植物总DNA的方法和基本原理。

2、学习利用紫外分光光度计法测定DNA溶液的浓度。

二、实验原理三、实验步骤1、2%CTAB抽提缓冲液在65摄氏度水浴中预热，与此同时，用剪刀、镊子取8片约0.2g的子叶于研钵中，放在冰水研至匀浆状。

2、用移液器向研钵中加入700微升2%CTAB抽提缓冲液，轻轻搅拌。

然后将研磨液倒入1.5ml的灭菌离心管中，再置于65摄氏度的恒温水浴锅中，每隔10min轻轻摇动，40min后取出。

3、冷却2min后，用移液器吸700微升的氯仿/异戊醇到离心管中，剧烈振荡2~3min，使两者混合均匀。

4、与另一组同学的离心管平衡，对称放入离心机中，10000r/min离心10min，与此同时，将60微升的预冷的异丙醇加入另一个新的灭菌离心管中。

5、移液器轻轻地吸取上清液（约600微升），转入含有异戊醇的离心管内，将离心管慢慢上下摇动30s，使异丙醇与水层充分混合至能看到DNA絮状物。

6、同样，与另一组同学的离心管平衡，对称放入离心机中，10000r/min离心1min，然后立即倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出。

7、将离心管倒立于滤纸上1min，直立离心管，加入720微升的75%的预冷的乙醇及80微升5mol/L的乙醇钠，轻轻转动，用手指弹管尖，使沉淀与管底的DNA块状物浮游于液体中。

放置10min，使DNA块状物的不纯物溶解。

8、与另一组同学的平衡，对称放入离心机，10000r/min离心1min，倒掉液体，再加入800微升75%乙醇，将DNA再洗2min。

9、与另一组同学的平衡，对称放入离心机，10000r/min离心30s，立即倒掉液体，将离心管倒立于滤纸上，数分钟后，直立离心管，干燥DNA。

10、加入50微升0.5XTE(含RNase)缓冲液，使DNA溶解，置于37摄氏度恒温箱中约1.5h，消化RNA。

11、取2.99ml蒸馏水至一干净的试管，再加入上述DNA溶液10微升，混匀。

植物基因组dna提取和纯化实验的改进
植物基因组DNA提取和纯化一直是分子生物学研究中的基础操作，也是分子克隆和重组DNA技术的基础。

随着研究的深入，对植物基因组DNA提取实验的提高和改进变得越来越重要。

为了提高植物基因组DNA提取和纯化的结果，目前采用许多改进措施，其中包括：
1.引入新型DNA提取液，根据实验条件和所选择的植物材料，使用不同种类的溶剂体系。

这样可以增加植物细胞质和DNA之间相对稳定的作用，从而提高DNA提取率。

2.根据植物叶绿体组织的性质，添加重力沉淀、离心沉淀或电泳分离的步骤，使原材料不受外界的干扰，彻底分离出纯正的DNA片段。

3.根据不同的植物材料，运用酶促技术，采用噬菌体表达系统和定量PCR方法，获得更高精细度和效率。

4.使用植物基因组DNA受体法，可以特异性提取极微量的DNA，提高可测量级别的DNA样品。

这些有效的改进措施可以显著提高植物基因组DNA的提取和纯化质量，为进一步的基因组学研究提供稳定的质量保证。

基因组DNA的提取一、从哺乳动物组织提取基因组DNA实验材料：液氮、消化缓冲液、PBS（冰冷）、25:24:1酚/氯仿/异戊醇、7.5M乙酸铵、无水乙醇及70%乙醇、0.1%SDS、RNA酶、TE缓冲液（pH8.0）、离心管、研钵、冷冻离心机。

实验步骤：1.取新鲜或冰冻动物组织块，剪成小块。

置于液氮中冻结。

2.将500mg的组织用预冷的研钵和研杵研碎，或用小锤子将其捣为细粉末，每100mg组织用1.2 mL消化缓冲液悬浮。

3.将6ml样品在盖紧的离心管中于50℃摇荡下温育12～18 h。

4.用6ml酚/氯仿/异戊醇抽提样品，1700g离心10 min。

如果样品溶解得不好，再加6ml不含蛋白酶K的消化缓冲液，并重复离心。

如果在界面上有一层厚的白色物质，重复有机抽提，将上层(水溶液)转移至一个新管中。

5.加入6ml 7.5M乙酸铵和24ml 100%乙醇，1700g离心2 min。

6.用70%乙醇洗涤，晾干，沉淀用TE缓冲液重新溶解，使终浓度在约1mg/mL左右。

7.加入0.1%的SDS和1pg/mL无DNA酶的RNA酶，37℃温育1h,以除去残留的RNA.重复步骤 4～5。

二、从植物组织提取基因组DNA实验材料：液氮/干冰、2-巯基乙醇(2-ME)、 CTAB抽提液、CTAB/NaCl溶液、24:1(v/v)氯仿/异戊醇、CTAB沉淀液、高盐TE缓冲液、80%乙醇、TE缓冲液、抗有机溶剂的试管和烧杯、研钵和研杵、粉碎器/匀浆器、捣碎机、恒温金属浴、冷冻离心机。

实验步骤：1.取1g的鲜叶组织，在3.2ml CTAB抽提液中加入0.8ml 2-巯基乙醇，使终浓度达2%(v/v)。

将此溶液及1ml CTAB/NaCl溶液加热至65℃。

2.用液氮(-196℃)或干冰(一78℃)冷却粉碎器/匀浆器，将植物组织粉碎成为细粉，然后将冷冻的组织转移到一个抗有机溶剂的试管或烧杯中。

3.往粉碎的组织中加入预热的2-ME/CTAB,混合使之充分湿润，65℃温育10～60min,不时混匀：4.用4ml的24:1氯仿/异戊醇抽提匀浆液，颠倒使充分混合，于4℃, 7500g离心5 min(对于小样品，在离心机上以10000 r/min离心),回收上(水)相。

植物基因组dna提取的原理-回复植物基因组DNA提取的原理DNA提取是从永久性细胞中分离DNA的过程。

植物基因组DNA提取是分离植物细胞的DNA，以便进行后续的分子生物学实验和研究。

这个过程涉及到多个步骤，包括细胞破碎、DNA的溶解和纯化等。

本文将一步一步回答关于植物基因组DNA提取的原理。

1. 选择植物样本首先，需要选择一个适合的植物样本。

优选的植物样本是新鲜的，健康的细胞组织。

对于不同种类的植物，比如叶片、茎、果实等，DNA的含量和纯度可能有所不同。

因此，在选择样本时应根据具体实验的目的和需求。

2. 组织破碎一旦有了植物样本，接下来的步骤是将细胞破碎，以释放细胞内的DNA。

这可以通过物理或化学方法来实现。

对于植物细胞壁较坚固的样本，比如木材或坚果，可以通过机械磨碎或高速搅拌器来破碎。

而对于柔软的植物组织，如叶片或幼苗，可以使用方法如液氮冷冻和粉碎，或者用热溶液破坏细胞壁。

3. 分离DNA细胞破碎后，需要将DNA与其他组织和细胞碎片分离。

这个步骤通常通过离心和滤液来实现。

首先，使用离心将悬浮在混合物中的固体细胞碎片与溶液分开。

然后，将上清液通过滤纸或滤芯，去除细胞残渣。

得到的上清液中包含了DNA。

4. DNA溶解离心和滤液后，得到的上清液通常含有DNA、RNA、蛋白质和其他杂质。

为了进一步纯化DNA，需要将DNA溶解在合适的缓冲溶液中。

缓冲溶液可以帮助维持DNA的稳定性和活性。

此外，缓冲溶液中还可以加入特定的酶来降解RNA和蛋白质。

5. DNA纯化溶解DNA后，可以使用不同的纯化技术来从溶液中去除RNA、蛋白质和其他杂质。

最常用的方法是酚/氯仿提取法和硅酸盐柱纯化法。

酚/氯仿提取法是通过酚和氯仿的组合来分离DNA、RNA和蛋白质。

而硅酸盐柱纯化法则是通过DNA与硅酸盐在酒精溶液中的亲和性来纯化DNA。

6. DNA质量测定提取的DNA需要进行质量测定，以确定其浓度和纯度。

可以使用光谱法或比色法对DNA进行测定。