正常人成骨细胞系的建立及鉴定

·论著·系统医学SYSTEMS MEDICINE 系统医学2019年8月第4卷第16期骨质疏松是中老年人的一大常见疾病,以低骨量,骨显微组织损坏为主要特征,易引起老年人骨折,致残甚至死亡[1]。

成骨细胞的主要功能是负责骨的形成,分泌与矿化,其特异性分泌的多种生物活性物质,可以调节骨的形成和重建过程[2]。

其功能随着衰老的过程而发生显著的变化[3]。

乳鼠颅盖骨由于含有骨膜和骨松质,具有良好的表达成骨细胞蛋白合成以及繁殖的能力,培养条件较为简单,因而被普遍选作体外培养成骨细胞的组织来源[4]。

该试验旨在运用酶消化法和组织块相结合的培养法获取原代成骨细胞,并采用D-半乳糖法构建成骨细胞衰老模型,为后续对成骨细胞衰老机制的探讨打下基础。

1实验材料1.1实验动特实验动物新生5~7d的昆明乳鼠,雌雄均可,购自广西医科大学实验动物中心。

1.2主要试剂MEMα培养基,胶原酶Ⅱ型,BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒,PBS,胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%),β-半乳糖苷酶细胞衰老染色试剂盒,D-(+)DOI:10.19368/ki.2096-1782.2019.16.014衰老原代小鼠成骨细胞模型的建立与评价鲁晴1,谭海涛2,贺锦桥2,杨心妮1,张鑫1,黎静11.广西医科大学基础医学院生理学教研室,广西南宁530021;2.广西医科大学第八附属医院广西数字医学3D打印临床研究中心,广西贵港537100[摘要]目的提取小鼠颅骨原代成骨细胞,并建立成骨细胞衰老模型。

方法取5只新出生5~7d的昆明乳鼠颅骨,采取酶消化法与组织块培育法获取原代成骨细胞,经鉴定后,采用D-半乳糖诱导成骨细胞衰老,行β-半乳糖苷酶衰老染色、RT-PCR法分析ALP,BMP-2的表达。

结果光学显微镜下观察细胞呈三角形,长梭形,不规则多边形,碱性磷酸酶染色呈阳性且阳性率为90%。

经D-半乳糖处理后,成骨细胞β-半乳糖苷酶衰老染色阳性细胞数较对照组阳性细胞数显著增多(P<0.01),RT-PCR结果表明衰老成骨细胞中mRNAALP,BMP-2的表达较对照组均显著降低(P<0.05)。

人软骨细胞细胞系的名字全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：人软骨细胞细胞系是一种重要的细胞系，在生物医学领域有着广泛的应用。

软骨细胞是一种起支持作用的细胞，主要分布在软骨组织中，为组织提供支撑和保护作用。

软骨组织是一种结缔组织，其主要成分是软骨细胞和胶原蛋白。

软骨细胞细胞系是由软骨细胞培养而成的细胞系，可以用来研究软骨细胞的生物学特性和功能。

人软骨细胞细胞系的命名通常是根据该细胞系的来源和特性来命名的。

人软骨细胞细胞系可以根据其来源的不同来进行分类，比如来自关节软骨、鼻软骨、耳软骨等不同部位的软骨细胞细胞系。

人软骨细胞细胞系的特性和功能也会影响到其命名，可以根据其特定的生物学特性、细胞表型、研究目的等因素来进行命名。

在科学研究和临床应用中，人软骨细胞细胞系的命名非常关键，它不仅可以代表细胞系的来源和特性，还可以方便科研人员和临床医生进行交流和合作。

下面我们就来介绍几个常见的人软骨细胞细胞系的命名：1. HAC - Human Articular ChondrocyteHAC细胞系是来源于关节软骨的人软骨细胞细胞系，它具有良好的增殖能力和胶原蛋白合成能力，被广泛应用于软骨修复和再生医学领域。

HAC细胞系可以用来研究软骨退行性疾病、软骨损伤修复等方面的机制和治疗方法。

除了上述几个常见的人软骨细胞细胞系的命名外，还有许多其他来源和特性不同的人软骨细胞细胞系，它们各自具有独特的特性和应用价值。

随着生物医学研究水平的不断提高和技术的不断创新，人软骨细胞细胞系的命名和分类也会不断更新和完善，为软骨组织再生医学的发展提供更多的选择和可能性。

第二篇示例：人软骨细胞是一种广泛存在于人体软骨组织中的细胞，它们具有保护和支持关节、骨骼和其他结构的重要功能。

在研究软骨细胞时，科学家们通常使用细胞系（cell line）来进行实验，以便进一步了解软骨细胞的生理和病理特点。

在科学研究中，给软骨细胞细胞系取名并非一项轻松的任务。

骨髓活检诊断病理学基本知识介绍一、骨髓组织的结构与功能(图1)(一)支持造血组织的骨组织结构1.骨小梁：骨小梁是骨皮质在松质骨内的延伸部分，即骨小梁与骨皮质相连接，在骨髓腔中呈不规则立体网状结构，如丝瓜络样或海绵状，起支持造血组织的作用。

正常情况下，骨小梁具有一定的长度，它们之间有一定距离。

骨小梁形成后至20岁左右，骨小梁表面被覆一层骨原细胞(osteogenic cell)或成骨细胞(o ast)，因为都在骨髓腔内表面，故通称骨内膜细胞(endosteal cell)。

成骨细胞，排列在骨小梁表面，胞浆突起可与周围的成骨细胞胞浆相接，它是由紧贴骨表面扁平的骨原细胞发育来的(1)。

图1 骨髓组织基本结构图2 骨与骨髓组织结构从左到右：骨外膜、皮质骨、骨小梁及骨髓造血组和血管。

石蜡切片H-E 染色100 ×2.骨原细胞：骨原细胞可认为是松质骨或骨小梁表面处于静止状态的“干细胞”，具有多向分化的潜能，在不同的因子刺激下可转化为不同类型的细胞。

它常常与附近窦内皮相连续，在骨改建过程中它转化为成骨细胞，由扁平状变为立方状。

成骨细胞的作用是分泌骨胶原，合成骨基质中的有机成分(胶原和糖蛋白等)并身包埋在骨基质中。

在20岁以前的骨皮质内侧可见软骨基质(HE染色呈蓝色)及成串排列的软骨细胞，骨内膜面成骨细胞、破骨细胞也较多，软骨基质嗜呈浅灰蓝色。

20岁以后软骨细胞及软骨基质逐渐减少，成熟骨组织逐渐增多，25岁以后均为成熟板层骨(HE染色呈红色)，成骨细胞及破骨细胞也明显减少Islam HHA(1985)认为在适当的造血因子作用下，骨原细胞还可能转化为造血干细胞并发育或演变为某些造血细胞，如可分化发育为粒系造血细胞。

因常骨髓幼稚粒系造血细胞总是靠近骨小梁表面生长的，并将逐步发育成熟的粒细胞推向骨小梁之间中央区。

即越靠近骨小梁粒系细胞越幼稚，越远离骨小系细胞越成熟。

3.破骨细胞：破骨细胞(osteoclast)是一种大型分支状游动细胞，胞体直径可长100μm ，其分支不规则，形状和大小不一，胞核大小也不一致，数目可由6～50个或更多不相连。

新型多级孔生物玻璃对人成骨细胞增殖和分化的促进作用齐佳;孙新华;黄粲;娄译心;汪洋;申玉芹【摘要】目的：探讨一种新型的以地中海海绵为模板合成的多级孔生物玻璃（MBG）对人源性成骨样细胞系MG63增殖和分化的影响，阐明该生物活性玻璃的成骨分化作用。

方法：扫描电镜观察 MBG材料孔架结构；取对数生长期MG63细胞分别给予 MBG浸提液（MBG组）、普通生物玻璃（NBG组）和空白培养基（空白对照组），共培养1、3和5 d。

MTT法检测各组 MG63细胞的增殖率，酶联免疫法检测 MG63细胞中碱性磷酸酶（ALP）的活性，实时定量PCR法检测培养24 h时各组MG63细胞中成骨相关基因Sp7 mRNA及Runx2 mRNA的相对表达水平。

结果：扫描电镜下观察， MBG为多孔支培养架结构；培养1、3和5 d时 MBG组 MG63细胞增殖率高于空白对照组和 NBG组（P＜0.01）；1、3和5 d时， MBG组 MG63细胞中 ALP活性高于空白对照组和NBG组（P＜0.01）；培养24 h 后 MBG 组 MG63细胞中 Sp7 mRNA 相对表达水平高于（P＜0.01），但Runx2 mRNA相对表达水平与空白对照组和 NBG组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

结论：与 NBG比较，该新型 MBG具有细胞毒性小和可促进成骨细胞分化的优势。

%Objective:To investigate the effect of a new type of mesoporous bioactive glass with a hierarchical pore structure on the proliferation and differentiation of osteoblasts,and to clarify its osteogenetic differentiation effect.Methods:The MBG structure was observed by scanning electron microscope (SEM);the MG63 cells at logarithmic growth phase were selected and divided into MBG group (cultured with MBG),NBG group (cultured with NBG)and blank control group (cultured with blank cultrue medium),and they were cultured for 1 ,3 , and 5 d.The proliferation rate of MG63 cells was analyzed by MTT method;enzyme-linked immunoassay method was used to analyze the alkaline phosphates (ALP)activity in MG63 cells;real-time PCR was used to detect the relative expression levels of Sp7 mRNA and Runx2 mRNA in MG63 cells after cultured for 24 h.Results:The SEM results showed that the MBG had porous scaffold structure. Compared with blank control group and NBG group, the proliferation rates of MG63 cells in MBG group at 1, 3, and5 d were significantly increased (P<0.01 ).&nbsp;Compared with blank control group and NBG group,the activities of ALP in the MG63 cells in MBG group at 1,3, 5 d were significantly increased (P<0.01 ).Compared with blank control group and NBG group, the relative expression level of Sp7 mRNA in the MG63 cells in MBG group was significantly increased 24 h after culture (P<0.01),while the relative expression level of Runx2 mRNA in the MG63 cells in MBG group had no significant differences (P > 0.05 ). Conclusion:Compared with NBG, the MBG presents the promotive effect on the proliferation and differentiation of osteoblasts invitro with low cytotoxicity.【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2016(042)006【总页数】5页(P1049-1053)【关键词】生物活性玻璃;成骨细胞;碱性磷酸酶;细胞增殖;分化【作者】齐佳;孙新华;黄粲;娄译心;汪洋;申玉芹【作者单位】吉林大学口腔医院正畸科吉林省牙发育及颌骨重塑与再生重点实验室，吉林长春 130021;吉林大学口腔医院正畸科吉林省牙发育及颌骨重塑与再生重点实验室，吉林长春130021;吉林大学食品科学与工程学院食品质量与安全系，吉林长春 130062;吉林大学口腔医院正畸科吉林省牙发育及颌骨重塑与再生重点实验室，吉林长春 130021;吉林大学口腔医院正畸科吉林省牙发育及颌骨重塑与再生重点实验室，吉林长春 130021;吉林大学口腔医院牙周病科，吉林长春130021【正文语种】中文【中图分类】R318.5生物玻璃(bioactive glass, BG)是一种由多种无机离子组成的具有优良的生物相容性和成骨活性的生物活性材料[1]。

成骨细胞名词解释
成骨细胞，是一种存在于骨骼组织中的专一性细胞，可以分泌成骨基质，并参与到钙的沉积以及重塑骨骼的过程。

这是我们骨骼系统内不可或缺的一部分，它们形态各异，尤其在血供丰富，并且富含神经的骨髓空腔中，以及压力和负荷较大的骨端部位更为常见。

其主要功能有助于骨骼的生成、成熟以及重塑。

首先，成骨细胞具有生成和分泌成骨基质的功能，为骨骼的形成提供物质基础。

其次，它们还可以释放各种蛋白酶、酶类物质，如胶原酶、磷酸酶等，帮助析出矿化物质，使成骨基质矿化，形成成熟的骨骼。

再次，成骨细胞还可以通过对骨基质的重塑，实现骨组织的更新和重塑。

在生理过程中，成骨细胞直接影响骨健康和骨骼的正常功能。

例如，骨质疏松症、骨髓炎等疾病，都与成骨细胞的异常有关。

因此，对于成骨细胞的研究，将有助于我们更深入地了解骨骼疾病的发生机制，并探讨更有效的治疗手段。

总的来说，成骨细胞是骨骼系统中的重要组成部分，负责骨骼的生成、成熟和重塑等多种功能，同时也与一些骨骼疾病的发生有直接关系。

稳定表达野生型p53基因人骨肉瘤细胞株的建立与鉴定雷晓晶;韩鹏飞;吕智【期刊名称】《山西医科大学学报》【年(卷),期】2012(043)003【摘要】目的建立稳定表达外源性野生型p53基因的人骨肉瘤细胞株(u-2 OS),为进一步研究野生型p53基因在骨肉瘤自杀基因治疗中的协同作用提供体外实验模型建立与鉴定的方法. 方法利用分子生物学基因克隆技术将人类野生型p53基因cDNA片段插入到表达载体pIRES-EGFP中,得到重组质粒pIRES-EGFP-p53,并通过PCR、酶切电泳等方法进行质粒鉴定；然后用该重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞,转化菌落经PCR扩增后,将提取的质粒DNA用脂质体介导的转染方法导人U-2OS细胞中,经荧光显微镜下人工筛选得到稳定转染的骨肉瘤细胞系. 结果成功地构建出包含有野生型p53 cDNA片段的重组质粒pIRES-EGFP-p53,通过PCR、酶切电泳等方法鉴定质粒大小和位点均符合实验设计；并将该重组质粒成功导人人骨肉瘤细胞株U-2OS细胞中,经荧光显微镜下人工筛选得到稳定转染的骨肉瘤细胞系,命名为u-2-p53 OS.转染后的骨肉瘤细胞出现散在的凋亡现象. 结论利用基因转染技术,建立了稳定表达外源性野生型p53基因的人骨肉瘤U-2-p53 OS 细胞系,为进一步研究野生型p53基因在骨肉瘤自杀基因治疗中的协同作用奠定了基础.%Objective To establish an in vitro model of human osteosarcoma cell strain( U-2 OS) stably expressing the exogenetic wild-type p53 gene for further studying the role of wild-type p53 gene in osteosarcoma suicide gene therapy. Methods The molecular biology technology was used to insert the human wild-type p53 cDNA fragment into the expression vectorpIRES-EGFP for obtaining the recombinant plasmid pIRES-EGFP-p53, and then it was identified by PCR, enzyme electrophoresis and other methods. Then the recom-binant plasmid was transformed into E. Coli BL21 cells. After the transformed colony was amplified by PCR,the plasmid DNA was trans-fected into U-2 OS cells by liposome-mediated transfection method. Under fluorescence microscopy,the stably transfected osteosarcoma cell line was manually screened. Results A recombinant plasmid pIRES-EGFP-p53 containing wild-type p53 cDNA fragment was successfully constructed. The results of PCR,enzyme electrophoresis and other methods to identify the size and position of plasmid,were consistent with the experimental design. After transfection,the human osteosarcoma cell line was named U-2-p53 OS. The transfected osteosarcoma cells showed weak apoptosis. Conclusion The establishment of human osteosarcoma U-2-p53 OS cell lines by gene transfer technology lay a foundation for the further study of wild-type p53 gene in osteosarcoma suicide gene therapy.【总页数】4页(P188-191)【作者】雷晓晶;韩鹏飞;吕智【作者单位】山西省长治市第二人民医院骨科,长治046010;山西省长治市第二人民医院骨科,长治046010;山西医科大学第二临床医学院骨科【正文语种】中文【中图分类】R738【相关文献】1.稳定过表达人野生型及致病突变A30P、A53Tα-突触核蛋白单克隆SH-SY5Y细胞株的建立 [J], 东惟玲;方琪;张秀艳;赵昀;单立冬;惠国桢2.稳定表达外源野生型p53基因人胆囊癌细胞系的建立和鉴定 [J], 乌新林;施琳;罗力;孙晓风;董培德3.重组野生型p53基因转染人骨肉瘤细胞株体外实验 [J], 朱全胜;王娅兰4.重组野生型p53基因转染人骨肉瘤细胞株体外实验模型的建立 [J], 朱全胜;丘钜世5.外源性野生型p53基因对人骨肉瘤细胞株生物学特性的影响 [J], 朱全胜;丘钜世;梁惠珍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

干细胞诱导、细胞系诱导和原代分离3种提取成骨细胞的方法比较邓享誉;陈胜;邵增务;郑东【摘要】BACKGROUND: Osteoblasts have become a kind of important seed cells in bone tissue engineering. However, it is difficult to harvest osteoblasts, and the purity and calcification ability of osteoblasts isolated by different methods are inconsistent. OBJECTIVE: To compare the purity and calcification ability of osteoblasts induced from mouse bone marrow mesenchymal stem cells, MC3T3 cell lines, and cultured primarily from the neonatal mouse cranium. METHODS: Mouse bone marrow mesenchymal stem cells were isolated by differential adhesion method, and after passaing, passage 3 cells were cultured in osteogenic induction medium for 21 days. MC3T3 cell lines were cultured in osteogenic induction media 1 and 2 for 21 days. Osteoblasts were cultured primarily from neonatal mouse cranium by type Ⅰ coll agenase digestion method. Calcium nodules of osteoblasts obtained by three methods were observed by Alizarin red staining to detect osteogenic activity of cells. RESULTS AND CONCLUSION: (1) There were average 16.3 calcium nodules per low-power field after osteogenic induction of bone marrow mesenchymal stem cells.(2) There were sparsely distributed calcium nodules in MC3T3 cells after induction with osteogenic induction medium 1, accounting for 1.7 calcium nodules per low-power field, while there were dense calcium nodules in MC3T3 cells after induction with osteogenic induction medium 2,accounting for 44.6 calcium nodules per low-power field. There was a significant difference in the calcium nodule formation ability between the two groups (P < 0.01). (3) After primary culture, there was only 0.6 calcium nodule per low-power field. (4) Except for the insignificant difference between osteogenic induction medium 1 and primary culture groups, there were significant differences in pair-wise comparison of any other two groups. Except the insignificant difference between group I of MC3T3 inducing conditional media and primary culture osteoblasts, there were significant differences in the osteogenic ability between groups (P < 0.01). In conclusion, it is a better method to culture MC3T3 cells in osteogenic induction medium 2 containing dexamethasone, because many uncontrol able factors are involved in the isolation and culture of bone marrow mesenchymal stem cells.%背景:成骨细胞是骨组织构建的重要组织细胞之一.成骨细胞取材困难,不同方法获得的成骨细胞纯度及钙化能力不尽相同.目的:比较小鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导、细胞系MC3T3-E1成骨诱导和小鼠颅骨原代细胞培养3种方法获得的成骨细胞的纯度及钙化能力.方法:采用贴壁纯化法分离出小鼠骨髓间充质干细胞,传至3代后用成骨诱导培养基诱导21 d;将前成骨细胞系MC3T3分别用成骨诱导培养液1和成骨诱导培养液2诱导21 d;使用Ⅰ型胶原酶消化法取得乳鼠颅骨原代成骨细胞.对3种方法获得的成骨细胞进行茜素红钙结节染色,观察其成骨特性.结果与结论:①骨髓间充质干细胞诱导后钙结节平均为16.3个/低倍镜视野;②前成骨细胞系MC3T3诱导培养液1组可观察到稀疏的钙结节,平均为1.7个/低倍镜视野,诱导培养液2组可观察到密集的钙结节,平均为44.6个/低倍镜视野,两种诱导液相比钙结节形成能力差异有显著性意义(P<0.01);③原代成骨细胞钙结节平均为0.6个/低倍镜视野;④除MC3T3诱导液1组与原代成骨细胞相比差异无显著性意义外,其余两两相比成骨能力差异均有显著性意义(P<0.01);⑤由于骨髓间充质干细胞分离培养具有更多不可控因素,因此MC3T3细胞用含有地塞米松的诱导培养液2进行成骨诱导方法较好.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2017(021)017【总页数】6页(P2729-2734)【关键词】干细胞;分化;骨髓间充质干细胞;MC3T3;成骨细胞;成骨诱导;钙结节染色;吉姆萨染色;国家自然科学基金【作者】邓享誉;陈胜;邵增务;郑东【作者单位】华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科,湖北省武汉市 430000;华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科,湖北省武汉市 430000;华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科,湖北省武汉市 430000;华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科,湖北省武汉市 430000【正文语种】中文【中图分类】R394.20 引言 Introduction成骨细胞是组织工程的重要种子细胞，很多疾病如骨质疏松、骨缺损、骨折不愈合以及一些成骨相关的肿瘤等，其发生发展过程都与成骨细胞、破骨细胞的生理病理活动密不可分[1-2]。