单子叶植物CRISPR载体的构建资料

目 录 摘 要.................................................................................................................. 1

引言 ...................................................................................................................... 1

1.材料与方法 ..................................................................................................... 4

1.1实验材料.................................................................................................. 4 1.1.1菌株............................................................................................... 4 1.1.2体质粒载....................................................................................... 4 1.1.2酶和试剂....................................................................................... 4 1.1.2.1酶........................................................................................ 4 1.1.2.2抗生素................................................................................ 5 1.1.2.3生化试剂............................................................................ 5 1.2仪器设备.................................................................................................. 5 1.3实验方法.................................................................................................. 5 1.3.1酶切............................................................................................... 5 1.3.2DNA片段补平 .............................................................................. 6 1.3.3大片段去磷酸化............................................................................. 1.3.4乙醇沉淀纯化DNA ..................................................................... 7 1.3.5胶回收........................................................................................... 7 1.3.6连接................................................................................................. 1.3.7KOD plus高保真酶PCR反应 ............................................................... 1.3.8检测PCR反应 ............................................................................. 8 1.3.9Gateway技术 .................................................................................. 1.3.9.1BP反应 ............................................................................... 7 1.3.10大肠杆菌转化............................................................................... 1.3.11质粒提取 ..................................................................................... 9 2.结果与分析...................................................................................................... 12 2.1pWBVec8+Ga-b载体的酶切 ................................................................. 12 2.2载体去磷酸化........................................................................................ 12 2.3载体补平................................................................................................ 12 2.4Cas9质粒的酶切.................................................................................... 13 2.5含有Cas9元件片段的补平.................................................................. 13 2.6Cas9元件片段与载体的连接................................................................ 13 2.7pWBVec8+Ga-b-CRISPR质粒检测 ...................................................... 13 2.8入门载体的构建.................................................................................... 14 3.讨论 ................................................................................................................ 15 参考文献 ........................................................................................................... 17

致谢 .................................................................................................................... 18 1

集胞藻6803基因的克隆及植物转化载体的构建 摘 要： 关键词：Gateway技术

Key words: Gateway technology 引言 蓝藻是地球上最原始、最古老的一群植物，分布很广，主要生活在淡水中，海水中也有。蓝藻它是在地球上几乎还是绝对无氧的还原环境下，第一个利用太阳能将二氧化碳制造成有机物并释放出游离氧气的先驱生物，它对地球上的其他自养生物和异养生物的产生和演化，乃至人类的起源有着无可替代的重大意义。蓝藻藻体有单细胞体、群体和少数丝状体，为原核生物，细胞壁在电镜下分为四层，原生质体由中心质和周质组成，中心质含有DNA，无核仁和核膜结构，称为原核。周质中有很多扁平膜状的光合作用片层，呈条状有规律的排列，分布在其表面的色素有叶绿素a、藻蓝蛋白、藻红蛋白及一些黄色色素。蓝藻的光合作用产物为蓝藻淀粉和蓝藻颗粒体。周质中还有气泡。 蓝藻约有150属，1500种，分布很广，从两极到赤道，从高山到海洋，到处都有它们的踪迹。根据其植物体的形态不同而分为三个纲： 1、色球藻纲：包括所有单细胞体和单细胞群体种类。2、藻殖段纲：包括所有不分枝或假分枝丝状体种类及丝状群体种类。 3、真枝藻纲：包括所有具真分枝的丝状体种类。

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