当前位置：文档之家 › 用于Real-timePCR检测的牛肉组织DNA提取.方法探索

用于Real-timePCR检测的牛肉组织DNA提取.方法探索

  • 格式：pdf
  • 大小：225.43 KB
  • 文档页数：3

ＤＮ 同时 与 二 价金 属 离 子 螯 合 ， 以避 免 Ｄ Ａ 在 Ａ， 可 Ｎ 金 属离 子 的催 化 作 用 下 降解 ， 而 获 得 纯 度较 高 的 从
Ｄ Ａｔ１。 实验 采用 该 法提 取牛 肉组 织 Ｄ Ａ， Ｎ ９０ 本 ，］ Ｎ 并将
光 能 量传 递 技术 应用 于常规 Ｐ Ｒ 中 ， Ｃ 具有 高 特异 性 和 高灵 敏 性 ［５ ３］ － 。提 取 用 于 Ｒ ａ—ｉ Ｃ 检 测 的 ｅｌｔ ｍｅ Ｐ Ｒ Ｄ Ａ 模板 的方 法 很 多 ． 抽 提 法 、 丙 醇 沉 淀 法 以 Ｎ 酚 异 及 甲酰胺 裂 解 法 是 提 取 Ｄ Ａ最 为经 典 的 方 法 ， Ｎ 但 不适 用 于仅 有 少量 提 取 材料 时 。另 外 ， 、 ］ 酚 氯仿 等 有机 溶 剂易 造成 环境 污染 。 损操 作 者 的健康 ］玻 有 。 璃 棒 缠 绕 法 用 盐 酸 胍 裂 解 细胞 ，这种 方 法 简 单 快 速 ， 对 操 作 技 术 要 求 较 高 。 析 法 用 饱 和 氯 化 钠 但 盐 代 替 有 机 溶剂 去 除 蛋 白质 ，所 获 得 的 Ｄ Ａ 可 以满 Ｎ 足 Ｐ Ｒ的要 求 ， 产率 相 对 较 低 ＿。用 Ｃ ｅｅ 一 ０ Ｃ 但 ８ ］ ｈ ｌｘ １ ０
肉类 食 品的安 全 直 接 关 系 到人 类 的健 康 ， 立 建 准确 的 动物 源性 成分 检测 方 法非 常重 要 － 实 时定 ｌ］ ２ 。
量 Ｐ Ｒ（ ｅｌｔ ｏｙ ｅａｅ Ｃ ａ ｅｃｉｎ 将 荧 Ｃ Ｒ ａ ｉ Ｐ ｌｍ ｒｓ ｈ ｉ Ｒ ａｔ ） — ｍｅ ｎ ｏ
有 Ｃ ｅｅ 一 ０ ｈ ｌｘ １ ０悬 浊液 中煮沸 时 ， 胞膜 破 裂 释 放 出 细
第５ １卷 第 ５期
２１ ０ ２年 ３月
湖 北 农 业 科 学
Ｈｕ ｅ Ａ ｒｃ ｌ ｒ ｌ ｃｅ ｃ ｓ ｂ ｉ ｇ ｉ ｕ ｔ ａ Ｓ ｉｎ ｅ ｕ
Ｖｏ ． ｌ Ｎｏ５ １ ５ ．
Ｍａ．２ ２ ｒ ， ０１
用于 Ｒｅｌｔ Ｃ ａ—ｉ Ｐ Ｒ检测 的牛 肉组织 Ｄ Ａ提 取 ｍｅ Ｎ 方法探 索
．
李 璩 ， 陈世界 。陈 洋 ，
（ ． 都 理 工 大 学 材 料 与 化 学化 工学 院绿 色催 化 合 成 研 究 所 ， 都 １ 成 成 ２四 川 省 进 出 口检 验 检 疫局 技术 中 心 ， 都 ． 成 ６ ０４ ） １ ０ １ ６０ ５ ； １ ０ ９
摘 要 ： 用 Ｃ ｅｅ一 ０ 使 ｈｌ １０提 取 牛 肉组 织 Ｄ Ａ， 用 紫 外分 光 光 度 法检 测 所 提 取 的 Ｄ Ａ 浓 度 和 纯 度 ， 果 ｘ Ｎ 并 Ｎ 结 表 明 所提 取 的 Ｄ Ａ Ａ２ ／ 在 １ ６ ～ ． ６之 间 ， 度 较 高 。 ｅｌｔ ｅＰ Ｒ 扩 增提 取 的 Ｄ Ａ 模 板 ， Ｎ ６ Ａ２ ０ ８ ０ ． ２ １２ ６ ８ 纯 Ｒ ａ—ｉ Ｃ ｍ Ｎ
表 现 出较 高的敏 感 性 。 该 Ｄ Ａ 提 取 方 法 效 率 较 高 ， 作 简便 ， 够 获得 较 高质 量 的 Ｄ Ａ， 合 检 疫 部 门 Ｎ 操 能 Ｎ 适
的 快 速检 测 需要
关键 词 ： Ｎ 提 取 ： ｅ ｌｔ ｅ Ｐ Ｒ： 肉组 织 Ｄ Ａ； Ｒ ａ—ｉ Ｃ 牛 ｍ
６ ０ ５ ， ｈｎ ；２Ｓｃ ｕｎ Ｅ ｐ ￣ ａｄ Ｉ ｏ Ｉｓｅｔ ｎ Ｑｉ ａ ｘｏ ｎ ｍｐ￣ ｎｐｃｉ ｕｒｎｉ ｕｅｕ，Ｃ ｅ ｇｕ ６ ０ ４ ， ｈｎ ） ｈ ｏ ｎ ｈ ｎｄ １０ １Ｃ ｉａ
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｃ ｅ ｅ －１ ０ ｗ ｓ ｕ ｅ ｏ ｅ ｔａ ｔ ＤＮＡ ｒ ｍ ｅ ｆ ｔ ｓ ｅ ｈ ｓ ｒ ｃ ： ｈ ｌｘ ０ ａ ｓ ｄ ｔ ｘｒ ｃ ｆｏ ｂ ｅ ｉ ｕ ．Ｔ ｅ ＤＮＡ ａ ｌ ｓ ｗｅ ｅ ｈ ｎ ｔ ｓｅ ｙ ＵＶ ｐ ｃ ｒ ｐ ｏｏ — ｓ ｓ ｍｐ ｅ ｒ ｔｅ ｅ ｔ ｄ ｂ ｓ ｅ ｔｏ ｈ ｔ ｍｅ ｔ ．Ｔ ｅ ｒ ｓ ｌ ｅ ｅ ｌｄ ｔ ａ ０ ／ ０ ｏ ｒ ｙ ｈ ｅ ｕｔ ｒ ｖ ａｅ ｈ ｔ Ａ２ Ａ ２ ｆ ＤＮＡ ｗａ １６ ２ ．２ ．Ｒｅ ｌ ｔ Ｒ ｅ ｕ ｔ ｓ ｏ ｅ ｏ ｄ ｓ ｎ ｉ ｖ ｔ ．Ｔ ｅ ｐ ｏ ｓ ６ ８ ｓ ．６ －１８ ６ ａ－ｉ ｍｅ ＰＣ ｒ ｓ ｌ ｈ ｗ ｄ ｇ ｏ ｅ ｓ ｉｉ ｓ ｔ ｙ ｈ ｒ— ｃ ｓ ｅ ｏ ｅ ｓ ｓ ｆ ＤＮＡ ｘ ｒ ｃｉ ｎ ｅ ｔａ ｔ ｍｅ ｈ ｄ ｏ ｔ ｏ ｗａ ｓ ｓ ｉ ｌ ， ｒ ｐ ｄ ｎ ａ ｌ ｔ ｏ ｔ ｉ ＤＮ ｍｐ ｅ ａ ｉ ａ ｄ ｂ ｅ ｏ ｂ ａｎ Ａ ｗ ｔ ｈ ｇ ｑ ａ ｉ ｉ ｈ ｉｈ ｕ ｌ ｙ， ｗｈ ｃ ｃ ｕ ｄ ｅ ｓ ｄ ｏ ｔ ｉｈ ｏ ｌ ｂ ｕ ｅ ｆ ｒ ｒ ｐ ｄ ｄ ｔ ｃ ｉｎ ｏ ｎ ｍａ ｉｓ ｅ ｂ ｎ ｐ ｃ ｎ ｕ ｒ ｎ ｉ ｅ ｄ ｐ ｒｍｅ ｔ ａ ｉ ｅｅ ｔ ｆａ ｉ ｌｔ ｕ ｙ ｉｓ ｅ ｔａ ｄ ｑ ａａ ｔ ｅ ａｔ ｎ ． ｏ ｓ ｎ Ｋｅ ｒ ｓ ｙ ｗｏ ｄ ：ＤＮＡ ；ｅ ｔａ ｔ ｎ；ｒ ａ — ｉ ＣＲ；ｂ ｅ ｉｓ ｅ ｘ ｒ ｃｉ ｏ ｅ ｌｔ ｍｅ Ｐ ｅ ｆｔ ｕ ｓ
中图分类 号 ： ９ ３ Ｑ ５
文献标识码 ： Ａ
文章编号 ：４ ９ ８ １ （０ ２０ — ０ ８ ０ ０ ３ — １４ ２ １ ５ １２ — ２ Ｊ
Ｅｘ ｏ ａｔｏ ｏ ｔ ａ ｔｏ Ｍ ｅ ｈ ｄ ｆ Ｂｅ ｆ Ｔｉｓ ＇ ｐｌ ｒ ｉ ｎ ｆ Ｅｘ ｒ ｃ ｉ ｎ ｔ ｏ ｏ ｅ ｓ ｕｅ ｓ ＤＮＡ ｏ Ｒｅ ｌ ｉ ｅ ｆｒ ａ －ｔｍ ＰＣＲ ｔ ｃ ｉ ｎ Ｄｅ ｅ ｔｏ
Ｌ ｉｇ， ＨＥ Ｓ ｉｊ ２Ｃ Ｎ Ｙ ｎ ＩＪｎ Ｃ Ｎ ｈ－ｉ ， ＨＥ ａ ｇ ｅ
（ ． ｎ ｔ ｕｅ ｏ ｒｅ ａａｙ ｉ ａ ｄ Ｓ ｎｈ ｓ ，Ｍａｅｉ ｎ ｈ ｍｉ ｎ ｉｅ ｒ ｇ Ｃ ｌ ｇ ｆＣ ｅ ｇ ｕ Ｕｎｖ ｒｉ ｆＴ ｃ ｎ ｌｇ ，Ｃ ｅ ｇ ｕ １ Ｉ ｓ ｔｔ ｆ Ｇ ｅ ｎ Ｃ ｔｌｓ ｎ ｙ ｔｅ ｉ ｉ ｓ ｓ ｔ ａ ａ ｄ Ｃ ｅ ｃ Ｅ ｇｎ ｅ ｎ ｏｌ ｅ ｏ ｈ ｎ ｄ ｉ ｓｔ ｏ ｅ ｈ ｏｏ ｙ ｈ ｎ ｄ ｒ ｌ ｌ ａ ｉ ｅ ｅ ｙ

合集下载

用于牛肉掺杂肉成分检测的荧光PCR方法研究

用于牛肉掺杂肉成分检测的荧光PCR方法研究

□□湛宝萍 新疆昌吉州玛纳斯县动物疾病预 防控制中心
·48· 食品安全导刊 2021年6月
该方法可有效检测出同等质量下三种肉 以牛源性、猪源性、鸭源性基因为靶基 两次实验均值，即牛 d 为 932.42，猪 d
质的 DNA 浓度差异、质量百分比，且 因，设置特异性引物与探针 [1]。
为 156.24，鸭 d 为 11.53。
误差不超过 5%，通过该检测方式的应 用，可对牛肉中掺杂肉成分进行准确有 效检测。
材料与方法
试剂与设备 本实验主要试剂为动 物基因 DNA 提取试剂盒、Tap DNA 聚 合酶、分析纯、引物和探针合成、人 工全基因合成、无水乙醇。仪器为荧光 PCR 仪、高速冷冻离心机、绞肉机、电 泳系统、恒温混匀仪、电子天平。
实验方法 （1）样本制备。本实验采用牛肉、 猪肉和鸭肉，按照不同比例制备样品； （2）DNA 提取。选择 50g 动物肌 肉样本，用绞肉机搅碎后，先将样本选 取特定量放入 2ml 离心管内，将 3.8μL 蛋白酶 K 溶液放入混均仪中，温度设定 66℃，时间为 60min，间隔 15min 取出 颠倒混匀后取出；提炼样本中的上清液， 将其提炼出后沉淀晾干，加入 49μL 超 纯水使其完全溶解，放入 -18℃冰箱内 存储备用。 （3）荧光 PCR 检测。PCR 反应体 系为 35μL，循环参数设置为 95℃，变
实验结果
特异 为检验该实验中设计引物的 特异性，以猪、鸭、牛的 DNA 为模板， 利用引物和探针扩增样本。根据实验结 果可知，牛源性基因特异性引物和探针 与其他物种的 DNA 没有反应，仅与牛 DNA 产生扩散曲线；猪源性基因特异 性与其他 DNA 无反应，仅与猪 DNA 产 生扩散曲线；鸭源性基因特异性与其他 DNA 无反应，仅与鸭 DNA 产生扩散曲线。 由此可见，该实验中引物与采用荧光 PCR 检测五 个样本中不同动物源性成分质量比值含 量，分别从样本中选取 0.04g 样品进行 PCR 检测，获得质量百分比结果如下。 样品一：牛肉质量 0.36，猪肉 0.004， 实际检测质量比值为 87.9% 与 12.1%； 样品二：牛肉质量 0.028，鸭肉 0.012， 实际检测质量比值为 68.2% 与 31.8%； 样品三：牛肉质量 0.026，猪肉 0.014，实 际检测质量比值为 63.5% 与 36.5%；可见， 采用 PCR 检测法可准确测出全部样本中 掺入的猪肉与鸭肉，且比值误差不超过 5%，与掺杂肉成分检测需求相符合。
牛肉检测程序方案

牛肉检测程序方案

牛肉检测程序方案子标题1：引言牛肉是一种常见的肉类食品，但由于某些原因，如商品混淆、食品安全等问题，对牛肉的准确检测变得十分重要。

本文将介绍一种牛肉检测程序方案，能够帮助快速而准确地检测牛肉的真实性。

子标题2：方案概述该方案基于分子生物学技术，通过检测牛肉中特定的DNA序列来判断其真实性。

下面将详细介绍该方案的步骤和所需设备。

子标题3：步骤步骤1：样品准备•从市场或供应商处取得牛肉样品。

•将样品切碎或搅拌，以便充分混合。

步骤2：DNA提取•使用商业化的DNA提取试剂盒，按照说明书的指导进行操作。

•加入样品到提取试剂盒中，进行细胞破碎和DNA释放。

•根据试剂盒的说明书，进行后续的离心、洗涤和洗脱步骤。

•分析提取得到的DNA的浓度和纯度，确保可用于后续的PCR反应。

步骤3：PCR反应•准备PCR反应体系，包括PCR引物、DNA模板、核酸酶、缓冲液和酶切缓冲液等试剂。

•在PCR反应管中按照以下顺序加入试剂：酶切缓冲液、DNA模板、PCR引物、核酸酶、缓冲液和水。

•使用PCR仪进行PCR反应，设置适当的温度和时间，以放大目标基因片段。

步骤4：凝胶电泳•准备凝胶电泳仪及所需试剂：琼脂糖、TAE缓冲液等。

•根据所放大的基因片段大小，选择合适的琼脂糖浓度和电泳条件。

•将PCR产物与DNA分子量标准一同加载到凝胶槽中。

•开始电泳，设置适当的电压和时间。

•观察凝胶结果，根据目标基因片段的大小确定牛肉的真实性。

步骤5：数据分析•根据凝胶电泳结果，分析每个样品中目标基因片段的存在与否。

•将结果与已知的牛肉DNA样品对照进行比较。

•判断样品中是否存在目标基因片段，从而确定牛肉的真实性。

子标题4：所需设备•样品切割器或搅拌器•DNA提取试剂盒•离心机•PCR仪•凝胶电泳仪•电源电缆和连接线•电泳槽和凝胶模具•加热器和恒温水槽•数据分析软件子标题5：总结牛肉检测程序方案基于分子生物学技术，能够快速而准确地检测牛肉的真实性。

利用PCR法检测熟牛肉的肉源性

利用PCR法检测熟牛肉的肉源性

利用PCR法检测熟牛肉的肉源性PCR法是一种分子生物学技术，可用于检测食品中的肉源性。

它可检测DNA的存在和数量，因此可以用于确定食品中的肉源。

在本文中，我们将探讨如何利用PCR法检测熟牛肉的肉源性，以及其在食品安全监管中的重要性。

熟牛肉是一种常见的食品，其质量和安全性对人们的健康至关重要。

近年来，一些食品安全事件引起了人们对熟牛肉的担忧。

一些不法商家可能在熟牛肉中添加不合格或假冒的肉类成分，从而危害消费者的健康。

利用PCR法检测熟牛肉的肉源性成为了保障食品安全的重要手段。

PCR法的原理是通过特定的引物扩增目标DNA序列，然后利用凝胶电泳等方法对扩增产物进行鉴定。

对于熟牛肉的肉源性检测，可以设计特异的引物用于扩增特定物种的DNA序列，然后通过PCR扩增和鉴定的方法来确定熟牛肉中的肉源。

为了利用PCR法检测熟牛肉的肉源性，需要选取合适的DNA标记。

DNA标记是特定物种DNA序列的片段，可以用作PCR扩增的靶标。

通常选择的DNA标记包括线粒体DNA和线粒体基因。

需要设计特异的引物用于PCR扩增。

引物是用于扩增目标DNA序列的短链DNA分子，必须与目标DNA序列的两端互补配对。

通过特异的引物设计，可以确保只有目标物种的DNA序列被扩增，从而实现对熟牛肉的肉源性检测。

进行数据分析和结果判定。

对PCR扩增实验得到的数据进行分析，确定熟牛肉的肉源。

若结果显示熟牛肉中含有其他物种的DNA序列，则可以判定熟牛肉存在肉源混杂或假冒的情况。

利用PCR法检测熟牛肉的肉源性具有许多优点。

PCR法具有高灵敏度和特异性，可以有效地检测食品中极微量的DNA序列。

PCR法的操作简单、快捷，可以在短时间内得到结果。

PCR法能够同时检测多个目标物种的DNA序列，可以应用于多种食品的肉源性检测。

利用PCR法检测熟牛肉的肉源性对于保障食品安全具有重要意义。

通过PCR法的应用，可以有效地检测熟牛肉中的肉源，避免食品中的肉源混杂或假冒现象发生，保障消费者的健康。

组织dna提取实验步骤

组织dna提取实验步骤

组织dna提取实验步骤-概述说明以及解释1.引言1.1 概述DNA提取实验是分子生物学中一项重要的实验操作，通过该实验可以从细胞或组织中提取出DNA分子，为后续的分子生物学研究提供基础材料。

DNA的提取可以应用于许多领域，如基因检测、遗传学研究以及犯罪调查等。

DNA提取实验通常包括几个关键步骤，包括实验准备、样品收集、细胞破碎和DNA提取步骤。

在实验准备阶段，我们需要准备所需的试剂、器材和实验条件等。

样品收集要求从既定的细胞或组织样品中采集到足够的细胞数量以及完整的DNA。

细胞破碎是为了破坏细胞膜，使DNA释放出来。

最后，通过一系列的化学处理和离心等步骤，可以得到纯净的DNA 样品。

DNA提取实验的成功与否对后续实验的结果具有重要影响，因此实验步骤的正确和严谨非常重要。

本文将详细介绍DNA提取实验的步骤及其操作要点，并对实验结果进行分析和讨论。

通过本实验的学习和掌握，读者将能够熟练进行DNA提取实验，并为科研工作和应用研究提供有力的支持。

总之，本文旨在介绍DNA提取实验的步骤和操作要点，帮助读者了解和掌握该实验的基本原理和操作流程，同时也展望了进一步的研究方向。

通过本文的学习，相信读者将能够更好地应用这一技术，为科研工作和生物学领域的发展做出贡献。

文章结构部分的内容如下:1.2 文章结构本文将按照以下结构进行撰写：1. 引言：首先对DNA提取实验的背景和意义进行概述，介绍该实验在生物学研究中的重要性和应用领域。

2. 正文：详细介绍组织DNA提取实验的步骤及各个步骤的操作方法和注意事项。

正文将包括以下几个部分：2.1 实验准备：介绍进行实验所需的器材和试剂准备工作，确保实验的顺利进行。

2.2 样品收集：说明如何选择合适的生物组织样品，并介绍收集样品的方法和注意事项。

2.3 细胞破碎：详细介绍如何破碎细胞以释放DNA，并介绍各种细胞破碎方法的选择和操作步骤。

2.4 DNA提取步骤：逐步介绍DNA提取的各个步骤，包括细胞裂解、蛋白质酶处理、DNA沉淀、洗涤和溶解等过程，重点强调每个步骤的关键操作和注意事项。