实验一植物基因组DNA提取

实验一-DNA提取实验一DNA的小量制备小量法提取植物基因组DNA（CTAB法）1 实验目的：随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用，人们经常需要提取高分子量的植物DNA，用于构建基因文库、基因组southern 分析、酶切及克隆等，这是研究基因结构和功能的重要步骤。

本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA 的原理并掌握CTAB 提取DNA 的方法，进一步了解DNA 的性质。

2 实验原理细胞中的DNA 绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。

提取DNA 时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA 从抽提液中沉淀出来。

DNP 与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。

以NaCl 溶液为例：RNP 在0.14mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP 在其中的溶解度仅为纯水中的1％。

当NaCl 浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP 的溶解则随之不断增加。

当NaCl 浓度大于1mol/L 时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2 倍，因此通常可用1.4mol/L NaCl 提取DNA。

为了得到纯的DNA 制品，可用适量的RNase 处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。

关于植物总DNA 的提取主要有两种方法：1．CTAB 法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB 与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB 能溶解于乙醇中。

植物基因组DNA的提取及分析一、植物基因组DNA提取的步骤：1.样本的准备：从植物中选择健康和新鲜的组织样本，如叶片、茎、根等。

样本选择要避免含有大量的绒毛、叶色不正常等因素的部位。

2.细胞破碎：将样本放入液氮中迅速冷冻，然后用研钵和研钉对样本进行研磨，直至样本完全破碎。

3.细胞裂解：将研磨的样本加入裂解缓冲液，边振荡边研磨使样本均匀混合。

4.蛋白质去除：使用酚/氯仿提取法去除蛋白质。

加入等体积的酚/氯仿/异丙醇混合液，轻轻混合，然后离心离心管以分离上清和下层。

5.DNA沉淀：将上清转移至新的离心管中，加入等体积的冷乙醇进行DNA沉淀。

静置一段时间后，离心离心管以沉淀DNA。

6.DNA洗涤：将DNA沉淀物用70%乙醇洗涤一至两次，去除残留的盐和其他杂质。

7.DNA溶解：用适量的稳定缓冲液溶解DNA，使其达到一定浓度并避免降解。

二、植物基因组DNA分析的方法：1.PCR扩增：PCR技术可以通过放大DNA片段来研究特定基因或DNA 序列。

首先选择适当的引物，然后将DNA样本与引物、核酸酶、dNTPs等反应液混合，进行多次循环的变温扩增反应。

2.聚丙烯酰胺凝胶电泳：将PCR扩增的产物与DNA分子量标记物置于聚丙烯酰胺凝胶中，然后进行电泳。

电泳结束后，通过紫外线照射或染色剂染色，观察电泳图谱，可以得到DNA片段的大小和数量。

3.酶切电泳：使用限制性内切酶切割DNA片段，然后将切割后的DNA 片段进行电泳分析。

根据DNA片段的大小和相对迁移速度，可以进行DNA 的分析和比较。

4.南方杂交：将DNA样本与标记了放射性同位素或荧光染料的DNA探针进行杂交反应。

通过探针与目标DNA片段的互补配对，可以检测目标DNA的存在和数量。

5.DNA测序：通过测序技术获得DNA序列信息，可以揭示基因组的结构和功能。

通过以上方法，我们可以提取和分析植物基因组DNA，更好地了解植物基因组的组成和功能，为植物的遗传改良和研究提供重要的信息。

实验一CTAB法提取植物基因组DNA实验目的:学习从植物组织中(幼叶)提取基因组DNA的基本原理与方法。

实验原理:采用机械研磨的方法破碎植物的组织与细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其就是氧化酶类),其对DNA的抽提产生不利的影响,所以在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。

在液氮中研磨,材料易于破碎,并减少研磨过程中各种酶类的作用。

CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),就是一种阳离子去污剂,可溶解细胞膜并与核酸形成复合物。

该复合物在高盐的溶液中(>0、7mol/L NaCl)就是可溶的,通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀(CTAB能溶于乙醇)即可使核酸分离出来。

CTAB溶液在低于15度时会形成沉淀洗出,因此再将其加入冰冷的植物材料中之前必须预热(65度),且离心温度不要低于15度。

实验步骤:1、取幼嫩的植物叶片(3-5g)剪碎液氮研磨成粉,转入1、5ml离心管内。

加入等体积的65℃预热的DNA提取缓冲液置于65℃的恒温水浴摇床上1-2h(1、5h)。

2、加入等体积的氯仿:异戊醇(24:1),轻轻上下颠倒5分钟,静置5分钟,之后于12000rpm离心10分钟。

3、吸取上层水相,重复步骤2一次。

4、吸取上层水相,加入预冷2/3体积的异丙醇,轻缓颠倒2分钟并置-20℃冰箱内10min,待DNA沉淀后于12000rpm离心收集,收集的DNA于70%乙醇中洗2-3次。

将弃去乙醇风干后的DNA加适量水使其溶解。

5、待DNA完全溶解后加入1-2μl不含RNAaseA(10mg/ml),37℃保温1h以除去DNA中的RNA。

6、于Eppendorf管中加入1mL氯仿:异戊醇(24:1)轻轻上下颠倒10分钟后10000rpm离心10分钟。

7、吸取上层水相并先后加入1/10体积的3M醋酸钠及2倍总体积的预冷的无水乙醇,接着置于-20℃冰箱,10分钟后10000rpm离心10分钟,弃去无水乙醇,加入70％乙醇洗涤2-3次,风干,最后将DNA溶于适量(200-500μl) TE中。

实验一SDS法提取植物基因组DNA【实验目的】学习和掌握常用基因组DNA提取方法。

【实验要求】1.设计所采用实验方案并独立完成所有实验操作；2..获得高纯度、完整DNA样品。

一、原理利用含高浓度SDS的抽提缓冲液在较高温度（55—65℃）条件下裂解植物细胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸，然后提高盐浓度（KAc）和降低温度（冰上保温）的办法沉淀除去蛋白质和多糖（在低温条件下KAc与蛋白质及多糖结合成不溶物），离心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。

二、药品试剂及耗材——液氮——提取缓冲液：500 mmol/L NaCl, 100 mmol/L Tris-HCl ph8, 50 mmol/L EDTA ph8，10 mmol/L 2-巯基乙醇（用前加入） ---- 20% SDS ph7.2 ---- 5 mol/L KAc---- 氯仿：异戊醇（24：1）——异丙醇—— 70%乙醇—— TE缓冲液 :10 mmol/L Tris-HCl,1 mmol/L EDTA,PH8.0 耗材：移液枪，15、2.0、1.5ml离心管，篮、黄、白枪头各四套离心管架4个，离心管盒2个，水浴泡沫8个，研钵及小药勺8套棉手套，薄膜手套，透明胶布，剪刀三、操作程序1. 将1 g植物材料于液氮速冻，然后在研钵中将其磨碎，将粉末转至2 ml离心管中。

2. 加入 1.2 ml预热至65℃的提取缓冲液(3V)，轻缓振荡混匀，加入120μl 20%SDS(达到终浓度2%)，混匀，置65℃水浴中放置30分钟，不时颠倒混匀。

3. 加入0.45 ml 5M的醋酸钾（1/10V），混匀，冰浴20分钟，在10000 rpm离心20 min。

需要的话，Miracloth纱布过滤除去沉淀，取上清液转入另一离心管中。

4. 加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀， 12000 rpm离心15 min。

实验一植物组织DNA的提取与琼脂糖凝胶电泳检测一、实验目的（1）掌握用氯仿-异戊醇-核糖核酸酶法提取植物组织DNA的基本操作。

（2）掌握植物基因组DNA的提取方法。

（3）了解琼脂糖凝胶电泳检测核酸的原理和操作。

二、实验原理利用液氮对植物组织冻干脆化进行研磨，从而破碎细胞。

细胞提取液能溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉淀下来，核裂解液能使细胞核裂解释放DNA。

EDTA 抑制 DNA 酶的活性，氯仿、异戊醇能使蛋白质乳化沉淀去除蛋白，得到的 DNA 溶液经乙醇沉淀。

琼脂糖凝胶电泳是用于分离、鉴定和提纯DNA片段的标准方法。

琼脂糖是一种线性多糖聚合物。

浓度越高，空隙越小，其分辨能力就越强。

DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。

在一定电场强度下，DNA分子的迁移速度与相对分子质量的对数成反比。

溴化乙锭（EB）可嵌入DNA分子碱基对间形成荧光络合物，经紫外线照射后，可分出不同的区带，达到分离的目的。

三、材料、器材及药品1．材料玉米或水稻幼嫩的叶片2．药品十六烷基三乙基溴化铵（CTAB）、山梨醇、三羟甲基氨基甲烷（Tris）、盐酸（HCl）、乙二胺四乙酸（EDTA）、十二烷基肌氨酸钠、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、液氮、氯仿、异戊醇、异丙醇、乙酸钠、无水乙醇、RNA酶（RNase A）、乙酸、硼酸、溴酚蓝、溴化乙锭等。

3．器材研钵、研杵、玻璃棒、50mL离心管、1.5mL离心管、水浴锅、离心机、—20℃冰箱、高压灭菌锅、超净工作台、微量移液器及吸头、电泳仪、电泳槽及灌胶模具等。

4．试剂配制（1）DNA提取缓冲液：0.35mol/L山梨醇，0.1mol/L Tris-HCl（pH7.5）（用前需灭菌）。

（2）核裂解缓冲液：0．2mol/L Tris-HCl（pH7.5），0．05mol/L EDTA，2mol/L NaCl，2%CTAB（用前需灭菌）。

（3）5%十二烷基肌氨酸钠（用前需灭菌）。

实验一DNA的小量制备小量法提取植物基因组DNA（CTAB法）1 实验目的：随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用，人们经常需要提取高分子量的植物DNA，用于构建基因文库、基因组southern 分析、酶切及克隆等，这是研究基因结构和功能的重要步骤。

本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA 的原理并掌握CTAB 提取DNA 的方法，进一步了解DNA 的性质。

2 实验原理细胞中的DNA 绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。

提取DNA 时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA 从抽提液中沉淀出来。

DNP 与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。

以NaCl 溶液为例：RNP 在0.14mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP 在其中的溶解度仅为纯水中的1％。

当NaCl 浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP 的溶解则随之不断增加。

当NaCl 浓度大于1mol/L 时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2 倍，因此通常可用1.4mol/L NaCl 提取DNA。

为了得到纯的DNA 制品，可用适量的RNase 处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。

关于植物总DNA 的提取主要有两种方法：1．CTAB 法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB 与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB 能溶解于乙醇中。

实验一植物基因组DNA提取目的：了解植物细胞的特点，掌握植物基因组DNA分离、纯化的原理。

原理：用植物基因组DNA提取液处理研磨、收集后的样品，提取液中的乙二胺四乙酸二钠（EDTA）能螯合金属离子，以防止破碎细胞的脱氧核糖核酸酶对DNA 的降解作用，而细胞破碎液中的蛋白酶K在37℃温浴过程中还能降解蛋白质，从而减少了蛋白质对DNA的污染。

然后用CTAB处理，在特定的盐浓度下，CTAB 使基因组DNA处于溶解状态，而蛋白质仍为沉淀。

经细胞破碎液获得的DNA 粗提取液再用酚、氯仿、异戊醇处理，其中酚是高效的蛋白变性剂，可进一步将蛋白、脂类和细胞碎片去掉，然后用氯仿、异戊醇处理，一方面可达到去蛋白的目的，另一方面还可去除残留的酚。

一、材料植物的根、茎、叶。

二、设备移液管，高速冷冻离心机，台式离心机，水浴锅。

三、试剂1、CTAB或Nacl溶液：4.1克NaCl溶解于80ml水，缓慢加入10克CTAB，加水至100ml。

2、其它试剂：氯仿、异戊醇（24：1），酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），异丙醇，TE，10%SDS，蛋白酶K（20mg/ml），5mol/LNaCl。

四、操作步骤1、选新鲜无病虫害的叶片用自来水冲洗吸干，用蒸馏水洗两次，然后用超纯水洗一遍，吸干，剪碎称0.5-0.25克。

2、将所取材料放入预冷的研钵（研钵提前要灭菌），研成粉末后置于7ml离心管内（可以换为将样品放置到7ml离心管中800ulＣＴＡＢ后用玻棒捣碎）。

3、加入2.4ml 65℃预热的CTAB，充分混合后65℃水浴90min以上，冷却到室温，加入等体积氯仿异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀4℃离心6000g×10min，取上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇轻轻混匀，-20℃度放置20min，4℃离心5000g×5min，去上清。

4、再沉淀中加入0.6ml的65℃CTAB温育30min，待沉淀充分溶解，加入等体积氯仿异戊醇充分混匀，4℃离心6000g×5min，去上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇，轻轻混匀-20℃放置20min。

植物基因组dna的提取实验报告植物基因组DNA的提取实验报告引言：DNA提取是生物学研究中的基础实验之一，它可以帮助我们了解植物的遗传信息和基因组结构。

本实验旨在通过提取植物基因组DNA，探索DNA的提取方法以及其在植物基因研究中的应用。

材料与方法：1. 实验材料：新鲜植物叶片、细碎器、提取液（含有细胞裂解酶、蛋白酶K和盐酸）、离心管、离心机、冰浴装置、乙醇、磷酸盐缓冲液等。

2. 实验步骤：- 步骤一：取一片新鲜植物叶片，用细碎器将其细碎成细小颗粒。

- 步骤二：将细碎的植物组织转移到离心管中，并加入适量的提取液。

- 步骤三：将离心管放入冰浴装置中，在4℃下反应30分钟。

- 步骤四：离心管中的混合液离心10分钟，将上清液转移到新的离心管中。

- 步骤五：加入等体积的冷乙醇，轻轻摇晃离心管，使DNA沉淀。

- 步骤六：用微量移液器将DNA沉淀转移到新的离心管中。

- 步骤七：加入适量的磷酸盐缓冲液溶解DNA。

结果与讨论：通过上述实验步骤，我们成功地从新鲜植物叶片中提取到了DNA。

下面将对实验结果进行讨论。

首先，实验中使用的提取液含有细胞裂解酶和蛋白酶K。

细胞裂解酶可以破坏细胞膜，使细胞内容物释放出来，而蛋白酶K则能降解蛋白质，避免其对DNA的影响。

这两种酶的作用协同进行，为DNA的提取提供了基础。

其次，实验中的冰浴装置和离心机的使用是为了维持低温和分离混合液中的固体和液体。

低温可以减缓酶的活性，防止DNA的降解。

离心则可以将细胞碎片和其他杂质沉淀下来，使上清液中富含DNA。

最后，实验中的乙醇是用来沉淀DNA的。

加入乙醇后，DNA会与乙醇结合形成白色沉淀物。

通过轻轻摇晃离心管，可以帮助DNA更好地沉淀。

而且，乙醇的加入还能帮助去除杂质，使得提取到的DNA更纯净。

DNA的提取是植物基因研究的重要步骤之一。

通过提取到的DNA，我们可以进行一系列的遗传学研究，如PCR扩增、DNA测序等。

此外，DNA的提取还可以用于植物种质资源的鉴定和保护，以及基因工程的应用等领域。