动物基因组DNA的提取

一、实验目的1. 掌握动物组织基因组DNA提取的操作方法。

2. 理解并应用琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA的方法。

3. 学习DNA纯度与含量的测定方法。

二、实验原理动物组织基因组DNA提取的原理主要是通过破碎细胞膜和核膜，释放出DNA分子，然后通过特定的方法去除杂质，最终获得高纯度的DNA。

实验中，常用的破碎细胞膜和核膜的方法有：- 使用十二烷基磺酸钠（SDS）和蛋白酶K等试剂，使蛋白质变性并溶解细胞膜中的脂质，导致细胞裂解。

- 利用溶菌酶、蜗牛酶等酶类，水解细胞壁和细胞膜，释放DNA。

获得细胞裂解物后，通过加入苯酚和氯仿等有机溶剂，使蛋白质变性并形成有机相和水相，从而分离核酸和蛋白质。

由于DNA不溶于有机溶剂，因此可以通过离心分离获得含有DNA的上清液。

上清液中加入无水乙醇，DNA会从溶液中沉淀出来。

将沉淀的DNA溶解于TE缓冲液中，即可获得高纯度的DNA。

琼脂糖凝胶电泳是检测DNA纯度和大小的重要手段。

DNA分子在琼脂糖凝胶中，在电场的作用下，根据分子大小和所带电荷的不同，在凝胶中移动的速度不同，从而实现分离。

DNA纯度可以通过紫外吸收法测定，根据DNA在260nm处的吸光度值计算DNA的纯度。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：动物肝脏组织样本2. 试剂：- DNA提取试剂盒- 十二烷基磺酸钠（SDS）- 蛋白酶K- 溶菌酶、蜗牛酶- 苯酚、氯仿、异丙醇- 无水乙醇- TE缓冲液- 琼脂糖- 电泳缓冲液- 标准DNA分子量标记物四、实验器材与仪器1. 器材：离心管、移液器、电泳槽、凝胶成像系统、PCR仪等2. 仪器：超净工作台、恒温培养箱、高速离心机、微波炉等五、实验步骤1. 取动物肝脏组织样本，称重后加入适量提取试剂，进行细胞破裂和蛋白质水解。

2. 加入苯酚和氯仿，混合均匀，离心分离，取上清液。

3. 上清液中加入无水乙醇，混合均匀，离心分离，收集沉淀。

4. 将沉淀溶解于TE缓冲液中，即为提取的DNA。

动物基因组DNA的提取1.切取组织5g 左右，用组织粉碎机或研钵将细胞分离。

注：1）少量结缔组织并不影响最后得到的DNA勺质量；2）若标本为血液，则只需肝素抗凝、离心后取白细胞层；3）若为培养的贴壁细胞，则用胰酶消化后收集，PBS洗涤即可。

2.加入5ml DNA提取缓冲液，（10mmol/L Tris-CI ,0.1 mol/L EDTA 0.5% SDS）, 混匀。

注：1）最好先加入Tris-Cl、EDTA再加入SDS 2）最好一边匀浆，一边加入液体，使之充分混匀。

3.加入25ul蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml，混匀，37C温浴过夜。

注：1）致密组织（如小鼠尾巴）可以适当延长蛋白酶的作用时间；2）若组织量很大且组织比较疏松（如动物脾脏），或对所提取的DNA完整性要求不高时，可以不用蛋白酶K,而是剧烈振荡20分钟，将组蛋白与DNA分离。

此法可能会使部分DNA链断裂，但足以达到一般实验要求，并不影响后续处理；3）也可同时加入RNase。

4.加入等体积的酚－氯仿－异戊醇混合物（25:24:1），剧烈振荡10分钟，冰浴10 分钟，2500rpm 10 分钟离心收集水相。

注：不要混带中间蛋白层。

5.加1/10 体积3mol/L NaAc 及 2 倍体积冰预冷的无水乙醇，颠倒混匀。

冰浴1小时，沉淀DNA注：冰浴时间从10分钟到2小时均可，只是时间太短会影响到最后的产量，但不影响质量。

6.用玻棒轻搅钩出DNA沉淀，置于另一离心管中。

注：如果确信没有混入蛋白，也可用离心的方法去除液体，但应在加入蛋白酶K的同时加入RNaseA7.70%^醇洗涤，晾干，加适量TE或灭菌水溶解，-20 C保存。

注：若要长久保存DNA（数年以上），最好将其沉淀以无水乙醇封闭后，置于-80 °C。

动物基因组DNA的提取[实验原理]在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提，可以得到哺乳动构基因组DNA，用此方法得到的DNA长度为100-150 kb，适用于L嘴菌体构建基因组文库和Southern分析。

通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤，以及相对分子质量较大的DNA 的琼脂糖凝胶电泳技术。

[仪器、材料与试剂](一)仪器1.台式离心机2.玻璃匀浆器3．高压灭菌锅4．恒温水浴(二)材料1．1.5mL微量离心管2．微量取样器和吸头3．无菌过滤器(一次性)4．10 mL注射器5．鼠肝6．三羟甲基氨基甲烷(Tris)7.十二烷基硫酸钠(SDS)8．乙二胺四乙酸(EDTA)9．蛋白酶K10．RNA酶11．DNA相对分子质量标准物，DNA／EcoRI+HindⅢ相对分子质量标准物(三)试剂1、1.5 mol／L NaCl2、0.5 mol／L Tris·HCI pH8.03．0.5 mol／L EDTA pH8.04．3 mol／L NaAc pH5.2以上均高压灭菌。

5．蛋白酶K 10mg／mL配好后用一次性过滤器过滤，-20 保存(教师配制)6.组织匀浆液100mmol／LNaCI，10mmol／LTris·HCl(pH 8.0)，0.25mmol／LEDTA(pH8.0)7．酶解液200mmol／LNaCI，20mmol／L Tris·HCI(pH 8．O)，50mmol／LEDTA(PH 8.0)，200~g／mL蛋白酶K，1％SDS8．无DNA酵的RNA酶：将胰RNA酶溶解于10mmol／L Tris.HCI(pH7.5)、15 mmol ／L NaCl溶液中，浓度l0mg／mL，于100℃水浴处理15min，以降解DNA酶，缓慢冷却到室温，-20℃保存9．TE缓冲液：10mmol／LTris·HCl(pH8.0)，25 mmol／LEDTA(pH8.0)10．平衡酚(pH8.0)：氧仿：异戊醇=25：24：1<体积比)11．氧仿：异戊醇=24：l(体积比)12．5xTBE 5．4gTris，2．75g硼酸2mL 0.5mol／L EDTA(pH8.0)，加水到100mL；13．6x上样缓冲液o．25％溴酚蓝，40％(W／V)蔗糖水溶液14．λDNA／EcoRI+／HindⅢ相对分于质量标准物片段(bP)21 227，5148，4 973，4 268，3 530，2 027，1 904，1 584，1 315，947，831，564，125[实验步骤]本实验在无液氮的条件下，铡备鼠肝DNA，与有液氮条件下相比，产量和质量都有所下降。

动物组织DNA提取1样品预处理取新鲜组织25-50mg（组织不宜过多，否则裂解不完全堵塞离心柱），组织剪碎或者切成小块，放入预冷研钵，快速加入液氮用力研磨，或直接放入匀浆器中匀浆。

冻存组织同样使用研钵研磨或匀浆器快速用力研磨或匀浆（冻存组织避免反复冻融，使细胞破碎，内源酶外泄影响基因组DNA提取）2.加入100ulPBS到研磨好的样品中，样品均匀悬浮于PBS3.加600ul的Lysis Buffer，颠倒混匀，如需消化RNA，可加入20ulRNase A，颠倒混匀，室温放置5min4.加入10ul ProteinaseK，混匀，56度水浴45-60min，（颠倒混匀数次，裂解完全液体则清亮粘稠，此步骤可过夜）5 .12000rpm 离心10min，上清转入新的离心管，加800ul无水乙醇，混匀6.液体分次转入离心柱（一次加不完可分次加入），12000rpm 离心1min，弃废液。

7.加入700ulWash bufferA（用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm 离心30s-1min，弃废液。

8. 加入700ulWash bufferB（用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm 离心30s-1min，弃废液。

9.加入500ulWash bufferB，12000rpm 离心30s-1min，弃废液。

10.再次12000rpm 离心2min，将离心柱置于心得离心管中，打开离心柱盖，于室温或37度恒温箱放置5-10min，直至无明显乙醇味。

11.在硅基质膜中央加入50-200ulTEbuffer（事先预热55-65度）置于室温2-5min，12000rpm 离心30s。

12. 离心得到的溶液再次加入离心柱中，室温放置2min，12000rpm 离心2min，所得溶液为纯化后的基因组DNA.纯化效果检测：取2-5ulDNA产物，0.7%agarose电泳检测DNA分子的完整性和紫外分光光度计检测浓度和纯度。

动物组织细胞基因组DNA提取一、实验原理真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组DNA。

真核生物的DNA 是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。

提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。

蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在下保持很高的活性。

在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离，EDTA则抑制细胞中Dnase的活性；而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA 分子完整地分离出来。

二、仪器及试剂1. 仪器：恒温水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计（GeneQuant）、移液器、玻璃匀浆器、离心管（灭菌）、吸头（灭菌）2. 试剂：（1）细胞裂解缓冲液：Tris (pH8.0) 100 mmol/LEDTA (pH 8.0) 500 mmol/LNaCL 20 mmol/LSDS 10%胰RNA酶20ug/ml（2）蛋白酶K：称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌的双蒸水中，?C20℃备用。

（3）TE缓冲液（pH 8.0）：高压灭菌，室温贮存。

（4）酚?氯仿?异戊醇（25:24:1）、（5）异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。

三、操作步骤1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽量剪碎。

置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml 离心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20μl，混匀。

在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。

于台式离心机以12000 rpm离心5min，取上清液入另一离心管中。

基因组DNA的提取一、从哺乳动物组织提取基因组DNA实验材料：液氮、消化缓冲液、PBS（冰冷）、25:24:1酚/氯仿/异戊醇、7.5M乙酸铵、无水乙醇及70%乙醇、0.1%SDS、RNA酶、TE缓冲液（pH8.0）、离心管、研钵、冷冻离心机。

实验步骤：1.取新鲜或冰冻动物组织块，剪成小块。

置于液氮中冻结。

2.将500mg的组织用预冷的研钵和研杵研碎，或用小锤子将其捣为细粉末，每100mg组织用1.2 mL消化缓冲液悬浮。

3.将6ml样品在盖紧的离心管中于50℃摇荡下温育12～18 h。

4.用6ml酚/氯仿/异戊醇抽提样品，1700g离心10 min。

如果样品溶解得不好，再加6ml不含蛋白酶K的消化缓冲液，并重复离心。

如果在界面上有一层厚的白色物质，重复有机抽提，将上层(水溶液)转移至一个新管中。

5.加入6ml 7.5M乙酸铵和24ml 100%乙醇，1700g离心2 min。

6.用70%乙醇洗涤，晾干，沉淀用TE缓冲液重新溶解，使终浓度在约1mg/mL左右。

7.加入0.1%的SDS和1pg/mL无DNA酶的RNA酶，37℃温育1h,以除去残留的RNA.重复步骤 4～5。

二、从植物组织提取基因组DNA实验材料：液氮/干冰、2-巯基乙醇(2-ME)、 CTAB抽提液、CTAB/NaCl溶液、24:1(v/v)氯仿/异戊醇、CTAB沉淀液、高盐TE缓冲液、80%乙醇、TE缓冲液、抗有机溶剂的试管和烧杯、研钵和研杵、粉碎器/匀浆器、捣碎机、恒温金属浴、冷冻离心机。

实验步骤：1.取1g的鲜叶组织，在3.2ml CTAB抽提液中加入0.8ml 2-巯基乙醇，使终浓度达2%(v/v)。

将此溶液及1ml CTAB/NaCl溶液加热至65℃。

2.用液氮(-196℃)或干冰(一78℃)冷却粉碎器/匀浆器，将植物组织粉碎成为细粉，然后将冷冻的组织转移到一个抗有机溶剂的试管或烧杯中。

3.往粉碎的组织中加入预热的2-ME/CTAB,混合使之充分湿润，65℃温育10～60min,不时混匀：4.用4ml的24:1氯仿/异戊醇抽提匀浆液，颠倒使充分混合，于4℃, 7500g离心5 min(对于小样品，在离心机上以10000 r/min离心),回收上(水)相。

哺乳动物组织基因组DNA提取实验报告 doc 实验目的：本实验旨在通过提取哺乳动物组织中的基因组DNA，以用于后续的PCR反应、基因测序、遗传变异研究等。

实验原理：哺乳动物基因组DNA提取的一般步骤为组织破碎、细胞膜破裂、蛋白质和RNA去除、DNA纯化、质量检测和保存。

下面介绍各个步骤的细节：1.组织破碎：将样本室温下用离心管剪碎，然后用离心机离心5min，上清液中的细胞保存备用。

2.细胞膜破裂：加入50-100μL裂解缓冲液（10 mM Tris-HCl，10 mM EDTA，1% SDS），温和地在60℃下振荡消化30-60min，使细胞膜破裂。

为避免破坏DNA，需在缓冲液中添加RNase，以消化RNA。

整个过程中需注意避免搅拌过度或泡沫产生，以便保证DNA不被过度破坏。

3.蛋白质和RNA去除：加入蛋白质沉淀剂如氯化钾或盐酸盐，并冷藏至室温，使DNA 和蛋白质发生相互作用并形成凝胶。

离心15-20min使凝胶完整沉淀至管底。

注：蛋白质缓冲液中含氯化钾或盐酸盐，可使DNA的负电荷阴离子中和而凝聚起来。

此时，可以用琼脂糖凝胶电泳判断DNA的纯度和产量。

还可以用UV法检测DNA的浓度。

4.DNA纯化：将沉淀物用去离子水洗涤一次沉淀，使DNA更为纯洁。

用50%乙醇洗涤一次去除氯离子，离心以去除乙醇。

5.质量检测：用伊曼纹颅（EtBr）染料判断DNA纯度，光谱仪分析DNA浓度和质量。

6.保存：将DNA储存在-20℃的冰箱中，避免在各操作步骤中破坏DNA性状。

实验步骤：材料：1.全身组织2.标签离心管3.10 mM TrisHCl pH8.5，1 mM EDTA溶液5.RNase A（10 mg/ml）6.盐酸盐7.琼脂糖8.去离子水9.乙醇将实验室提供的全身组织（100mg）裹在湿润的巾纸中，然后将其研磨成粉末。

将粉末倒入银离子处理过的离心管中（1.5 mL），加入500μL的10 mM Tris HCl（pH 8.5）溶液中，轻轻振荡使样品完全混合，并置于4℃下保存备用。

动物基因组dna分离的原理动物基因组DNA分离的原理主要涉及到DNA的提取、纯化以及分析等过程。

以下是该过程的详细解释：第一步：DNA的提取动物基因组DNA的提取是DNA分离的第一步。

一般来说，有两种常用的提取方法：有机溶剂法和无机盐法。

有机溶剂法是指使用有机溶剂（如苯酚和氯仿）将DNA从细胞中提取出来。

首先，细胞样品被加入一个细胞裂解缓冲液中，以破坏细胞膜，并释放出DNA 和其他细胞组分。

然后，加入有机溶剂混合液对溶解后的溶液进行提取，使DNA溶解在有机相中。

最后，通过离心加速分离有机相和水相，并将DNA从有机相中重新提取出来。

无机盐法是指使用一系列含有盐的溶液将DNA从细胞中提取出来。

这种方法基于DNA在高盐浓度下与溶液中的阳离子形成离子相关物质可能性较低的原理。

首先，细胞样品被加入盐裂解缓冲液中，经裂解后，DNA与其他细胞组分分离。

然后，高盐缓冲液加入溶液中，通过离心将DNA从其他细胞组分中分离出来。

最后，通过洗涤等步骤去除残余的细胞组分和盐，并得到纯化的DNA 样品。

第二步：DNA纯化DNA纯化是为了去除提取过程中的杂质和其他细胞组分，从而得到高质量的DNA。

DNA纯化可以通过蛋白酶和蛋白质沉淀剂等酶消化、有机物沉淀和电泳等方法进行。

在酶消化方法中，蛋白酶被加入到DNA溶液中，以将DNA附着在蛋白酶或相关酶的组分上。

然后，使用有机物或其他方法除去蛋白酶和相关组分，使DNA 得到纯化。

有机物沉淀方法是通过将DNA与有机溶剂混合并离心沉淀去除其他细胞组分。

加入有机物（如异丙醇、以及其它盐类）的目的是改变DNA与溶液中的盐类和水分子的相互作用，从而促使DNA形成团状并沉淀。

离心作用向下压缩DNA并与有机溶剂一起沉淀，而其他细胞组分不受影响地保留在上层溶液中。

电泳是一种以电场为驱动力的方法，利用DNA的电荷特性将DNA分离出来。

DNA溶液被加载在含有琼脂糖的水平琼脂糖凝胶上。

然后，通过施加电场，DNA的负电荷会使其向正电极迁移。

动物基因组的提取原理
动物基因组的提取原理主要包括以下几个步骤：
1. 细胞溶解：首先需要将动物细胞进行溶解，以释放细胞内的核酸。

常用的方法包括直接破碎细胞壁、低渗透压溶解细胞膜等。

2. 蛋白质降解：细胞溶解后，利用蛋白酶等酶类将细胞内的蛋白质降解。

这样可以使DNA或RNA与蛋白质的结合解开，便于后续步骤的处理。

3. DNA或RNA的纯化：通过加入盐溶液，使DNA或RNA与其他杂质分离。

常用的方法包括酚-氯仿法、离心柱法等。

酚-氯仿法是将DNA或RNA溶液与酚和氯仿相混合后，通过离心使DNA或RNA落入有机相中，将有机相转移至新的离心管中，用异丙醇沉淀，最后用洗涤液洗净获得纯化的DNA或RNA。

4. DNA或RNA的测定和分析：纯化后的DNA或RNA可以通过吸光光度计进行测定，以确定其浓度和纯度。

此外，还可以使用琼脂糖凝胶电泳等方法对DNA 或RNA进行分析，了解其大小、形态、片段等信息。

总的来说，动物基因组的提取过程主要包括细胞溶解、蛋白质降解、DNA或RNA 的纯化以及测定和分析等步骤。

这些步骤的目的是使DNA或RNA从细胞中获得并纯化，以便进行后续的实验操作。

第1篇一、实验目的1. 掌握从动物组织中提取DNA的基本原理和方法。

2. 熟悉实验操作流程，包括组织处理、裂解、纯化、沉淀和溶解等步骤。

3. 学习使用酚-氯仿法提取DNA，并掌握相关试剂和仪器的使用。

二、实验原理动物组织中的DNA主要以染色体的形式存在于细胞核内。

提取DNA的目的是将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，同时保持DNA分子的完整性。

本实验采用酚-氯仿法提取DNA，其原理如下：1. 使用SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K处理组织，破坏细胞膜，使蛋白质变性并溶解。

2. 加入酚和氯仿/异戊醇，通过酚的变性作用和氯仿/异戊醇的相容性，使蛋白质和DNA分离。

3. 通过离心，将蛋白质和杂质与DNA分离。

4. 用乙醇沉淀DNA，得到纯净的DNA。

三、实验材料1. 实验动物：小鼠或鸡2. 试剂：SDS、蛋白酶K、酚、氯仿/异戊醇、乙醇、TE缓冲液、NaCl、EDTA、液氮、离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、吸头等四、实验步骤1. 组织处理- 称取适量动物组织（如肝脏、肌肉等），用液氮迅速冷冻。

- 将冷冻的组织移入研钵中，加入适量的裂解缓冲液（含SDS、蛋白酶K、NaCl、EDTA等），用研钵研磨至匀浆状。

- 将匀浆移入离心管中，加入等体积的酚和氯仿/异戊醇，充分混匀。

- 4℃下静置30分钟，待蛋白质变性沉淀。

2. 离心分离- 将离心管以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。

- 将沉淀中加入适量的TE缓冲液，充分混匀。

- 再次以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。

3. DNA沉淀- 向沉淀中加入适量的乙醇，混匀后静置2-3分钟。

- 将沉淀移入新的离心管中，以12,000 rpm离心5分钟。

- 弃去上清液，用75%乙醇洗涤沉淀1次。

- 将沉淀干燥，加入适量的TE缓冲液溶解。

4. DNA纯化- 将溶解的DNA溶液通过0.22 μm滤膜过滤，去除杂质。

- 使用紫外分光光度计测定DNA浓度。