一个与大鲵蛙病毒(ADRV)感染相关基因—6R的克隆、原核表达及其产物分离

高考生物真题专项解析—转基因生物，从基因工程中溯源

考向一 基因工程

【母题来源】2022年全国乙卷

【母题题文】(2022·全国·高考真题)新冠疫情出现后，病毒核酸检测和疫苗接种在疫情防控中发挥了重要作用。回答下列问题。

(1)新冠病毒是一种RNA病毒，检测新冠病毒RNA(核酸检测)可以采取RT-PCR法。这种方法的基本原理是先以病毒RNA为模板合成cDNA，这一过程需要的酶是______，再通过PCR技术扩增相应的DNA片段。根据检测结果判断被检测者是否感染新冠病毒。

(2)为了确保新冠病毒核酸检测的准确性，在设计PCR引物时必须依据新冠病毒RNA中的______来进行。PCR过程每次循环分为3步，其中温度最低的一步是______。

(3)某人同时进行了新冠病毒核酸检测和抗体检测(检测体内是否有新冠病毒抗体)，若核酸检测结果为阴性而抗体检测结果为阳性，说明______(答出1种情况即可)；若核酸检测和抗体检测结果均为阳性，说明______。

(4)常见的病毒疫苗有灭活疫苗、蛋白疫苗和重组疫苗等。已知某种病毒的特异性蛋白S(具有抗原性)的编码序列(目的基因)。为了制备蛋白疫苗，可以通过基因工程技术获得大量蛋白S。基因工程的基本操作流程是______。

[答案](1)逆转录酶##反转录酶

(2) 特异性核苷酸序列 退火##复性

(3) 曾感染新冠病毒，已康复 已感染新冠病毒，是患者

(4)获取S蛋白基因→构建S蛋白基因与运载体的表达载体→导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定 (检测受体能否产生S蛋白)

【试题解析】

PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术；过程：①高温变性：DNA解旋过程(PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开)；低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。

(1)分析题意可知，新冠病毒的遗传物质是RNA，而RT-PCR法需要先得到cDNA，由RNA到DNA的过程属于逆转录过程，逆转录过程需要的酶是逆转录酶(反转录酶)。

某理工大学《微生物学教程》

课程试卷（含答案）

__________学年第___学期 考试类型：（闭卷）考试

考试时间： 90 分钟 年级专业_____________

学号_____________ 姓名_____________

1、判断题（230分，每题5分）

1. 病毒、类病毒和朊病毒因其是活细胞内寄生物，不能在人工培养基上培养，故属于难养菌。（ ）

答案：错误

解析：不能在人工培养基上生长的微生物称为难养菌，例如类支原体，类立克次氏体和少数寄生真菌等，而病毒不属于难养菌。

2. 在局限转导中，若对双重溶源菌进行诱导，就可获得含50左右的局限转导噬菌体的高频转导裂解物。（ ）[华中农业大学2017研]

答案：正确

解析：

3. 由类脂A、核心多糖和O特异侧链构成的LPS，只存在于G＋细菌的细胞壁上。（ ） 答案：错误

解析：由类脂A、核心多糖和O特异侧链构成的LPS，只存在于G－细菌的细胞壁上。

4. 赤霉菌可以产生植物生长刺激素。（ ）[南开大学2011研]

答案：正确

解析：某些细菌、放线菌、真菌等微生物合成并能刺激植物生长的一类生理活性物质。赤霉素（可由赤霉菌产生）就是由引起水稻恶苗病的藤仓赤霉产生的一种不同类型赤霉素的混合物，是农业上广泛应用的植物生长刺激素，尤其在促进晚稻在寒露来临之前抽穗方面具有明显的作用。

5. 玻璃器材洗净后在急需时可采用高压蒸汽灭菌，而不能用干热灭菌。（ ）

答案：错误

解析：玻璃器材急需时可采用干热灭菌，高压蒸汽灭菌后还需进行烘干才可使用。

6. 处于萌发阶段的芽孢，具有很强的感受态。（ ）

答案：正确

解析：萌发阶段的芽孢需要从外界大量吸收水和营养物质，也易转入外源基因，故其具有很强的感受态。

7. 在微生物遗传实验中所用到的基本培养基就其成分而言，应归属于天然培养基中。（ ） 答案：错误

5期·1559·

黄喉拟水龟Cathelicidin基因克隆及表达分析

魏华1，谭雯予1，吴志刚1，杨祖鹏1，张洪耀1，韩书煜2，施金谷2，

黄德生3，梁静真1*，黄钧1*

（1广西大学动物科学技术学院/广西水生动物病害诊断实验室/广西高校水生生物健康养殖与营养调控重点实验室，广西南宁530004；2广西水产技术推广站，广西南宁530022；3合浦县水产技术推广站，广西北海536199）

摘要：【目的】克隆黄喉拟水龟（Mauremysmutica）Cathelicidin基因（MmCath）并分析其组织表达特征，为深入研

究MmCath基因在黄喉拟水龟先天免疫中的潜在作用提供理论依据。【方法】运用RACE克隆黄喉拟水龟MmCath基因

cDNA序列，利用生物信息学软件进行序列特征分析，并通过实时荧光定量PCR检测MmCath基因在黄喉拟水龟不同

组织中的表达特征及细菌攻毒后的表达情况。【结果】MmCath基因cDNA序列全长777bp，包括63bp的5'非编码区、

483bp的开放阅读框（ORF）和231bp的3'非编码区。MmCath基因编码160个氨基酸残基，包括N端的信号肽区，含

有4个保守半胱氨酸（Cys）残基的Cathelin肽区和C端的成熟肽区，符合Cathelicidins蛋白家族典型特征。MmCath前体

蛋白相对分子质量为17.74kD，理论等电点（pI）为5.27，其二级结构中α-螺旋占31.25%，无规则卷曲占20.63%，β-折叠

占48.12%。黄喉拟水龟MmCath前体蛋白氨基酸序列与西部锦龟（Chrysemyspictabellii）Cathelicidin氨基酸序列的

相似性最高，达80.63%，亲缘关系最近。MmCath基因在黄喉拟水龟的表达具有组织差异性，以脾脏和肝脏中的相对

表达量较高，在表皮、心脏、肾脏、肺脏、脑、肠道和肌肉等组织中的相对表达量较低；嗜水气单胞菌（Aeromonashy-

一株黄喉拟水龟致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及药敏分析

作者：周晗 黄瑜 简纪常 蔡佳 黄浦江

来源：《安徽农业科学》2023年第20期

摘要 ［目的］明確广东省深圳市某养殖场黄喉拟水龟的突发性死亡原因。［方法］采用平板划线分离法对患病龟的肝脏、脾脏等病灶组织分离到一株优势菌，命名为GZW01，对分离菌进行形态特征和生理生化特征的鉴定，利用通用引物27F、1492R对16S rDNA序列扩增，采用DNAMAN及MEGA 6.0等软件进行生物信息学分析该病原菌分类地位。动物回归感染试验验证其致病性，药物敏感试验筛选有效的治疗防控方法。［结果］菌株GZW01为杆状革兰氏阴性菌，其氧化酶活性、葡萄糖酸盐试验、甘露醇、甘露糖、蔗糖、阿拉伯糖、肌醇、覃糖、MR、VP、精氨酸脱羧酶等生理生化鉴定为阳性，可使葡萄糖产气；与NCBI上维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）具有99%同源性；回归感染试验表明菌株GZW01对黄喉拟水龟具有强致病性；药敏结果显示，分离菌株对青霉素G、苯唑西林、氨苄西林、四环素、万古霉素、克林霉素6种药物耐受，对克拉霉素药物中度敏感，对庆大霉素、红霉素、氧氟沙星、氨曲南等28种抗生素高度敏感。［结论］引发深圳市某养殖场黄喉拟水龟的突发性死亡的致病菌为维氏气单胞菌。

关键词 黄喉拟水龟；维氏气单胞菌；分离；鉴定；药敏试验

中图分类号 S917.4 文献标识码 A

文章编号 0517-6611（2023）20-0109-05 doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.20.027

Isolation， Identification and Drug Susceptibility Analysis of a Pathogenic Aeromonas vickerii