脑与神经疾病杂志２００７年第１５卷第４期
实验性大鼠脑出血血肿周围组织胶质细胞
纤维酸性蛋白的动态表达
张彤 刘瑞春 张祥建 ２４３
摘要 目的：动态观察胶质细胞纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）在脑出血动物模型脑组织中的表达及其意义。方法应用
脑立体定向技术，建立大鼠脑出血模型，假手术作为对照组。分别测定脑组织含水量，观察血肿周围ＧＦＡＰ的表达规律。
结果：大鼠脑出血后脑水肿于４８ｈ达到高峰，与对照组比较有统计学意义（Ｐ％０．０５）。脑出血后脑内ＧＦＡＰ阳性细胞数
６ｈ表达最强，在７２ｈ时表达最少，７ｄ的阳性细胞数量比７２ｈ增加（Ｐ％０．０５），但数量少于６ｈ（Ｐ％０．０５）。相应时间点出
血组阳性细胞数与对照组比较，有明显统计学意义，（Ｐ％０．０５）。结论：脑出血后脑内ＧＦＡＰ的表达与脑水肿相关，提
示星形胶质细胞在脑出血的病理变化过程中有重要作用。星形胶质细胞在损伤的修复作用具有二重性，即可以抑制也
可以促进损伤修复。 关键词 脑出血胶质细胞纤维酸性蛋白 星形胶质细胞脑水肿 大鼠
中图分类号：Ｒ７４３．３４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６—３５１Ｘ（２００７）０４—０２４３—０４
Ｔｈｅ ｄｙｎａｍｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｇｌｉａｌ Ｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ Ａｃｉｄｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｐｅｒｉ—ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ ｏｆ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ＺＨＡＮＧ Ｔｏｎｇ，ＬＩＵＲｕｉ—ｃｈｕｎ，ＺＨＡＮＧ Ｘｉａｎｇ—Ｊ Ｊａｎ．
Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄ ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｈｅｂｅｉ ｍｅｄｉｃａｌ ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ ０５００００，Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｈｅ ｐｕｒｐｏｓｅ ｏｆ ｔｈｉｓ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｓ ｔＯ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｇｌｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ ａｃｉｄｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＧＦＡＰ）ｉｎ
・ ８６・ 中国中医药科技２００７年３月第１４卷第２期Ｍａｒ．２００７ Ｖｏ１．１４ Ｎｏ．２ 人参皂甙Ｒｇ 对局灶性脑缺血大鼠 脑组织ＧＦＡＰ表达的影响＊ 崔荣太 蒲传强 王培福刘洁晓 罗 萍 （解放军总医院神经内科・北京１００８５３） 摘要 目的：观察人参皂甙Ｒｇｌ对大鼠局灶性脑缺血梗死区胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）表达的影响。方 法：５２只ｓＤ大鼠采用ｔｏｎｇａ颈外动脉线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型，随机分为人参皂甙Ｒ商药物 治疗组、单纯缺血组及假手术组，药物治疗组、单纯缺血组又分为２４、４８、７２、１６８小时４个时间点，每个时 间点各５只大鼠。观察各时间点大鼠神经功能缺损程度并采用免疫组织化学法观察脑梗死区ＧＦＡＰ的表 达。结果：Ｒｇｌ药物组神经功能评分较缺血组为好（Ｐ＜０．０５），ＧＦＡＰ阳性细胞于脑缺血２４小时后即已出 现，４８、７２、１６８小时大量表达，７２小时为高峰，且药物组较手术组明显增多（Ｐ＜０，０５）。结论：人参皂甙 Ｒ蜀能促进中枢神经系统较高水平的ＧＦＡＰ表达，可能对脑缺血损伤的恢复起重要作用。 主题词脑缺血，中医药疗法 ＠人参皂甙Ｒｇｌ／治疗应用 胶质纤维酸性蛋白 大鼠 胶质纤维酸性蛋白（ ａｌ ｎｂｆｉＵａｒｙ ａｃｉｄｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＡＰ）是脑 内成熟星形细胞的主要中间丝蛋白，是星形胶质细胞的一种 标志蛋白，在星形细胞中有丰富的、唯一的表达。脑损伤后 脑组织星形胶质细胞功能异常活跃，可通过分泌生长因子、 细胞因子、识别分子等修复损伤的神经元，促进轴突再生及 诱导再生神经元的迁移，从而恢复神经系统正常功能…。人 参皂甙ＲｇＩ（ｇ／ｎｓｅｎｏｓ／ｄｅ，ＲｇＩ）是人参（Ｐａｎａｘ ｇ／ｎｓｅｎｇ Ｃ，Ａ． Ｍｅｙｅｒ）的一种活性成分，在增强记忆、抗衰老及增强免疫 作用方面的研究已取得了一定进展Ｌ２“ｊ，已有研究表明其对 心肌缺血损伤有保护作用 Ｊ，但人参皂甙Ｒ 对局灶性脑缺 血的神经保护作用，特别是对星形胶质细胞形态、数量和分 布方面变化的影响研究较少。本实验用线栓法制作大鼠大脑 中动脉闭塞（ＭＣＡＯ）模型，观察人参皂甙Ｒ岛对脑缺血的 保护作用及运用免疫组化方法观察人参皂甙Ｒ 对脑缺血区 ＧＦＡＰ表达的影响，探讨人参皂甙Ｒ 的脑保护作用机制。 １材料和方法 １、１主要试剂一抗为兔抗大鼠胶质纤维酸性蛋白抗体： Ｓｉ￣Ｔｎａ。ＳＡＢＣ试剂盒：武汉博士德生物工程有限公司。人参 皂甙Ｒｇ，：中国药品生物制品检定所，批号：１１０７０３—２００３２２。 １，２ ＭＣＡＯ模型的制备采用Ｌｏｎｇａ线栓法制备大鼠ＭＣＡＯ 模型＿６ Ｊ。假手术（Ｓｈａｍ）组：只插线ｌＯｍｍ左右，不行其它条 件干预。 １、３实验动物分组及给药健康雄性Ｓｐｒａｇｕｅ—Ｄａｗｌｅｙ大鼠 ５２只，体重（２５０±２０）ｇ，解放军总医院动物实验中心提供。 动物随机分为单纯缺血组（２０只）、人参皂甙Ｒ岛药物治疗组 （２０只）、假手术（Ｓｈａｍ）组（１２只）。其中药物组和缺血组又 分为２４、４８、７２、１６８小时４个时间点，每个时间点５只大鼠， 并在此４个时间点分别进行神经功能评估及脑组织免疫组 ＊北京市自然科学基金资助Ｎｏ．７０５２０６２ 化观察。给药组：术前５天腹腔注射人参皂甙Ｒｇ，（２０ｍｇ／ ｌ（ｇ），每日２次。对照组：注射相同剂量的生理盐水，方法同 给药组。 １．４神经功能评定 由其他研究人员按双盲原则进行神经 功能缺损程度评分。神经缺损评分按Ｈａｍ等【７ 制定标准：０ 分，无神经功能缺损症状；１分，轻微神经功能缺损，不能完 全伸展左侧前爪；２分，中度局灶性神经功能缺损，向左侧转 圈；３分，重度局灶性神经功能缺损，向左侧倾倒或无自发活 动；４分，不能自发行走，意识水平下降。 １．５ ＧＦＡＰ检测ＳＡＢＣ免疫组化法。 １．６图像分析及统计学处理切片在统一放大倍数（１０ｘ １０）下，随机选１Ｏ个视野，输入图像分析系统，记取平均阳性 细胞数。所得数据用ＳＰＳＳ软件进行统计学处理。所有计量 资料数据用ｘ±ｓ表示，两两比较用ｔ检验。 ２结果 ２．１大鼠脑缺血后神经功能评分见附表。从表中可见． 预先用人参皂甙ＲｇＩ处理后，神经功能缺损评分降低，与同 时间段缺血组比较差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结果表明人参 皂甙Ｒ蜀可改善脑缺血所致的神经缺损症状。 ２．２各组大鼠脑梗死后ＧＦＡＰ的表达情况 假手术组脑组 织未见ＧＦＡＰ阳性细胞表达。脑缺血２４小时时脑梗死区 ＧＦＡＰ阳性细胞出现，密度相对稀少，胞体相对较小，突起分 支较细、少，染色相对较浅，在灰质均匀分布。脑缺血４８小 Ｏ￣ＧＶＡＰ阳性细胞数开始增多，脑缺血７２小时，脑梗死区 ＧＦＡＰ阳性细胞数达高峰，ＧＦＡＰ阳性细胞数与其它时间点相 比有明显差别（Ｐ＜０．０５）。脑缺血１６８小时ＧＦＡＰ阳性细胞 仍大量存在，较７２小时略有减少。预先用人参皂甙Ｒ 处 理后，ＧＦＡＰ阳性细胞数增多，以４８、７２和１６８小时明显（Ｐ＜ ０．０５），缺血区ＧＦＡＰ阳性细胞染色加深，突起变长、增粗和增 多，分支显著增多，以海马区更为明显（见图１
对氧磷酶3(PON3)ELISA试剂盒说明书
本试剂仅供研究使用 标本：体液
对氧磷酶3(PON3)ELISA试剂盒说明书试验原理：
BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将BFGF和生物素标记的抗体同时温育。人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。
对氧磷酶3(PON3)ELISA试剂盒说明书自备材料
1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
对氧磷酶3(PON3)ELISA试剂盒说明书操作注意事项
1．试剂应按标签储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9．按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
对氧磷酶3(PON3)ELISA试剂盒说明书样品收集、处理及保存方法
广东医学２ｏｏ８年１０月第２９卷第１０期 ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉ ＪｏｕｒｎＭ Ｑｃｃ． ８，Ｖｏ１． ！！ ！． ．１７１７．
血清胶质纤维酸性蛋白在脑梗死患者并发ＨＩ及
ＭＯＤＳ中的临床意义
詹海涛。 陈钢
佛山科学技术学院医学院（广东佛山５２８０００）； 广东省佛山市第一人民医院（５２８０００）
【摘要】 目的探讨血清胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）含量对诊断急性血栓形成性脑梗死（ＡＣＩ）及预测并发
出血性脑梗死（ＨＩ）、多脏器功能障碍（ＭＯＤＳ）的临床意义。方法应用酶联免疫吸附双抗体夹心法（ＥＨＳＡ），定
量分析７２例ＡＣＩ患者及５０例正常人血清ＧＦＡＰ含量；ＡＣＩ后２４ ｈ内ＧＦＡＰ含量＜１．２０ ｇ／Ｌ者为观察Ｉ组，
ＧＦＡＰ含量≥１，２０ ｇ／Ｌ者为观察Ⅱ组，对比分析两个观察组ＨＩ及ＭＯＤＳ发生率。结果病后４８ ｈ内及第５天，
两个观察组血清ＧＦＡＰ含量明显高于正常人（Ｐ＜０．０１），第８天，观察Ｉ组ＧＦＡＰ含量趋于正常（Ｐ＞０．０５），观察
Ⅱ组ＧＦＡＰ含量持续增高（Ｐ＜０．０１）。ＡＣＩ患者血清ＧＦＡＰ的含量越高，ＨＩ及ＭＯＤＳ的发生率越高（Ｐ＜０．０１）。
结论血清ＧＦＡＰ含量增高可视为ＡＣＩ急性期特异性生化检测标志物；ＡＣＩ患者血清ＧＦＡＰ含量与ＨＩ及Ｍ０Ｄｓ
发生率呈一致性增高，提示检测血清ＧＦＡＰ可早期诊断ＡＣＩ，可为重症ＡＣＩ患者的病情及预后评估提供依据。
【关键词】 胶质纤维酸性蛋白 脑梗塞 多脏器功能障碍
寻找一种非侵入性、快速准确诊断急性血栓形成
性脑梗死（ＡＣＩ），并预测损害程度及预后的生化检测
指标，是完善临床诊治ＡＣＩ的有效途径。胶质纤维酸
性蛋白（ｇｌｉＭ ｆｉｂｆｉｌｌ￣ａｃｉｄｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＡＰ）是星形胶
质细胞的特异性生化标志物，动物实验发现ＧＦＡＰ与
ＡＣＩ有关，目前相关的临床研究仍较少。本研究对比
分析７２例ＡＣＩ患者及５０例正常人血清ＧＦＡＰ含量，探
