酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(PNP比色法)

高效氯氰菊酯对草鱼血清和脾脏酸性磷酸酶活性的影响

摘要：研究了暴露在不同浓度高效氯氰菊酯下草鱼（Ctenopharyngodon

idellas）血清和脾脏中酸性磷酸酶（ACP）的活性变化。将高效氯氰菊酯浓度设5组，包括1个对照组（0 μg/L）和4个处理组（0.5、1.0、3.0、5.0 μg/L），每组分别于暴露1、5、12 d时取样，测定血清和脾脏ACP的活性。结果显示，暴露1 d时，血清ACP活性各处理组显著下降；脾脏ACP活性0.5 μg/L组和1.0 μg/L组显著升高，3.0 μg/L组和5.0 μg/L组显著下降。暴露5 d时，血清ACP活性1.0

μg/L组显著上升，3.0 μg/L组和5.0 μg/L组显著下降；脾脏ACP活性1.0、3.0和 5.0 μg/L组显著下降。暴露12 d时，血清ACP活性1.0、3.0和5.0 μg/L组显著下降；脾脏ACP活性各处理组均显著下降。ACP活性的变化反映了高效氯氰菊酯能够影响鱼体的代谢平衡，对鱼体具有毒害作用；同时，血清和脾脏的ACP活性对高效氯氰菊酯早期污染的敏感性可以作为监测水体中此类化学品污染的一个特异性标志物。

关键词：高效氯氰菊酯；草鱼（Ctenopharyngodon idellas）；酸性磷酸酶；血清；脾脏

菊酯类农药因较有机磷、有机氯农药对哺乳动物和鸟类的毒性低，且具有广谱、高效的优点，而被广泛应用于农业、林业和家庭病虫害控制中；在水产养殖方面也被用来杀灭鱼体表面的甲壳类寄生虫和控制有害水生昆虫的过度繁殖[1]。但是，菊酯类农药的过量使用和随意排放，可能会被冲刷到附近的水体中，进而对水环境造成污染。即使在非常低的浓度下，菊酯类农药也会对淡水鱼类和其他非靶标水生生物产生极大的毒害[2]。因而，评估菊酯类农药对非靶标水生生物的毒性作用成为研究的热点[3，4]。酸性磷酸酶（Acid phosphatase，ACP）（EC 3.1.3.2）是一种对鱼类的生理代谢有着重要影响的酶，通过研究高效氯氰菊酯对鱼类ACP活性的影响，有助于揭示鱼体对菊酯类农药的响应机制。国外在高效氯氰菊酯对鱼类代谢的影响方面开展了大量研究[5，6]，而关于鱼类体内ACP的研究则较少，国内在这方面更是鲜见报道。草鱼（Ctenopharyngodon idellas）是我国主要的淡水养殖鱼类之一，具有重要的经济价值。因此，探讨高效氯氰菊酯对草鱼ACP活性的影响，可以为水环境质量监测和渔业生产的健康发展提供参考。

感染白斑综合征病毒的斑节对虾免疫酶变化特征

摘要:研究了斑节对虾(Penaeus monodon)感染白斑综合征病毒(White spot

syndrome virus,WSSV)后的发病情况和4种免疫酶活性的变化特征｡通过对斑节对虾进行WSSV急性攻毒试验,发现在感染50 h左右出现死亡高峰,感染60 h后大部分死亡虾出现明显的白斑｡血液酚氧化物酶(PO)､过氧化物酶(POD)､超氧化物歧化酶(SOD)､酸性磷酸酶(ACP)活性在感染WSSV后都呈现先降低再升高再降低的趋势,并在感染后60 h左右,活性达到最大值｡肝脏､肌肉组织中的ACP､SOD活性变化规律与其在血液中的变化类似,肝脏中的ACP､SOD活性明显高于肌肉组织中的活性｡

关键词:斑节对虾;白斑综合征病毒(WSSV);免疫酶

Characteristics of Immuno-enzymes of Penaeus monodon Infected with White Spot

Syndrome Virus

Abstract: The mortality of WSSV-infected Penaeus monodon, and the enzyme

avtivity for four immuno-enzymes were investigated. It found that the highest shrimp

mortality appeared around 50 hours, and the white spots occurred on most of the died

shrimps around 60 hours after WSSV infected. The activity of

phenoloxidase(PO),peroxidase(POD), superoxide dismutase (SOD) and acid

第1页共3页酸性磷酸酶染色液（铅法）说明书货号：G1490规格：2×50ml有效期：6个月产品内容：规格名称G14902×50mlStorage试剂(A):ACP孵育液50ml4℃避光试剂(B):ACP硫化液2×1mlRT避光试剂(C):ACP对照液10ml4℃避光产品简介：酸性磷酸酶（Acidphosphatase，ACP）分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5-5.5。酸性磷酸酶染色液以β-甘油磷酸钠为底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸盐，遇到铅离子则生成磷酸铅沉淀，再被S2+置换，最终生成硫化铅棕黑色沉淀。酸性磷酸酶的一般抑制剂为氟化物、磷酸根离子。对某些酸性磷酸酶来讲，Cu2+、酒石酸根离子和四氯化碳以及醛类也都是抑制剂，Mn2+为该酶的激活剂。冰冻切片和石蜡切片均可，但多用冰冻切片。临床上，改染色法对前列腺癌和其他脏器的转移性前列腺癌呈强阳性反应，霍奇金淋巴瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、舌表皮性癌、多核巨细胞瘤的瘤细胞质也呈强阳性反应，Ewing肉瘤、成骨肉瘤等呈阴性反应。自备材料：蒸馏水、恒温箱、封片剂操作步骤（仅供参考）：（一）冰冻切片染色1、冰冻切片至蒸馏水。2、切片入ACP孵育液，置于37℃温箱，浸染15-60min。

第2页共3页3、入37℃蒸馏水中洗2次，每次1min，以去除未被吸附的铅。4、在上述过程中配制ALP硫化工作液，即取试剂（B）用蒸馏水稀释50倍，即为ALP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育1-2min。5、流水冲洗3-5min，蒸馏水洗。6、（可选）核固红复染细胞核，蒸馏水洗。甘油明胶封片。（二）石蜡切片染色1、石蜡切片脱蜡至蒸馏水。2、切片入ACP孵育液，置于37℃温箱，浸染4-12h，可以延长至24h。3、入37℃蒸馏水中洗2次，每次1min，以去除未被吸附的铅。4、在上述过程中配制ALP硫化工作液，即取试剂（B）用蒸馏水稀释50倍，即为ALP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育1-2min。5、流水冲洗3-5min，蒸馏水洗。6、（可选）核固红复染细胞核，蒸馏水洗。甘油明胶封片。染色结果：酶活性部位黑色硫化铅沉淀细胞核根据复染液不同而不同阴性对照：（可选）将切片置于试剂（C）-ACP对照液中，室温1-2h孵育，其余步骤相同，结果为阴性。注意事项：1、ACP孵育液、ACP硫化液易失效，最好分成小分储存。ACP硫化液具有腐蚀性。2、对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。3、样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。4、组织固定需在4℃冰箱进行，时间不宜超过24h，否则酶活性会减弱或消失。5、组织在石蜡包埋是，温度不宜高于56℃。应使用熔点为52-54℃的石蜡进行浸蜡，浸蜡时间要短，否则

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酸性磷酸酶的检测实验报告

一． 实验目的

1. 以Gomori铅法为例学习细胞化学方法检测水解酶的原理和方法。

2. 掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。

3. 观察巨噬细胞内酸性磷酸酶的分布进一步了解溶酶体的结构和功能。

二． 实验原理

1. 向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤，排异反应使小鼠产生大量巨噬细胞，且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤后不会对细胞造成伤害，反而被“喂养”。连续多天注射使小鼠腹腔内聚集大量巨噬细胞。

2. 由于无法直接观察酸性磷酸酶的分布，可以通过检测酸性磷酸酶代谢产物的方法间接观察。酸性磷酸酶催化反应。再通过福尔马林-钙固定，再通过显色与染色过程。在光镜油镜下可观察到黑色颗粒，也就是硫化铅沉淀，从而观测酸性磷酸酶在巨噬细胞中的分布。

三． 实验材料及设备

1. 实验材料： 2 / 9

a) 连续三天向腹腔中注射1mL6%淀粉肉汤的小鼠一只

b) 酸性磷酸酶工作液，

c) 福尔马林-钙固定液

d) 2%硫化铵溶液

e) 0.1%沙黄染液

2. 实验设备：

a) 普通光学显微镜

b) 载玻片若干

c) 4摄氏度冷藏柜

d) 染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等 3 / 9

四． 实验方法及步骤

（一）实验组：

1. 巨噬细胞采集与附着

a) 配置6%淀粉肉汤，连续三天向小鼠腹腔内注射，注意不要伤害小鼠器官。

b) 用脊髓脱臼法快速处死小鼠。在白瓷板上用剪刀打开小鼠腹腔，用适量生理盐水冲洗小鼠内脏。

c) 用胶头滴管吸取生理盐水冲洗液，滴于洁净的载玻片上，注意不要涂抹，每个载玻片各滴两滴，注意做好编号与正反标记。

d) 将载玻片置于有U形玻璃支架的大型培养皿中。培养皿在4摄氏度的冷藏柜中放置30min。用吸水纸吸去多余生理盐水，注意不要让细胞完全干燥。

2. 酶的反应

将玻片置于37摄氏度的酸性磷酸酶工作液中，温浴30min。生理盐水小心冲洗，吸去多余水分。