红细胞裂解液.pdf
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ACK 红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)简介:在生物科研领域,经常需要去除红细胞。
去除红细胞的方法有多种,如ACK Lysis Buffer 、Tris-氯化铵红细胞裂解液、Gey's Lysis Buffer 。
ACK 红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)也称ACK Lysis Buffer ,是一种从人、鼠或其他哺乳动物等体内的组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液,其主要有效成分为NH 4Cl 。
本裂解液经过滤除菌,经过ACK Lysis Buffer 处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的细胞培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。
组成:操作步骤(仅供参考):(一)组织细胞样本的常规操作1、制备细胞悬液: 新鲜组织经过胰蛋白酶或胶原酶等消化处理,通过适当方法制备成细胞悬液,离心弃上清。
2、裂解: 加入3~5倍细胞沉淀体积的ACK Lysis Buffer ,轻柔吹打混匀裂解。
3、离心5min ,弃红色上清。
4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3各一次。
5、洗涤:根据实验要求加入适量PBS 、HBSS 、生理盐水或无血清培养液,轻柔混匀重悬沉淀。
4℃离心,弃上清,该离心步骤亦可在室温下操作。
6、如有必要,重复上述步骤5一次,共洗涤1~2次。
7、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀,进行计数、培养等后续实验。
(二)组织细胞样本的快速操作(无需洗涤)1、制备细胞悬液:新鲜组织经过胰蛋白酶或胶原酶等消化处理,通过适当方法制备成细胞悬液,离心弃上清。
2、裂解:加入细胞5倍细胞沉淀体积的ACK Lysis Buffer ,轻柔吹打混匀裂解。
3、加入PBS 、HBSS 、生理盐水或无血清培养液,轻柔混匀。
4、离心,弃红色上清,本离心步骤亦可在室温下操作。
5、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2~4各一次。
红细胞裂解液(RBC Lysis Buffer ,10×)简介: 红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)是一种从人、鼠或其他哺乳动物等体内的组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液,其主要有效成分为NH 4Cl 。
RBC Lysis Buffer(10×)配方经过优化不同于ACK Lysis Buffer ,在裂解无核红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(Lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。
使用1×RBC Lysis Buffer 处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的细胞培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测,尤其适用于流式细胞检测或需要高浓度裂解液的情况。
组成:操作步骤(仅供参考):注意:绝大多数情况下,应使用无菌去离子水稀释RBC Lysis Buffer(10×)至1×使用,流式细胞术除外。
(一)组织细胞样本的常规操作1、制备细胞悬液,离心弃上清。
2、裂解: 加入1×RBC Lysis Buffer ,轻柔吹打混匀,裂解。
本操作步骤在4℃条件下操作更佳,亦可在室温下操作。
3、离心: 4℃离心,弃红色上清。
本步骤亦可在室温下操作。
4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3各一次。
5、洗涤:根据实验要求加入适量PBS 、HBSS 、生理盐水或无血清培养液,轻柔混匀重悬沉淀。
4℃,离心,弃上清,该离心步骤亦可在室温下操作。
6、如有必要,重复上述步骤5一次,共洗涤1~2次。
7、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀,进行计数、培养等后续实验。
(二)组织细胞样本的快速操作(无需洗涤)1、制备细胞悬液:新鲜组织经胰蛋白酶或胶原酶等消化处理,制备细胞悬液,离心弃上清。
2、裂解:加入1×RBC Lysis Buffer ,轻柔吹打混匀,裂解。
本操作步骤在4℃条件下操作更佳,亦可在室温下操作。
红细胞裂解液的配方红细胞裂解液是一种可以用于制备单细胞悬液的液体,是用于培养细胞、测定细胞特性或进行免疫学和细胞生物学分析时必不可少的。
红细胞裂解液的配方可能会随着应用不同而有所不同,一般来说,红细胞裂解液应该包含两种主要成分:溶剂和除去红细胞壁的酶。
第一步,选择溶剂。
红细胞裂解液的溶剂有多种,如水、生理盐水、PBS(phosphate buffered saline)、Tris-HCl(tris hydrochloric acid)及EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid)等。
其中,生理盐水和PBS是最常用的,因为它们能够保持细胞环境的稳定性,PBS也是大多数细胞生物学实验中最常用的溶剂之一,而EDTA是一种有助于去除红细胞壁的溶剂。
第二步,选择酶。
红细胞裂解液中的酶一般是由trypsin或RNase组成,这两种酶都有助于去除红细胞壁,以便使细胞可以被溶解。
有些研究者会添加DNAse (deoxyribonuclease),这种酶可以帮助降解DNA,从而减少胎牛血清白蛋白对细胞的污染。
第三步,添加抗凝剂。
抗凝剂可以防止细胞在悬液中凝结,常用的抗凝剂有EDTA、heparin、citrate等。
抗凝剂的用量一般以0.1%~0.5%的浓度添加到溶剂中。
第四步,添加抗生素。
抗生素可以有效预防致病微生物的污染,常用的抗生素有penicillin/streptomycin、gentamicin、amphotericin B等,一般以100U/ml的浓度添加到溶剂中,以防止污染。
最后,将上述所有成分添加到一定的比例中,并搅拌均匀,就可以制备出一种完整的红细胞裂解液了。
通常情况下,红细胞裂解液的配方可以根据具体的实验要求而有所不同,可根据实验的具体要求调整添加的各种成分的比例,以满足实验的要求。
总之,红细胞裂解液的配方应当包括溶剂、除去红细胞壁的酶、抗凝剂和抗生素,经过调整添加各种成分的比例,即可制备出一种完整的红细胞裂解液。
红细胞裂解液产品简介:碧云天生产的红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer),也称ACK Lysis Buffer,是一种用于从人或鼠等的血液或组织样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。
本裂解液经过优化配方,在裂解红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。
本裂解液的主要有效成分为氯化铵。
本裂解液不适用于有细胞核红细胞的裂解,例如鸟或禽类的红细胞。
本裂解液经过无菌处理,处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的原代培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。
保存条件:4℃保存,一年有效。
室温保存, 3个月有效。
注意事项:本裂解液为无菌产品,请注意保持无菌,使用本产品时宜在超净工作台内进行。
如果经过红细胞裂解液处理后的样品后续用于总RNA的提取,在处理细胞时不必使用经过DEPC处理过的溶液。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:对于组织细胞样品:1.新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清。
2.加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。
例如细胞沉淀的体积为1ml,则加入3-5ml的红细胞裂解液。
本步骤在室温或4度操作均可。
3.400-500g离心5分钟,弃红色上清。
4℃离心效果更佳。
4.如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。
通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5.洗涤1-2次:加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500g离心2-3分钟,弃上清。
可再重复1次,共洗涤1-2次。
洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。
4℃离心效果更佳。
6.根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤:1.新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清。