红细胞裂解液的配制

红细胞裂解液(RBC Lysis Buffer ,10×)简介： 红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)是一种从人、鼠或其他哺乳动物等体内的组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液，其主要有效成分为NH 4Cl 。

RBC Lysis Buffer(10×)配方经过优化不同于ACK Lysis Buffer ，在裂解无核红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(Lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。

使用1×RBC Lysis Buffer 处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的细胞培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测，尤其适用于流式细胞检测或需要高浓度裂解液的情况。

组成：操作步骤(仅供参考)：注意：绝大多数情况下，应使用无菌去离子水稀释RBC Lysis Buffer(10×)至1×使用，流式细胞术除外。

(一)组织细胞样本的常规操作1、制备细胞悬液，离心弃上清。

2、裂解: 加入1×RBC Lysis Buffer ，轻柔吹打混匀，裂解。

本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。

3、离心: 4℃离心，弃红色上清。

本步骤亦可在室温下操作。

4、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3各一次。

5、洗涤：根据实验要求加入适量PBS 、HBSS 、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀重悬沉淀。

4℃，离心，弃上清，该离心步骤亦可在室温下操作。

6、如有必要，重复上述步骤5一次，共洗涤1～2次。

7、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。

(二)组织细胞样本的快速操作(无需洗涤)1、制备细胞悬液：新鲜组织经胰蛋白酶或胶原酶等消化处理，制备细胞悬液，离心弃上清。

2、裂解：加入1×RBC Lysis Buffer ，轻柔吹打混匀，裂解。

本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。

红细胞裂解液(RBC Lysis Buffer ,10×)简介： 红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)是一种从人、鼠或其他哺乳动物等体内的组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液，其主要有效成分为NH 4Cl 。

RBC Lysis Buffer(10×)配方经过优化不同于ACK Lysis Buffer ，在裂解无核红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(Lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。

使用1×RBC Lysis Buffer 处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的细胞培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测，尤其适用于流式细胞检测或需要高浓度裂解液的情况。

组成：操作步骤(仅供参考)：注意：绝大多数情况下，应使用无菌去离子水稀释RBC Lysis Buffer(10×)至1×使用，流式细胞术除外。

(一)组织细胞样本的常规操作1、制备细胞悬液，离心弃上清。

2、裂解: 加入1×RBC Lysis Buffer ，轻柔吹打混匀，裂解。

本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。

3、离心: 4℃离心，弃红色上清。

本步骤亦可在室温下操作。

4、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3各一次。

5、洗涤：根据实验要求加入适量PBS 、HBSS 、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀重悬沉淀。

4℃，离心，弃上清，该离心步骤亦可在室温下操作。

6、如有必要，重复上述步骤5一次，共洗涤1～2次。

7、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。

(二)组织细胞样本的快速操作(无需洗涤)1、制备细胞悬液：新鲜组织经胰蛋白酶或胶原酶等消化处理，制备细胞悬液，离心弃上清。

2、裂解：加入1×RBC Lysis Buffer ，轻柔吹打混匀，裂解。

本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。

裂解液配制方法 The manuscript was revised on the evening of 20211、红细胞裂解液（去除红细胞）配制试剂所需材料：1. Ammonium Chloride x10 Lysing Concentrate Solutiona) NH4Cl (1.5 M) 80 gb) KHCO3 (100 nM) 10 gc) Na4EDTA (10 nM) 3.7 gd) Distilled H2O 1000 mL2. 1N HCl or 1N NaOH（调节pH值用）配制步骤：1. 将以上a、b、c试剂溶于900ml 去离子水中；2.调节溶液pH值到，加去离子水定容到1000ml；3.在制备工作液时，将此储存液稀释10倍后使用。

保存：储存液储存于2-8°C不能超过半年（六个月）；2.在使用前，工作液每天都应该新鲜配制放置于室温，当日用不完的弃掉。

2、ripa裂解液NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟） L(100μg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 μmol/Lμg/ml)Leupeptin（亮抑制肽） mlAprotinin（抑蛋白酶肽）μmol/L(1μg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于LHEPES；Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）3、细胞裂解液（Tris－HCL）1．1M Tris 溶液的配置取Tris242.2g，加ddH2O至1600ml，加热溶解。

2．1M Tris－HCL Ph=溶液的配置取 1M Tris 溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=（需浓盐酸约），加ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用。

Toll Free: 400 6721 600 (China Only) Website: Lysing solution for FACS (10×)I.产品信息目录号: LSB01, LSB02, LSB03 规格: 100T,250T, 500T保存: 室温效期: 一年II.产品简介本产品可在哺乳动物外周血细胞经荧光素标记的抗体染色后，将红细胞裂解，随后进行流式分析。

当抗体加入到全血中，与白细胞特异性的表面抗原结合。

染色的样品随后用流式红细胞裂解液处理，在温和的低渗条件下裂解红细胞，从而保留住白细胞。

III.使用方法1.用蒸馏水将10×红细胞裂解液稀释为1×，稀释后的工作液可在室温保存一个月。

2.用合适的抗凝管收集全血。

3.取100 μl混匀的抗凝血到流式管。

4.按照抗体说明书加入合适的剂量，混匀后孵育适当时间。

5.加入2 ml 1×红细胞裂解液，涡旋振荡混匀。

6.室温避光孵育10分钟。

7.300 - 400 g离心5分钟，弃上清。

8.加入2 ml PBS，300 - 400 × g离心5分钟。

9.弃上清，加入0.5 ml PBS重悬细胞沉淀。

10.在流式细胞仪上进行分析。

如不能马上检测，请将样品避光保存于2 - 8℃。

IV. 结果示例图. FSC/SSC散点图。

全血细胞经1×红细胞裂解液裂解后，在Becton Dickinson FACSCalibur TM流式细胞仪。

通过FSC和SSC可以清晰地区分出淋巴细胞、单核细胞和粒细胞，几乎很少细胞碎片产生。

Toll Free: 400 6721 600 (China Only) Website: V. 注意事项1.本产品经优化，专门针对临床实验室所用的流式细胞仪，包括Becton Dickinson FACSCalibur TM和CoulterEPICS® XL®。

红细胞裂解液红细胞裂解液红细胞裂解液是一种用于从人或鼠等的血液或组织样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。

在裂解红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞或其它有细胞核的细胞。

本裂解液不适用于有细胞核红细胞的裂解，例如鸟或禽类的红细胞。

本裂解液经过无菌处理，处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的原代培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。

应用对于组织细胞样品1. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。

2. 加入3~5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解4~5min。

例如细胞沉淀的体积为1mL，则加入3~5mL的红细胞裂解液。

3. 1000g离心5 min，弃红色上清。

4. 如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。

通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

5. 洗涤1~2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，1000g离心2~3 min，弃上清。

可再重复1次，共洗涤1~2次。

洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。

6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤1. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。

2. 对于0.2mL细胞沉淀加入1mL红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解4~5min。

3. 加入15~20mL PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。

4. 1000g离心5min，弃红色上清。

5. 如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。

通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

说明：对于常规步骤，多一步洗涤过程中的离心，但可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好一些，同时不需要大体积的离心管。

快速步骤少了一次离心，但洗涤效果略差一些，同时需要大体积的离心管。

红细胞裂解液使用说明书产品货号：SL1070储存条件：2-8度保存，有效期1年。

产品内容：产品内容SL1070-100ml SL1070-500ml 红细胞裂解液100ml500ml说明书1份产品简介：红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)，也称ACK Lysis Buffer，是一种用于从人或鼠等的血液或组织样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。

本产品经过优化配方，在裂解红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞（lymphocyte）或其它有细胞核的细胞。

不适用于鸟或禽类等有细胞核红细胞的裂解。

本产品主要成分为氯化铵，经过无菌处理。

经过处理的血液或组织细胞样品可以用于后续的原代培养、细胞融合，核酸或蛋白的提取，及各种常规的分析和检测。

使用说明：组织细胞样品常规操作步骤：.1、新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。

2、加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。

室温或4度操作均可。

3、400-500g离心5分钟，弃红色上清。

4℃离心效果更佳。

4、如果红细胞裂解不完全，可以重复步骤2和步骤3。

一般极微量的红细胞不影响后续检测。

5、加入5-8倍细胞体积的PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃上清。

4℃离心效果更佳。

洗涤1-2次。

6、根据实验需要，选用适当溶液重悬细胞沉淀，随后进行计数等后续实验。

组织细胞样品快速操作步骤：1、新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。

2、加入5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。

室温或4度操作均可。

3、加入15-20倍红细胞裂解液体积的PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。

4、400-500g离心5分钟，弃红色上清。

4℃离心效果更佳。

5、如果红细胞裂解不完全，可以重复步骤2和步骤3。

红细胞裂解液的配制我在一个公司的网站上看到的红细胞裂解液的说明书上说操作要点是：1.在37度预热；2.充分混匀细胞我就是这样做的，效果还可以。

不过我只做流式细胞仪的检测，活性没测。

我的裂解液是0.16M NH4Cl，0.13mM EDTA，12mM NaHCO3我用的方法：全血：裂解液=1：3，如2ml的全血加上6ml的红细胞裂解液，充分混匀后，室温静置5mim，1000rpm离心6~10min。

红细胞裂解得非常充分。

0.15 M NH4CL, 0.01 M NaHCO3 and 1 mM EDTA (Sigma)Ammonium chloride (NH4Cl) 8.29 g 0.155 MPotassium bicarbonate (KHCO3) 1 g 10mMEDTA 0.37 g 1mMH2O 1l.Filter with 0.45µm filteraliquot in 100 ml aliquotsfilter the solution to be used with 0.2µm filter.我们用的是Tris-NH4Cl,具体配方如下:NH4Cl:4.15克加双蒸水500ml,取450ml;Tris:1.0297克加双蒸水50ml,再加上上面的450ml,共计500ml,高压灭菌,用时加10-20ml,静置5min,效果蛮好.9月29日我用的配方氯化铵3.735g，tris 1.3g，加在500ml水中，ph约7.2。

将全血约5ml加入配好的加入30ml裂解液的50ml试管中5分钟或15分钟，发现5分钟组细胞要多些，15分钟组细胞要少些，而且红细胞仍然有。

红细胞裂解液使用说明书
产品简介红细胞裂解液是一种专门设计用来裂解红细胞的新型试剂。

它是一种经过精心制备的化学试剂，能有效地溶解红细胞，以便进一步进行血液样本的处理和分析。

本产品具有使用方便、裂解效果好、安全性高等优点。

使用目的使用红细胞裂解液的主要目的是裂解红细胞，释放其中的血红蛋白和其他细胞内成分，以便进行后续的生化、免疫或分子生物学分析。

同时，该试剂也可以用于分离和纯化血红蛋白，以进行更深入的研究。

成分与特性红细胞裂解液的主要成分包括溶血剂、稳定剂、防腐剂等。

其中溶血剂可以破坏红细胞的细胞膜，使细胞内物质释放出来。

稳定剂和防腐剂则可以保持试剂的稳定性和延长保存时间。

本试剂具有高效率、高纯度、低毒性的特点。

操作流程使用红细胞裂解液的操作流程如下：
(1)准备实验样品：将需要裂解的红细胞悬液准备好。

(2)加入红细胞裂解液：按照样品与红细胞裂解液的比例加入适量的红细胞裂解液。

(3)充分混合：轻轻旋转或摇动混合器，使红细胞裂解液与样品充分混合。

(4)静置：将混合物静置一段时间，让红细胞充分裂解。

(5)离心：将混合物离心，分离出上清液和沉淀物。

(6)处理上清液：根据后续分析的需要，处理上清液，如进行蛋白质沉淀、蒸发、纯化等。

安全性及注意事项(1)请在实验前仔细阅读说明书并穿戴实验服和手套。

(2)请在通风良好的实验环境中进行实验操作。

(3)避免皮肤接触试剂，如不慎接触，请立即用清水冲洗。

(4)请将试剂存放在儿童触及不到的地方，并放在通风、干燥、避光的地方保存。

(5)请勿将试剂与其他物质混合使用。

红细胞裂解液配方
1.裂解液：的确是ACK裂解液作用更柔和些
配方：
NH4CL 8.29g
KHCO3 1.00g
Na2EDTA 37.2mg
溶于1000mL蒸馏水，pH 7.2-7.4，效果一直很好。

注意：
（1）裂解液如果放在冰箱里，一定要预热，37度即可。

裂解期间试管也可水浴，但如果是夏天室温比较高则不必；
（2）裂解5min后立刻离心（从所有管都混匀后计时间）；
（3）PBS离心洗涤2次；
（4）裂解液pH值很重要，最好一次不要配多，时间长效果不好，我一般一次配100mL，避光保存。

2.离心速度：800-1000rpm，5min
3.研磨轻柔很重要
4.培养淋巴细胞的最佳培养液是RPMI 1640，因为是原代细胞，要用10%胎牛血清。

还有非常重要的一点，要想让细胞增殖得好，必须加二巯基乙醇（beta-2ME）
5.细胞密度1－2X10^6/mL。