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血清葡萄糖GLU己糖激酶HK法测定法-检验科生化室作业书

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【实用】检验科SOP文件

药海无涯 学无止境 专注医学领域

血清葡萄糖GLU己糖激酶HK法测定法

实验原理

己糖激酶紫外比色测定法。

HK

葡萄糖+ATP-------------﹥G-6-P+ADP

Mg2+

G6PDH

G-6-P+NAD+-------------﹥6-磷酸葡萄糖+NADH+H+

2.标本：

2.1病人准备：12小时禁食。

2.2类型：血清或血浆（EDTA，肝素或氟化钠），标本最好不要溶血。迅速分离血清或血浆，减少红细胞糖酵解时葡萄糖的损失。随机收集尿样。

3.标本存放：血清、血浆应在血液采集1小时内，尽早分离。加入糖分解抑制剂（NaF，KF）后的稳定性：15～25℃保存可稳定1天,4～8℃保存可稳定7天。血清中的葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在25℃下可稳定8个小时，在4℃下可稳定72小时。尿样应保存在2～8℃下并尽快进行分析。脑脊髓液如果避免蒸发可在2～8℃下稳定至少5天，5天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20℃的条件下。

4.标本运输：常温条件下保存运输。

5.标本拒收标准：细菌污染、超时送检的的标本。 【实用】检验科SOP文件

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6.实验材料

6.1试剂申能血糖测定试剂盒（14125171701试剂16×64ml＋试剂26×16ml）

6.1.1试剂组成

试剂1：

Tris缓冲液pH7.880mmol/L

Mg2+4mmol/L

ATP1.7mmol/L

NAD1.7mmol/L

试剂2：

Mg2+4mmol/L

己糖激酶>1500U/L

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶>1500U/L

6.1.2试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。

6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5注意事项：此试剂为体外诊断用。不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如排向下水道请用大量的水冲洗。

6.2校准品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪【实用】检验科SOP文件

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进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

6.3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

7.仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪

8.操作步骤

8.1项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件

8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件

9.检验结果的判断与分析

10.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11.计算方法：以TruCalU复合校准品血糖校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。手工测定计算方法为：

Au

葡萄糖浓度（mmol/L）＝×校准液浓度

As

12.参考值范围：（mmol/L）

新生儿

脐带血 3.5～8.8

1小时 2.0～5.5

2小时2.2～4.9 【实用】检验科SOP文件

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5～14小时1.9～4.3

10～28小时2.6～4.5

44～52小时2.7～4.4

儿童（空腹）

1～6岁4.1～7.0

7～19岁3.9～5.9

成人（空腹）3.9～6.4

参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

13.临床意义：检测血清或血浆中葡萄糖主要用于糖尿病的诊断和治疗监视，还可用于检出新生儿低血糖症、排除胰岛细胞癌以及评估各种疾病碳水化合物代谢状况。血清葡萄糖水平可能会异常高（高血糖）或异常低（低血糖）。葡萄糖测量用于诊断和治疗碳水化合物代谢紊乱，包括糖尿病，新生儿低血糖，自发性低血糖，郎格罕氏岛细胞癌等。

葡糖尿（存在葡萄糖化尿）在健康，怀孕的妇女中很常见。妊娠葡糖尿的最主要的特征就是每天之间或一天之中有一个显著的变化。

脑脊髓液（CSF）葡萄糖的测定帮助区别病毒性脑膜炎与细菌性脑膜炎；细菌性脑膜炎和结核性脑膜炎中的葡萄糖值通常很低（不到的40%至50%血清葡萄糖），病毒性脑膜炎中的葡萄糖值通常是正常的。癌性脑膜炎（肿瘤细胞在脑膜中广泛渗透）也使CSF葡萄糖值在正常值以下。

14.操作性能 【实用】检验科SOP文件

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14.1线性范围：0.1～28mmol/L

14.2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU1000批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。

批内精密度

n=20 x

(mmol/L) s

(mmol/L) CV

(%) 批间精密度

n=20 x

(mmol/L) s

(mmol/L) CV

(%)

样品1 5.05 0.047 0.94 样品1 3.65 0.077 2.11

样品2 6.50 0.059 0.91 样品2 6.72 0.142 2.11

样品3 16.10 0.127 0.79 样品3 16.54 0.296 1.79

14.3方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对76个样品进行GLU检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+0.00mmol/L；r=0.998。

14.4灵敏度：本试剂的检测限为0.1mmol/L。

14.5病人结果可报告范围：0.1～28mmol/L

15.超出范围结果处理：本法线性上限为28mmol/L。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9%氯化钠溶液作1:10稀释，重新测定，结果乘以11。

16.病危报警值的处理：女性及婴儿的血糖测定值<2.2mmo/L或者>22.2mmol/L；男性的血糖测定值<2.7mmo/L或>22.2mmol/L；新生儿的血糖测定值<1.6mmo/L或>16.6mmol/L时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。

17.方法局限性 【实用】检验科SOP文件

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17.1本法线性上限为28mmol/L。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9%氯化钠溶液作1:10稀释，重新测定，结果乘以11。

17.2干扰物质：使用试剂起始法，当样品中抗坏血酸浓度1704mol/L，胆红素浓度684mol/L，血红蛋白浓度5.00g/L，甘油三酯浓度22.6mmol/L时没有观察到干扰。

18.补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。

19.参考文献

1.ThomasL.ClinicalLaboratoryDiagnostics.1sted.Frankfurt:TH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.131-7.

2.SacksDB.Carbohydrates.In:BurtisCA,AshwoodER.editors.TietzTextbookofClinicalChemistry.3rded.Philadelphia:W.B.SaundersCompany;1999.p.750-808.

20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。

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生化检验技术实验报告

生化检验技术实验报告

一、实验目的

1. 掌握血糖测定的原理和方法。

2. 熟悉血糖测定仪器的操作流程。

3. 了解血糖在人体代谢中的重要性。

二、实验原理

血糖测定是通过检测血液中的葡萄糖浓度来评估血糖水平。常用的血糖测定方法有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法和葡萄糖氧化酶-氧电极法等。本实验采用葡萄糖氧化酶法进行血糖测定。

葡萄糖氧化酶（GOD）催化葡萄糖与氧气反应生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的催化下分解为水和氧气，氧气在电极上还原，产生电流，电流大小与葡萄糖浓度成正比。

三、实验设备与试剂

1. 实验设备：血糖测定仪、微量移液器、移液管、一次性采血针、酒精棉球、消毒液等。

2. 实验试剂：葡萄糖氧化酶试剂盒、葡萄糖标准品、蒸馏水等。

四、实验步骤

1. 标准曲线绘制

（1）准备标准溶液：将葡萄糖标准品用蒸馏水稀释成不同浓度的标准溶液。

（2）按照试剂盒说明书设置血糖测定仪，将标准溶液分别加入测定管中。

（3）开启血糖测定仪，依次测定各标准溶液的血糖浓度，记录数据。

（4）以葡萄糖浓度为横坐标，测定值为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 血糖测定

（1）用酒精棉球消毒采血部位，用一次性采血针对准静脉，待血液流出后，用消毒液消毒采血针。

（2）用微量移液器吸取适量血液，加入测定管中。 （3）按照试剂盒说明书设置血糖测定仪，将测定管放入测定仪中。

（4）开启血糖测定仪，待测定仪显示血糖浓度后，记录数据。

五、实验结果与分析

1. 标准曲线绘制

绘制标准曲线，得到线性方程：y = 0.0037x + 0.0035，R² = 0.9987。

2. 血糖测定

本次实验测得血糖浓度为4.5 mmol/L。

六、实验讨论

1. 本实验采用葡萄糖氧化酶法进行血糖测定，操作简便、快速，准确性较高。

2. 在实验过程中，要注意控制操作误差，如准确配制标准溶液、正确设置测定仪等。

3. 血糖测定对于糖尿病等疾病的诊断和治疗具有重要意义，本实验有助于加深对血糖测定原理和方法的理解。

生化操作规程

生化操作规程

1

操 作 规 程

临 床 化 学 检 验

2

目 录

一. 葡萄糖测定

二. 总胆固醇测定

三. 甘油三酯测定

四. 尿素测定

五. 肌酐测定

六. 高密度脂蛋白胆固醇测定

七. 低密度脂蛋白胆固醇测定

八． 载脂蛋白A1测定

九. 载脂蛋白B测定

3 十． 尿酸测定

十一. 总胆红素测定

十二. 间接胆红素测定

十三. 总蛋白测定

十四. 白蛋白测定

十五．丙氨酸氨基转移酶测定

十六. 天门冬氨酸氨基转移酶测定

十七. 血清γ-谷氨酰转移酶测定

十八. 碱性磷酸酶测定

十九. 肌酸激酶测定

二十. 乳酸脱氢酶测定

二十一. 肌酸激酶同工酶测定

二十二. 胆碱酯酶测定

二十三. α-L-岩藻糖苷酶测定

二十四. 脂蛋白a测定

二十五. 总胆汁酸测定

二十六. α-淀粉酶测定

二十七. 电解质(k\na\cl）测定

4

总 则

为了使检验工作的顺利进行, 在任何时候，都能使各检验人员按照规定的操作程序准确进行检验，报告可靠结果。保证临床医务人员和患者能快速得到准确、可靠的报告，制定本操作规程，依据是上海市临床检验中心有关规定和国家卫生部主编的《全国临床检验操作规程》（第二版），以及上海市卫生局和医学会主编的《实验室诊断与基础治疗常规》。

主要内容包括：

5 1、 项目名称、检验方法；

2、 方法学原理；

3、 试剂品牌、包装规格、内含物；

4、 仪器品牌、型号、主要参数；

5、 操作步骤；

6、 质控品使用方法、使用水平和频率、质控规则;

7、 操作性能概要；

8、 校准程序

9、 参考范围；

10、 临床意义；

11、 病人准备、标本要求；注意事项；

12、 参考文献；

13、 编写者和日期；

14、 科主任签字认可；

一 葡萄糖测定

(一)项目名称：葡萄糖测定 Glucose. 简写：GLU.

肌酸激酶测定的标准操作程序

肌酸激酶测定的标准操作程序

肌酸激酶测定的标准操作程序

【应用范围】

体外检测血清、血浆肌酸激酶测定。

【适用仪器】

Olympus AU-2700全自动生化分析仪。

【程序改变】

严格遵循仪器、试剂说明书及校准品使用说明。

【方法学原理】

ck

ADP + 磷酸肌酸 肌酸 + ATP

ATP + 葡萄糖 ADP + 葡萄糖-6-磷酸

葡萄糖-6-磷酸+NAD+ 6-磷酸葡萄糖酸+NADH+H+

【试剂】

试剂1（R1）+ 试剂2（R2）：

咪唑缓冲液 pH 6.7 100 mmol/L

磷酸肌酸 30 mmol/L

葡萄糖 20 mmol/L

N-乙酰半胱氨酸（NAC） 20 mmol/L

乙酸镁 10 mmol/L

EDTA-Na2 2 mmol/L

ADP 2 mmol/L

NADP 2 mmol/L

AMP 5 mmol/L

二腺苷-5'-磷酸 10 mmol/L

6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6P-DH） ≥1500 U/L

已糖激酶（HK） ≥2500 U/L

2. 校准品：DiaSys TruCal U。 己糖激酶(HK)

(G6P-DH) 3. 质控品：Randox Assayed Multiseral Level 1 and Level 2。

【标本收集与准备】

1.血清或血浆标本

根据实验室标准采集程序采集标本，适用标本为血清或肝素抗凝血浆,不可从正在静脉滴注手臂上采血，上机标本不能有凝块，样品采集后2天内离心标本，分离血清，血清或血浆标本室温保存4天，冷藏7天，冷冻保存6个月。血清或血浆肌酸激酶结果高于线性建议稀释。

【操作步骤】

1.仪器测定参数设置

Test Name:    TypeSerum 

OperatioYes 

检验科生化肌酸激酶测定的标准规程

检验科生化肌酸激酶测定的标准规程

肌酸激酶测定的标准规程

【目的】

体外检测血清中肌酸激酶（CK）含量。

【职责】

1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。

2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

【标本类型及实验前准备】

1.受检者的准备

病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.静脉采血

除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

【仪器设备】

东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机

一、检测原理

本试剂采用基于经Rosalki和Szasz改进的 Oliver方法，反应原理如下：

磷酸肌酸 + ADPCK肌酸 + ATP

D-葡萄糖 + ATPHKADP + 葡萄糖-6-磷酸

葡萄糖-6-磷酸+NADP+PDHG66-磷酸葡糖酸+NADPH+H+

式中： CK = 肌酸激酶

HK = 己糖激酶 G-6-PDH = 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶

在上述反应中，NADPH+H+的生成速率与样本中肌酸激酶的含量成正比。通过在340 nm处监测吸光度的上升速率，即可测得样本中肌酸激酶的活力。

二、试剂

1.试剂

本科使用上海复星长征医学科学有限公司CK试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：

试剂1（R1）：

D-葡萄糖 27 mmol/L

乙酸镁 14 mmol/L

N-乙酰半胱氨酸 27mmol/L

NADP+ 2 .7mmol/L