血清葡萄糖的测定GODPOD法
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葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase , GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并释放过氧化氢。
过氧化物酶 (peroxidase , POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧,并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物,即 Trinder 反应。
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
【试剂】1 . 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中,用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ,用蒸馏水定容至 1L 。
2 .酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ,葡萄糖氧化酶 1 200U , 4- 氨基安替比林 10mg ,叠氮钠 100mg ,溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中,用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ,用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ,置 4 ℃保存,可稳定3 个月。
3 .酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中,用棕色瓶贮存。
4 .酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合, 4 ℃可以存放 1 个月。
5 . 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中,加温助溶,冷却后加蒸馏水定容至 l L 。
6 . 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ,溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中,以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。
2h 以后方可使用。
7 . 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中,用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度,混匀。
【操作步骤】1 .自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。
葡萄糖氧化酶法(GOD-POD)试剂盒与己糖激酶法(HK)试剂盒测定血糖比较摘要:通过对本实验室常规使用的己糖激酶法试剂盒的比较,分析葡萄糖氧化酶法试剂盒检测血糖的可靠性和应用性。
对本实验室使用的血糖测定参考方法HK法试剂盒与GOD-POD法试剂盒从重复性、试剂稳定性、特异性等方面进行比较。
结果显示GOD-POD法在重复性、试剂稳定性等方面均能满足一般实验室要求,且与HK法相关性良好。
关键词:GOD-POD、HK、血糖测定、方法比较1 引言。
血糖测定是诊断糖尿病的重要依据,血糖的准确测定对诊断和处理高血糖和低血糖症十分重要测定方法主要有化学法和酶法,而酶法有分为葡萄糖氧化酶与过氧化物酶偶联的的GOD-POD法及己糖激酶与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶偶联的HK 法。
酶法中的GOD-POD法,因具有操作简单,无毒、无害,试剂已商品化、易于质控、价格低等优点,现已广泛用于临床。
为此,将GOD-POD法与血糖参考方法HK法从重复性、试剂稳定性、特异性及两种方法的相关性方面作比较,现报告如下:2 材料与方法2.1仪器与试剂己糖激酶试剂盒四川迈克生物科技有限公司批号:20110310葡萄糖氧化酶试剂盒四川迈克生物科技有限公司批号:20110310胆红素校准品(430 umol/l)四川迈克生物科技有限公司批号:20101120血糖中值质控品(4.80 mmol/l)四川迈克生物科技有限公司批号:20101008血糖高值质控品(11.20mmol/l)四川迈克生物科技有限公司批号:20101008日立-7180全自动生化分析仪2.2方法按试剂盒使用说明设置参数和操作。
2.2.1重复性试验取两个血糖浓度的定值质控血清用两种方法分别平行测20次,计算批内误差。
另取两个血糖浓度同一批号定值质控血清用两种方法每天各做两次,累计20个结果,计算天间误差。
2.2.2回收试验取若干健康体检人群血清混合,分装,按9:1的比例分别加入浓度为4.80 mmol/L和11.20 mmol/l的糖标准溶液,用两种方法分别测定,每种方法的每一浓度平行测定三次,分别计算回收率。
为什么GOD-POD是临床常规方法?
god-pod法即葡萄糖氧化酶法,可以用来测测定血清(浆)葡萄糖,是临床常规方法。
葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并释放过氧化氢。
过氧化物酶(peroxidase,POD)在色原性氧受体god-pod法即葡萄糖氧化酶法,可以用来测测定血清(浆)葡萄糖,是临床常规方法。
葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并释放过氧化氢。
过氧化物酶(peroxidase,POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧,并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物,即Trinder反应。
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
存在时将过氧化氢分解为水和氧,并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物,即Trinder反应。
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
godpod法测血糖实验报告一、实验目的本实验旨在探究 godpod 法在血糖检测中的准确性、可靠性以及操作便利性,为临床血糖监测和糖尿病患者的自我管理提供有效的检测方法参考。
二、实验原理Godpod 法是一种基于葡萄糖氧化酶(GOD)和过氧化物酶(POD)的酶促反应来测定血糖浓度的方法。
葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢,过氧化氢在过氧化物酶的催化下与显色剂发生反应,生成有颜色的化合物,通过比色测定吸光度,从而计算出血糖浓度。
三、实验材料与设备1、血糖仪及配套的 godpod 法血糖测试条。
2、采血针。
3、消毒棉片。
4、标准葡萄糖溶液(不同浓度)。
5、移液器及配套枪头。
6、离心机。
7、分光光度计。
四、实验方法1、血糖仪校准使用血糖仪配套的校准液对血糖仪进行校准,确保血糖仪的准确性。
2、样本采集选取健康志愿者和糖尿病患者作为研究对象。
使用采血针在手指末梢采集血液样本,将血液滴在血糖测试条上,按照血糖仪的操作说明进行检测,记录血糖值。
3、标准曲线绘制配制不同浓度的标准葡萄糖溶液,使用分光光度计在特定波长下测定吸光度,绘制标准曲线。
4、准确性验证将采集的血液样本离心分离出血浆,使用实验室生化分析仪测定血糖浓度作为参考值,与 godpod 法血糖仪测定的血糖值进行比较,计算偏差。
5、重复性实验对同一血液样本进行多次 godpod 法测定,计算测定结果的变异系数,评估方法的重复性。
6、干扰实验在血液样本中加入常见的干扰物质,如维生素 C、胆红素、甘油三酯等,测定血糖浓度,观察干扰物质对 godpod 法测定结果的影响。
五、实验结果1、血糖仪校准结果血糖仪校准成功,显示值与校准液的标准值相符。
2、样本采集情况共采集了健康志愿者 20 例和糖尿病患者 30 例的血液样本,样本采集过程顺利,无明显不良反应。
3、标准曲线绘制的标准曲线线性良好,相关系数 R²达到 099 以上。
4、准确性验证与实验室生化分析仪测定的参考值相比,godpod 法血糖仪测定的血糖值偏差在允许范围内,平均偏差为具体偏差值%。
葡萄糖测定标准操作规程1.检验原理:(葡萄糖氧化酶法)葡萄糖氧化酶(GOD )利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并释放出过氧化氢。
过氧化物酶(POD )在色原性氧受体4-氨基安替比啉(4-AA )和对羟基苯甲酸钠去氢缩合为红色醌类化合物,即Trinder 反应。
红色醌类化合物的生成量成正比。
D-葡萄糖+2O +O H 2−−→−GOD 葡萄糖酸+22O H222O H +4-AA+对羟基苯甲酸钠−−→−POD 红色醌类物质+4O H 2 2.试剂组成成分3.样本要求:新鲜无溶血血清或用草酸钾-氟化钠抗凝的血浆。
在22~25℃保存8小时,2~8℃保48小时,-20℃保存7天,样本不可反复冻融!4.检验方法:仪器法(详见DF-603/DI-600标准操作规程)5.参考范围:6.检验结果的解释:6.1在给定的样本/试剂比例和条件测定时,本试剂线性范围可达25mmol/L。
样本含量超出线性范围时,建议用0.9%(W/V)的氯化钠溶液稀释样本,最大稀释倍数为10.6.2.单位换算:mg/dl=mmol/L×187.检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊或以水空白在500nm处吸光度大于0.200时不能使用。
8.试剂性能指标8.1试剂外观:R1:无色或淡红色透明液体,无悬浮物及沉淀;R2无色透明液体,无悬浮物及沉淀。
8.2装量:不低于标识值。
8.3空白吸光度:在500nm处,光径1cm时,空白吸光度A≤0.2008.4线性范围:试剂的线性区间为[2.2-25]mmol/L,在此线性区间内:a)线性相关系数r应不小于0.9900;b)[2.2-4.7]mmol/L区间内,线性绝对偏差不超过±10U/L;(4.7-25)mmol/L区间内,线性相对偏差不超过±10%。
8.5准确度:使用参考物质测定时,当浓度≤4.16mmol/L,实测值与标识值偏差应不超过±0.833mmol/L,当浓度>4.16mmol/L,实测值与标识值偏差应在±20%范围内。
葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD微板法)简介:葡萄糖(Glucose, Dextrose,Glu)又称玉米葡糖,简称葡糖,化学式C6H12O6,分子量为180.16,是自然界分布最广、最重要的一种单糖,属于多羟基醛。
用酶学方法测定葡萄糖是生化检测中的常用方法,最常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法。
上述酶学法特点是:1、灵敏度、准确度、精密度均高;2、使用温和的反应条件;3、操作简便;4、适用于自动分析仪。
Leagene葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD微板法)又称葡萄糖氧化酶法或葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联法等,其检测原理是在葡萄糖氧化酶的催化下,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸,同时消耗溶液中的氧,产生过氧化氢,过氧化氢与氧化色原物质反应生成有色化合物,初始反应中过氧化氢的生成量与葡萄糖浓度成正比,酶标仪进行比色测定。
本试剂盒专门用于人或动物的血清、血浆、脑脊液细胞、组织等样本中的葡萄糖含量定量测定,但不宜直接检测尿液中的葡萄糖含量,其中Glu标准(5mmol/L)=90mg/dl。
本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:自备材料:1、生理盐水或PBS2、96孔板或离心管、小试管3、水浴锅或恒温箱4、酶标仪或分光光度计5、全自动或半自动生化分析仪操作步骤(仅供参考):编号名称TC0711200TTC0711500TStorage试剂(A): 酚试剂30ml75ml RT 避光试剂(B): 酶试剂磷酸盐缓冲液(pH7.0)30ml75ml -20℃避光4-氨基安替比林葡萄糖氧化酶过氧化物酶临用前,按酚试剂:酶试剂混匀,即GOD-POD工作液,4℃保存。
试剂(C): Glu标准(5mmol/L) 1ml1ml -20℃试剂(D): ddH2O 1ml1ml RT 使用说明书1份1、样本处理:①血清、血浆、脑脊液样本:从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血,直接检测,如超过线性范围(25mmol/L),用生理盐水稀释后检测。
实验四葡萄糖的测定(POD-GOP法)一.实验目的1. 掌握葡萄糖氧化酶—过氧化物酶法测定血糖;2. 学习使用分光光度计;3. 学习微量移液器的使用二.实验原理葡萄糖氧化酶(GOD)葡萄糖+O2 葡萄糖酸+ H2O2过氧化物酶(POD)H2O2 + 酚+ 4-氨基安替比林醌+ H2O+O2红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比,在505nm有吸收峰三.试剂1. 试剂1:磷酸盐缓冲液70mmol/L酚10.6mmol/L pH 7.02. 试剂2:磷酸盐缓冲液70mmol/L4-氨基安替比林0.8mmol/L葡萄糖氧化酶>10U/ml过氧化物酶> 1U/ml pH 7.03. 标准葡萄糖溶液 5.55mmol/L4. 兔子血清四.操作步骤1.配制工作液:取等量试剂1和试剂2混合均匀2.按下表加入有关试剂3. 充分混匀,置于37℃水浴15分钟,显色后,在波长505nm处,以空白调零,读取标准管和样品管的吸光值A4. 实验结果计算:葡萄糖(mmol/L)=[样品管吸光度(A样)/标准管的吸光度(A标)]×标准液浓度五.实验数据及结果1.数据记录2.计算结果葡萄糖=0.489/0.237*5.55mmol/L=11.45mmol/L=206.35mg/dl思考题哪些方法可增加血糖测定的准确性?答:1.增加测定的重复次数2.加样的准确,如在使用微量移液器量取液体时要称量准确,向试管中加液的顺序要正确3.可根据所得数据绘制标准曲线,并通过标准曲线求出浓度4.在使用分光光度计时注意操作准确以上的这些方法都可以增加血糖测量的准确性。
葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)简介:葡萄糖(Glucose, Dextrose,Glu)又称玉米葡糖,简称葡糖,化学式C6H12O6,分子量为180.16,是自然界分布最广、最重要的一种单糖,属于多羟基醛。
用酶学方法测定葡萄糖是生化检测中的常用方法,最常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法。
上述酶学法特点是:1、灵敏度、准确度、精密度均高;2、使用温和的反应条件;3、操作简便;4、适用于自动分析仪。
Leagene葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)又称葡萄糖氧化酶法或葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联法等,其检测原理是在葡萄糖氧化酶的催化下,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸,同时消耗溶液中的氧,产生过氧化氢,过氧化氢与氧化色原物质反应生成有色化合物,初始反应中过氧化氢的生成量与葡萄糖浓度成正比,分光光度计进行比色测定。
本试剂盒专门用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的葡萄糖含量定量测定,但不宜直接检测尿液中的葡萄糖含量,其中Glu标准(5mmol/L)=90mg/dl。
本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:自备材料:1、生理盐水或PBS2、离心管、小试管或96孔板3、水浴锅或恒温箱4、分光光度计或酶标仪5、全自动或半自动生化分析仪操作步骤(仅供参考):编号名称TC0713100TTC0713200TStorage试剂(A): 酚试剂50ml2×50ml RT 避光试剂(B): 酶试剂磷酸盐缓冲液(pH7.0)50ml2×50ml -20℃避光4-氨基安替比林葡萄糖氧化酶过氧化物酶临用前,按酚试剂:酶试剂混匀,即GOD-POD工作液,4℃保存。
试剂(C): Glu标准(5mmol/L) 1ml2×1ml -20℃试剂(D): ddH2O 1ml2ml RT 使用说明书1份1、样本处理:①血清、血浆、脑脊液样本:从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血,直接检测,如超过线性范围(25mmol/L),用生理盐水稀释后检测。
godpod法测血糖实验报告一、实验目的本次实验旨在探究 godpod 法在血糖检测中的准确性、可靠性以及操作的便捷性,为临床血糖监测和糖尿病的诊断与管理提供参考依据。
二、实验原理Godpod 法是一种基于葡萄糖氧化酶(GOD)和过氧化物酶(POD)的酶促反应来测定血糖浓度的方法。
葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢,过氧化氢在过氧化物酶的作用下与显色剂发生反应,产生可测量的颜色变化,通过比色法测定吸光度,进而计算出血糖浓度。
三、实验材料与设备1、实验试剂葡萄糖标准液(浓度分别为 28mmol/L、61mmol/L、111mmol/L)葡萄糖氧化酶试剂过氧化物酶试剂显色剂2、实验仪器分光光度计移液器恒温箱离心机试管、刻度吸管等四、实验步骤1、样本采集采集空腹静脉血 3ml,注入含有抗凝剂的试管中,轻轻混匀。
以 3000r/min 离心 10 分钟,分离血浆备用。
2、标准曲线绘制分别取不同浓度的葡萄糖标准液 01ml,加入到试管中,然后加入30ml 葡萄糖氧化酶试剂和 03ml 过氧化物酶试剂,充分混匀。
将试管置于 37℃恒温箱中孵育 15 分钟。
取出试管,在分光光度计上于 505nm 波长处,以空白管调零,测定各标准管的吸光度。
以葡萄糖浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。
3、样本测定取01ml 待测血浆样本,按照与标准曲线绘制相同的步骤进行操作,测定吸光度。
4、计算结果根据样本的吸光度,在标准曲线上查出对应的葡萄糖浓度。
五、实验结果1、标准曲线绘制的标准曲线呈现良好的线性关系,相关系数 r 为 0998。
2、样本测定结果对 10 份血浆样本进行测定,结果如下(单位:mmol/L):|样本编号|测定值|||||1|52||2|68||3|49||4|75||5|58||6|82||7|46||8|63||9|71||10|55|六、结果分析1、准确性将测定结果与已知的血糖参考值进行比较,发现大部分样本的测定值与参考值偏差在允许范围内,表明 godpod 法具有较高的准确性。