氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖

H2O2+ 4-氨基安替吡啉过氧化物酶醌亚胺 + 4H2O
生成的醌亚胺的颜色深浅与样品中葡萄糖浓度成正比。
3 标本
血清及肝素/EDTA抗凝血浆，处理方法见标本准备。
稳定性：15－25℃8小时
2-8℃72小时
收集后的标本应该尽快检测，或者与细胞进行分离。
4 试剂
4.1ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ剂
来源：ROCHE配套试剂（详见试剂说明书）。
血糖降低：生理性血糖过低见于妊娠期、哺乳期、饥饿及长期剧烈体力劳动后。病理性血糖过低常见于过量的胰岛素治疗，胰岛细胞增生或瘤，严重肝病及对抗胰岛素的激素分泌不足。
12 危急值
成人女性和婴儿：<2.2或>22.2mmol/L
成人男性：>22.2或<2.7 mmol/L
新生儿：<1.6或>16.6 mmol/L
血糖增高:生理状态下，饱食后或运动后有一过性的血糖增高，注射葡萄糖、肾上腺素及精神紧张可使血糖升高。病理性升高多见于糖尿病。其它内分沁系统
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-23
葡萄糖（Glu）测定氧化酶法
版序：ABCD
页码：第3页，共3页
的疾病，如甲状腺机能亢进、垂体前叶嗜酸性细胞腺瘤、肾上腺皮质功能亢进、嗜铬细胞瘤、垂体前叶嗜碱性细胞机能亢进症等。
Measurement POINT(1)[34]
TECHNICAL LIMIT(HIGH) [ 25.2 ]
POINT(2)[ 0]
CALIBRATION METHOD [ LINEAR ]
POINT(3)[ 0 ]
CALIBRATION POINT [ 2 ]

葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理概述及解释说明1. 引言1.1 概述本文旨在介绍葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，并对其进行详细的解释和说明。

血糖测定是医学和生物科学领域中非常重要的一项实验技术，用于评估人体内的葡萄糖水平以及相关代谢功能的异常情况。

葡萄糖氧化酶法是一种常用的血糖测定方法，其基本原理是利用特定酶对葡萄糖进行氧化反应并与辅助试剂发生显色反应，从而间接地测定血液中的葡萄糖含量。

1.2 文章结构本文将按照以下结构进行展开：首先，介绍葡萄糖氧化酶的简要概况和血糖测定方法的总体概述；其次，详细讲解葡萄糖氧化酶法测定血糖的基本原理；然后，描述实验步骤并给出操作流程；接着，分析实验结果并讨论其中的意义和影响因素；最后，总结实验结论并展望未来该领域的研究意义和发展方向。

1.3 目的本文的目的是全面而清晰地介绍葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，帮助读者了解该方法在实际应用中的作用和意义。

通过本文的阅读，读者可以深入了解葡萄糖氧化酶法的基本理论和操作流程，并对实验结果进行准确而详细的分析与讨论。

同时，本文也旨在提供对该方法局限性和未来发展方向进行探讨，并为相关研究人员提供参考，促进该领域的进一步发展和突破。

2. 葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理：2.1 葡萄糖氧化酶简介：葡萄糖氧化酶是一种存在于细胞内的酶类，在生物体中起到将葡萄糖转化为能量的重要作用。

该酶主要参与细胞内氧化还原反应，并催化葡萄糖与辅酶NAD+之间的反应。

在此过程中，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，并产生还原型辅酶NADH。

2.2 血糖测定方法概述：血液中的血糖水平是一个重要的生理指标，可以提供人体能量供给的信息。

因此，血糖水平的测定对于诊断和治疗许多代谢性疾病非常重要。

目前，有多种方法用于测定血液中的血糖浓度，其中最常用且最经典的方法就是使用葡萄糖氧化酶法。

2.3 葡萄糖氧化酶法的基本原理：葡萄糖氧化酶法是一种非常敏感和特异性的测定血糖浓度的方法。

该方法基于葡萄糖氧化酶与葡萄糖的特异性反应，通过检测在该反应中生成的还原型辅酶NADH的产生量来间接测定血液中的血糖浓度。

葡萄糖试剂盒（氧化酶法）标准操作程序1. 摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清样本中葡萄糖的含量。

2. 适用范围程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清样本中葡萄糖的含量。

3. 职责使用AU5811自动生化分析仪进行测定葡萄糖浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的葡萄糖试剂盒采用的是氧化酶法(GOD-POD)。

5. 原理葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下与水分子和氧分子反应生成葡萄糖酸和双氧水,最后双氧水在过氧化物酶的催化下与色原底物、4-氨基安替比林和苯酚反应生成红色化合物醌亚胺。

由于醌亚胺在波长500nm 处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内, 500nm 处吸光度的变化值与样本中葡萄糖的含量成正比。

O H O H O H O O H 22222224+−−−→−+-++−−−−→−++醌亚胺苯酚氨基安替比林葡萄糖酸葡萄糖过氧化物酶葡萄糖氧化酶6. 仪器AU5811自动生化分析仪7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2 试剂瓶内主要成分：R1：磷酸盐缓冲液、过氧化物酶、苯酚、防腐剂；R2：磷酸盐缓冲液、葡萄糖氧化酶、4-氨基安替比林、防腐剂；校准品：葡萄糖、防腐剂7.3 试剂稳定性：试剂于2℃-8℃避光保存，有效期为一年。

开瓶后存放在生化分析仪试剂仓中可稳定14天。

8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用科华公司的校准品对自动分析仪进行校准。

按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品：罗氏公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。

每日在测定前做一次质控加试剂后做一次质控。

该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。

3.移液器（枪）（规格1.0ml6个，20山6个），枪头各100个
4.试管50支，
6.记号笔6支
7.蒸馏水1瓶
此范围仅供参考，各实验室须建立本室的参考值范围。
【参考文献】
1.全国临床检验操作规程（第二版），主编：叶应妩，王敏三，1997,P616.
2.Trinder P. Ann Clin Biochem，1969, 6: 24-27.
血糖测定实验所需器材：
1.紫外分光光度计（比色杯光径1.0cm），
2.恒温水浴箱（能调温度的，37C）,
>13000U/L
过氧化物酶（POD
>900U/L
R2
磷酸缓冲液（pH7.0）
100mmol/L
酚
11mmol/L
4-氨基安替吡啉
0.77mmol/L
葡萄糖标准液5.55mmol/L(100mg/dl)
【样本】
新鲜无溶血血清。
【步骤】
将10ml R1与90ml R2混合均匀，即为工作液
空白管
校准管
样品管
工作液
1.50 ml
1.50 ml
1.50 ml
蒸馏水
0.01 ml
校准液
0.01 ml
样品
0.01 ml
分别混合均匀，37C水浴10〜15分钟（避免太阳光直射），用波长505nm比色杯光径1.0cm，用空白管调“零”点测定各管的吸光度（A）值。
【计算】
葡萄糖
葡萄桃
【参考值】
血清/血浆：3.89—6.11 mmol/L（70—110mg/dl）。
实验血糖测定（葡萄糖氧化酶法）
【目的】
体外测定血清或血浆中葡萄糖含量。
【临床意义】

项目方法葡萄糖（GLU）葡萄糖氧化酶终点法目录1.检测原理2.标本采集与处理2.1受检者的准备2.2静脉采血2.3抗凝剂2.4标本处理3.试剂3.1试剂3.2校准血清3.3试剂与校准血清的稳定性4.仪器5.操作6.计算7.操作性能7.1精密度7.2准确度7.3灵敏度7.4可报告范围7.5特异性7.6干扰8.参考值9.临床意义附录A:参数1.检测原理在葡萄糖氧化酶的作用下，β-D-葡萄糖氧化生成过氧化氢和葡萄糖酸。

过氧化氢在过氧化物酶的存在下与苯酚、4-氨基安替比林氧化缩合成红色醌式染料。

此染料在500nm处有最大吸收峰，其吸光度值与葡萄糖含量成正比。

GODβ-D-葡萄糖+H2O+O2-----------H2O2+D-葡萄糖酸PODH2O2+4-氨基安替比林+苯酚----------醌亚胺（红色）+H2O2．标本采集与处理2.1受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。

注意有无应用影响测试项目的药物。

此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。

应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

有些药物长期应用，可使患者糖代谢发生障碍，引起血糖增高，因而应当在使用这些药物期间定期监测血糖，避免引起高血糖。

常用药物中可致血糖增高的有以下几类。

糖皮质激素：糖皮质激素药物如强的松、氢化可的松、抗炎松等，临床应用广泛。

糖皮质激素可通过三条途径影响糖代谢：（1）增强糖元分解；（2）使糖异生途径活动；（3）减少外周组织对葡萄糖的作用，因而血糖升高。

如果大剂量或长期使用糖皮质激素治疗，应密切监测血糖，根据情况适当减少剂量或配合降糖药物应用。

甲状腺制剂：甲状腺激素（甲碘胺、甲状腺素、甲状腺球蛋白），可以促进葡萄糖的吸收，加速糖元分解及糖异生，使血糖增高。

因而应用甲状腺制剂时应严密观察，特别是糖尿病病人需用甲状腺制剂时应慎重给药。

血清中葡萄糖含量检测的方法研究进展【摘要】血清葡萄糖含量是临床生化检验中重要的指标，其的准确测定对糖尿病等疾病的诊断、治疗都有重大意义。

本文介绍了近几年血清中葡萄糖含量检测的主要方法以及这些方法的一些研究结果。

【关键词】血清；葡萄糖；检测方法血清中葡萄糖是人体内各组织细胞活动所需的物质。

人体内的血糖必须保持一定的水平才能维持体内各器官和组织的需要。

正常人在空腹血糖浓度为3.9～6.0mmol/L。

空腹血糖浓度超过6.0mmol/L称为高血糖而血糖浓度低于3.9mmol/L 称为低血糖。

血清中葡萄糖是临床生化检验中的重要指标，可以为糖尿病、高血压以及心脑血管系统等疾病的诊断、治疗用药、病情监测以及疾病预防等方面提供客观依据。

因此，对其进行准确的测定具有极其重要的意义。

1血清中葡萄糖的主要检测方法目前，血清中葡萄糖的检测方法主要有：葡萄糖氧化酶（GOD-POD）法、己糖激酶法（HK法）、葡萄糖脱氢酶法（GDH法）、气相色谱-同位素稀释质谱法（GC-IDMS法）以及无创血糖测量法等。

下面就对以上方法进行简要的介绍。

1.1葡萄糖氧化酶（GOD-POD）法葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)将葡萄糖氧化成葡萄糖酸，同时释放过氧化氢。

过氧化物酶(peroxidase，POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。

红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。

通过测定吸光度就能计算出血液中葡萄糖的含量。

该法的优点有：操作简便，用血量少，成本低，多见于便携式血糖仪，是我国卫生部推荐的血糖测定的常规方法。

但缺点是：过氧化酶的特异性较差，尿酸、维生素C、胆红素等可与色原性物质竞争过氧化氢而抑制反应，引起结果偏低。

且该法线性范围较窄（0.1~20.0mmol/L）。

同时，葡萄糖氧化酶对β-D-葡萄糖高度敏感，而新配制的葡萄糖标准溶液主要为α-D-葡萄糖，为使检测结果准确，需静置溶液2h以上（最好过夜）待其完全转化为β-D-葡萄糖再使用。

竭诚为您提供优质文档/双击可除葡萄糖氧化酶法的实验报告篇一：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase，goD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。

过氧化物酶(peroxidase，poD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。

红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。

【试剂】1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液(ph7.0)称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800ml中，用1mol/L氢氧化钠(或1mol/L盐酸)调ph至7.0，用蒸馏水定容至1L。

2．酶试剂称取过氧化物酶1200u，葡萄糖氧化酶1200u，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于磷酸盐缓冲液80ml 中，用1mol/Lnaoh调ph至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置4℃保存，可稳定3个月。

3．酚溶液称取重蒸馏酚100mg 溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。

4．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合，4℃可以存放1个月。

5．12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至lL。

6．100mmol/L葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。

2h以后方可使用。

7．5mmol/L葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。

【操作步骤】1．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。

2．手工操作法取试管3支，按下表操作。

读取标准管及测定管吸光度。

【计算】【参考范围】空腹血清葡萄糖为3.89～6.11mmol/L。

谢谢！
三.测定的血糖浓度异常： 反应不彻底引起的（偏低） 葡萄糖标准溶液浓度有问题（偏高或偏低） 移液器引起的（偏高或偏低）
【讨论】
本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应， 第二步特异性较差。误差往往发生在反应的第二步。一些还原性物 质如尿酸、维生素C、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争 过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑 制，使测定结果偏低。
（1）葡萄糖＋O2＋H2O
葡萄糖酸＋H2O2
（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚
过氧化物酶 （POD）
H2O ＋红色醌式物质
Trinder反 应
【思考题】
1.为什么要在饥饿条件下采血？ 血糖主要来源是食物，进食会增高血糖浓度。 2.除糖尿病外，若血糖浓度测定结果不正常 可考虑哪些原因？ 注射葡萄糖、饮食、糖代谢疾病、应激反应 3.本法测定血糖为何不需制备血滤液？ 血滤液除蛋白，对血糖测定没有影响。 4.为什么取血前要涂凡士林？ 起润滑，防渗血作用。
1.正常血糖浓度: 3.9-6.1 mmol/L(成年人空腹)
低血糖:
低于 2.8 mmol/L
高血糖:
超过 7.8 mmol/L
2. 低血糖的因素：胰岛素、磺脲类药、饮酒、严重饥 饿
高血糖的因素：进食、情绪紧张时、糖尿病.
3. 糖尿病的诊断和治疗监视、新生儿低血糖症等.
肾上腺素
adrenaline;epinephrine
结果分析
一.结果可报告范围： 本法对葡萄糖的检测范围为0.06～22.2 mmol/L。当样品测 定值超过上限时，应将样品用9 g/L氯化钠溶液作1+ 4稀释， 重新测定，结果乘以5。
二.当样品中抗坏血酸浓度≤ 852 µmol/L，胆红素浓度≤ 684 µmol/L， 血红蛋白浓度≤ 2.00 g/L，甘油三酯浓度≤ 22.6 mmol/L时没有观察 到干扰。

实验 血清葡萄糖测定
葡萄糖氧化酶法
1
【实验要求】
1. 掌 握 掌 握 血 糖 测 定 葡 萄 糖 氧 化 酶 法 （ GODPOD法）的原理，操作方法 2.熟悉葡萄糖测定的临床意义； 3.巩固分光光度计的使用。
2
【实验原理】
葡萄糖氧化酶（GOD）催化葡萄糖氧化成葡萄糖 酸，并产生过氧化氢。在过氧化氢酶（POD）及色原性 受体4-氨基安替比林（4-AAP）的存在下，过氧化氢释 放氧使色素原氧化生成红色醌类化合物。醌的生成量与 葡萄糖成正比，在波长520nm处比色，求得葡萄糖含量。
7
【临床意义】
3.生理性或暂时性低血糖 见于饥饿、剧烈运动、注射胰岛 素后、妊娠和服用降糖药后。 4.病理性低血糖 见于(1)胰岛β细胞增生瘤等，使胰岛素分 泌过多；(2)对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能 减退，肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、 肾上腺皮质激素分泌减小；(3)严重肝病患者，由于肝脏储 存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。
8
【注意事项】
1、注意准确的加入所需要的液体量。 2、注意胆红素、谷胱甘肽、尿酸和维生素C等一些还 原性物质将使结果受到干扰。
9
【打扫卫生】
1、实验结束后对自己用过的试管、移液管等物 品进行清洗。 2、打扫桌面与地面卫生。 3、带齐本人物品，离开实验室。
10
谢 谢！
11
【计算】
血清葡萄糖（mmol/L）＝ Au Cs As
Au:测定管吸光度 As:标准管吸光度 Cs:标准管浓度
5
【参考范围】
血清葡萄糖：3.89～6.11 mmol/L
6
【临床意义】
1.生理性高血糖 见于饭后1～2h，注射葡萄糖或摄入高糖 食物后、情绪紧张肾上腺素分泌增加时，但不应超过 10mmol/L。 2.病理性高血糖 见于(1)内分泌腺功能障碍能引起高血糖， 如胰腺β细胞损害导致胰岛素分泌缺乏，血糖可超过正常， 临床上称为糖尿病。其他内分泌疾病引起的各种对抗胰岛 素的激素分泌增加也会出现高血糖；(2)颅内压增高：颅内 压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等； (3)由于脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等可使血 糖轻度增高。

POD
红色醌类化合物
2019/2/15
4
实验试剂
器材
5ml移液管，50或100ul微量可调式移液管,721E型分光光度计，1比色皿， 37度恒温水 浴锅。
试剂
0.1磷酸盐缓冲液（Ph=7.0） 称取无水磷酸二氢钾5.3g，溶于蒸馏水800ml中，调节pH=7.0,定容至1L 酶试剂 取过氧化物酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮化钠100mg，溶入磷酸 盐缓冲液80ml中，调节pH值至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置于4度 保存，可稳定存在3个月。 酚溶液 称取重蒸馏酚100mg，溶入蒸馏水100ml中，用棕色瓶储存。 酶-酚混合试剂 将酶试剂及酚溶液等量混合，4度可放一个月。
6
2019/2/15
实验操作
试剂
血清/μL 葡萄糖标准液/μL 蒸馏水/μL
空白管
0.02
标准管
0.02 -
测定管
0.02 -
酶酚混合试剂/μL
3.00
3.00
3.00
混匀，置于37°C水浴中，保温25min，在波长510nm处比色，以空白管 调零，读取标准管和测定管的吸光度。 血清葡萄糖的含量= 参考值：3.89-6.11mmol/L
5 2019/2/15
实验试剂
12mmol苯甲酸钠溶液 称取苯甲酸钠1.6g，于800ml蒸馏水中加温助溶，冷却后加蒸馏水定容 至1L。 葡萄糖标准储存液（100mmol/L） 称取已干燥至恒重的无水葡萄糖1.082g，溶入约70ml 12mmol/L苯甲酸 钠溶液中定容至100ml。2h以后方可使用。 葡萄糖标准工作液（5mmol/L） 吸取葡萄糖标准储存液5.00ml，置入100ml容量瓶中，用12mmol/L，苯 甲酸钠溶液稀释至刻度，混匀。

葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖实验原理葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并成成过氧化氢。

过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解喂水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林（4-AAP）和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。

在500nm 处测得的吸光度与葡萄糖含量成正比。

GOD葡萄糖+O2→葡萄糖酸+H2O2PODH2O2+4-AAP+酚→红色醌类化合物+H2O临床意义 1.生理性高血糖可见于餐后或高糖饮食.情绪紧张肾上腺分泌增加等。

2.病理性高血糖（1）糖尿病患者。

（2）内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质及髓质功能亢进等。

升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。

（3）颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤.颅内出血.脑膜炎等。

（4）脱水引起的高血糖：如呕吐.腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。

3.生理性低血糖见于长期饥饿和剧烈运动后。

4.病理性低血糖（特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性.肝源性.胰岛素瘤等）。

（1）胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。

（2）对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退.肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使相应的激素分泌减少。

（3）严重肝病患者，由于肝脏存储糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。

注意事项 1.葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%为α型，64%为β型。

葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。

目前某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完全自发变旋过程。

新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置2h以上（最好过夜），待变旋平衡后方可应用。

2.葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量，这是因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。

3.测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。

78
化学分析计量
2008年 , 第 17 卷 , 第 3 期
血清中葡萄糖含量的测定方法及其研究进展
戴新华 齐韬 杨梦瑞 徐蓓 方向
100013) ( 中国计量科学研究院化学计量与分析科学研究所 , 北京
*
摘要 关键词
阐述 了血清中葡萄糖的检测在临床诊 断研究方 面的重 要意义 , 较 全面地 综述了血 清葡萄 糖常用 的检测 血清 葡萄糖 检测方法 20. 0 mm ol/L ) [ 5] 。葡 萄糖 氧 化酶 对 葡萄糖溶液中有 需要 型到 型及 D 葡萄 糖 高度 敏 感。
* 国家 科 技基 础 条 件平 台 项 目标 准 物 质资 源 共享 平 台 建设 ( 2005DKA 21501 )与 十一五 国家科技支撑计划 重点项目 科研用高 纯有 机 试 剂 核 心 单 元 物 质 及 共 性 关 键 技 术 的 研 制 与 开 发 ( 2006BA F07B03) 收稿日期 : 2008 03 05
型两种葡萄糖 , 葡萄糖的 完全氧化
型 的转 化。新配 制的 葡萄糖 标准 液主 要是
型葡萄糖 , 必须放置 2 h 以上 ( 最好过夜 ) 待其变旋 平衡后方 可应用 [ 6] 。 1. 2 微电流法 微电流法的检测原 理是在电极表面固化 GOD, 当血液滴 到电极上时 , 葡萄糖氧化酶可氧化血液 中的葡萄糖 产生葡萄 糖内酯和 H 2 O2, 同时 释放 出电 子。所产 生的 电子 被导 电介 质转移给电极 , 在一 定电压 作用 下 , 流过电 极的 电流 将发生 变化 , 通过检测电流变化与葡萄糖浓度 的线性关系 达到检测 血糖浓度的目 的 [ 7] 。 1. 3 氧速率法 氧速率 法又 称 氧电 极 法 , 其原 理是 测 定溶 液 中氧 的消 耗 , 根据从酶反应开 始至结 束的 氧浓度 差 , 求得 标本 中葡萄 糖浓度。 葡萄糖 + O2 + H 2 O 葡萄糖酸 + H 2 O2 氧电极置 于含有适量葡萄糖氧化酶的 溶液中 , 当加入样 品后 , 样品中的葡萄糖被氧化而消耗 氧。由于氧消 耗量与血 清中的葡萄糖 浓度成 正比 , 而 电极 的极 限扩 散电 流 ( I M )又 与溶液中氧含量成正比 , 因此 , 氧 电极 I M 值即可反 映样品中 血清葡萄糖的浓 度 [ 8] 。氧速 率法 的精密 度好、 准 确性高 , 且 具有极高的抗 特异性。 该法中 氧电 极只监 测高 度特 异的葡 萄糖氧化酶催 化反应 , 且电极检测到的 是样本的最 大氧消耗 速率 , 因而它不受大气中氧的干扰 , 也不受溶 血黄疸、 乳糜和 其它代谢物的 干扰 , 其 测定结 果与 参考 方法最 接近 [ 9] ; 由于 氧速率法的使 用 , 血糖的 结果可 以在加 入样本 20 s 后获 得 , 大大地提高了 检测速 度。该法 的不 足之处 是需 要特 殊仪器 反应槽和电极 , 只能测定葡萄糖含量 , 不能测 定其它项 目 ; 由 于氧电极膜具 有一定寿 命 , 使用 一段时 间后 , 膜 的老 化使其 对氧通透性降 低 , 灵 敏度下 降 , 检测 结果的 准确 度也 随之下 降 [ 10] 。

实验名称：葡萄糖氧化酶法测定血清（浆)葡萄糖【实验原理】葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸并产生过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，能与苯酚及4-氨基安替比林作用产生红色醌化合物。

醌的产量与葡萄糖量成正比。

醌化合物呈红色，其颜色深浅与葡萄糖含量成正比，在500nm出测定其吸光度，对照标准科计算出葡萄糖的含量。

【实验准备】一、材料（1）血清（2）血浆：以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆二、试剂（1）试剂R1：磷酸盐缓冲液100mmol，pH7.5，苯酚10mmol/L。

（2）试剂R2：磷酸盐缓冲液100mmol，pH7.5，葡萄糖氧化酶16 000U/L，过氧化物酶1 000U/L，4-氨基安替比林2.0mmol/L。

（3）葡萄糖校准液：5.550mmol/L（1mg/ml）（4）生理盐水。

（5）工作试剂（酶酚混合液）：取R1试剂4.5ml与R2试剂0.5ml混合在10ml试管中。

三、器材（1）试管和试管架（2）移液枪（3）722型分光光度计（4）酶标仪（5）恒温水浴箱（6）酶标板（7）板条（8）生化培养箱【实验步骤】（1）取酶标板一块，板条一条，设定空白孔A1，标准孔A2、A3，测定孔A4、A5，按【实验结果】葡萄糖（GLU）浓度（mmol/L）=（A测定孔平均值/A校准孔平均值）×5.55参考值：3.89~6.11mmol/L测得数据为A2 A3 A4 A50.085 0.05 0.03 0.037(0.037+0.030)/2——×5.55 ﹦2.75mmol/L（0.085+0.050/2【实验讨论】①移液枪操作熟练程度直接影响测定结果，吸样前需多练习②测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。

③由于尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，会干扰过氧化物酶反应，出现结果假性偏低，因此葡萄糖氧化酶法不能直接测定尿液葡萄糖含量，但可直接测定脑脊液葡萄糖含量。

④本法测定葡萄糖原理中反应式第一步是特异反应，第二步特异性较差，所以第二步易引起误差。

葡萄糖氧化酶法测血糖实验报告实验目的，通过葡萄糖氧化酶法测定不同浓度的葡萄糖溶液，并利用标准曲线测定未知血糖浓度。

实验原理，葡萄糖氧化酶是一种特异性酶，只能催化葡萄糖的氧化反应。

在此反应中，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，同时还伴随着NAD+被还原成NADH+H+。

而NADH+H+在紫外光下有较强的吸收，其吸收峰位于340nm处。

因此，可以通过测定NADH+H+的吸光度来间接测定葡萄糖的浓度。

实验步骤：1. 预先配制不同浓度的葡萄糖溶液，分别为0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.3mmol/L、0.4mmol/L和0.5mmol/L。

2. 取5个比色管，分别加入0.5ml不同浓度的葡萄糖溶液。

3. 加入0.5ml葡萄糖氧化酶溶液，混匀后放置在37℃恒温槽中反应10分钟。

4. 分别加入0.5mlNADH+H+溶液，混匀后立即测定吸光度A1。

5. 将比色管放入37℃恒温槽中反应5分钟后，再次测定吸光度A2。

实验数据处理：1. 以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度差ΔA（ΔA=A2-A1）为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 用标准曲线测定未知血糖浓度。

实验结果，标准曲线方程为ΔA=0.05C+0.01，R²=0.998，未知血糖浓度为0.35mmol/L。

实验结论，通过葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度，可以得到准确的结果。

标准曲线的斜率与浓度呈线性关系，R²接近1，说明实验结果可靠。

未知血糖浓度为0.35mmol/L，与实际值接近，证明该方法准确可靠。

实验注意事项：1. 实验中要注意葡萄糖溶液和酶溶液的配制浓度，避免误差。

2. 在测定吸光度时，要确保比色管内溶液充分混匀，避免测定误差。

实验改进：1. 可以尝试使用其他方法验证实验结果，提高实验的可靠性。

2. 可以尝试改变反应条件，如温度、反应时间等，观察对实验结果的影响。

总结，葡萄糖氧化酶法是一种常用的测定血糖浓度的方法，通过本次实验验证了其准确性和可靠性。

葡萄糖氧化酶的活力测定实验报告葡萄糖氧化酶酶活测定葡萄糖氧化酶酶活测定1 酶活单位与定义pH6.0、30℃的条件下，每分钟能把 1.0μmol 的β-D-葡萄糖氧化成D-葡萄糖酸和H2O2 的酶量为一个单位。

2 测定原理葡萄糖和氧反应，在葡萄糖氧化酶的作用下，生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢和无色的还原型邻联茴香胺在过氧化物酶的作用下，生成水和红色的氧化型邻联茴香胺。

3 试剂和溶液3.1 磷酸盐缓冲液（pH6.0）称取16.61g 磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O ）和35.82g 磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O），溶于无CO2 的水中，稀释到1000ml。

3.2 邻联茴香胺甲醇缓冲液1g 邻联茴香胺加在100ml 甲醇中搅拌溶解备用。

临用时现配，取0.1ml 加入到上述缓冲液12ml 中混匀。

3.3 180g/l 葡萄糖水溶液18g 葡萄糖加适量水溶解，并定容至100ml。

3.4 0.03%辣根过氧化物酶液称取辣根过氧化物酶（HRP,美国Ameresco 公司）10mg，溶于30ml 蒸馏水。

4 仪器设备721-分光光度计、恒温水浴、秒表5 分析步骤5.1 待测酶样品的处理将待测酶样做适当稀释后进行试验，使得测定△A 值在0.25～0.4。

5.2 测定6 结果表示与计算X=[△A÷（11.3×t×0.1）] ×nt—测定时间，min0.1—样品体积，ml11.3—消光系数n—稀释倍数所得结果表示至整数。

篇二：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶(glucose oxidase ，GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。

过氧化物酶(peroxidase ，POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder 反应。