血清葡萄糖的测定

血清葡萄糖GLU测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。

2 实验原理本试剂基于在精密度和准确性方面具有很高可靠性的Trinder’S方法，在防止已知化合物（如尿酸、谷胱甘肽和肌酐等）的干扰进行了进一步的改良。

GOD葡萄糖+ H2O+ O2 H2O2+葡萄糖酸 PODH2O+AAP + HBA 醌亚胺（红色）H2O 式中：AAP 为4-氨基安替比林；HBA 为4-羟基苯甲酸上述反应中，红色醌亚胺色素的生成量与样本中葡萄糖的浓度成正比，通过在波长500nm波长处测定吸光度的变化值，即可测得样本中葡萄糖的浓度。

3 标本：3.1 病人准备：12小时禁食。

3.2 类型：血清，标本最好不要溶血。

迅速分离血清或，减少红细胞糖酵解时葡萄糖的损失。

随机收集尿样。

3.3 标本存放：血清应在血液采集1小时内，尽早分离。

加入糖分解抑制剂（NaF，KF）后的稳定性：15～25℃保存可稳定1天,4～8℃保存可稳定7天。

血清中的葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在25℃下可稳定8个小时，在4℃下可稳定72小时。

尿样应保存在2～8℃下并尽快进行分析。

脑脊髓液如果避免蒸发可在2～8℃下稳定至少5天，5天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20℃的条件下。

3.4 标本运输：常温条件下保存运输。

3.5标本拒收标集：细菌污染、超时送检的的标本。

4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司GLU试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）：过氧化物酶 375U/L 4-羟基苯甲酸15mmol/L4-氨基安替比林0.75mmol/L磷酸盐缓冲液110mmol/L试剂2（R2）：葡萄糖氧化酶6000U/L 磷酸盐缓冲液110mmol/L4.1.2 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月4.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

血清葡萄糖测定方法
血清葡萄糖测定方法是一种常用的检测血清葡萄糖的方法。

它可以检测血清中的水溶性葡萄糖的含量，从而可以反映机体的糖代谢情况。

血清葡萄糖测定方法有多种，其中最常用的是酶联免疫法（ELISA）和磷酸二氢钾滴定法（HK）。

2、酶联免疫法（ELISA）
酶联免疫法（ELISA）是一种常用的血清葡萄糖测定方法。

ELISA技术利用免疫反应原理，把糖尿病患者血清中的葡萄糖水解酶以抗原或抗体的形式结合起来，然后用抗体识别，经过可见性染料和酶的底物分解，用放大效应得到明显的反应信号，通过测量信号来确定葡萄糖的浓度。

ELISA对葡萄糖的检测灵敏度很高，但是分析时间比较长，且需要有特殊的仪器。

3、磷酸二氢钾滴定法（HK）
磷酸二氢钾滴定法（HK）是另一种检测血清葡萄糖浓度的常用方法。

它是一种血清中葡萄糖的滴定法，用40-50℃的磷酸二氢钾溶液作为比色剂，通过比色分析得到血清中的葡萄糖含量。

这种方法分析速度快，结果准确，但是需要较高的技术要求。

4、结论
血清葡萄糖测定方法是一种常用的检测血清葡萄糖的方法，它可以准确反映机体的糖代谢状况。

目前最常用的血清葡萄糖测定方法有酶联免疫法（ELISA）和磷酸二氢钾滴定法（HK），它们具有自己的优缺点，根据实际情况选择合适的方法。

血液中葡萄糖的测定（邻甲苯胺法）一目的掌握邻甲苯胺法测定血糖的原理和方法。

二原理血清样品中的葡萄糖在酸性环境中与邻甲苯胺共热时，葡萄糖脱水转化为5-羟甲基α-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺结合为蓝绿色的醛亚胺（Schiff碱）。

血清中的蛋白质则溶解在冰醋酸和硼酸中不发生混浊。

将标准葡萄糖溶液与样品按相同方法处理，在630nm波长处比色，即可测得样品中葡萄糖含量。

邻甲苯胺法测得正常空腹血糖值为3.9～6.11mmol / L (即100ml血清中葡萄糖的正常值为70～100mg)。

邻甲苯胺法对葡萄糖特异性高，测定结果为真糖值，为临床上常用的血糖测定方法。

此方法不受血液中其他还原物质的干扰，测定时也无需去除血浆或血清中的蛋白质。

由于血液葡萄糖在进食后明显升高，所以必须采取空腹血做血液葡萄糖测定，血细胞糖酵解作用会降低血液葡萄糖浓度，所以血液抽出后应及时测定，或用含氟化钠的抗凝剂抑制糖酵解，可稳定24小时。

三操作1.采得待测血样（抗凝）后立即离心以分离血浆（3,000转离心15分钟）。

2.取干燥试管4支，分别标出号码，按下表添加试剂。

4.以空白管调零，读取各管630nm处吸光度值。

5.计算血糖mmol/L = 测定管吸光值× 5标准管吸光值四实验器材与试剂分光光度计、沸水浴、试管、移液管、电炉、烧杯、洗耳球、试管夹。

邻甲苯胺试剂：称取硫脲(AR)级1.5g，溶于940ml冰醋酸(AR级)中，加邻甲苯胺60ml。

置棕色瓶中至少可用两个月。

此试剂腐蚀性极强，应避免接触皮肤。

12 mmol/L苯甲酸溶液：900ml蒸馏水中加入1.4g苯甲酸，加热助溶，冷却后定容到1L。

葡萄糖标准储存液（100 mmol / L）：称取无水葡萄糖（烘箱80烘干至恒重，干燥器中保存）1.802g，溶于80ml苯甲酸溶液中，再定容到100ml。

葡萄糖标准应用液（5 mmol / L）：取标准储存液5ml，加苯甲酸溶液至100ml。

血清葡萄糖测定1.实验原理在己糖激酶（HK）催化下，葡萄糖和ATP发生磷酸化反应，生成葡萄糖-6-磷酸（G6P）与ADP。

前者在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）催化下脱氢，生成6-磷酸葡萄糖酸（6PG），同时使NADP还原成NADPH。

NADPH的生成速率与葡萄糖浓度呈正比。

NADPH在波长340nm有吸收峰，可监测吸光度升高速率，计算血清中葡萄糖浓度。

2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。

2.2 类型：血清或血浆（EDTA，肝素或氟化钠），标本最好不要溶血。

迅速分离血清或血浆，减少红细胞糖酵解时葡萄糖的损失。

随机收集尿样。

3. 标本存放：血清、血浆应在血液采集1小时内，尽早分离。

加入糖分解抑制剂（NaF，KF）后的稳定性：15～25℃保存可稳定1天,4～8℃保存可稳定7天。

血清中的葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在25℃下可稳定8个小时，在4℃下可稳定72小时。

尿样应保存在2～8℃下并尽快进行分析。

脑脊髓液如果避免蒸发可在2～8℃下稳定至少5天，5天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20℃的条件下。

4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：细菌污染、超时送检的的标本。

6. 试验材料：6.1 欧泰克血糖测定试剂盒，罗氏复合定标液，罗氏质控品I、II。

6.1.1 试剂组成：磷酸缓冲液，PH7.6 100 mmol/L三磷酸腺苷（ATP） 4 mmol/L醋酸镁10 mmol/LNAD+ 3 mmol/L己糖激酶（HK）≥25 KU/L葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）≥75 KU/L6.1.2试剂准备：6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂有效期为24个月。

试剂不可冰冻。

开盖后应避免污染。

6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：避免试剂与皮肤及粘膜接触。

6.2 校准品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：日立7060全自动生化分析仪8. 操作步骤：8.1 项目基本参数：参见7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见7060生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

血清葡萄糖测定方法
血清葡萄糖测定方法的步骤如下：
1. 采集血液样本，一般常用的是静脉血。

2. 将血样离心，使血浆和血细胞分离开。

3. 取血浆样本进行血清葡萄糖测定。

常用的血清葡萄糖测定方法有：酶促反应法、葡萄糖氧化酶法、光度法等。

4. 酶促反应法：将血清样本与一定浓度的葡萄糖酰胺酶和葡萄糖脱氢酶一起反应，生成NADH。

通过测量NADH的吸光度来计算血清中的葡萄糖含量。

5. 葡萄糖氧化酶法：将血清样本与一定浓度的葡萄糖氧化酶反应，生成过氧化氢和D-酮糖。

再用过氧化物酶反应掉过氧化氢，最后通过吸光度计算血清中的葡萄糖含量。

6. 光度法：将血清样本与一定浓度的酚啉试剂和磷酸缓冲液混合后，通过加热反应，测量其吸光度，然后计算血清中的葡萄糖含量。

7. 根据所用方法的不同，测定结果会有一些差异，请根据实验室所用的方法进行测定。

一、实训目的通过本次实训，使学生掌握血清葡萄糖检测的基本原理、操作方法和注意事项，提高学生的实验技能和综合素质，为今后从事临床检验工作打下坚实基础。

二、实训内容1. 实验原理血清葡萄糖检测是利用葡萄糖氧化酶法检测血清中的葡萄糖含量。

该方法基于葡萄糖氧化酶催化-D-葡萄糖氧化生成D-葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的催化下，与色原在酸性条件下生成绿色化合物，通过比色法测定绿色化合物的吸光度，从而计算出血清中葡萄糖的含量。

2. 实验材料（1）试剂：葡萄糖氧化酶试剂盒、显色剂、底物、缓冲液、氧化酶溶液、过氧化物酶溶液、盐酸、磷酸盐缓冲液、标准葡萄糖溶液。

（2）仪器：酶标仪、移液器、加样器、微量离心机、恒温水浴锅、试管、试管架、吸头、吸管、酒精灯、蒸馏水等。

3. 实验步骤（1）标准曲线绘制1）将标准葡萄糖溶液用蒸馏水稀释成0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mg/L系列浓度。

2）分别取上述溶液100μl于试管中，加入葡萄糖氧化酶试剂100μl，混匀。

3）在37℃恒温水浴锅中反应10分钟。

4）取出试管，加入显色剂100μl，混匀。

5）室温放置10分钟。

6）用酶标仪在波长520nm处测定吸光度。

7）以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

（2）样品测定1）取血清样品100μl于试管中，按照上述步骤进行操作。

2）测定吸光度。

3）根据标准曲线计算血清中葡萄糖的含量。

4. 结果与分析（1）标准曲线绘制以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，计算相关系数R²。

（2）样品测定根据标准曲线，计算血清中葡萄糖的含量。

三、实训总结1. 通过本次实训，掌握了血清葡萄糖检测的基本原理、操作方法和注意事项。

2. 培养了严谨的实验态度和团队协作精神。

3. 提高了实验技能和综合素质。

4. 为今后从事临床检验工作打下了坚实基础。

四、存在问题及改进措施1. 问题：部分学生操作过程中出现吸光度误差较大，导致计算结果不准确。