总皂苷含量测定的方法学验证

HPLC-ELSD法测定酸枣仁合剂提取物混合片剂中酸枣仁皂苷A的含量张凤鸿　上海中维检测技术有限公司　126707摘要：建立了HPLC-ELSD分析酸枣仁合剂提取物混合片剂中酸枣仁皂苷A的含量的方法。

采用：Agilent XDB-C18, 柱温30℃，乙腈水梯度洗脱，梯度流速，程序进样，ELSD蒸发温度90℃，雾化器温度：85℃。

实验结果：酸枣仁皂苷A在20.00-100.00ug/ml范围内线性良好（R² = 0.9971），仪器精密度1.2%，方法精密度2.2%，平均回收率在99.8%-105.9%，系统适应性中样品中酸枣仁皂苷A 的分离度为2.2，理论塔板数74459，专属性良好，检出限为5ug/mL，对应的样品浓度为50mg/kg（0.005%），定量限为10ug/mL，对应的样品浓度为100 mg/kg （0.010%）。

结论：采用HPLC-ELSD方法，对枣仁合剂提取物混合片剂中酸枣仁皂苷A的含量进行测定，操作简单，准确性高、重复性好适合于酸枣仁合剂提取物混合片剂中酸枣仁皂苷A的含量的测定。

酸枣仁皂苷来源于为鼠李科植物酸枣Ziziphus jujuba Mill. var.spinosa (Bunge) H u ex H. F. Chou干燥成熟的种子，具有养心补肝，宁心安神，敛汗，生津。

用于虚烦不眠，惊悸多梦，体虚多汗，津伤口渴的功效[1]。

酸枣仁合剂收录于卫生部药品标准中药成方制剂第七册，由酸枣仁、知母、茯苓、川芎和甘草五味中草药构成[2]，但由于煎煮程序复杂，因此部分药厂将这五味或是取其部分中草药或与其他中草药配伍做成特殊膳食补充剂，方便服用。

其中起主要药效的是酸枣仁皂苷A，目前对于酸枣仁皂苷A的检测多是集中在单味药酸枣仁及其提取物的检测，利用HPLC[1,3,4]，以及LC-MS-MS方法[5]，然而没有对于酸枣仁合剂及复方中酸枣仁皂苷A的检测方法，本实验的主要目的是利用HPLC-ELSD建立酸枣仁合剂提取物混合片中酸枣仁皂苷A含量的测试方法。

《三七总皂苷对K562细胞抗肿瘤作用及机制的研究》摘要本研究主要探讨了三七总皂苷（PNS）对K562细胞的抗肿瘤作用及其潜在机制。

通过一系列实验，我们观察了PNS对K562细胞的增殖抑制作用，以及其对细胞凋亡、细胞周期、信号通路等方面的影响。

实验结果表明，三七总皂苷具有显著的抗肿瘤作用，其机制涉及多个层面。

一、引言三七是一种常用的中药材，具有广泛的药理作用，其中三七总皂苷（PNS）是其主要的有效成分之一。

近年来，研究表明PNS具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等多种生物活性。

K562细胞是一种人慢性髓性白血病细胞，常被用作肿瘤研究的模型。

因此，本研究旨在探讨PNS对K562细胞的抗肿瘤作用及机制。

二、材料与方法1. 材料实验所用的三七总皂苷（PNS）购自某某制药公司，K562细胞购自中科院细胞库。

实验所用药品与试剂均符合实验要求。

2. 方法（1）细胞培养与处理：K562细胞在含有10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中培养，并加入不同浓度的PNS进行处理。

（2）细胞增殖检测：采用MTT法检测PNS对K562细胞增殖的影响。

（3）细胞凋亡检测：通过流式细胞术检测PNS处理后K562细胞的凋亡情况。

（4）细胞周期检测：利用PI染色法检测PNS对K562细胞周期的影响。

（5）信号通路分析：通过Western blot法分析PNS处理后K562细胞中相关信号通路的变化。

三、结果1. PNS对K562细胞增殖的抑制作用实验结果显示，PNS能够显著抑制K562细胞的增殖，且呈剂量依赖性。

在较高浓度下，PNS几乎完全抑制了K562细胞的增殖。

2. PNS诱导K562细胞凋亡流式细胞术检测结果显示，PNS处理后，K562细胞的凋亡率显著增加。

这表明PNS能够诱导K562细胞发生凋亡。

3. PNS对K562细胞周期的影响PI染色法检测结果显示，PNS处理后，K562细胞周期发生阻滞，主要停留在G0/G1期和S期，表明PNS可能通过干扰细胞周期进程来抑制K562细胞的增殖。

高效液相色谱法测定三七伤药片中人参皂苷Rg1的含量摘要】目的：利用高效液相色谱法测定三七伤药片中人参皂苷Rg1的含量。

方法：分别制备对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液用于研究分析。

其中对照品溶液为人参皂苷Rg1的甲醇溶液，供试品溶液为三七伤药片去糖衣后的甲醇溶液，阴性样品溶液为不含三七的阴性样品制备的溶液，运用高效液相色谱法测定三七伤药片中的人参皂苷Rg1含量，并对该方法的精确度和回收率进行测定。

结果：经测定，供试品溶液中的人参皂苷Rg1含量约为每片1.68毫克，回收率高达97.8%。

结论：使用高效液相色谱法测定三七伤药片中的人参皂苷Rg1含量具有很高的准确率，较《中华药典》有一定的先进性。

【关键词】高效液相色谱法；三七伤药片；人参皂苷Rg1 三七伤药片是专治跌打损伤的中成药，具有消肿化瘀、散瘀止痛的功效，其主要成分为中药材三七，辅以草乌、接骨木等，在现行的检验标准中，主要对其含有的柚皮苷含量进行了规定，而人参皂苷Rg1的含量的测定并没有说明，本次研究，拟用高效液相色谱法对三七伤药片中的人参皂苷Rg1含量进行测量，观察其测量效果，现做如下报道： 1 资料与方法 1.1一般资料本次实验中，需要用到的仪器、材料和药品如下：高校液相色谱仪一台，电子天平一台，超声波仪一台，人参皂苷Rg1纯乙腈、纯化水等。

在实验前，需要先制备实验所需的各种溶液，包括对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液。

对照品溶液是纯人参皂苷Rg1的甲醇溶液，供试品溶液是去掉糖衣的三七伤药片研磨后的甲醇水溶液。

阴性样品溶液是去掉三七成分的三七伤药片研磨后的甲醇水溶液。

1.2试验方法 1.2.1专属性实验专属性的实验目的是为了验证三七伤药片中的其他中药成分是否对人参皂苷Rg1的含量测定具有干扰作用，具体方法是取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10微升，在一定的色谱条件下，借助高效液相色谱仪进行检定。

经过测定可知，高效液相色谱法测量三七伤药片中的人参皂苷Rg1含量不受其他成分的影响[1]。

正交试验优选藤三七提取工艺阎思彤;李胜;于浩淼;徐雯娟;朱翠玲;林子豪;徐先祥【摘要】目的:优选藤三七的提取工艺.方法:采用正交实验法,以提取得率及总皂苷含量为评价指标,考察乙醇浓度、提取时间、温度和提取次数四种因素对提取工艺的影响.结果:温度和提取次数对藤三七得率有显著影响,最佳提取工艺条件为80℃水浴,以60％乙醇浓度提取藤三七3次,每次1.5h.结论:优选的工艺简单可行.【期刊名称】《中国野生植物资源》【年(卷),期】2017(036)001【总页数】3页(P35-36,71)【关键词】藤三七;提取工艺;正交试验;总皂苷【作者】阎思彤;李胜;于浩淼;徐雯娟;朱翠玲;林子豪;徐先祥【作者单位】华侨大学生物医学学院,福建泉州362021;华侨大学生物医学学院,福建泉州362021;华侨大学生物医学学院,福建泉州362021;华侨大学生物医学学院,福建泉州362021;华侨大学生物医学学院,福建泉州362021;华侨大学生物医学学院,福建泉州362021;华侨大学生物医学学院,福建泉州362021【正文语种】中文【中图分类】R284.2藤三七又名洋落葵、土三七等，因其珠芽、地下块茎的外观与名贵中药三七相似而得名，来源为落葵科多年生蔓生植物藤三七[Anredera cordifolia (Ten.) Sreenis][1]，生长容易，福建省内可常见其野生分布，福建民间有采食藤三七嫩叶和茎尖的习惯。

藤三七珠芽可入药，具有补肝肾、壮腰膝、抗疲劳、消肿散痰等功效，主治腰膝痹痛，病后体弱，跌打损伤等作用[2]，且安全无毒[3]。

为进一步研究开发研究藤三七，本文以正交试验优选了藤三七的醇提取工艺。

干燥藤三七药材，由泉州市中医院洪佳妮中药师鉴定为藤三七[Anredera cordifolia (Ten.) Sreenis]珠芽，粉碎为粗粉备用。

齐墩果酸对照品(含量测定用)，批号201206，中国食品药品检定研究院；香草醛、冰醋酸、高氯酸、95%乙醇、甲醇等试剂均为分析纯。

3.1　为减少污染微生物在检测过程中的损伤,降低检测中的测定误差,供试液的制备方法首选常规法;计数测定一般采用最低稀释级作为第一稀释级,水溶性液体供试品,应首选混合供试品原液作为第一稀释级。

3.2　若常规法制备的供试液的最低稀释级1m l,计数测定回收率不符合药典要求,可采用培养基稀释法,取最低稀释级的供试液2m l,每1m l供试液可等量分注2个、5个或最多10个平皿。

控制菌常规法检查验证结果不符合要求时,可增加增菌培养基用量,以消除抑菌作用。

3.3　若采用培养基稀释法仍无法消除抑菌作用,不能达到满意的验证结果时,可根据供试品的性质,使用离心沉淀法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法或多个方法联合使用。

经试验,白色念珠菌和黑曲霉菌以500r/m i n离心5m i n时,稀释剂对照组的回收率较低,不能满足试验要求,故不宜用此法消除供试品的抑真菌作用。

3.4　若最低稀释级的供试液经各种方法的消除抑菌作用,仍无法达到回收率要求,可在保证能够判断供试品污染菌是否符合药品微生物限度标准的前提下,可向后顺延稀释级,以能达到要求的最低稀释级作为测定的第一个稀释级。

3.5　采用薄膜过滤法时,先加入少量稀释剂适当浸泡滤膜,可减少滤膜对药物的吸附,利于对抑菌药物的冲洗。

对于有抑菌作用供试品,以温热(不超过45℃)的含1%聚山梨酯的稀释液冲洗效果更佳。

直接过滤供试液较为困难时,可用稀释液作适量稀释改善过滤效果。

必要时(如控制菌检查),可采用两个或两个以上滤器滤过,将所有滤膜取出置同一增菌液中。

使用75 m m直径滤器也可提高过滤效率。

3.6　根据供试品抑菌性质不同,细菌、霉菌和酵母菌计数可分别采用不同的测定方法,只对细菌有抑制作用的供试品,细菌计数供试液可采用经验证合格的特殊方法处理,而霉菌和酵母菌计数仍可用常规法制备的供试液,以平皿法测定。

4　其他影响因素4.1　进行微生物方法验证的品种繁多,有抗生素制剂,也有含有抑菌作用的化学药品、中成药和医院制剂。

不同炮制方法对三七的药理作用和皂苷含量的影响【摘要】目的：探讨三七的皂苷含量和药理作用受到不同炮制方法的影响。

方法：制备对照品溶液、样品溶液、不同炮制方法下三七，然后进行HPLC分析，分析对照品线性关系、三七生品及不同炮制品含量。

结果：将X轴、Y轴分别设定为进样量、峰面积，线性方程公式为y=mx+b（m、b、R2分别为斜率、截距、相关系数），进样量、线性范围单位分别为μg、mg，对峰面积和进样量的关系进行分析，发现具有较好的正线性相关性，因此能够在各炮制加工下三七皂苷含量的评价中有效应用。

三七生品在约40min时有较大波动出现；油炸三七在40min前有最大的波动，同时还有2个巅峰出现，只有1个组分含量显著增加；砂烫、烘焙三七均在约40min时有最大的波动；蒸制三七在25min时有一定波动出现，在40min时有最大的波动。

结论：三七的皂苷含量和药理作用在不同炮制方法下不同，砂烫、油炸、蒸制、烘焙下三七皂苷含量逐渐升高，即三七皂苷含量随着温度的升高而升高。

【关键词】三七；砂烫；油炸；蒸制；烘焙；皂苷含量；药理作用三七又称血山草、田七等，生品的主要功效为活血化瘀、消肿定痛[1]。

熟品三七主要在面色苍白、腰膝酸软、四肢无力、气血不足、肾精亏损、生血乏源等治疗中应用[2]。

本研究探讨了三七的皂苷含量和药理作用受到不同炮制方法的影响。

1.材料与方法1.1 材料1）药品。

从于文山高田三七种植产业基地产挖三七生品，依据《中国药典》要求油炸、砂烫、蒸制、烘焙等炮制加工；2）试剂。

购买国家药品生物制品检定所提供的三七总皂苷标准品，国药集团化学试剂有限公司生产的甲醇、乙腈色谱纯，娃哈哈公司生产的纯化水；3）仪器及辅料。

选取安捷伦Agilent 1260II 代高效液相色谱仪，Hypersi 1 BDS-C18色谱柱，柱高、规格分别为5μm、250mm×4.6mm，购买Mettler Toledo AE-204型十万分之一电子分析天平，浙江屹立工贸有限公司生产的XS-D4A四两装高速万能粉碎机，浙江上虞市道墟张兴纱筛厂生产的药典筛，孔径、筛号分别为0.25mm、4，邦西仪器科技有限公司生产的HH-6型水浴锅，上海阳光实验仪器有限公司生产的ZK-820型电热真空干燥箱，美的集团生产的MQ-L213B型微波炉，并应用福临门植物调和油、河沙作为食用油、沙子。

“一测多评”法测定腰痹通胶囊中5种皂苷类成分的含量代百东;孙莉琼;李艳静;丁岗;李欣;王振中;毕宇安;萧伟【期刊名称】《世界科学技术-中医药现代化》【年(卷),期】2014(000)010【摘要】目的：建立“一测多评”法测定腰痹通胶囊中皂苷类成分含量的分析方法。

方法：以腰痹通胶囊为研究对象，建立参照物人参皂苷Rg1与三七皂苷R1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd的相对校正因子，分别采用外标法和“一测多评”法测定腰痹通胶囊中5种皂苷类成分的含量，并将两种测定方法的结果进行对比分析，以验证“一测多评”法的合理性、可行性和可重复性。

结果：腰痹通胶囊中皂苷类成分间的相对校正因子分别为：f 人参皂苷Rg1/三七皂苷R1=0.999、f人参皂苷Rg1/人参皂苷Re=1.228、f人参皂苷Rg1/人参皂苷Rb1=0.990、f人参皂苷Rg1/人参皂苷Re=1.094。

“一测多评”法的计算结果与外标法的实测值之间无显著性差异，实验所得的相对校正因子可信。

结论：本实验建立的“一测多评”法可行准确，可以更合理、快速地实现腰痹通胶囊中多种皂苷类成分的质量控制。

【总页数】6页(P2227-2232)【作者】代百东;孙莉琼;李艳静;丁岗;李欣;王振中;毕宇安;萧伟【作者单位】江苏康缘药业股份有限公司/中药制药过程新技术国家重点实验室连云港 222001;江苏康缘药业股份有限公司/中药制药过程新技术国家重点实验室连云港 222001;江苏康缘药业股份有限公司/中药制药过程新技术国家重点实验室连云港 222001;江苏康缘药业股份有限公司/中药制药过程新技术国家重点实验室连云港 222001;江苏康缘药业股份有限公司/中药制药过程新技术国家重点实验室连云港 222001;江苏康缘药业股份有限公司/中药制药过程新技术国家重点实验室连云港 222001;江苏康缘药业股份有限公司/中药制药过程新技术国家重点实验室连云港 222001;江苏康缘药业股份有限公司/中药制药过程新技术国家重点实验室连云港 222001【正文语种】中文【中图分类】R284【相关文献】1.一测多评法测定冀南产柴胡中柴胡皂苷类成分 [J], 张洪峰;王乐;张凯;刘燕娟2.一测多评法测定重楼药材中4种皂苷类成分含量 [J], 徐赛华;沈昱翔3.一测多评法同时测定山银花药材中5种皂苷类成分的含量 [J], 孙玲;樊晓兰;郭绮;张小蒙;陈磊4.一测多评法测定血塞通胶囊中5种皂苷类成分的含量 [J], 姜志远;刘世萍;马妍妍;李业雨5.一测多评法同时测定血塞通片中5种皂苷类成分的含量 [J], 李海亮;张雯洁;金红宇;王莹;马双成因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。