桔梗总皂苷含量测定方法研究

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高效液相色谱法检测桔梗中的皂苷D

高效液相色谱法检测桔梗中的皂苷D张娜;程满环;杨芬;王婉莹【摘要】建立了桔梗中皂苷D的HPLC快速测定方法.以甲醇为提取剂,超声波处理法提取皂苷D,以乙腈—水(体积比25∶75)为流动相,以C18为色谱柱,保留时间定性,峰面积定量.在该实验条件下皂苷D质量浓度在4.62～85.20 μg/mL范围内呈线性相关,R2=0.999 6,回归方程y=2.871 7x+0.343 2,检出限为2.31 μg/mL,样品的加标回收率为92.86％～95.12％,RSD为1.2％.该法样品处理简单、快速,检测灵敏度高,重现性好,适合测定桔梗中皂苷D的质量分数.【期刊名称】《淮海工学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(024)003【总页数】4页(P47-50)【关键词】桔梗;皂苷D;高效液相色谱【作者】张娜;程满环;杨芬;王婉莹【作者单位】黄山学院化学化工学院,安徽黄山 245041;黄山学院分析测试中心,安徽黄山 245041;黄山学院化学化工学院,安徽黄山 245041;黄山学院化学化工学院,安徽黄山 245041【正文语种】中文【中图分类】R2840 引言桔梗为桔梗科桔梗属植物桔梗（Platycodon grandiflorum）的干燥根，是我国传统的中药材.现代药理学研究表明，桔梗具有镇咳、降低胆固醇［1］、抗菌及抗癌［2－3］等作用.其主要化学成分有皂苷类、多糖类等［4］.近几年来，从桔梗中又先后获得10余种新化合物［5－8］.桔梗的主要活性成分为桔梗皂苷，其中桔梗皂苷D一直被作为桔梗质量控制的指标性化合物［9］.皂苷的提取方法主要有回流提取法、水提醇沉法、超声波提取法等，通常依靠盐沉淀分离、吸附分离、色谱分离以及膜分离技术进行纯化［10］.其定量分析方法有比色法、UV－Vis法、HPLC法等.本实验利用超声波法提取桔梗皂苷，湿法过柱对桔梗皂苷提取液进行纯化，HPLC 法对其进行定量检测分析.其中超声波的空化作用可以加速植物有效成分的浸出，缩短提取时间，提高产品产率［11］.桔梗中皂苷类成分种类多、含量少，其提取物中还含有大量的多糖类化合物，故其提取液还需用内径2 cm的硅胶柱进行纯化.而HPLC法具有分离效率高、检测灵敏度高等优点，因而大多数皂苷类检测通常采用此法.作为大宗药材品种，桔梗形似人参，药食两用，素有“南方人参”的美誉.桔梗产地较多，不同产地药材的质量品质不同.本文对其中桔梗皂苷D的提取及定性、定量方法进行探讨，以期为桔梗的研究与质量控制提供参考.1 实验部分1.1 实验仪器与试剂Agilent 1260型高效液相色谱仪（安捷伦），AUY220电子分析天平（岛津），JK－2200DVE超声波清洗仪（合肥金尼克）.对照品溶液：将桔梗皂苷D标准品（分析纯，北京裕策达科贸有限责任公司）配制成质量浓度为0.426 0mg／mL的甲醇溶液.供试品溶液［12］：取桔梗药材粉末4.000 0g，精密称定，加入体积分数为50%的甲醇50mL，超声处理30min，放冷，过滤，滤液置水浴上蒸干.残渣加水20mL，微热使其溶解，加入水饱和的正丁醇，振摇并提取3次，20mL／次，合并正丁醇液，用氨试液50mL洗涤，弃去氨液，再用正丁醇饱和的水50 mL洗涤，弃去水溶液，将正丁醇溶液蒸干.残渣加甲醇3mL使溶解，加硅胶1.0g搅拌均匀，置水浴上蒸干，加于硅胶柱上［100～120目，20g，内径为2 cm，用三氯甲烷—甲醇（体积比9∶1）混合溶液湿法装柱］，以三氯甲烷—甲醇（体积比9∶1）混合溶液50mL洗脱，弃去洗脱液，再用三氯甲烷—甲醇—水（体积比60∶20∶3）混合溶液100mL洗脱，弃去洗脱液，继续用三氯甲烷—甲醇—水（体积比60∶29∶6）混合溶液100mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，过0.45μm的微孔滤膜备用.桔梗饮片（亳州沪谯药业有限公司），使用前于烘箱70℃干燥处理后打碎，使之呈细粉状，备用.甲醇、正丁醇、三氯甲烷（均为色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）；其余试剂为市售分析纯，实验用水为超纯水.1.2 色谱检测条件色谱柱为 Agilent Eclipse XDB－C18，5μm，4.6 mm×250mm；流动相为乙腈—水（体积比25∶75），流速1.0mL／min；柱温为室温；紫外检测器，检测波长210nm；进样量20μL.1.3 定性与定量分析分别取供试品溶液和对照品溶液进行液相分析，比较其在规定检测波长下色谱峰的保留时间，进行定性.标准曲线的绘制：将对照品溶液分别稀释5，10，25，100倍，标点质量浓度分别为85.20，42.60，17.04，4.26μg／mL.分别取上述稀释后的对照品溶液20μL 进样，测量保留时间和峰面积，用峰面积对皂苷D的质量浓度作图，绘制标准曲线.样品中皂苷D的质量分数测定：取20μL供试品溶液进样，根据保留时间定性，峰面积代入标准曲线定量.2 结果与讨论2.1 流动相的选择采用流动相乙腈与水的体积比分别为20∶80，25∶75进行试验［12］，考察流动相比例对样品分离效果的影响.试验结果表明，当乙腈与水的体积比为20∶80时，流动相对样品分离效果虽好，但干扰峰的峰面积较大；当乙腈与水的体积比为25∶75时，不仅分离效果好，而且干扰峰的面积也有所减小.故选择乙腈与水的体积比为25∶75作为流动相.2.2 定性分析分别取供试品溶液和对照品溶液进行液相分析，对照品溶液与供试品溶液的色谱图如图1和图2所示.由图1可以看出，桔梗皂苷D对照品溶液在14.23min时出现一色谱峰，即桔梗皂苷D的保留时间为14.23min.由图2可以看出，供试品溶液在14.24min时出现一色谱峰，表明供试品溶液中含有桔梗皂苷D.图1 对照品溶液色谱图Fig.1 HPLC chromatogram of standard solution图2 供试品溶液色谱图Fig.2 HPLC chromatogram of sample solution2.3 定量分析2.3.1 标准曲线的绘制将不同质量浓度的皂苷D对照品溶液进样，测其峰面积，以峰面积对质量浓度作图，绘制标准曲线，结果如图3所示.求得回归方程为y＝2.871 7x＋0.343 2，线性相关系数R2为0.999 6.图3 皂苷D的标准曲线图Fig.3 Standard curve for determination of platycodin D结果表明，皂苷D质量浓度在4.26～85.20 μg／mL范围具有良好的线性关系.2.3.2 样品的测定在试验的最佳条件下测定供试品溶液的峰面积，得样品峰面积分别为215.2，215.8，213.2，均值为214.7.计算得样品所对应的供试品溶液中皂苷D质量浓度为74.64μg／mL.2.3.3 检测结果的换算根据桔梗取样质量及样品处理过程中定容的体积，计算出桔梗样品中皂苷D的质量分数.计算公式为式中：X为样品中皂苷D的质量分数（mg／kg），C为样品测定液中查标准曲线得到的相当于标准的质量浓度（μg／mL），V 为样品定容体积（mL），m 为桔梗的取样量（g）.经计算得桔梗中皂苷D的质量分数为93.3mg／kg.2.4 精密度试验精密吸取“1.1”项下对照品溶液各20μL，连续进样6次，测其峰面积，计算RSD.得试验的相对标准偏差为0.15%，说明本方法精密度较好.2.5 稳定性试验精密吸取“1.1”项下供试品溶液20μL，于2，4，6，8，12，24h后测定，记录峰面积，计算 RSD.得试验的相对标准偏差为0.935%，表明本方法稳定性较好. 2.6 重复性试验精密称取6份桔梗粉末各4.000 0g，按“1.1”项下制备供试品溶液并稀释10倍，按“1.2”项下进样，测定，记录峰面积，计算RSD.得试验的相对标准偏差为2.12%，表明本试验方法重复性较好.2.7 加标回收率试验将已测定的样品精密称取3份，每份4.000 0 g，按“1.1”项下制备原供试品溶液，各取0.50mL，各精密加入适量的对照品溶液0.50mL，制成加标后的供试品溶液，按“1.2”项下进样，测定，记录峰面积，结果如表1所示.表1 加标回收率试验结果（n＝3）Table 1 Results of recovery tests（n＝3）样品编号本底值／（μg／mL）加入值／（μg／mL）测得值／（μg／mL）回收率／%平均回收率／%RSD／%1 37.32 10.65 47.45 95.12 2 37.32 21.30 57.10 92.86 94.18 1.20 3 37.32 42.60 77.60 94.55由以上结果可以看出，回收率为92.86%～95.12%，RSD为1.20%，说明本方法测定皂苷D的质量分数具有较高的准确度.3 结论（1）桔梗中皂苷D在高效液相色谱法下分离效率高，检测灵敏度好；本实验测得桔梗中皂苷D的质量分数为93.3mg／kg.（2）通过对桔梗中皂苷D稳定性的探讨，可以看出桔梗皂苷D在24h内基本无变化，说明其稳定性良好.（3）准确度试验和精密度试验结果均良好，表明本文对皂苷D的测量结果准确、稳定、可靠、简捷.建立了一种测定桔梗中皂苷D的液相色谱方法，可作为实验室测定桔梗皂苷D的方法.【相关文献】［1］杨壮.桔梗总皂苷的提取和纯化工艺研究［D］.杭州：浙江大学，2007.［2］舒娈，高山林.桔梗研究进展［J］.中国野生植物资源，2012，20（2）：4－6.［3］ CHOI C Y，KIM J Y，KIM Y S，et al.Augmentation of macrophage functions by an aqueous extract isolated from Platycodon grandiflorum ［J］.Cancer Leters，2001，166（1）：17－25.［4］周秀娟.桔梗的质量研究［D］.合肥：安徽中医药大学，2013.［5］ FU Wenwei，SHIMIZU N，DOU Deqiang，et al.Five new triterpenoid saponins from the roots of Platycodon grandiflorum［J］.Chemical and Pharmaceutical Bulletin，2006，54（4）：557－560.［6］付文卫，候文彬，窦德强.桔梗中远志酸型皂苷的化学研究［J］.药学学报，2006，41（4）：358－360.［7］ FU Wenwei，DOU Deqiang，SHIMIZU N，et al.Studies on the chemical constituents from the roots of Platycodon grandiflorum［J］.Journal of Natural Medicines，2006，60（1）：68－72.［8］ HE Zhendan，QIAO Chunfeng，HAN Quanbin，et al.New triterpenoid saponins from the roots of Platycodon grandiflorum［J］.Tetrahedron，2005，61（8）：2211－2215.［9］李伟.桔梗皂苷类化学成分及药理活性研究［D］.长春：吉林农业大学，2007.［10］贺红军.茅莓总皂苷提取及纯化工艺研究［D］.重庆：重庆医科大学，2011.［11］纵伟，李翠翠，赵光远，等.桔梗皂苷超声提取工艺优化研究［J］.江苏农业科学，2012，40（6）：244－247.［12］李喜凤，刘素梅，李振国.RP－HPLC法测定桔梗中桔梗皂苷D的含量［J］.中华中医药学刊，2008，26（2）：283－284.。

HPLC_ELSD法测定桔梗中3种桔梗皂苷的含量_叶静

第31卷第5期2010年9月西安交通大学学报(医学版)Jo ur nal of X i an Jiao to ng U niv ersity (M edical Scie nce s)V ol.31N o.5Sep.2010HPLC -ELSD 法测定桔梗中3种桔梗皂苷的含量叶静1,肖美添1,2,汤须崇1,黄雅燕1(华侨大学:1.化工与制药工程系;2.制药工程研究所,福建厦门 361021)摘要:目的建立测定桔梗药材中桔梗皂苷D 、D 3、E 含量的方法。

方法采用高效液相色谱-蒸发光激光闪射检测器(H PL C -EL SD)法,H ypersil C 18柱(5 m,4.6mm 150mm),以乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速1.0mL/min,EL SD 漂移管温度113 ,载气(N 2)流速3.0L /min 。

结果桔梗皂苷D 、D 3、E 的线性范围分别为13.78~275.6 g /mL (r =0.9995)、8.40~168.0 g /mL (r =0.9997)、12.02~240.4 g/mL (r =0.9996),平均回收率(n =5)为98.3%、99.4%和101.3%。

结论本法操作简便,结果准确可靠,可用于桔梗皂苷D 、D 3、E 含量的测定。

关键词:桔梗;桔梗皂苷;H PL C -ELSD中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1671-8259(2010)05-0640-03HPLC -ELS D for determining the content ofthree platycodins in Radix platy codoiYE Jing 1,XIAO M e -i tian 1,2,T ANG Xu -chong 1,H UA NG Ya -yan 1(1.Department of Chemical and Pharm aceutical Eng ineer ing,H uaqiao University,Xiamen 361021; 2.Institute of Pharm aceuticalEngineering ,H uaqiao U niv ersity,Xiamen 361021,China)ABSTRAC T:Objective T o establish a qua ntita tiv e metho d to de term ine the co ntent of platy codin D ,D 3and Ein Radix platycodi.Methods H igh pe rf or mance liquid chro mata gr aphy -ev apro r ative light scatter ing decto r(HP LC -EL SD)met hod was a do pted.Platy codin D ,D 3and E we re se pa ra ted by C 18(5 m,4.6mm 150m m)w ith aceto nitr ile -w ater as mo bile phase in a gr adient pr og ra m;f lo w rate was 1.0mL /min,the tem per at ure o f dr if t tube was set at 113 ,a nd the gas f lo w (N 2)wa s set at 3.0L /min.R esults T he linea r r anges o f platy codin D ,D 3andE w er e 13.78-275.6 g/m L (r =0.9995),8.40-168.0 g /mL (r =0.9997)a nd 12.02-240.4 g /mL (r =0.9996),respec tiv ely.T he a ver age reco ve ries (n =5)wer e 98.3%,99.4%and 101.3%,respec tiv ely.C onclusion T he metho d is co nvenient,accura te and r eliable,and can be used fo r the deter minatio n of platy codinD,D 3and E in Radix plat yco do i.KEY WORDS:Ra dix platycodoi ;pla tyco din;HP LC -EL SD 收稿日期:2009-09-02 修回日期:2009-12-07作者简介:叶静(1980-),女(汉族),讲师,硕士,主要从事中药及中药制剂质量分析研究.E -m ail:yejenny@h 中药桔梗(Radix p laty codi )为桔梗科植物桔梗Platy codon g randif lor um (Jacq.)A.DC.的干燥根,在我国药用历史悠久,具有宣肺、利咽、祛痰和排脓之效[1]。

HPLC-ELSD法测定桔梗饮片中8种桔梗皂苷的含量

ｒ１２ｔｓ５５高效液相色谱仪（国Ｗａｅｓ司）ＩＥＤ２０ｅ美ｔｒ公，ＰＩ１０型蒸发光散射检测器（国～Ｓ英ＰｌｍｅＬｂｒｔｒｓ．乙腈（ｏｙｒａｏａｏｉ）ｅ色谱纯，国Ｔｄａ，纯水（验室自制）Ｄ１１大孔吸附树脂（津美ｅｉ）超实，０天
妮等Ｅ首次采用ＨＰ — ＩＤ法测定了桔梗中皂苷Ｄ含量．夏泉等通过ＨＰ — ＩＤ建立了测定ｓ］ＩＥＣＳ］ＩＥＣＳ桔梗样品中桔梗皂苷Ｅ含量的方法．ＦＺＴＩ７用ＨＰ — ＩＤ法分离、定了２种人参皂ＵＺＡ等Ｉ采ＩＥＣＳ测５苷．在本文中，笔者将首次通过建立多指标体系的方法，采用ＨＰ — ＩＤ法测定桔梗饮片中８种桔ＩＥＣＳ
中图分类号：５．２Ｒ２４１０６７７；８．文献标识码：Ａ文章编号：１０ —８４２０）４０４ —００７２Ｘ（０８０ — ０１４
桔梗（ａｉｐａｙｏｏｉ为桔梗科（ａａｕａｅｅ植物桔梗Ｐａｙｏｏｒｎｉｌｕ（ａｑ）Ｒｄｘｌｃｄｎ）ｔｓＣｍｐｎｌａ）ｃｌｔｃｄｎｇａｄｆｏｍＪｃ．ｒＡ．Ｄ．Ｃ的干燥根ｎ，经炮制可制得桔梗饮片Ｌ，是临床中药配伍常用的一味中药．桔梗的主要有效］２］成分为桔梗皂苷，占２４．３约．［由于皂苷类化合物无共轭结构，强的发色基团，在紫外光谱区仅无故

比色法测定桔梗中桔梗总皂苷的含量

图 2 供试品显色后的紫外全波长扫描图 F ig 2 UV Spectrum of Total Platycosides after Color Develop ing
至干 ,用 5 mL水溶解残留物 ,所得溶液缓缓通过已处理好的 2. 4 线性关系考察
AB - 8型大孔吸附树脂柱 (径高比 1 ∶5) ,反复上样 5 次后 ,
释至刻度 ,摇匀 ,即得。
2. 2 供试品溶液的制备
取桔梗药材粉末 (过 4 号筛 )约 0. 2 g,准确称定 ,置于
150 mL具塞锥形瓶中。精密加入 50 mL 甲醇后 ,准确称重。
浸泡 60 m in,超声提取 30 m in,再次称重 ,补加甲醇至超声前重量。过滤 ,精密移取续滤液 25 mL 于蒸发皿中 ,水浴蒸发
图 1 对照品桔梗皂苷 D显色后的紫外全波长扫描图 F ig 1 UV Spectrum of Platycodin D after Color Develop ing
2. 1 对照品溶液的制备
精密称取经 70 ℃减压干燥至恒重的 p latycodin D 8. 00
mg,加 70%甲醇适量溶解 ,置 50 mL 量瓶中 ,用 70%甲醇稀
桔梗 (R adix platycodon is)为桔梗科植物桔梗 ( P latycodon 合并正丁醇层 ,减压蒸干。残留物用 70%甲醇溶解转移至
g rand iflorum Jacq. A. DC) 的干燥根 [1 ] , 性味苦、辛、平 , 归肺 10 mL量瓶中 ,定容 ,摇匀 ,即得。
对测定无干扰。 3. 4 对照品溶液进样精密度
精密吸取对照品溶液 (25. 78μg·mL - 1 ) 5份 ,进行顶空分析 ,按上述条件测定峰面积 ,结果峰面积分别为 261. 32, 263. 90, 255. 61, 253. 74, 254. 56, 相对标准偏差 ( RSD ) 为 1. 7% ( n = 5) ,符合中国药典 2005版二部中有机溶剂残留量测定方法 [2 ]中顶空分析的要求 (RSD < 10% ) 。 3. 5 加样回收率

HPLC法测定桔梗药材中桔梗皂苷D的含量

简便，因此采用超声提取作为桔梗皂苷Ｄ的提取工
艺。
的峰面积，其ＲＳＤ为０．４２％，表明精密度良好。
三萜皂苷，桔梗皂苷Ａ、桔梗皂苷Ｂ、桔梗皂苷Ｄ
柱（２５０ｍｍ×４．６ａｒｍ，５ｔｘｍ）；流动相Ａ：０．１％磷酸溶液，流动相Ｂ：乙腈，按表１进行梯度洗脱；流速：０．
５ｍｌＭｍｉｎ；柱温：３Ｏ ℃；进样量１０１ｘＬ；检测波长为
２ｌＯｎｍ。
等，其他尚含有黄酮、聚炔、甾体、酚酸、脂肪酸等类型的化合物。现代研究表明，桔梗的主要活性成分
表１梯度洗脱程序
Байду номын сангаас
为桔梗皂苷类成分，具有祛痰、抗炎、降低毛细血管通透性、抑制佐剂性关节炎、以及松弛肠道平滑
明，超声提取与加热回流提取的桔梗皂苷Ｄ的含量
２．５精密度试验
精密吸取对照品溶液１０ｐ￣Ｌ，在
２．１项色谱条件下，连续进样６次，得到桔梗皂苷Ｄ
相当，且大于索氏提取得到的量，由于超声方法比较
甲醇３０ｍＬ，超声３０ｍｉｎ，滤过；滤渣置具塞锥形瓶
ＢＳＡ１２４Ｓ天平（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）。
中，精密加入５０％甲醇３０ｍＬ，超声３０ｍｉｎ，滤过；合并续滤液，于水浴中蒸干至５０ｍＬ以下，用甲醇定容至５０ｍＬ，续滤液过０．２２１ｘｍ微孔滤膜，备用。

不同产地桔梗药材中桔梗总皂苷和桔梗皂苷D的测定

２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ ’ ａｎ７１００６９，Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｍｅｔｈｏｄｏｆｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｏｔａｌｐｌａｙｃｔｏｄｉｎａｎｄｐｌａｔｙｃｏｄｉｎＤ：Ａｎｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓ
ｏｆｔｏｔａｌｐｌａｔｙｃｏｄｉｎａｎｄｐｌａｔ３，ｃｏｄｉｎＤｉｎＰｌａｔｙｃｏｄｉＲａｄｉｘｆｒｏｍｄｉｆｅｒｅｎｔｈａｂｉｔａｔｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｏｔａｌｐｌａｔｙｃｏｄｉｎｗａｓ
・１６８２・
中草１ＩＢＣｈｉｎｅｓｅＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌａｎｄＨｅｒｂａｌＤｒｕｇｓ第４６卷第ｎ期２０１５年６月
不同产地桔梗药材中桔梗总皂苷和桔梗皂苷Ｄ的测定
谭玲玲，侯晓敏，胡正海
１．青岛农业大学生命科学学院山东省高校植物生物技术重点实验室，山东青岛２．西北大学生命科学学院，陕西西安摘要：目的７１００６９２６６１０９

两种不同方法测定桔梗总皂甙含量的比较

芦金清，男，1955 年生. 副教授。
续滤液于已恒重的锥形瓶中，水浴蒸干。105 C 干燥至恒重，干燥器中放置过夜，精密称定，计算桔梗总皂甙的百
分比含量。
表1 桔梗总皂甙的百分含量（% ）
样
品
野生栽培品（1 年生）栽培品（2 年生）
总皂甙含量
文献方法
改进后方法
8. 6 10. 2 9. 3
grandifloru mi n t wo different met hods
Lu Ji nCi ng Gong Guobo
~ubei college of TCM（wuhan 430061 ）
Abstract ：This article deter mi ned and compared t he content of total saponi n of wil d plat ycodon grandifloru m and diff erent growt h peri ods culti vated plat ycodon grandifloru m. At t he sa me ti me ，we compared t he results of different met hods . The results i ndicated ：The to-
2010(11)
7.魏永春.张卫.李冲皂苷的提取与纯化工艺研究进展[期刊论文]-广东化工 2008(11) 8.纵伟.李翠翠.赵光远.张华桔梗皂苷超声提取工艺优化研究[期刊论文]-江苏农业科学 2012(6) 9.黄樱.史春蕾.刘墨祥.于红艳 HPLC-ELSD法测定桔梗饮片中8种桔梗皂苷的含量[期刊论文]-扬州大学学报（自然
引证文献(11条)

论文-RP-HPLC测定桔梗地上部分桔梗皂苷D的含量

目录题目 (I)摘要及关键词 (I)1 前言 (1)2 材料与方法 (1)2.1 材料 (1)2.2 方法 (1)2.2.1 色谱条件 (1)2.2.2 对照品溶液的制备 (1)2.2.3 样品溶液制备 (1)2.2.4 线性关系考查 (2)2.2.5 精密度实验 (2)2.2.6 稳定性实验 (2)2.2.7 重复性实验 (3)2.2.8 加样回收率实验 (3)3 结果 (3)4 总结与讨论 (3)参考文献 (4)致谢 (5)RP-HPLC测定桔梗地上部分桔梗皂苷D的含量学生：专业：指导教师：摘要：目的是建立桔梗地上部分桔梗皂苷D的检测方法。

采用反相高效液相色谱法，以Hypersil ODS2色谱柱（150mm×4.6mm,5μm），乙睛/水为流动相，梯度洗脱，流速：1.0mL/min；检测波长210nm; 柱温：室温，以外标法检测。

结果显示桔梗皂苷D在0.8-6.4μg范围内呈良好线性关系，平均回收率为97.8%。

结论说明首次报道了桔梗地上部分桔梗皂苷D的含量测定方法，该方法准确可靠，可作为桔梗地上部分桔梗皂苷D 的质量控制依据。

关键词：桔梗地上部分；桔梗皂苷D；RP-HPLCRP-HPLC Determination of platycodin D in aerial parts ofPlatycodon grandiflorumName: Zhang XinMajor: Traditional Chinese MedicineTutor: ×××Abstract:To set up an assay method for the determination of platycodin D in the aerial parts of Platycodon grandiflorum A.DC. The samples was determined by RP-HPLC on a Hypersil ODS2 column (150mm×4.6mm,5μm).The mobile phase con sisted of CH3CN-H2O by gradient elution. The flow rate was 1.0mL/min.The detection wavelength was 210nm. Results show that the calibration curve was linear in the range of 0.8-6.4μg. The average recovery was 97.8% . The conclusion indicates we firstly repo rted the method for platycodin D in the aerial parts of Platycodon grandiflorum A.DC. and it can be for the quality control of the the aerial parts of Platycodon grandiflorum A.DCKey words: Aerial parts of Platycodon grandiflorum ; platycodin D; RP-HPLCI1 前言桔梗（Platycodi Radix）为桔梗科(Campanulaceae)植物桔梗Platycodongrandiflorum(Jacq.)A.DC.的干燥根。

HPLC-ELSD法测定不同海拔高度桔梗皂苷的含量

度为（１０５．８ ±７．６）％，中间浓度为（９６．７±８．２；日内和日间
ＲＳＤ高浓度分别为０．５％、７．１％，低浓度分别为７．４％、７．６％，
中间浓度分别为４．６％、５．８％。
３讨论
楼江，王峰，李焕德．阳离子色谱柱一ＨＰＬＣ法测定人血浆中氯氮平及去甲氯氮平浓度．药物分析杂志，２０１３（１）：４４ — ４９．刘伟忠，陈清霞，朱军．等．ＲＰ — ＨＰＬＣ法同时测定人血浆中氯
样品处理方法进行，日内进行６次测定，隔日进行１次测定，结果高浓度为２．００ｍｇ／Ｌ，低浓度为０．１０ｍｇ／Ｌ，中间浓度为０．５０ｍｇＬ，对照品血浆的回收率高浓度为（９２．１ ±３．１）％，低浓
参考文献
张文英，郭莉萍，沈广虎．在线固萃取一高效液相色谱法检测
人血清中氯氮平浓度．山东医药，２０１３，５３（１９）：５２．杨辉，张冰，李荣，等．高效液相色谱法测定人血清中氯氮平浓度．中国实用医药，２０１０，５（２０）：９２．
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］ｊ
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ＨＰＬＣ — ＥＬＳＤ法测定不同海拔高度桔梗皂苷的含量
陈良胜方应权
【摘要】目的测定大别山不同海拔高度桔梗药材的桔梗皂苷的含量，为评价其质量品质提供理论依据。方法采用高效液相色谱一蒸发光散射检测器（ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ）法，ＫｉｎｅｔｅｘＣ色谱柱（４．６ｉｆｌｍｘ１００ｍｍ，５ｍ１；流动相乙腈（Ａ）一０．１％甲酸溶液（Ｂ），梯度洗脱；流速０．４ｍｌ／ｍｉｎ。结果１０００ｍ海拔．Ｄｃ．的干燥根，在我国药用历史悠久，具有宣肺、利咽、祛痰和排脓之效 ¨ 。』。桔梗中主要成分是桔梗皂苷，现代药理研究试验表明：桔梗中的主要活性物质桔梗总皂苷具有广泛的生物活性，在免疫调节、抗炎、镇痛、解热、祛

不同海拔高度桔梗药材中3种桔梗皂苷含量的测定

关键词：桔梗桔梗皂苷海拔高度含量测定
中图分类号：Ｒ２８４．１
Байду номын сангаас
文献标识码：Ａ
文章编号：１６７２ — ８３５１（２０１５）０５ — ００１２ — ０２
桔梗（Ｒａｄｉｘｐｌａｔｙｅｏｄｉ）为桔梗科植物桔梗Ｐｌａｔｙｅｏｄｏｎｇｒａｎ — 梗皂苷Ｄ（上海一林生物科技公司，批号为：ＹＬ２０１３１１２５０７，含ｄｉｌｆｏｒｕｍ（Ｊａｃｑ．）Ａ．ＤＣ．的干燥根，在我国药用历史悠久，具有宣量９８．０％）；乙腈：色谱纯；甲醇，甲酸：分析纯（川东化工集团有限肺、利咽、祛痰和排脓之效ｌｌｌ，桔梗是食药两用中药材品种，资源公司化学试剂厂）；超纯水（自制）。丰富。据文献报道，桔梗中有效成分主要为五环三萜类的多糖本试验桔梗药材采集后清洗去除泥沙，刮去根皮后干燥，即苷，包括桔梗皂苷Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｄ、Ｄ等，桔梗皂苷Ｄ是桔梗皂苷中得桔梗样品，并经重庆万州食品药品检验所孟家安教授鉴定为的主要皂苷［２１，药效学试验表明，桔梗皂苷Ｄ具有显著的镇咳、桔梗科桔梗属植物桔梗Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎｇｒａｎｄｉｌｆｏｒｕｍ（Ｊａｃｑ．）Ａ．ＤＣ．祛痰作用嘲。药理研究表明，去芹菜糖桔梗皂苷Ｄ具有抑制脂肪的根，见表１。酶活性及抗肿瘤活性ｌ４．５１的功效。桔梗中含有大量亚油酸等不饱和脂肪酸，有降压降脂、抗动脉粥样硬化等多种作用，是一种很好的保健食品嘟。目前，有文献多研究不同产地桔梗皂苷Ｄ的含量及多种桔梗皂苷的含量测定，海拔高度对桔梗皂苷含量影响的研究较

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LI SH I ZH EN M ED IC I NE A ND M ATER I A M ED I CA RESEA RCH 2009 VOL. 20 NO. 7
时珍国医国药 2009 年第 20 卷第 7 期
醇至回流前重量。过滤 , 合并滤液于蒸发皿中 , 水浴蒸发至干 , 用 10 m l水溶解残留物 , 将所得溶液缓缓通过已处理好的 AB! 8 型大孔吸附树脂柱 ( 重量比 1% 20), 反复上样 5 次后 , 以水 150 m l 洗脱 , 弃去水液 , 之后再以 300 m l 60 % 乙醇洗脱 , 收集 60% 乙醇洗脱液 , 蒸干。残留物用 70% 甲醇溶解 , 转移至 10 m l量瓶中 , 定容 , 摇匀 , 即得 [ 10] 。 2. 3 测定波长的选择精密移取 80 l的标准品及 50 l的供试品溶液 , 置 10 m l具塞磨口试管中 , 于 70# 水浴蒸发至干 , 精密加入 10 % 香草醛试液 0. 5 m ,l 60% 硫酸 5 m , l 摇匀 , 于 60# 水浴加热 15 m in, 冰水浴中冷却 3 m in, 随行试剂做空白 , 在紫外分光光度计于 400~ 700 nm 波长范围全程扫描 [ 11] , 标准品及供试品的最大吸收波长均在 472 nm, 且空白对照无干扰 , 故选择 472 nm 为测定波长。 2. 4 标准曲线的绘制精密吸取桔梗皂苷 D 标准品溶液 0 , 40, 80, 160, 200 ,l 置 10 m l具塞磨口试管中 , 于 70# 水浴蒸发至干 , 精密加入 10 % 香草醛试液 0. 5 m ,l 60% 硫酸 5 m , l 摇匀 , 于 60# 水浴加热 15 m in, 冰水浴中冷却 3 m in, 以同法平行处理的空白溶剂为空白 , 在 472 nm 处测定吸光度。以标准品浓度 C ( l/m l) 为横坐标 , 吸光度 A 为纵坐标绘制标准曲线 , 得到回归方程为 : A = 0. 003 4C + 0. 006 4 , r = 0. 999 7, 结果看出 C 在此浓度系列范围内与 A 呈现良好的线性关系。 2. 5 精密度实验精密吸取标准品溶液 80 , l 按照 & 2. 4∋项下方法显色测定吸光度 , 连续测定 5 次 , 结果 RSD 为 0. 30% , 说明仪器的测试性能良好。 2. 6 稳定性实验精密吸取供试品溶液 50 , l 按照 & 2. 4∋项下方法操作 , 按不同时间测定其吸光度变化 , 在放置 5, 10 , 20, 30 , 40, 50, 60 m in 后 , 吸光度分别为 0. 214, 0. 214, 0 . 214 , 0. 215, 0. 216, 0. 215 , 0. 217。结果表明该法在 60 m in 内 , 吸光度值稳定。 2. 7 重复性实验称取桔梗药材已干燥粉末 6 份 , 每份 1 . 0 g ,准确称定 , 按照 & 2. 2∋ 项下操作 , 制备 6 份供试品溶液 , 各准确移取 50 ,l 按照 & 2. 4 ∋ 项下方法操作 , 测定吸光度 A, 计算总皂苷含量。结果平均含量为 3. 07 % , RSD 为 1 . 17 %。 2. 8 加样回收率实验准确称取已知含量的桔梗药材已干燥粉末 6 份 , 每份 0. 05 g , 加入桔梗皂苷 D 适量 , 按照 & 2. 2∋ 项下方法制备样品溶液 , 各取 50 l样品液 , 按照 & 2. 4∋项下方法显色后测定吸光度 , 计算回收率。结果见表 1 。平均加样回收率为 96. 97 % , RSD 为 1 . 51 % ( n = 6) 。
, ZHANG C hong x i, W E I J ian he , XU X u dong , CHU Q ing long ( 1. J ilin Agricultural University, Chang chun 130118 ; 2 . Institu te of M edicinal P lant, Chinese A cademy of M edi cal Sciences , B eijing Union M edical College, Beijing 100193 , China ) Abstract : O bjective To develop a v an illin - H 2 SO4 co lo ri m etry m ethod for the deter m ination of tota l saponins in R adix P la ty c
关键词 : 桔梗; 总皂苷; 桔梗皂苷 D; 比色法中图分类号 : R284 文献标识码 : A 文章编号 : 1008 0805( 2009) 07 1580 02
D eterm ination of Total Sapon in s in Rad ix P latycodon is
L I Y an
转蒸发仪 R - 205( B CH I有限公司产品 ); 电热恒温鼓风干燥箱 DHG - 9240( 上海精宏实验设备有限公司产品 ); SK 8200H 型超声波清洗器 ( 上海科导超声仪器有限公司 ) ; SHZ - ∀ 型循环水真空泵 ( 上海亚荣生化仪器厂 ) ; 大孔树脂层析色谱柱 ( 内径 3 c m, 长 30 c m ) 。标准品桔梗皂苷 D ( HPLC 制备纯化 , 纯度用归一化法计算在 98% 以上 ) ; AB! 8 型大孔吸附树脂 ( 南开大学化工厂 ); 其他试剂均为分析纯。 1. 2 材料桔梗样品共 14 个 : GP1BC1- 12 和 GP1BC2 - 6 为 3 代不育株系 , G SNH 3- M 3 为 2 代粉花自交株系 , 种质来源于河北 ; GP2BC4- 10 和 GP 2BC4- 5 为 3 代不育株系 , G S902- 7 - 2 为 3 代自交保持株系 , 种质来源于安徽 ; GS218- 1, G S218- 2 和 G S228- 1 为 2 代自交系 , 种质来源于山东 ; G S111- 2 为 2 代自交株系 , GS262- W 4- W 2 为 3 代自交保持株系 , 种质来源于赤峰 ; G S173- 5 为 2 代自交株系 , 来源于延庆野生种质 ; CK 2 为山东生产用种质 , CK 1 为赤峰生产用种质 [ 9] 。以上各样品于 2007 11 初地上部分枯萎后 , 将其根部挖出 , 每个样品系内随机取 3 株 , 洗净 , 趁鲜刮去外皮 , 烘箱中 60 # 烘干 , 粉碎 , 粉末混合均匀后 , 装于自封袋中 , 置于干燥器中保存 , 备用。样品均采自药用植物研究所试验基地 ( 北京市海淀区 ), 由魏建和研究员鉴定。 2 方法与结果收稿日期 : 2008 10 21 ; 修订日期 : 2009 02 23 2. 1 标准品溶液的制备精密称取经 60# 减压干燥至恒重的桔基金项目 : 国家自然科学基金面上项目 ( N o. 30772728) , 加 70% 甲醇适量溶解 , 置 1 m l量瓶中 , 用 70% 作者简介 : 李妍 ( 1984 ) , 女 ( 蒙古族 ) , 吉林长春人 , 现任吉林农业大学中梗皂苷 D 3. 5 mg 药材学院在读硕士研究生 , 学士学位 , 主要从事天然药物化学研究工作 . 甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 即得。 * 通讯作者简介 : 许旭东 ( 1968 ), 男 ( 汉族 ) , 北京人 , 现任中国医学科学 2. 2 供试品溶液的制备取桔梗药材已干燥粉末约 1. 0 g , 准确院中国协和医科大学药用植物研究所副研究员 , 博士学位 , 主要从事天然称定 , 置索氏提取器中 , 加入 10 倍量的 70% 甲醇后 , 准确称重。药物化学研究工作 . 浸泡 30 m in, 加热回流提取 3 次 , 2 h /次 , 再次称重 , 补加 70 %甲
1 , 2
1w ord s : R ad ix P la tycodonis;
T ota l saponins;
P latycod in D;
Co lor i m etry
桔梗 ( R adix P latycodonis) 为桔梗科 ( Campanulaceae ) 植物桔梗 P la tycodon grandif lorum ( Jacq . ) A. DC 的干燥根 [ 1] , 是一种药食同源的植物 , 用途广泛。桔梗性味苦、辛、平 , 归肺经 , 有宣肺、利咽、祛痰、排脓之功效 , 用于咳嗽痰多 , 胸闷不畅 , 咽痛 , 音哑 , 肺痈吐脓 , 疮疡脓成不溃 , 被广泛应用于祛痰止咳药 [ 2] 。桔梗中的皂苷类成分 , 是桔梗药用品质的主要评价指标 , 桔梗中含有大量的三萜皂苷 , 已经分离鉴别出四十多种单体皂苷 , 如桔梗皂苷 D、桔梗皂苷 A、桔梗皂苷 B、桔梗皂苷 D2、 D3、桔梗皂苷 E 等 [ 3~ 5] 。现代药理学研究表明 , 桔梗皂苷为桔梗主要的药理活性成分 [ 6] 。中国药典 ( 2005 年版 ) 采用重量法测定桔梗总皂苷含量 , 该方法操作繁琐 , 特别是其中糖类成分等杂质会对测定结果产生严重干扰 , 造成检测结果大大高于实际总皂苷的含量 [ 7, 8] 。本实验以桔梗皂苷 D 为标准品 , 采用香草醛 - 硫酸显色 , 比色法对桔梗总皂苷的含量进行了测定。 1 仪器与材料 1. 1 仪器与试剂 UV 2550 型紫外 ! 可见分光光度计 ( 日本岛津 ) ; TB - 214 型电子分析天平 ( 北京赛多利斯仪器系统有限公司产品 ); 数显恒温水浴锅 HH - 6( 国华电器有限公司产品 ) ; 旋

桔梗总皂苷含量测定方法研究

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