白英中总皂苷的含量测定

XXXXX有限公司成品质量标准及检验操作规程
1 品名：
1.1 中文名：白英
1.2 汉语拼音：Baiying
2 代码：
3 取样文件编号：
4 检验方法文件编号：
5 依据：《中国药典》（1977年版一部）。

6 质量标准：
7 检验操作规程：
7.1 试药与试剂：乙醇、盐酸、氨水、三氯甲烷、白英对照药材、甲苯、甲醇、氢氧化钠滴定液、甲基红乙醇溶液指示剂。

7.2 仪器与用具：显微镜、硅胶G薄层板、干燥箱、三用紫外分析仪、中药二氧化硫测定仪。

7.3 性状：取本品适量，自然光下目测色泽，嗅闻气味。

7.4 鉴别：
7.4.1取本品制片置10×10显微镜下做显微观察。

7.4.2取本品粉末5g，加乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，药渣再加乙醇10ml，超声处理15分钟，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加5%盐酸溶液20ml 使溶解，加氨水调节pH值至9～10，用三氯甲烷20ml振摇提取，分取三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

另取白英对照药材5g，同法制成对照药材溶液。

照薄层色谱法（附录7）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-甲醇（6:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，至少显一个相同颜色的荧光斑点。

7.5 检查：
7.5.1水分：不得过13.0%（附录15水分测定法）。

7.5.2二氧化硫残留量：照二氧化硫残留量测定法（附录58）测定，不得过150mg/kg。

白英是我国药典中的药材，药用历史悠久，可以用于小儿肝热、感冒和结核发热等的治疗[1]，疗效显著，现代研究已证明白英具有一定的抗癌防癌[2]、镇痛抗炎和抗病毒[3]等作用。

白英含有多种化学成分，主要有甾体生物碱类、甾体皂苷类、黄酮类及有机酸类等化合物[3]。

甾体生物碱类化合物是一类广泛存在于植物或少数动物中的含有氮元素的有机化合物，具有诸多药效作用，如平喘镇咳、抗炎消菌[4]、抗病毒、抗癫痫、保护肝脏、抗心律失常[5]、抗肿瘤[6-8]等作用，为人类疾病治疗做出一定的贡献。

我国近年来加大了对白英总生物碱的研究，为生物碱相关药品和保健品的研发投入了大量资金，同时市场对生物碱类药物的需求也不断增加，生物碱的研究方向逐渐成为焦点。

本课题采用正交实验对提取总生物碱工艺进行优化，方法简单高效，对白英总生物碱的提取研究有一定的借鉴意义。

1材料与方法1.1材料和仪器白英，北京市同仁堂有限责任公司；士的宁标准品，德思特，DS0026，HPLC≥98%；pH 4.0缓冲液，自制，试剂均为分析纯。

Cary 100scan 型紫外-可见分光光度计；RE-201型旋转蒸发仪；SZCL-3B 数显智能控温磁力搅拌器；HLD-20002型电子天平。

1.2方法将白英全草洗净、切碎，于烘箱中烘干约2h ，再用粉碎机粉碎，过40目筛，得到白英粗粉，装入烧杯，放入冰箱备用。

1.2.1对照品溶液的制备称取4.5mg 士的宁标准品加入到100mL 容量瓶中，再加入二氯甲烷溶液直至刻度线，摇匀。

1.2.2供试品溶液的制备在25mL 容量瓶中加入0.5g 白英粉末和3mL 氨水。

0.5h 后，再加入25mL 无水乙醇，提取3.5h ，再用循环水式真空泵抽滤，将所得滤液蒸发浓缩，最后用二氯甲烷萃取，取二氯甲烷层，转移到容量瓶中，用二氯甲烷定容。

1.2.3最大吸收波长的测定向分液漏斗里加入2mL 士的宁溶液、2mL 样品溶液，再依次加入2mL 溴甲酚绿溶液、4mL pH 值为4.0的缓冲液、5mL 二氯甲烷，配制完成后静置20min ，分离取出二氯甲烷层溶液。

保健食品中总皂甙的测定1.试剂（1）Amberlite-XAD-2大孔树脂，Sigma化学公司、U.S.A。

（2）正丁醇分析纯。

（3）乙醇分析纯。

（4）中性氧化铝层析用，100－200目。

（5）人参皂甙Re 购自中国药品生物制品检定所。

（6）香草醛溶液称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100mL。

（7）高氯酸分析纯。

（8）冰乙酸分析纯。

（9）人参皂甙Re标准溶液：精确称取人参皂甙Re标准品0.020g，用甲醇溶解并定容至10.0mL，既每毫升含人参皂甙Re2.0mg。

2.仪器（1）比色计（2）层色柱3.试验步骤（1）试样处理固体试样：称取1.000g左右的试样（根据试样含人参量定），至于100mL 容量瓶中，加少量水，超声30min，再用水定容至100mL，摇匀，放置，吸取上清液1.0mL 进行柱层析。

液体试样：含乙醇的补酒类保健食品，吸取1.0mL试样放水浴挥干，用水浴溶解残渣，用此液进行柱层析。

非乙醇类的液体试样：吸取1.0mL试样（假如浓度高、或颜色深，需稀释一定体积后再取1.0mL）进行柱层析。

（2）柱层析：用10mL注射器作层析管，内装3cm Amberlite-XAD-2大孔树脂，上加1cm中性氧化铝。

先用25mL70％乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25mL水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0mL已处理好的试样溶液（试验步骤中试样处理），用25mL水洗柱，弃去洗脱液，用25mL70％乙醇洗脱人参皂甙，收集洗脱液于蒸发皿中，置于60℃水浴挥干，以此作显色用。

（3）显色：在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL5％香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣都溶解，在加0.8mL高氯酸，混匀后移入5mL带塞刻度离心管中，60℃水浴上加热10min，取出，冰浴冷却后，准确加入冰乙酸5.0mL,摇匀后，以1cm比色池于560cm波长处与标准管一起进行比色测定。

（4）标准管：吸取人参皂甙Re标准溶液（2.0mg/mL）100µL放蒸发皿中，放在水浴挥干（低于60℃），或热风吹干（勿使过热），以下操作从“试验步骤中柱层析…”起，与试样相同。

RP-HPLC法测定中药白英中大豆苷的含量宋敏;贾玉荣;佟立今;孙立新【期刊名称】《实用药物与临床》【年(卷),期】2011(14)2【摘要】目的建立测定白英中大豆苷(Daidzin)含量的RP-HPLC法.方法色谱柱为Diamonsil-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水-磷酸(16:84:0.1,v/v),检测波长为260 nm,柱温为35 ℃,流速为1.0 mL/min.结果大豆苷质量浓度在1.0～40.0 μg/mL内线性关系良好(r=0.999 7).大豆苷的平均回收率为100.1%,RSD为1.1%.结论该方法准确,重复性良好,适用于白英药材的质量控制.%Objective To establish a RP-HPLC method for the determination of daidzin in Solanum lyratum Thunb. Methods A Diamonsil C18 column (250 mm ×4. 6 mm,5 tμm) was used. The mobile phase consisted of acetonitrile-water-phosphoric acid ( 16: 84: 0. 1, v/v). The wavelength was set at 260 nm. Results The linear range of daidzin was 1.0 ～40. 0 μg/mL. The average recovery was 100. 1％ ( RSD was 1. 1％ ). Conclusion The method is simple, accurate, reproducible, and it could be used for the quality control of Solanum lyratum Thunb.【总页数】2页(P136-137)【作者】宋敏;贾玉荣;佟立今;孙立新【作者单位】大连市药监局,大连,116021;沈阳药科大学药学院,沈阳,110016;沈阳药科大学药学院,沈阳,110016;沈阳药科大学药学院,沈阳,110016【正文语种】中文【相关文献】1.RP-HPLC法测定7种中药材中反式阿魏酸和顺式阿魏酸的含量 [J], 刘晓芳;刘养清;赵平;马春红;陈元元;仝永斌2.RP-HPLC法测定中药茯苓皮中茯苓酸A和3-表去氢土莫酸的含量 [J], 夏烨;杨春华;刘静涵;濮社班3.HPLC法测定中药白英中16-妊娠双烯醇酮的含量 [J], 孙立新;李凤荣;孟楠;王承军;王敏伟;毕开顺4.HPLC法测定中药白英中薯蓣皂苷元的含量 [J], 孙立新;孟楠;何珉;张克星;毕开顺;王敏伟5.RP-HPLC法测定中药镇痛合剂中栀子苷含量 [J], 秦学玲;杨璐璐;任李玥;马娜;蒋新平;秦兴卫因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

白英不同药用部位不同生长期总生物碱的含量测定【摘要】目的：探讨白英不同药用部位不同生长期总生物碱含量分布规律。

方法：分别于5、6、7、8、9、10、11月份采集白英的根、茎、叶、果等药用部位作为样品，用氯仿-甲醇(4∶1) 混合溶剂提取总生物碱,酸性染料比色法测定提取物中生物碱含量。

结果：总生物碱在4.56～13.68μg·ml- 1 （r=0.9998）范围内,浓度与吸光度线性关系良好；平均加样回收率为99.80%( n =5),r sd=1.84%。

白英根总生物碱含量最高：平均为0.247%，其次分别为果实、叶子、下部茎、上部茎。

根、下部茎、上部茎、叶中总生物碱均在八月份达到最高值；果实在十月份达到最高值。

结论：不同药用部位不同生长期总生物碱的含量差别较大。

【关键词】白英; 药用部位；生长期；酸性染料比色法; 总生物碱;含量测定【中图分类号】r 284 【文献标识码】a 【文章编号】1004－7484（2012）04- 0015- 02白英为茄科茄属植物(solanum lyratum thunb.)，又名鬼目草（《尔雅》郭璞注）、白毛藤（《百草镜》）、毛千里光、金线绿毛龟、葫芦草（《福建民间草药》）等，以全草及根供药用，具有清热利湿、解毒消肿、抗癌等功能。

化学及现代药理研究表明[1], 白英中的甾体生物碱种类多, 是白英药理作用的有效成分。

甄会贤、李晨等[2-3]分别对白英药材的总生物碱的含量进行了测定，本实验采用酸性染料比色法, 探讨了白英不同药用部位不同生长期总生物碱的含量分布规律,为白英药材的采收、质量控制、合理选择应用提供了科学依据。

1 仪器与材料tu—1800s紫外可见分光光度计（北京普析通用分析仪器厂），梅特勒－托利多电子天平（梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司），十万分之一电子天平（sartorius,德国）。

贝母素甲（批号：110750-200609，购于中国药品生物制品检定所），白英根、茎、叶、果分别为5、6、7、8、9、10、11月份自采，白英药材2010年11月自采，均经余南才主任药师鉴定为茄科茄属植物, 水为蒸馏水,氯仿、甲醇、溴甲酚绿等试剂均为分析纯。

实验二: 白英化学成分的分离及含量测定一、实验目的1．学习天然产物的提取、纯化、鉴定的原理和方法，了解从药用植物中提取、纯化、鉴定天然产物化学成分的全过程。

2．掌握减压蒸馏、结晶、柱层析、薄层层析等基本的化学试验操作。

3．了解气相色谱、液相色谱、红外光谱等大型仪器的基本操作，增加对天然产物结构分析的理解。

二、实验原理我国疆土辽阔，各种中药材资源十分丰富，中草药应用历史悠久，积累了丰富的经验，对中草药的研究与开发具有得天独厚的基础优势。

中草药化学成分非常复杂，天然产物的分离和提纯常用柱层析的方法。

柱层析常用的有吸附柱色谱和分配色谱两类。

前者常用氧化铝和硅胶作固定相，后者则以附着在惰性固体如硅藻土和纤维素等上的活性液体作为固定相。

吸附柱色谱通常在玻璃管中填入表面积很大、经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂。

当混合物溶液加入吸附柱上端时，各种成分则被吸附在柱的上端，当洗脱溶剂流下时，由于不同的化合物吸附能力不同，便以不同的速度下移，于是形成不同的层次，即溶质在柱中自上而下按对吸附剂亲和力的大小分别形成若干色带，继续用溶剂洗脱时，已经分开的溶质可以分别从柱上洗脱收集。

合并相同单一含有组分的洗脱液，浓缩即可得到化合物纯品。

柱层析洗脱情况可以通过薄层层析监控。

经分离提纯得到的化合物纯品可以通过红外、核磁及质谱确定其结构。

白英系茄属植物，其全草作为我国的传统中药在《本草纲目》中已有记载，现代医学研究证明其具有抗癌消炎等功效，临床多用于癌症的治疗。

白英中含有大量的皂苷类化合物，对皂苷类化合物总量的测定有利于白英的质量控制。

研究表面白英中薯蓣皂苷含量较高，故可以薯蓣皂苷为标准品来测定白英中皂苷类化合物的总含量。

但薯蓣皂苷元分子中不具有共轭结构，不宜直接用UV检测，故须采用显色剂显色。

常用的显色体系有香草醛-冰醋酸-高氯酸体系；香草醛-乙醇-硫酸体系；高氯酸体系。

但是香草醛-冰醋酸-高氯酸和香草醛-乙醇-硫酸比色法操作比较繁琐，而经高氯酸显色后的样品较为稳定、漂移较小、方法简单。

白英中总黄酮的含量测定
甄会贤;李平;张虹;齐伟;陈扬;孙立新
【期刊名称】《中华中医药学刊》
【年(卷),期】2008(26)10
【摘要】目的：建立白英中总黄酮的含量测定方法。

方法：以芦丁为对照，三氯
化铝显色，采用分光光度法，在419nm处测定吸光度值，计算白英中总黄酮含量。

结果：芦丁的质量浓度在5．48～21．920．g／mL范围内与吸光度值呈良好线
性关系（r=0．9996），方法的平均回收率为96．7％（n=9），RSD为1．1％；不同来源的白英药材中总黄酮含量差异较大。

结论：本方法操作简便、准确、灵敏、重现性好，可用于白英药材的质量控制。

【总页数】3页(P2231-2233)
【关键词】白英;总黄酮;芦丁;分光光度法
【作者】甄会贤;李平;张虹;齐伟;陈扬;孙立新
【作者单位】沈阳药科大学药学院;山西生物应用职业技术学院
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
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白英中甾体类总生物碱的含量测定研究韩素芹;张强;张翼敏;王瑞【摘要】Objective:To establish the assay method of steroidal total alkaloids content in Solanum lyratum Thumb.. Methods:After extracting total alkaloids by the method of ethanol extracting-hydrolyzing with acid and ethanol,steroidal total alkaloids were isolated. Then its absorbance at the point of 412 nm was observed by the ultraviolet-visible spec-trophotometry and its content was calculated. Results:The solasodine curve was linear over the range of 1.6 μg/mL~9.6μg/mL with the correlation coefficient of 0.999 5. The average recovery rate were88.70%~102.2%(RSD=3.09%~4.96%,n=9). The contents of steroidal alkaloids in Solanum lyratum Thumb. which was from different samples had statistically difference. Conclusion:The method isaccurate,simple,sensitive and reproducible,especially for the detection of steroidal alkaloids con-tent in Solanum lyratum Thumb. It can provide a theoretical reference for the quality evaluation of Solanum lyratum Thumb..%目的：建立白英中甾体类总生物碱含量的测定方法。