皂苷测定方法
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附件:一、保健食品中大蒜素的测定1 范围本方法适用于以大蒜及其制品为原料的保健食品中大蒜素(三硫二丙烯,C6H10S3)的含量测定。
本方法最低检出浓度为0.0430mg/mL;取100mg试样,提取定容5.0mL时,试样中大蒜素最低检出质量浓度为0.20g/100g。
本方法最佳线性范围: 0.320mg/mL~3.00 mg/mL。
2 原理:根据大蒜素为挥发性油成分,经有机溶剂提取,用气相色谱仪分析,采用外标法定量。
3 试剂除特殊说明,所用试剂均为分析纯。
3.1 无水乙醇3.2 正己烷3.3标准溶液:称取0.1000g标准品,置于10mL容量瓶中,用正己烷定容至刻度,该溶液中含大蒜素浓度为10.0mg/mL。
此溶液可在冰箱中保存七天。
取该溶液1.0mL,置于10mL容量瓶中,用正己烷定容至刻度,此溶液含大蒜素浓度为1.0mg/mL。
4 仪器4.1气相色谱仪:附氢火焰(FID)检测器4.2数据处理机或积分仪4.3分析天平:万分之一4.4超声清洗机4.5离心机:3000r/min5分析方法5.1试样提取5.1.1固体试样:称取试样适量(相当于含大蒜素5mg,精确至0.001g),加无水乙醇适量,密塞,超声70min,取出冷却,加正己烷定容(调节大蒜素含量约为1mg/mL),振摇,静置分层后,取上层溶液进样。
5.1.2液体试样吸取试样适量(相当于含大蒜素5mg,精确至0.001g),置于分液漏斗中,加5mL 正己烷振摇提取1min ,静置(或离心)分层后,取上层溶液进样。
5.2 气相色谱参考条件5.2.1 色谱柱:HP-5(30m×0.25mm)5.2.2 柱箱温度:100℃(3min )min)10(℃200℃150℃/min 20℃/min 10−−−→−−−−→−5.2.3 进样口温度:220℃ 5.2.4 检测器温度:250℃ 5.2.5 载气:氮气(1mL/min )5.2.6 氢气:40mL/min ;空气:400mL/min 5.2.7 进样量:1μL5.3 定性分析:在参考操作条件下,以对照品与试样比较保留时间定性。
竹节参中皂苷含量测定方法的建立
竹节参是一种常用的中药材,含有多种有效成分,具有抗疲劳、降血糖等多种功效。
其中竹节参中的皂苷是其主要活性成分之一,具有多种生理活性。
因此,研究竹节参中皂苷的含量和测定方法是非常重要的。
竹节参中皂苷的含量测定需要一些化学试剂备齐,包括高效液相色谱系统、甲醇、乙腈、正丙醇、乙酸、醋酸、纯化水等。
具体测定方法如下:
1、样品制备
取粉末状竹节参样品5克,加入研钵中,添加30 ml甲醇,并使用超声波设备进行超声提取,超声时间为30 min。
过滤提取液,并将残渣再次提取三次,每次提取20 ml正丙醇,振荡混合5 min,离心收集上清液,将上清液混合并浓缩至5 ml,加入20 ml乙酸,在70℃水浴中加热10 min,离心获取上清液,将上清液重溶于10 ml甲醇中,过0.22 μm 的膜过滤器,待用。
取10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg、40 mg/kg、50 mg/kg浓度的竹节参提纯皂苷标准品各1 ml,加入10 ml甲醇中,溶解混合,过0.22 μm的膜过滤器,待用。
3、高效液相色谱分析
将经过上述方法制备好的竹节参样品和竹节参提纯皂苷标准品分别注入高效液相色谱系统中,以CYDN-1 C18色谱柱为分离柱,流动相为甲醇-水(75:25),流速为1.0 ml/min,测定波长为208 nm,通过测定峰面积,计算竹节参样品中皂苷的含量。
通过上述方法,可以测定竹节参中皂苷的含量,并且测定结果准确可靠。
对于竹节参的质量控制和研究开发具有重要的意义。
【导言】我国药典是国家药典的统称,是指对我国境内生产、流通和使用的药品质量标准的权威性规定,是保障药品质量和使用合理、安全的基本依据。
其中,人参总皂苷含量是人参药材质量的重要评价指标,其测定方法对于保证人参药材的质量具有重要意义。
本文将对我国药典2020版中人参总皂苷含量测定方法进行详细介绍。
【正文】1. 依据依据我国药典是国家药典,是依法规定的药品标准,它规定了符合标准的药品质量要求、规范药品生产、流通和使用。
人参作为一种重要的中药材,在我国药典中有着详细的质量标准,其含有的总皂苷含量是一个至关重要的指标。
2. 人参总皂苷含量的意义总皂苷是人参中的重要有效成分之一,它具有调节免疫功能、提高机体抗氧化能力、增强心肌供血量、预防心绞痛、心肌梗死等保护心脏的作用。
测定人参总皂苷含量不仅有利于评价人参的药用价值,还能为人参的质量控制提供依据。
3. 我国药典2020版中人参总皂苷测定方法我国药典2020版中,人参总皂苷的测定方法主要包括提取、净化、分离和定量测定这几个步骤。
具体操作步骤如下:3.1 溶剂选择:首先选择合适的溶剂,如乙醇、丙酮等,将人参样品粉碎成粉末状,然后用溶剂进行提取,得到提取液。
3.2 净化分离:将提取液进行净化分离,去除杂质,得到待测液。
3.3 定量测定:采用分光光度计或者高效液相色谱仪等仪器,进行人参总皂苷的定量测定,计算出含量结果。
4. 测定方法的操作要点在操作过程中,需严格控制提取温度、时间和溶剂的体积比例,避免提取效果不佳。
净化过程中也需保证分离效果,避免杂质对测定结果的影响。
测定过程中应根据仪器的要求进行参数设置,确保测定结果的准确性。
为了保证人参总皂苷含量的测定结果的可靠性和稳定性,建议重复测定并取平均值。
5. 结论我国药典2020版中的人参总皂苷测定方法,是一种全面、准确的测定方法,可以有效地评价人参药材的质量,并为制定人参制剂的合理使用提供依据。
基于该方法,人们可以对人参药材的质量进行科学评价,保证人参产品的质量和疗效。
三七皂苷含量标准三七,又称田七、人参三七,是五加科人参属植物,具有丰富的药用价值。
三七皂苷是三七的主要活性成分,具有抗炎、镇痛、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性。
因此,三七皂苷含量的测定对于评价三七质量具有重要意义。
本文主要对三七皂苷含量的测定方法及其标准进行研究。
一、三七皂苷含量的测定方法1. 液相色谱法(HPLC)液相色谱法是目前最常用的三七皂苷含量测定方法。
该方法具有灵敏度高、分离效果好、重复性好等优点。
常用的检测器有紫外检测器(UV)和蒸发光散射检测器(ELSD)。
根据三七皂苷的化学性质,可以选择适当的色谱柱和流动相进行分离和检测。
2. 薄层色谱法(TLC)薄层色谱法是一种常用的定性分析方法,也可以用于三七皂苷含量的初步测定。
该方法操作简单,但灵敏度和分离效果相对较低。
常用的显色剂有碘化铋钾、香草醛-硫酸等。
3. 毛细管电泳法(HPCE)毛细管电泳法是一种新型的分离分析方法,具有分离效果好、操作简单、运行成本低等优点。
该方法可以用于三七皂苷组分的分离和含量测定,但目前仍处于研究阶段。
二、三七皂苷含量标准三七皂苷含量标准是评价三七质量的重要依据。
目前,国内外尚无统一的三七皂苷含量标准。
不同国家和地区根据当地的气候、土壤、生长条件等因素,制定了相应的质量标准。
例如,中国药典规定三七中人参皂苷Rb1、Rg1和Re的含量分别不低于0.8%、0.5%和0.3%。
三、三七皂苷含量标准的影响因素1. 品种差异:不同品种的三七,其皂苷含量存在显著差异。
例如,云南三七的皂苷含量通常高于云南三七。
因此,在制定三七皂苷含量标准时,需要考虑到品种的差异。
2. 生长环境:生长环境对三七皂苷含量也有显著影响。
例如,土壤肥力、光照时间、降水量等因素都会影响三七的生长和皂苷含量。
因此,在制定三七皂苷含量标准时,需要考虑到生长环境的差异。
3. 采收时间:三七的生长周期较长,不同时间段采收的三七,其皂苷含量存在显著差异。
一般来说,种植后2-3年的三七,其皂苷含量高。
重量法测定总皂苷含量的方法
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总皂苷的测定方法(分光光度法)本方法适用于功能性食品中总皂苷的测定。
本方法人参皂苷Re的最低检出量为2μg/mL。
一、方法提要样品中总皂苷经提取、PT—大孔吸附树脂柱预分离后,在酸性条件下,香草醛与人参皂苷生成有色化合物,以人参皂苷Re为对照品,于560nm处比色测定。
二、仪器1.722分光光度计。
2.PT—大孔吸附树脂柱(河北省津杨滤材厂)。
3.超声波振荡器。
三、试剂1.甲醇(分析纯)。
2.乙醇(分析纯)。
3.人参皂苷Re标准品(中国药品生物制品检定所)。
4.5%香草醛溶液:称取5g香草醛,加冰乙酸溶解并定容至l00mL。
5.高氯酸(分析纯)。
6.冰乙酸(分析纯)。
7.人参皂苷Re标准溶液:精确称取人参皂苷Re标准品20.0mg,用甲醇溶解并定容至10mL,即每1mL含人参皂苷Re2.0mg。
8.重蒸水。
四、测定步骤1.样品处理:(1)固体样品称取1.0g左右样品于100mL烧杯中,加入20~40mL 85%乙醇,超声波振荡30min,再定容至50mL,摇匀,放置,吸取上清液1.0mL挥干后以水溶解残渣,进行柱分离。
(2)液体样品含乙醇的酒类样品:准确吸取1.0mL样品放于蒸发皿中,蒸干,用水溶解残渣,用此液进行柱层析;非乙醇类液体样品:准确吸取1.0mL样品(如浓度高或颜色深,需稀释一定体积后再取1.0mL)直接进行柱分离。
2.柱层析以PT—大孔吸附树脂柱进行层析分离,准确吸取上述已处理好的样品溶液1.0mL上柱,用15mL水洗柱,以洗去糖分等水溶性杂质,弃去洗脱液,再用20mL85%乙醇洗脱总皂苷,收集洗脱液于蒸发皿中,于水浴上蒸干,以此作显色用。
3显色在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL 5%香草醛冰乙酸溶液,转动蒸发皿,使残渣溶解,再加0.8mL高氯酸,混匀后移入l0mL比色管中,塞紧盖子于60℃以下水浴上加温15min取出,冷却后准确加入冰乙酸5.0mL,摇匀后以1.0cm 比色皿、于560nm处与人参皂苷Re标准管同时比色。
人参中人参皂苷的提取、分离和测定一、本文概述二、人参皂苷的提取方法人参皂苷的提取是从人参原材料中分离和纯化目标化合物的重要步骤。
提取方法的选择直接影响皂苷的得率和纯度。
常用的提取方法包括溶剂提取法、微波辅助提取法、超声波辅助提取法以及超临界流体提取法等。
溶剂提取法:这是最常见且相对简单的方法,主要利用人参皂苷在不同溶剂中的溶解度差异进行提取。
常用的溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮等。
通过浸泡、回流或渗漉等方式,使人参皂苷从原材料中溶解到溶剂中,再通过蒸发溶剂得到粗提物。
微波辅助提取法:微波提取是利用微波对溶剂和原材料的加热作用,提高提取效率和速度。
微波产生的热能可以使细胞壁破裂,加速溶剂对人参皂苷的渗透和溶解,从而缩短提取时间。
超声波辅助提取法:超声波提取是通过超声波产生的空化效应、机械效应和热效应等作用,增加溶剂对原材料的穿透力,提高人参皂苷的提取率。
同时,超声波还可以破坏细胞结构,使皂苷更容易释放到溶剂中。
超临界流体提取法:超临界流体提取是利用超临界状态下的流体(如二氧化碳)作为溶剂,通过调节压力和温度来控制流体的溶解能力,从而实现对人参皂苷的高效提取。
这种方法具有提取效率高、操作温度低、对原料破坏小等优点。
在实际应用中,可以根据人参原材料的性质、目标皂苷的特点以及实验条件等因素,选择最合适的提取方法。
为了提高提取效果,还可以结合使用多种提取方法,如先用溶剂提取法得到粗提物,再用超声波或微波辅助提取法进行进一步的纯化。
三、人参皂苷的分离技术人参皂苷的分离是提取过程后的关键步骤,其主要目标是从复杂的混合物中分离出单一或特定类型的人参皂苷。
这通常涉及到一系列的色谱技术,包括液-液分配色谱、固相萃取、柱色谱、薄层色谱以及高效液相色谱(HPLC)等。
液-液分配色谱,也称为液-液萃取,是基于不同物质在两种不相溶溶剂中的溶解度差异进行分离的。
这种方法对于初步分离人参皂苷和其他杂质非常有效。
固相萃取是一种基于吸附和解吸原理的分离技术。
总皂苷的测定方法(分光光度法)本方法适用于功能性食品中总皂苷的测定。
本方法人参皂苷Re的最低检出量为2μg/mL。
一、方法提要样品中总皂苷经提取、PT—大孔吸附树脂柱预分离后,在酸性条件下,香草醛与人参皂苷生成有色化合物,以人参皂苷Re为对照品,于560nm处比色测定。
二、仪器1.722分光光度计。
2.PT—大孔吸附树脂柱(河北省津杨滤材厂)。
3.超声波振荡器。
三、试剂1.甲醇(分析纯)。
2.乙醇(分析纯)。
3.人参皂苷Re标准品(中国药品生物制品检定所)。
4.5%香草醛溶液:称取5g香草醛,加冰乙酸溶解并定容至l00mL。
5.高氯酸(分析纯)。
6.冰乙酸(分析纯)。
7.人参皂苷Re标准溶液:精确称取人参皂苷Re标准品20.0mg,用甲醇溶解并定容至10mL,即每1mL含人参皂苷Re2.0mg。
8.重蒸水。
四、测定步骤1.样品处理:(1)固体样品称取1.0g左右样品于100mL烧杯中,加入20~40mL 85%乙醇,超声波振荡30min,再定容至50mL,摇匀,放置,吸取上清液1.0mL挥干后以水溶解残渣,进行柱分离。
(2)液体样品含乙醇的酒类样品:准确吸取1.0mL样品放于蒸发皿中,蒸干,用水溶解残渣,用此液进行柱层析;非乙醇类液体样品:准确吸取1.0mL样品(如浓度高或颜色深,需稀释一定体积后再取1.0mL)直接进行柱分离。
2.柱层析以PT—大孔吸附树脂柱进行层析分离,准确吸取上述已处理好的样品溶液1.0mL上柱,用15mL水洗柱,以洗去糖分等水溶性杂质,弃去洗脱液,再用20mL85%乙醇洗脱总皂苷,收集洗脱液于蒸发皿中,于水浴上蒸干,以此作显色用。
3显色在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL 5%香草醛冰乙酸溶液,转动蒸发皿,使残渣溶解,再加0.8mL高氯酸,混匀后移入l0mL比色管中,塞紧盖子于60℃以下水浴上加温15min取出,冷却后准确加入冰乙酸5.0mL,摇匀后以1.0cm 比色皿、于560nm处与人参皂苷Re标准管同时比色。
1 三萜皂苷三萜皂苷主要分布在植物界的石竹科、桔梗科、五加科、豆科中。
桔梗、南沙参、党参、人参、三七、瞿麦、甘草、远志、紫菀、地榆等许多中草药都含有此类皂苷。
不同的中草药其三萜皂苷的皂苷元或活性成分不同,比如人参皂苷的皂苷元为人参皂苷Rg1、Re 和Rb[9];女贞子中三萜皂苷的皂苷元为齐墩果酸[10]。
三萜皂苷的定量测定方法主要有比色法、薄层色谱法、高效液相色谱-紫外检测器法、高效液相色谱-二极管阵列检测器法。
1.1 比色法比色法的原理是:三萜皂苷分子中缺少发色团和助色基,需要某种试剂与其反应形成发色基团后显色,在某个波长下测定其吸光度,再根据吸光度与浓度的关系(标准曲线),计算出样品的浓度,从而计算出样品中总皂苷的含量。
常见的显色剂有香草醛-冰醋酸溶液和高氯酸体系或浓硫酸。
比如徐睿庸等人利用分光光度法测定青钱柳叶中总三萜皂苷的含量,所采用的显色剂就是0.3mL的50g/L 香草醛一冰醋酸与0.6mL 的高氯酸。
在显色剂与样品中的三萜皂苷反应后,80℃水浴10min,在波长550nm 处测定青钱柳叶中总三萜皂苷的吸光度,从而计算出含量。
其化学反应原理是:强酸使羟基脱水而使其双键数目增加,又经双键位移后与显色剂缩合等反应形成共轭结构,最后在酸作用下形成碳正离子盐而显色[11]。
而杨文志等人则认为显色机理是因为皂苷元中C3 和C12上的羟基与香草醛上的醛基发生反应,形成缩醛,成为新的共轭体系而显色[12]。
孔燕君则采用浓硫酸作为显色剂,分别测定了人参、三七和男壮胶囊中三萜皂苷的含量。
他认为人参皂苷分子上的糖基能被浓硫酸氧化脱水成糠醛衍生物,在60℃水浴2h 后在322nm 处有紫外吸收,测其吸光度,进而计算出人参、三七和男壮胶囊中的三萜皂苷含量[13] [14]。
1.2 薄层扫描法傅强等人依据五加科植物人参三萜皂苷中人参皂苷Rg1 在薄层板上分离效果较好和荧光分光光度法高灵敏度的特点,建立了薄层色谱-荧光分光光度法测定人参中人参皂苷Rg1 薄层色谱法。
展开剂为氯仿:醋酸乙酯:甲醇:水=16∶2∶11∶12 的下层液体,显色剂为10的硫酸乙醇溶液,喷雾显色,95℃水浴中加热5min,在双波长薄层扫描仪下扫描,激发波长Ex=320nm,发射波长Em=400nm。
实验表明:薄层色谱显色是定量的关键,用10%硫酸乙醇溶液喷雾显色要均匀,否则定量洗脱后测定荧光强度值有较大差异。
在105℃加热5min,效果良好[15]。
1.3 高效液相色谱法近年来,随着高效液相色谱仪的普及,越来越多的皂苷成分开始使用到了这项技术。
由于它能有效处理非挥发性和极性较强的化合物,可以较好分离出主成分峰和杂质峰,能反映样品的真实含量,方法简便、准确、灵敏有利于产品质量的控制,从而使它成为了测定皂苷的一种最有效最常用的方法,但HPLC 仪器昂贵,而且要求有对照品。
1.3.1 高效液相色谱-紫外检测器法该方法是HPLC 中测定有紫外吸收的皂苷常用方法,广泛应用于三萜皂苷如人参皂苷、女贞子中齐墩果酸含量的测定中。
紫外检测器由于对环境温度、流速、流动相组成等的变化不是很敏感,所以还能用于梯度淋洗,但它非通用检测器,它要求被测物质有较强的紫外吸收或本身无紫外吸收但转化后有吸收紫外线的基团。
战佩英等人使用岛津高效液相色谱仪-紫外检测器(SPD-10A UV-V IS)工作站对女贞子药材中的齐墩果酸进行了含量测定。
色谱条件是:C18 色谱柱(200mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-0.05%乙酸胺水溶液(86:14);流速:0.8mL /min;检测波长:220nm;柱温25℃[10]。
1.3.2 高效液相色谱-二极管阵列检测器法戚志华等人采用600 高效液相色谱仪-2996 二极管阵列检测器对不同产地、不同生长期的女贞子中齐墩果酸和熊果酸的含量进行了测定。
其实验色谱条件如下:色谱柱:LichrospherC18(250mm×416mm,5μm);流动相:乙腈-甲醇-水-磷酸-三乙胺(50∶30∶20∶0;流速:1mL·min-1;检测波长:205nm;柱温:室温;进样量:20μL[16]。
Fang LIU 等人对绞骨蓝皂苷的高效液相色谱技术进行了研究。
他们认为,皂苷的紫外吸收较弱,紫外检测器设置的最大吸收波长一般在203nm 左右,在这个波长范围内,黄酮和色素等杂质也有紫外吸收,从而带来杂峰。
因此,他们选用了二极管阵列检测器作为检测工具[17]。
其色谱条件是:Agilent 1100 系列工作站,G1315A 二极管阵列检测器,AlltimaC18 柱(4.6mm×250mm,5mm),流动相:水:乙腈梯度洗脱(5—100%),流速0.8ml/min,波长203nm,进样量20ml。
Muhammad K.Saeed 等人对中国粗榧提取物进行了高效液相色谱分析,他们为了获得尽可能多的可检测到的强峰,而选用了二极管阵列检测器,这样一来,所有峰的光谱就都可以被检测显示出来。
他们的色谱条件是:HPLC Elite P230 系列工作站,二极管阵列检测器(DAD-230),Kromasil C18 柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相是水-乙腈(1:1),5~40min 内线性洗脱,流速0.7ml/min,波长254nm,进样量10μl[18]。
二极管阵列检测器(diode-array detector,DAD)是先让所有波长的光都通过流动池,然后通过一系列分光技术,使所有波长的光在接受器上被检测。
和普通的紫外—可见分光检测器相比,二极管阵列检测器进入流动池的光不再是单色光。
它具有以下优点:⑴可极为方便地得任意波长的色谱图;⑵可得任意时间的光谱图,相当于与紫外联用;⑶提供组分的定性信息。
也就是说,二极管阵列检测器不仅可用于定量检测,还具有辅助定性、峰纯度评估等功能,可得到立体的光谱-色谱图,对有特征紫外吸收的化合物的定性很有帮助。
1.3.3 高效液相色谱-蒸发光散射检测器法蒸发光散射检测器(evaporative light-scattering detector,ELSD) 是一种基于溶质的光散射性质的通用检测器,由雾化器、加热漂移管(溶剂蒸发室)、激光光源和光检测器(光电转换器)等部件构成。
流动相由热气流使之热气化喷雾,再进入加热管,溶剂在加热管中挥发。
被分析检测的物质颗粒通过一束狭窄的散射光由光电倍增管收集,色谱柱流出液导入雾化器,被载气(压缩空气或氮气)雾化成微细液滴,液滴通过加热漂移管时,流动相中的溶剂被蒸发掉,只留下溶质,激光束照在溶质颗粒上产生光散射,光收集器收集散射光并通过光电倍增管转变成电信号。
ELSD 的响应取决于被分析的质粒的数量和大小,而不依赖于被测物的光学特性。
ELSD 可消除因温度变化引起的基线漂移,即使是在梯度洗脱时也能提供平稳的基线。
和紫外检测器相比,它排除了用UV 检测器时的溶剂干扰,大大地提高了分离效果。
和二极管阵列检测器相比,蒸发光散射检测器基线噪音小,不受梯度影响,能够获得较好的峰形,且仅对不挥发被分析物质产生响应,因此杂质峰较少。
和示差折光检测器相比,它的基线漂移不受温度影响,信噪比,高灵敏度比RID 高二个数量级,且与梯度洗脱兼容。
对无紫外吸收或仅有紫外末端吸收的物质如糖类、皂苷类,蒸发光散射检测器具有良好的稳定性,较高的灵敏度和重现性。
因此,越来越多的中草药中皂苷类成分的测定使用到了蒸发光散射检测器。
王举涛等人用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法对常用中药黄芪中的功效成分黄芪甲苷进行了含量测定。
由于黄芪甲苷仅在200 nm 处有弱的末端吸收,因而操作条件十分严格,噪音对结果影响较大,灵敏度也较差;如果用柱前衍生化高效液相色谱-紫外检测器进行测定,虽可克服黄芪甲苷仅在200nm 处有弱的末端吸收的弱点,但试验结果表明操作繁琐,重现性差。
而高效液相色谱-蒸发光散射检测器进行测定黄芪甲苷,不受流动相溶剂的干扰,不要求被检测组分特定的化学结构,亦可用于不挥发性成分的检测。
试验结果表明分离度好、干扰少、前处理简便。
灵敏度、稳定性及重现性均符合含量测定要求。
其色谱条件如下:色谱柱:ODS 柱(4.6mm×150mm,5μm);柱温:25℃;流动相:乙腈-水(40∶60),流速:1.0ml/min;漂移管温度:105℃,载气流速为2.8 L/min[19]。
2 甾体皂苷甾体皂苷主要存在于薯蓣科、百合科植物中,如各种薯蓣、七叶一枝花、土茯苓、知母、麦冬等。
甾式皂苷因可作为合成甾体激素的原料而有重要意义。
不同的中草药其甾体皂苷的皂苷元或活性成分不同,比如知母、天冬中甾体皂苷的皂苷元主要为菝葜皂苷元[20] [21];黄姜或盾叶薯蓣中甾体皂苷的主要皂苷元则为薯蓣皂苷元[22] [23]。
甾体皂苷的定量测定方法主要有比色法、高效液相色谱-示差折光检测器法、高效液相色谱-蒸发光散射检测器法。
2.1 比色法比色法测定甾体皂苷的含量其原理同三萜皂苷相同,但因其化学结构与三萜皂苷不同,故所选用的显色剂不同。
一般来说,测定总甾体皂苷的显色剂是浓硫酸或香草醛-冰乙酸溶液和高氯酸。
薛小娟等人利用知母中菝葜皂苷元能与浓硫酸发生显色反应的原理,通过测定总皂苷水解产物中菝葜皂苷元的含量来测定知母总皂昔含量[24]。
李敏等人在测定天冬中总皂苷含量时,对不同的显色剂;①0.2ml 香草醛-冰醋酸和0.8ml 高氯酸;②8%香草醛-乙醇液和77%硫酸;③高氯酸;④94%硫酸进行了比较,发现高氯酸的显色效果较好[21]。
总的来说,比色法的特点是:①方法灵敏,但显色试剂的专属性较差,通常用于总皂苷的测定;②要求有特定的显色剂;③要选择合适的对照品。
2.2 高效液相色谱法-二极管阵列检测器法都述虎等人通过采用waters 高效液相色谱仪和996二极管阵列检测器(DAD)对穿龙薯蓣总皂苷中薯蓣皂苷元含量进行测定,建立了反相高效液相色谱法测定穿龙薯蓣总皂苷中薯蓣皂苷元的含量的方法[25]。
色谱条件如下:Bondapak C18 柱,甲醇为流动相,流速1.0ml /min,检测波长208nm。
刘中博等人同样采用高效液相色谱仪,2996 型和二级管阵列检测器,对薯蓣属植物有效成分甾体皂苷中的原薯蓣皂苷进行了定,该方法不仅灵敏度高、专属性强、操作简单易行,而且将质量控制与活性成分相结合。
色谱条件如下:色谱柱为XterraTM ODS(250mm×416mm,5μm),以乙腈-水(27:73)为流动相,体积流量110mL /min,柱温35℃,检测波长203nm[26]。
2.3 高效液相色谱-示差折光检测器法示差折光检测器(differential refractometers detector,RID)是除紫外检测器之外应用最多的检测器。