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介绍一种骨髓组织脱钙新方法
傅春燕;陈晨;周庆;沈明
【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》
【年(卷),期】2003(019)006
【摘要】@@ 骨髓组织活检标本来之不易,在制片过程中若处理不当,会给诊断造成极大的困难.如何既快又好地制作高质量的骨髓病理组织切片对正确诊断尤为重要.笔者通过2年的反复实践,摸索出一种骨髓组织脱钙后的常规制片方法(简称"新法"),现介绍如下.
【总页数】1页(P664-664)
【作者】傅春燕;陈晨;周庆;沈明
【作者单位】中南大学基础医学院病理学教研室,长沙,410078;中南大学基础医学院病理学教研室,长沙,410078;中南大学基础医学院病理学教研室,长沙,410078;中南大学基础医学院病理学教研室,长沙,410078
【正文语种】中文
【中图分类】R446.8
【相关文献】
1.介绍一种改良骨髓石蜡包埋组织网状纤维染色技术 [J], 刘少颜
2.介绍一种改良脱钙液在骨组织制片中的应用 [J], 陈世梁;卢志承;董玉英
3.介绍一种骨髓穿刺活检的理想脱钙剂及其HE染色法 [J], 缪勇建
4.介绍一种简易快速的骨髓组织脱钙法 [J], 夏勤;夏娟;李林丰;刘智;罗启翅;梁海桥
5.介绍一种改良快速病理组织脱钙法 [J], 刘旭伟;焦惠贤
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骨组织脱钙技术及其应用张绪斌;熊正文;张华东;解放军第【摘要】@@ 骨组织不同于一般的软组织,是一种坚硬的结缔组织,由粘多糖和一些胶原纤维样骨胶纤维构成的骨样组织和沉着于其中的无机盐(骨盐)形成的.【期刊名称】《医学理论与实践》【年(卷),期】2011(024)011【总页数】4页(P1264-1267)【关键词】骨组织;脱钙技术;应用【作者】张绪斌;熊正文;张华东;解放军第【作者单位】解放军第251医院,河北省张家口市,075000;解放军第251医院,河北省张家口市,075000;解放军第251医院,河北省张家口市,075000;解放军第251医院,河北省张家口市,075000【正文语种】中文【中图分类】R954.65;R392.1骨组织不同于一般的软组织,是一种坚硬的结缔组织,由粘多糖和一些胶原纤维样骨胶纤维构成的骨样组织和沉着于其中的无机盐(骨盐)形成的。
无机盐以羟基磷灰石结晶的形式存在,其中绝大部分为水合磷酸钙,此外还包括微量碳酸盐和柠檬酸盐等[1,2],因此骨和其他一些已钙化的组织在脱水、透明等制片前必须将组织中的钙盐用脱钙剂除去,才能制成4～5μm厚的切片。
目前,常用的脱钙剂主要有单纯酸类、混合酸类、螯合剂、离子交换树脂和电解脱钙等方法[3～6],尤其是近年来应用微波技术辅助脱钙明显缩短了脱钙时间,改善了HE、组织化学、免疫组织化学染色和原位杂交[7～11]。
现将骨组织的脱钙技术及应用等有关内容简介如下。
1 骨组织的组织学特点[1,2]骨组织由骨基质和骨细胞组成,骨基质是由有机物质和无机物质紧密结合而成,主要成分有:(1)胶原纤维:为Ⅰ型胶原;(2)粘蛋白:为胶原纤维间的无定型物质;(3)骨盐:主要是羟基磷灰石;(4)酶:包括碱性磷酸酶、酸性磷酸酶和胶原酶等。
软骨基质是由软骨母细胞分泌丰富的蛋白多糖组成的,HE染色呈淡蓝色,A lcian蓝染色阳性(蓝色),甲苯胺蓝呈异染性反应(紫红色),软骨的胶原属Ⅱ型胶原。
骨组织病理制片三种脱钙液的比较
白直成;鲁萍;顾栋桦;平金良;董吉顺
【期刊名称】《中国现代医生》
【年(卷),期】2011(49)29
【摘要】目的比较三种文献报道的改良脱钙液的效果,获得简单、便捷、适用于临床病理制片的脱钙液.方法考察在常温及37℃恒温条件下,三种改良脱钙液对骨组织的脱钙及染色效果.结果常温条件下,三种改良脱钙液的脱钙时间为72h左右,组织结构损伤小,改良脱钙液Ⅰ、Ⅲ染色效果佳；37℃恒温条件下,三种改良脱钙液的脱钙时间为8～14h,改良脱钙液Ⅰ镜下组织结构破坏,改良脱钙液Ⅱ组织结构破坏且染色效果不佳,改良脱钙液Ⅲ组织结构损伤小,染色效果佳.结论37℃恒温条件下,改良脱钙液Ⅲ是较适合于临床病理制片的脱钙溶液.
【总页数】2页(P75-76)
【作者】白直成;鲁萍;顾栋桦;平金良;董吉顺
【作者单位】浙江省湖州市中心医院病理科,浙江湖州313000;浙江省湖州市中心医院病理科,浙江湖州313000;浙江省湖州市中心医院病理科,浙江湖州313000;浙江省湖州市中心医院病理科,浙江湖州313000;浙江省湖州市中心医院病理科,浙江湖州313000
【正文语种】中文
【中图分类】R361+.2
【相关文献】
1.三种脱钙液对骨组织脱钙后切片染色效果分析 [J], 连丽琴;夏凌志;钟惠霞
2.骨组织制片中改良脱钙液与传统脱钙液的比较 [J], 王彦芳;王宪治
3.三种不同脱钙液在骨组织石蜡切片中的应用比较 [J], 杜洪;金荣
4.骨组织病理制片三种脱钙液的比较 [J], 张婉仪;阮君;丘展龙
5.骨组织病理制片三种脱钙液的比较 [J], 张婉仪;阮君;丘展龙
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一种改良脱钙液的配置与脱钙方法
李晓未;朱雪明
【期刊名称】《中国血液流变学杂志》
【年(卷),期】2016(26)4
【摘要】目的比较改良脱钙方法与传统脱钙方法在骨组织脱钙及制片染色中的差异.方法选取病理科的骨组织标本若干,分为两组,分别用改良脱钙法及传统脱钙法进行脱钙处理,然后脱水、包埋、切片、染色,观察脱钙效果及切片染色效果.结果改良脱钙液组平均脱钙时间比传统脱钙液组缩短为约1/3,改良脱钙液组的标本制片质量和HE染色优良率均高于传统脱钙液组.结论改良脱钙法脱钙时间短、脱钙更彻底,切片质量高,HE核浆染色清楚、对比清晰.
【总页数】2页(P479-480)
【作者】李晓未;朱雪明
【作者单位】苏州大学附属儿童医院病理科,江苏苏州 215025;苏州大学附属儿童医院病理科,江苏苏州 215025
【正文语种】中文
【中图分类】R446.8
【相关文献】
1.介绍一种改良脱钙液在骨组织制片中的应用 [J], 陈世梁;卢志承;董玉英
2.一种改良脱钙液在骨组织制片中的临床应用 [J], 何蓉;陈建萍;李艳
3.改良脱钙液制作脱钙骨石蜡切片与传统方法的比较 [J], 谢玲;邹丽宜;张志平;崔
红晶;林坚涛
4.介绍一种改良的Neutral EDTA脱钙液 [J], 马恒辉;章如松;周航波;周晓军
5.介绍一种改良的Plank·Rycho脱钙液 [J], 胥维勇;杨红;李科;杨群
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石蜡切片一、取材骨组织剔除上面的肌肉及结缔组织后，用浸满生理盐水的纱布包裹后再用锡箔纸包裹，-20放置两小时后转移至-80保存。
二、脱钙1、固定在4%PFA中4℃固定48h，然后PBS漂洗过夜，然后置于脱钙液中进行脱钙。
注:①、固定液一般新配的为好，配好后应密封放置在阴凉避光处；②、固定组织时，固定液必须充足，一般是组织体积的20-30倍，有些水分多的材料，中间应更换1-2次固定液。
2、脱钙a、酸脱钙20倍。
每天更换脱钙液，直至脱钙完成，小鼠股骨大概需要24-26小时。
脱钙完成后，立即将组织转移进氨水（浓氨水5滴加进100ml蒸馏水中配制）中30分钟中和残余在组织中剩余的酸。
b、EDTA脱钙15%EDTA骨组织脱钙液：首先在800mlPBS溶液中加入63.5NaOH搅拌至完全溶解，随后加入150g乙二胺四乙酸粉剂继续搅拌至溶液清亮，再加入2.5g多聚甲醛搅拌至溶解，最后调整pH值7.2-7.4，并定容为1L。
EDTA脱钙大概需要一个至两个月，第一个星期要每天换液，之后两三天换一次即可。
3、判断脱钙终点a、物理测试法用注射针扎入骨组织，能顺利无阻碍的扎进去即是脱钙完成。
b草酸铵工作液，充分混合放置过夜，每天测试一次，连续测试两天不出现沉淀即为脱钙完成。
三、脱水1、脱钙完成后的组织在PBS中漂洗过夜。
2、再在4%PFA固定过夜。
（可以省略）3、40%酒精脱水40min；4、75%酒精脱水35min；5、95%酒精脱水30min；6、100%酒精脱水20min；7、100%酒精脱水20min。
注：①、脱水时应在带盖的容器中进行，防止吸收空气中的水分。
②、更换更高一级的脱水剂时，最好不要移动组织防止损坏，可以用吸管吸出液体，再用滤纸吸净脱水剂，再加入新的脱水剂。
③、在低浓度酒精中停留不宜太长，防止组织变软，助长组织的解体。
④、在高浓度酒精和纯乙醇中停留也不宜太长，防止组织变脆，影响切片。
⑤、如需过夜，应放在70%酒精中。
大鼠关节组织硝酸＼EDTA脱钙对石蜡制片的影响及比较标签：大鼠关节组织;硝酸脱钙;EDTA脱钙;石蜡制片骨组织脱钙技术是病理实验室常用技术之一。
它的应用,使难以切片或不能完整制片的骨或软骨组织达到完整制片的目的。
适用组织化学、免疫组化等技术的染色。
大鼠关节组织制片的关键步骤是脱钙,其直接影响到制片的成败。
现在大鼠关节组织石蜡制片实验中,分别用10%硝酸和乙二胺四乙酸二钠(EDTA)复合液进行脱钙处理后,石蜡包埋、制片、染色。
对用两种方法脱钙处理的大鼠关节组织石蜡制片后染色,镜下观察形态及着色效果。
1 材料与方法1.1 材料大鼠30只、出生10周,平均体质量400 g(购自中山大学动物实验)。
雌雄不限,随机分组。
在麻醉状态下经心脏注射生理盐水及1%多聚甲醛处死动物,取关节组织、标本置10%甲醛固定液中固定24 h。
10%的硝酸脱钙液。
EDTA脱钙液,微波炉。
1.2 方法10%硝酸脱钙液的配制及脱钙方法将1份的硝酸溶液加入到9份的蒸馏水中搅拌均匀即可。
将大鼠关节组织放入是组织体积20倍量的10%硝酸溶液中,浸泡16～18 h,浸泡中无需更换脱钙液,用针能刺入即可。
取出组织置流水中冲洗碱化2 h。
取材,入脱水机石蜡包埋、切片、染色。
1.3 EDTA脱钙液的配制及脱钙方法用PBS缓冲液(pH7.2)100 ml、加NaOH 搅拌溶解至饱合状态,再加入EDTA10 g溶解后用1 mol/L Hcl调节pH值至7.2,加甲醛15 ml即可。
把脱钙液装入小烧杯中,将大鼠关节组织放置其中,脱钙液需充足。
放入微波炉中调节微波功率50℃,微波照射50 s即可达到脱钙的目的。
取出无需流水冲洗、直接取材、入脱水机、石蜡包埋、切片、染色。
2 结果10%硝酸脱钙处理的大鼠关节组织切片组织结构尚完整,组织块也能顺利连续切片,镜下:细胞形态、结构尚清,HE着色较淡,有时细胞核仁及膜边界不太清晰,分界不清,对比度不强。
在特殊染色和免疫组化染色中,着色较困难,效果欠佳。
骨组织快速脱钙法
近年来，在生物医学研究领域，研究人员经常需要从骨骼组织中快速脱钙。
快速脱钙
技术可用于细胞组织培养、哺乳动物研究和细胞组织工程制备。
快速脱钙的主要目的是为
了更好地提取或分离细胞或其组织介质，以便进行后续的细胞组学分析或克隆。
现有的快速脱钙技术大多使用高浓度的EDTA来脱除组织中的钙离子，但是该方法有
几个缺点，如：（1）脱除过程耗时较长，（2）由于EDTA有强烈胃溃疡作用，因此需要
慎重使用，（3）EDTA会干扰细胞活性，或产生活性抑制作用，对后期实验的结果有影响，（4）EDTA脱除出的细胞可能是死的，效率低，（5）脱除过程中使用的EDTA无法循环。
因此，开发一种新型快速脱钙技术是有必要的。
该新型脱钙技术基于交联十六烷磺酸
钠（CTAC）和乙醇两个试剂，该试剂可准确、快速地脱除骨骼组织中的钙离子。
CTAC具有水溶性好，无毒、无味、无气味、体积小且可循环利用等优点，通过特定的缓冲系统，可
以准确、快速地调节钙离子，实现快速脱钙。
此外，CTAC不会影响细胞活性，乙醇的加入可以以正常的细胞保护组织，同时不影响细胞活性，保持细胞的生长性。
该方法简单且快速，实验结果表明，该方法与传统的EDTA脱钙方法相比，可以在几
分钟内脱除组织中的钙离子，且可保护细胞的活性，有效增加后期实验的准确性，该方法
值得推广应用。
骨组织脱钙液概述
在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。
由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同，含钙的组织一般不能直接制作切片。
骨组织含钙量最多。
除了骨组织之外其它组织也可发生钙化，在组织中形成钙化区，所以需要经过脱钙过程。
脱钙是制作骨组织切片的重要环节，尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织。
为达到骨组织既充分脱钙，又保护骨组织的抗原不受破坏，需要对含钙的织固定之后再进行脱钙或采用固定兼有脱钙的液体处理，固定并脱钙。
然后再行常规制片。
用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid EDTA）除此之外还有电解脱钙法。
强有机酸，如硝酸和盐酸可用于密皮质骨的脱钙，在短时间内可除去大量的钙。
令人遗憾的是这些强酸对组织形态会产生不良影响，脱钙作用强对组织破坏性大。
细小的组织，例如，骨髓组织不推荐用强酸脱钙。
虽然可以使用各种附加剂，如缓冲液具有保护组织的作用，但也降低了脱钙速度。
因此，各种脱钙液的配方都围绕着脱钙速度和消除对组织的不良影响而设计。
在酸类脱钙液中醋酸和甲酸比较适合于骨髓组织脱钙。
甲酸是一种使用范围较广的脱钙剂。
甲酸脱钙 10% 浓度比较合适。
醋酸和甲酸的作用比较弱，脱钙速度比较慢，它们不适合密皮质骨的脱钙。
EDTA 是一种比较温和的脱钙剂（EDTA 不是酸）。
对组织的渗透性差，作用慢。
大剂量使用价格较贵。
电解脱钙对组织损害最小，因为它的脱钙速度太慢，所以，不适合常规使用。
不同的脱钙液对骨组织的脱钙作用不同，脱钙效果也不完全相同。
为了达到良好的脱钙效果，建议使用EDTA脱钙液，该脱钙液对组织损伤较小，缺点就是脱钙时间会比较长些，但脱钙时间也要根据组织块大小而定。
目前国内生产EDTA脱钙液的公司也很少，个人感觉上海舜百生物的EDTA脱钙液使用效果还不错，脱钙脱的比较彻底，而且对组织损伤很小，就是周期长了些。
EDTA 是一种相对较好螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织抗原性。
经 EDTA 脱钙的组织可以进行免
疫组化和原位杂交染色，缺点是脱钙速度比较慢。
一般脱钙时间需要数周至数月。
为了提高 EDTA 的脱钙速度，骨组织取材尽量取薄 0.3mm，采用微波脱钙。
用微波炉辅助脱钙可以大大缩短脱钙时间，只要设置好脱钙程序，严格控制好温度和脱钙时间，一般不会对组织造成不良影响，据资料介绍微波炉脱钙，骨髓组织EDTA 脱钙，只需要花费3-4 个小时。
这样的脱钙时间完全可以满足常规使用。
另外，使用 EDTA 可以避免强酸脱钙所造成组织结构不良的影响。
EDTA可用于各种骨组织、牙齿等的脱钙，是一种比较理想的脱钙剂。
