trap染色

蛋白质银染原理与方法2009-04-28 16:38:24 来源:未知【大中小】评论: 条-摘要：蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，检测极限是2～5.0ng／蛋白条带。

原理：蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，检测极限是2～5.0ng／蛋白条带。

①SDS-PAGE电泳。

注意：银染检测蛋白质的水平是在100ng左右，与CommassieBlue染色比较，银染加样量要少。

否则难以得到清晰的电泳分辨率。

②电泳结束后，戴手套将PAGE胶转移到干净的玻璃培养皿或TIP头盒盖中。

加入25ml FixingSolution（固定液），室温振荡保温30min。

胶需要完全淹没在固定液中。

③彻底弃去固定液，加入25mlIncubationSolution（保育液），室温振荡保温30min。

胶需要完全淹没在保育液中。

④彻底弃去IncubationSolution（保育液），用50ml去离子水洗3次，每次5min。

⑤准备：取2.5ml 10XSilvering Solution, 加入22.5mL水，混匀后使用。

⑥弃去洗涤的水，加入25mlSilvering Solution (银染液)。

室温振荡保温20min。

⑦彻底弃去银染液，加入25mLDevelopingSolution（显色液），室温振荡保温1~10min。

注意观察目的条带。

如果目的条带出现了，可以考虑终止显色。

显色时间不要过长，否则本底较深。

⑧彻底弃去显色液,加入25mLStopping Solution（终止液），室温振荡保温10min。

⑨彻底弃去StoppingSolution（终止液），用50mL去离子水洗3次，每次5min。

弃去洗涤的水，加入25mL PreservingSolution（保护液），室温振荡保温20min。

银染PAGE 胶可以拍照保存，也可以室温玻璃纸干燥。

今天第一次银染，结果出来啥也没有，凝胶就像一块海带一样。

血液学检验测试题与答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1.在FⅫ缺陷时，实验室或临床表现为 ( )A、APTT正常B、STGT正常C、PT异常D、没有临床出血症状E、以上均不是正确答案：D2.多发性骨髓瘤根据形态分为四型，下列哪一型除外 ( )A、幼浆细胞型B、浆细胞型C、网状细胞型D、火焰细胞型E、原浆细胞型正确答案：D3.下述不符合血细胞发育过程中形态演变规律的是A、颗粒从无至有B、核染色质由粗糙至细致C、胞体由大至小D、核仁从有至无正确答案：B4.出血时间测定器法的参考范围 ( )A、20～40秒B、大于20秒C、1～6分钟D、2.5～9.5分钟E、1～3分钟正确答案：D5.正常骨髓象粒系统占骨髓细胞百分之多少A、40%～60%B、60%～70%C、40%～50%D、50%～70%正确答案：A6.缺铁性贫血的细胞形态学表现为 ( )A、大细胞性贫血B、正细胞正色素性贫血C、大细胞低色素性贫血D、小细胞低色素性贫血E、小细胞正色素性贫血正确答案：D7.下列哪一疾病的确诊主要依靠淋巴结病理活检 ( )A、骨髓纤维化B、恶性淋巴瘤C、脂质代谢障碍性疾病D、毛细胞白血病E、恶性组织细胞病正确答案：B8.纤维蛋白(原)降解产物的生理功能是A、促进血液凝固B、抑制血液凝固C、抑制纤维蛋白溶解D、促进纤维蛋白溶解正确答案：B9.下列哪项符合类白血病反应 ( )A、外周血中白细胞明显增加，红细胞及血小板也常有明显变化B、血象中幼稚细胞常在30%以内C、骨髓象变化不大D、粒细胞常无明显的毒性改变E、NAP积分常正常正确答案：C10.传染性单核细胞增多症患者血清中存在嗜异性抗体，该抗体属于A、IgAB、IgMC、IgGD、IgE正确答案：B11.下列哪项检查结果不符合再生障碍性贫血 ( )A、骨髓活组织检查发现骨髓造血面积缩小B、血浆和尿中促红细胞生成素水平减低C、HbF增高D、中性粒细胞碱性磷酸酶活性增高E、骨髓活组织检查时急性再生障碍性贫血改变尤为明显正确答案：B12.某细胞，胞体35μm，胞体椭圆形；胞质蓝色，无颗粒，有少许空泡；核大，椭圆形，双核(形态特点对称)，核染色质呈颗粒状，每个核有1个核仁(大而清楚)。

关于trap染色的可行性分析引言在纺织行业中，染色是一项重要的工艺，其目的是使纺织品具有丰富的颜色，提高产品的附加值。

然而，传统的染料染色存在着环境污染、染色效果不稳定等问题，因此新型的染色技术备受关注。

本文将就一种名为trap染色的新型染色技术进行可行性分析，并讨论其应用前景和挑战。

trap染色的原理trap染色是一种通过陷阱分子在纺织品表面形成的微量圆环结构实现颜色变化的染色技术。

其原理基于纳米技术和光学原理，通过控制不同波长的光线在陷阱分子的干涉作用下的可见光吸收特性，实现颜色的切换。

trap染色的优势相比传统染色技术，trap染色具有以下优势：1. 环境友好：trap染色不需要使用有害的化学染料，避免了废水污染和对环境的危害。

2. 染色效果稳定：由于陷阱分子在纺织品表面形成的微量圆环结构具有较高的稳定性，trap染色的染色效果更加持久，不易褪色。

3. 可控性强：通过控制陷阱分子的结构设计和光线波长，可以实现纺织品颜色的精准调节和切换。

4. 良好的耐洗性：经过模拟洗涤测试，trap染色纺织品表现出良好的耐洗性能，颜色不易褪变。

5. 适用范围广泛：trap染色技术可以应用于各类纺织品，包括服装、家居用品、工业用材料等。

trap染色的挑战虽然trap染色技术具有诸多优势，但在实际应用中仍然面临一些挑战：1. 成本问题：目前，trap染色技术的研发和生产成本相对较高，需要进行进一步的经济性评估和工艺改进。

2. 缩放效果：在实际生产中，如何保持trap染色技术的均一性和批量性仍然需要改进。

3. 技术标准和验证：尚需制定相应的技术标准，建立评价trap染色产品质量的验证体系。

trap染色的应用前景随着消费者对环境友好产品的需求不断上升，trap染色技术有望在纺织行业得到广泛的应用。

特别是在高端品牌和可持续发展理念倡导下，trap染色技术具备市场竞争力和可持续发展的优势。

此外，trap染色技术还可以与其他纺织工艺相结合，例如纳米抗菌、防蚊虫等，实现多重功能的纺织品生产。

骨小梁染色是一种常用的组织学技术，用于观察和分析骨骼组织的结构和特征。

以下是常见的几种骨小梁染色方法：
1.基本的酸性染色方法：经典的酸性染色方法包括贝尔马红（Carmine）染色、赖氏银染
色和邦纳金（Van Gieson）染色。

这些染色方法可以突出骨小梁的形态和颜色对比。

2.钙盐染色：钙盐染色是一种特殊的染色方法，用于显示骨小梁中的钙盐沉积。

一种常用
的方法是使用茜素红（Alizarin Red）或农夫黑（Von Kossa）染色来标记骨小梁中的钙盐。

3.免疫染色：免疫染色是利用特定抗体与骨组织中的目标蛋白结合，以显示其位置和表达
水平。

例如，可以使用抗体来标记骨基质蛋白、骨特异性蛋白等，并通过免疫组化染色方法进行可视化。

4.特殊染色方法：还有一些特殊的染色方法可用于观察骨小梁中的细胞和结构。

例如，使
用TRAP（酸性磷酸酶）染色来标记破骨细胞、用塔姆氏蓝（Toluidine Blue）染色来显示骨质基质等。

这些骨小梁染色方法可以根据需要和研究目的选择使用，并与其他组织学技术结合，如显微镜观察和图像分析等，以获取更详细的骨骼组织信息。

具体的实验步骤和条件会因染色方法的不同而有所变化，建议参考相关文献或专业实验室的指导进行操作。

端粒酶基本原理及技术方法摘要：近几年研究表明端粒酶与肿瘤的发生发展密切相关，推测可能是一个广泛的肿瘤标志物。

本文就端粒酶活性检测的原理，端粒酶的提取方法，TRAP扩增技术，四种结果分析方法（同位素法、染色法、荧光法和ELISA法）以及如何进行质量控制与半定量测定进行综述。

端粒酶（Telomerase）是由RNA和蛋白质组成的一种核糖核蛋白酶。

人端粒酶RNA组分（hTR）于1995年被克隆，其中含有端粒重复序列的模板（5′-CUAACCCUAAC-3′）；蛋白质组分具有RNA依赖的DNA多聚酶活性，结构尚不清楚。

端粒酶能以自身RNA的模板区为模板复制合成端粒序列。

在胚性细胞等增殖活跃的细胞中具有端粒酶活性，而在正常成熟体细胞中端粒酶失活，同时还发现绝大多数肿瘤细胞都呈端粒酶阳性，而在癌旁组织和正常组织阳性率很低，推测端粒酶可能是一个广泛的肿瘤标志物1。

因此近几年端粒酶在各种肿瘤中的研究日益深入，同时促进了检测方法的改进与完善。

本文对其检测方法综述如下。

1基本原理端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺（PAGE）凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。

1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法（telomericrepeatamplificationprotocol,TRAP）。

TRAP反应原理见下图。

首先合成一个18nt的TS做上游引物，端粒酶结合TS末端的GTT并合成agggttag，然后每经过一次转位合成一个ggttag的6碱基重复序列，端粒酶灭活后，加入一个24nt的CX做下游引物，经过多次变性-退火-延伸，扩增端粒酶延伸产物。

2基本技术方法2.1标本来源手术摘除组织，针吸活检组织，胸水，腹水，膀胱或胰管冲洗液，棉拭子所取分泌物和尿液（尚有争议）等。

2.2端粒酶的提取方法早期采用超声等物理破碎的方法在不同细胞中的提取效率差异较大，此后采用去污剂（如CHAPS）裂解的方法在少量细胞获取了较稳定的端粒酶提取液。

破骨细胞trap染色步骤破骨细胞（osteoclasts）是一种在骨组织内进行重要功能的多核巨噬细胞。

破骨细胞能够吸附到骨表面，通过溶酶体释放酸性蛋白酶，降低骨矩阵的pH值，从而溶解败坏的骨组织。

trap染色是一种常用的破骨细胞特异性染色方法，能够准确地识别并观察破骨细胞的形态和活性。

trap染色的原理基于破骨细胞在酸性环境中释放的酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP）活性。

TRAP是一种破骨细胞特异性的酶，能够催化酸性磷酸酶反应。

在trap染色中，使用一种叫做红碱性磷酸酶耐受的反应试剂，能够在破骨细胞所在的区域产生红棕色沉淀物，从而可视化破骨细胞的分布和形态。

下面是trap染色的步骤：1. 取得骨组织标本并保持其完整性。

可以使用钳子、锯子等工具在实验室条件下取得骨组织标本。

确保取得的标本相对完整，不要过分损伤，以保持破骨细胞的形态和活性。

2. 固定标本。

使用4%的中性缓冲福尔马林或其他适当的固定液固定标本。

固定可以使标本保存并保持其形态结构，同时也有助于切片过程。

3. 制备切片。

将固定的骨组织标本进行切片处理。

通常使用切片机或显微刀将骨组织切成较薄的片段，一般为4-10 μm。

切片的厚度可以根据实验的需要进行调整。

4. trap染色。

将切片放置在含有trap染色试剂的反应液中，通常包括硝酸钒、酒石酸和4-硝基苯胺等。

将切片和反应液放置在37℃的恒温箱中进行染色反应，通常需要1-2小时。

反应时间可以根据实验条件进行调整。

5. 停止反应。

当标本呈现所需的染色强度时，使用缓冲液将反应停止。

多数情况下，使用去离子水或含有6%硫酸的缓冲液进行停止反应。

停止反应有助于保持染色效果和标本结构。

6. 洗涤和干燥。

将标本在流动水中洗涤，去除多余的染色试剂。

然后用纯净水冲洗几次，最后用纸巾轻轻吸干。

7. 封片和观察。

将切片放在显微镜玻璃片上，使用透明的封片剂封闭标本。

阿伦膦酸钠对骨髓生成破骨细胞骨吸收作用的阻碍陈明，郑琼，方真华，勘武生【摘要】［目的］研究阿伦膦酸钠对体外培育的小鼠骨髓生成破骨细胞及其骨吸收作用的阻碍。

［方式］搜集小鼠骨髓细胞于含有10-8mol／L的1，25二羟基维生素D3［1,25-(OH)2D3］的α-MEM完全培育基中体外培育，设置不同浓度的阿伦膦酸钠给药，并于培育的第六、九、12 d观看记录抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)阳性多核巨细胞［破骨样细胞(osteoclast-like cell,OLC)］生成数，反映破骨细胞生成情形。

记数培育12 d骨磨片上骨吸收陷窝数及吸收面积，反映骨吸收情形。

［结果］随着阿伦膦酸钠浓度的增高，TRAP阳性的细胞数减少，骨吸收陷窝数及面积均减少。

［结论］阿伦膦酸钠可抑制骨髓细胞体外培育中破骨样细胞的形成，体外可抑制破骨细胞骨吸收作用。

【关键词】阿伦膦酸钠；骨髓细胞；破骨细胞；骨吸收Abstract：［Objective］To study the effect of alendronate on bone resorption and osteoclast-like cells formation in mouse bone marrow culture.［Method］Marrow cells from kunming mousewere harvested and cultured in α-MEM with 10-8mol/L ［ 1,25-(OH)2D3］. TRAP positive cells were recorded after 6,9 and 12 days exposure to various concentrations of alendronate in culture to reflect the formation of osteoclast-like cells. The number of bone resorption pits and area on bone slices were counted to reflect the bone resorption at 12 days.［Result］TRAP positive cells, the number of bone resorption pits and area were reduced with the concentration increase of alendronate. The inhabiting effect was dose dependent.［Conclusion］Alendronate has the inhabiting effects of oil bone resorption and the differentiation of bone marrow cells into osteoclast-like cells in vitro.Key words：alendronate; bone marrow cells; osteoclasts; bone resorption现代人工关节置换技术日趋成熟，临床应用日趋增多，但后期假体无菌性松动严峻阻碍此类手术的远期成效。

慢病毒转染破骨样细胞的可行性分析-细胞生物学论文-生物学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——骨代谢的平衡由骨形成和骨吸收维持，成骨细胞（OB）和破骨细胞（OC）起着重要作用。

其中，OC是一种具有独特骨吸收功能的多核巨细胞，来源于造血细胞系，属于终末细胞，不能增殖和传代〔1〕。

而破骨样细胞（OLC）是指具有OC性质，通过原代培养或实验导生成的，用于实验研究的细胞。

到目前为止，还没有成熟的OC株。

自从Testa等〔2〕首次在体外培养骨髓造血细胞时发现能够形成OC 后，骨髓导培养法分化OLC的技术形成并逐渐开展应用。

获得OC 的方法多种多样，包括导培养、直接培养等技术都逐渐趋于稳定成熟，有助于着手从基因水平深入研究骨吸收的机制，从而进一步开发代谢性骨病的治疗药物。

本文拟证实慢病毒转染OLC的可行性，为进一步利用OLC进行基因学研究奠定重要基础。

1 材料与方法1. 1实验动物4周龄雌性SD大鼠，购自吴氏实验动物中心。

1. 2主要试剂、材料和仪器低糖DMEM培养基（美国Hy-clone 公司）,中美胎牛血清（Bioind）,红细胞裂解液，双抗、磷酸盐缓冲液（PBS,美国Gibco公司）,鼠M-CSF、RANKL（美国Peprotech 公司）,抗酯酸性蛋白酶染色试剂盒（TRAP,美国Sig-ma公司）,NFAT 抑制剂（德国Calbiochem公司）,Trizol（美国Ambion公司）,逆转录试剂盒（Ta KaRa）,SYBR Green试剂（In-vitrogen）,NFAT2RNAi 慢病毒、对照病毒由厦门欣基公司包装合成，引物由上海生工公司合成；10 cm培养皿、六孔板（美国Corning公司）;CO2培养箱（美国Thermo公司）,DM2500荧光显微镜（德国Leica公司）,PCR扩增仪（美国Bio-Rad公司）,荧光定量PCR仪7500型（美国ABI公司）。

1. 3大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）的分离与导培养取SD 大鼠麻醉后，无菌条件下取双侧股骨和胫骨，剔除多余软组织，用5 ml注射器吸取适量低糖DMEM冲洗骨髓腔，直至骨髓腔变白，取冲洗液充分吹打制成细胞悬液后离心，800 r / min,3 min.弃上清加红细胞裂解液，混匀静置2 min,800 r / min离心3 min,弃上清去除红细胞，得到白细胞沉淀。

trap染色原理染色是一种用于对细胞、组织或病原体进行可视化的方法，以研究其结构、功能以及相关疾病的技术。

其中，trap染色是一种特殊的染色技术，用于检测和可视化细胞内和组织中的酸性磷酸酶活性。

本文将详细介绍trap染色的原理及其在生物实验中的应用。

trap染色的原理基于细胞中酸性磷酸酶（acid phosphatase）的活性。

酸性磷酸酶是一类催化酸性环境下磷酸酯水解反应的酶，它可以使底物产生染色反应。

而trap染色通常使用一种底物叫做naphthol AS-MX phosphate，通过活性的酸性磷酸酶作用后，底物分解成一种酚类产物，再与已经添加的染料（通常是Fast Red）反应形成红色的染色产物。

这种染色产物的形成，可以通过显微镜观察并记录结构和相关的细胞或组织。

所以，为了进行trap染色，一般需要准备以下试剂和材料：1.10%缓冲氧化铅溶液：用于抑制内源性碱性磷酸酶的活性。

2. naphthol AS-MX phosphate：trap活性底物。

3. Fast Red TR盐：染色试剂，通常为红色。

4.缓冲液：用于将上述试剂和样品混合，保持酸性环境，常用的缓冲液包括醋酸钠缓冲液和酒石酸缓冲液等。

具体的trap染色步骤如下：1.准备与样品相匹配的缓冲液，并在适当的温度下预温。

2.处理样品：根据需要，可以对细胞、组织进行固定、切片和染色前处理等步骤。

3. 清洗：将已处理的样品进行清洗，去除与trap染色无关的组织液和其他杂质。

4. 添加底物：将样品放入所选择的缓冲液中，并添加naphthol AS-MX phosphate作为底物。

根据所研究的细胞和标本，可以选择不同浓度的底物。

5. trap反应：将样品置于所选的缓冲液中，保持适当的酸性条件，使酸性磷酸酶与底物发生反应。

反应时间通常为1-2小时，具体时间取决于样品和所用条件的不同。

6. 停止反应：通过快速冲洗样品来停止trap反应。

7. 添加染色试剂：在缓冲液中加入Fast Red TR盐，使其与底物反应，生成红色的染色产物。

原理：蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，检测极限是2～5.0ng／蛋白条带。

① SDS-PAGE电泳。

注意：银染检测蛋白质的水平是在100ng左右，与CommassieBlue染色比较，银染加样量要少。

否则难以得到清晰的电泳分辨率。

②电泳结束后，戴手套将PAGE胶转移到干净的玻璃培养皿或TIP头盒盖中。

加入25ml FixingSolution（固定液），室温振荡保温30min。

胶需要完全淹没在固定液中。

③彻底弃去固定液，加入25mlIncubation Solution（保育液），室温振荡保温30min。

胶需要完全淹没在保育液中。

④彻底弃去IncubationSolution（保育液），用50ml去离子水洗3次，每次5min。

⑤准备：取2.5ml 10XSilvering Solution, 加入22.5mL水，混匀后使用。

⑥弃去洗涤的水，加入25mlSilvering Solution (银染液)。

室温振荡保温20min。

⑦彻底弃去银染液，加入25mLDevelopingSolution（显色液），室温振荡保温1~10min。

注意观察目的条带。

如果目的条带出现了，可以考虑终止显色。

显色时间不要过长，否则本底较深。

⑧彻底弃去显色液,加入25mLStopping Solution（终止液），室温振荡保温10min。

⑨彻底弃去StoppingSolution（终止液），用50mL去离子水洗3次，每次5min。

弃去洗涤的水，加入25mL PreservingSolution（保护液），室温振荡保温20min。

银染PAGE胶可以拍照保存，也可以室温玻璃纸干燥。

今天第一次银染，结果出来啥也没有，凝胶就像一块海带一样。

能不能提供详细的银染步骤呢？好像有好几种版本，哪位大侠有经验的希望能点拨一下？hotstoe wrote:1. 取下凝胶,蒸馏水冼胶30秒.2. 0.1% 硝酸银染色10分钟.3. 弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟.4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.显色液配方: 10克氢氧化钠+0.2克碳酸钠+2m甲醛溶液,定溶到500ml.这个染色方法挺好的,我用过.注意染色时间不能长.我的经验是：1.取下凝胶用去离子水冼胶30秒三次，2.0.1% 硝酸银染色10分钟.3.弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟（换2次去离子水）4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.不要试图将所有的条带都显出来，要求越高可能导致背景就深，5.染色后要用固定液（冰乙酸）终止染色，6.固定3分钟后再用去离子水洗涤2遍（整个试验比较费去离子水）。

持续激活β-catenin对拔牙窝初期愈合的影响陈艳丽;张旗【期刊名称】《口腔生物医学》【年(卷),期】2024(15)3【摘要】目的:探究持续激活β-连环蛋白(β-catenin)对拔牙后牙槽骨初期骨改建的影响。

方法:构建Catnb lox(ex3)/+小鼠(对照组)和9.6 kb Dmp1-Cre+/-;Catnb lox(ex3)/+小鼠(实验组)。

分别拔除两组小鼠右上颌第一磨牙,1周后收样,采用苏木精-伊红(HE)染色、Masson染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察两组小鼠拔牙窝愈合情况,免疫组织化学染色检测两组小鼠拔牙窝内成骨细胞特异性基质蛋白表达的差异。

结果:成功构建9.6kb Dmp1-Cre+/-;Catnb lox(ex3)/+小鼠;与对照组相比,其拔牙窝内HE染色显示无新生骨质,Masson染色显示胶原矿化减少(P<0.001),TRAP染色显示破骨细胞数量减少(P<0.001),免疫组化染色显示成骨细胞的骨钙蛋白(OCN)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)和牙本质基质蛋白(DMP1)的特异性表达减少(P<0.01)。

结论:9.6kb DMP1+细胞中持续激活β-catenin,延缓拔牙窝的初期愈合速率。

【总页数】7页(P140-146)【作者】陈艳丽;张旗【作者单位】同济大学口腔医学院·同济大学附属口腔医院牙体牙髓科【正文语种】中文【中图分类】R780.2【相关文献】1.局部应用芦荟膏对大鼠拔牙窝早期愈合的影响2.拔牙创不同处理方式对牙槽窝愈合影响的实验研究3.即刻种植与拔牙窝愈合初期种植的效果比较4.明胶海绵放置方式对拔牙窝愈合的影响5.拔牙后保留炎性肉芽组织对拔牙窝愈合效果的影响分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。